4-硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯及其抗病毒药物用途转让专利
申请号 : CN202111065792.7
文献号 : CN113501853B
文献日 : 2021-12-07
发明人 : 佟有恩 , 李时悦 , 周光泉 , 马丁 , 潘永利 , 杨丽 , 袁仁涛 , 时洪艳 , 江海明 , 李润峰 , 杨梦琪
申请人 : 南京颐媛生物医学研究院有限公司 , 国擎生物医药(上海)有限公司 , 国擎未来高科技产业(广东)有限公司
摘要 :
本发明公开了一种4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，结构式为：Q06，发现新的药物分子不仅是对治疗乙肝药物有了新的选择，对开发更理想的治疗乙肝药物也具有重要意义。
权利要求 :
1.一种4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，其特征在于：分子式为C21H33N2O11PS，分子量为
552.53，结构式为： Q06。
2.根据权利要求1所述的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，其特征在于：4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯为黄色固体。
3.根据权利要求1所述的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯在制备抑制乙肝病毒药物的应用。
4.根据权利要求3所述的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯在制备抑制乙肝病毒药物的应用，其特征在于，4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯对HBV病毒抑制率不低于29.95%。
5.根据权利要求3所述的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯在制备抑制乙肝病毒药物的应用，其特征在于，所述药物制备成药剂学上的任意一种剂型，包括片剂、胶囊剂、 颗粒剂、丸剂、口服液、注射剂，或者其他适合制作的剂型。
说明书 :
4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯及其抗病毒药物用途
技术领域
[0001] 本发明属于药物化学技术领域，特别涉及4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，及其抗病毒药物用途。
背景技术
[0002] 乙型肝炎(乙肝)病毒感染是病毒性肝炎的主要致病因素,继而引起肝硬化、肝癌,严重者危及生命。中国作为全球乙肝感染大国,虽然疫苗使用非常成功,但由于人口基数
大,既往感染率高等原因,乙肝病毒携带率及乙肝发病率均处于高位水平。针对具有一定指
征的病毒性肝炎,在临床上采用抗病毒治疗具有很好的疗效。抗乙肝病毒药物主要有干扰
素和核苷(酸)类药物,而核苷(酸)类抗乙肝病毒药物在临床上应用较多,市场占比大。种类
虽多，但大部分药物再继续使用后存在不同程度的停药反跳现象，以至于乙肝治疗中出现
了“停药即复发”的现象，而且均会产生耐药性，以及药效不强，仍需寻找新药。
大,既往感染率高等原因,乙肝病毒携带率及乙肝发病率均处于高位水平。针对具有一定指
征的病毒性肝炎,在临床上采用抗病毒治疗具有很好的疗效。抗乙肝病毒药物主要有干扰
素和核苷(酸)类药物,而核苷(酸)类抗乙肝病毒药物在临床上应用较多,市场占比大。种类
虽多，但大部分药物再继续使用后存在不同程度的停药反跳现象，以至于乙肝治疗中出现
了“停药即复发”的现象，而且均会产生耐药性，以及药效不强，仍需寻找新药。
[0003] 公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
[0004] 本发明的目的在于提供一种4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，从而克服上述现有技术中的缺陷，提供一种新的技术选择。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供了一种4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯，结构式为：
[0006] Q06。
[0007] 优选地，上述技术方案中，4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯为黄色固体。
[0008] 本申请还请求保护根据前文所述的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯在制备抑制乙肝病毒药物的应用。
[0009] 优选地，上述技术方案中，4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯对HBV病毒抑制率不低于29.95%。
[0010] 优选地，上述技术方案中，药物制备成药剂学上的任意一种剂型，包括片剂、胶囊剂、 颗粒剂、丸剂、口服液、注射剂，或者其他适合制作的剂型。
[0011] 4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯的合成方法，按照如下步骤进行：
[0012] S1， 。
[0013] 化合物A、磷酸三甲酯与碘化钠混合于乙腈中，惰性气体保护下90℃回流搅拌过夜，反应完成后反应液冷却至室温后过滤，滤液浓缩，粗品经柱层析分离得到化合物B；
[0014] S2， 。
[0015] 化合物B与溴化锂溶于乙腈中，90℃回流搅拌过夜；反应结束后冷却至室温，产品析出，过滤，石油醚洗涤滤饼，滤饼常温干燥后即为化合物C；
[0016] S3， 。
[0017] 化合物D、醋酸酐溶于吡啶中，氩气保护，室温搅拌反应过夜，反应完直接减压浓缩，加入二氯甲烷稀释，用饱和的柠檬酸洗涤有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过
滤，滤液减压浓缩得到化合物E；化合物E不经纯化直接进行下一步；
滤，滤液减压浓缩得到化合物E；化合物E不经纯化直接进行下一步；
[0018] S4， 。
[0019] 化合物E溶于甲苯，回流搅拌直至体系溶清，再加入劳森试剂继续回流2h，反应液冷却至室温，浓缩，柱层析分离，得到化合物F；
[0020] S5， 。
[0021] 化合物F溶于氨甲醇溶液中，室温下搅拌过夜，反应液浓缩，得到化合物G，化合物G可直接用于下一步；
[0022] S6， 。
[0023] 化合物G与化合物C溶于THF中，0 ℃下依次加入3‑硝基‑1，2，4‑三氮唑，二异丙基乙胺与双（2‑氧代‑3‑恶唑烷基）次磷酰氯，室温下搅拌1h；反应液加二氯甲烷稀释，然后加
1M的柠檬酸洗涤，分出有机相，有机相加水洗涤，然后饱和食盐水洗涤；有机相用无水硫酸
钠干燥，过滤，滤液浓缩，柱层析分离得4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯Q06。
1M的柠檬酸洗涤，分出有机相，有机相加水洗涤，然后饱和食盐水洗涤；有机相用无水硫酸
钠干燥，过滤，滤液浓缩，柱层析分离得4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯Q06。
[0024] 优选地，上述技术方案中，步骤S1具体为：化合物A、磷酸三甲酯与碘化钠混合于乙腈中，向反应液中加入几粒4A 分子筛，惰性气体保护下90℃回流搅拌过夜，反应完成后反
应液冷却至室温，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤渣，滤液浓缩，粗品经柱层析分离得到化合
物B。
应液冷却至室温，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗涤滤渣，滤液浓缩，粗品经柱层析分离得到化合
物B。
[0025] 优选地，上述技术方案中，步骤S1中柱层析的展开剂为石油醚/乙酸乙酯=15/1 5/~
1。
1。
[0026] 优选地，上述技术方案中，化合物B为无色透明油状物，化合物C为白色固体，化合物E为白色固体，化合物F为黄色油状物，化合物G为黄色固体。
[0027] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0028] 发现新的药物分子不仅是对治疗乙肝药物有了新的选择，对开发更理想的治疗乙肝药物也具有重要意义。
附图说明
[0029] 图1为4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯的核磁谱图。
具体实施方式
[0030] 下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0031] 除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元
件或其它组成部分。
件或其它组成部分。
[0032] 本领域技术人员能够理解，本发明的4‑硫代尿嘧啶脱氧核苷磷酸酯为黄色固体，可以根据具体的施用方式被配制成各种本领域熟知的制剂形式，例如片剂、胶囊剂、颗粒
剂、丸剂、口服液、注射剂。
剂、丸剂、口服液、注射剂。
[0033] 实施例1：化合物B的合成
[0034] 。
[0035] 1）将化合物A（25 g, 178.48 mmol）溶于乙腈（250 mL）中，反应混合物氩气置换后氩气保护，再向反应液中依次加入磷酸三甲酯（107.5 g, 713.93 mmol）、碘化钠（80 g,
535.45 mmol）和4A分子筛，加完，反应液油浴升温至90℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，硅
藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=15/1 5/1）得到化
~
合物B（50.7 g，无色透明油状物，收率：65%）。
535.45 mmol）和4A分子筛，加完，反应液油浴升温至90℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，硅
藻土过滤，滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=15/1 5/1）得到化
~
合物B（50.7 g，无色透明油状物，收率：65%）。
[0036] 2）将化合物A（11.2 g, 79.96 mmol）溶于乙腈（100 mL）中，反应混合物氩气置换后氩气保护，再向反应液中依次加入磷酸三甲酯（41.15 g, 279.86 mmol）、碘化钠（35.96
g, 239.88mmol），加完，反应液油浴升温至90℃搅拌30h。反应液冷却至室温，硅藻土过滤，
滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=15/1 5/1）得到化合物B（23.9
~
g，无色透明油状物，收率：68%）。
g, 239.88mmol），加完，反应液油浴升温至90℃搅拌30h。反应液冷却至室温，硅藻土过滤，
滤液减压浓缩得粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=15/1 5/1）得到化合物B（23.9
~
g，无色透明油状物，收率：68%）。
[0037] 实施例2：化合物C的合成
[0038] 。
[0039] 1）将化合物B(50.7 g, 115.11 mmol)溶于乙腈（250 mL）中，然后再将溴化锂（10 g, 115.11 mmol）加入至反应液中，反应混合物氩气置换后氩气保护，油浴升温至90℃反应
16h。反应液自然降至室温有大量固体析出，过滤，石油醚洗涤滤饼，滤饼经干燥即为所得化
合物C（26.6 g，白色固体，收率：71.9%）。
16h。反应液自然降至室温有大量固体析出，过滤，石油醚洗涤滤饼，滤饼经干燥即为所得化
合物C（26.6 g，白色固体，收率：71.9%）。
[0040] 2）将化合物B(23.9 g, 54.27 mmol)溶于乙腈（150 mL）中，然后再将溴化锂（4.7 g, 54.27 mmol）加入至反应液中，反应混合物氩气置换后氩气保护，油浴升温至90℃反应
16h。反应液自然降至室温，直接减压浓缩，粗品用石油醚（300 mL）打浆，过滤得到化合物C
（14.3 g，白色固体，收率：81%）。
16h。反应液自然降至室温，直接减压浓缩，粗品用石油醚（300 mL）打浆，过滤得到化合物C
（14.3 g，白色固体，收率：81%）。
[0041] 实施例3：
[0042] 1）化合物E的合成
[0043] 。
[0044] 将化合物D（5 g，21.91mmol)、醋酸酐（4.92 g，48.2 mmol）溶于吡啶（50 mL)中，反应混合物氩气置换后氩气保护，室温搅拌反应16h。反应液直接减压浓缩，加入二氯甲烷
（200 mL）稀释，用饱和的柠檬酸（80 mLx2）洗涤有机相，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠
干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物E（7.57 g，白色固体）。
（200 mL）稀释，用饱和的柠檬酸（80 mLx2）洗涤有机相，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠
干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物E（7.57 g，白色固体）。
[0045] 2）化合物E的合成
[0046] 。
[0047] 将化合物D（5 g，21.91mmol)、醋酸酐（4.92 g，48.2 mmol）溶于乙腈（50 mL)中，反应混合物氩气置换后氩气保护，搅拌10min，再缓慢滴加三乙胺（4.88 g，48.2 mmol），室温
搅拌反应16h。反应液直接减压浓缩，加入二氯甲烷（200 mL）稀释，用水（100 mLx2）洗涤有
机相，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物E（4.3 g，白
色固体）。
搅拌反应16h。反应液直接减压浓缩，加入二氯甲烷（200 mL）稀释，用水（100 mLx2）洗涤有
机相，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到化合物E（4.3 g，白
色固体）。
[0048] 实施例4：化合物F的合成
[0049] 。
[0050] 1）将化合物E (7.57 g, 24.24 mmol)溶于甲苯（170 mL）中，油浴升温至100℃搅拌直至体系溶清，再加入劳森试剂（10.78 g，26.67 mmol），100℃继续反应1.5h。反应液自
然降至室温，直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=9/1 1/1）得到
~
化合物F（6.95 g，黄色油状物，收率：87.3%）。
然降至室温，直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=9/1 1/1）得到
~
化合物F（6.95 g，黄色油状物，收率：87.3%）。
[0051] 2）将化合物E (7.57 g, 24.24 mmol)溶于甲苯（170 mL）中，油浴升温至100℃搅拌直至体系溶清，再加入劳森试剂（5.88 g，14.54 mmol），100℃继续反应1.5h。反应液自然
降至室温，直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=9/1 1/1）得到化
~
合物F（7.16 g，黄色油状物，收率：90.1%）。
降至室温，直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=9/1 1/1）得到化
~
合物F（7.16 g，黄色油状物，收率：90.1%）。
[0052] 实施例5：化合物G的合成
[0053] 。
[0054] 1）将化合物F (6.95 g, 21.17 mmol)溶于氨甲醇溶液（100 mL，7M）中，室温搅拌16h。反应液直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（二氯甲烷/甲醇=30/1 20/1）得到
~
化合物G（5.6 g，黄色固体)。
~
化合物G（5.6 g，黄色固体)。
[0055] 2）将化合物F (6.95 g, 21.17 mmol)溶于氨甲醇溶液（80 mL，7M）中，室温搅拌16h。反应液直接减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析分离（二氯甲烷/甲醇=30/1 20/1）得到
~
化合物G（5.8 g，黄色固体)。
~
化合物G（5.8 g，黄色固体)。
[0056] 实施例6：
[0057] 1）化合物Q06的合成
[0058]
[0059] 将化合物G (100 mg，0.409 mmol）、化合物C(204 mg，0.614 mmol）和三苯基磷（161 mg， 0.614 mmol）溶于四氢呋喃（7 mL）中，氮气置换三次并保护，室温搅拌10min，再
加入偶氮二甲酸二乙酯，室温搅拌过夜，没有产物。
加入偶氮二甲酸二乙酯，室温搅拌过夜，没有产物。
[0060] 2）化合物Q06的合成
[0061] 。
[0062] 将化合物G (1.45 g，5.94 mmol）、化合物C(1.97 g，5.94 mmol）溶于四氢呋喃（50 mL）中，冰水降温至0℃，再依次加入3‑硝基‑1H‑1,2,4‑三唑（1.35 g，11.87 mmol）、二异丙
基乙胺（3.07 g，23.75 mmol）和双（2‑氧代‑3‑恶唑烷基）次磷酰氯（3.02 g，11.87 mmol），
反应液自然升至室温搅拌1h。反应液加入乙酸乙酯（500 mL）稀释,用1M得柠檬酸洗涤三次，
水洗两次，饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去无水硫酸钠，滤液浓
缩，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=5/1 1/1）得到终产物Q06（820 mg，黄色固体，收
~
率：25%）。
基乙胺（3.07 g，23.75 mmol）和双（2‑氧代‑3‑恶唑烷基）次磷酰氯（3.02 g，11.87 mmol），
反应液自然升至室温搅拌1h。反应液加入乙酸乙酯（500 mL）稀释,用1M得柠檬酸洗涤三次，
水洗两次，饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去无水硫酸钠，滤液浓
缩，经硅胶柱层析分离（石油醚/乙酸乙酯=5/1 1/1）得到终产物Q06（820 mg，黄色固体，收
~
率：25%）。
[0063] 1H NMR (500 MHz, DMSO‑d6) δ 12.87 – 12.60 (m, 1H), 7.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.29 (dd, J = 7.6, 2.0 Hz, 1H), 6.10 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 5.61 (dd,
J = 13.8, 1.5 Hz, 4H), 5.49 (s, 1H), 4.35 – 4.09 (m, 3H), 4.04 – 3.86 (m,
1H), 2.25 – 2.14 (m, 2H), 1.17 (d, J = 2.4 Hz, 18H)。
J = 13.8, 1.5 Hz, 4H), 5.49 (s, 1H), 4.35 – 4.09 (m, 3H), 4.04 – 3.86 (m,
1H), 2.25 – 2.14 (m, 2H), 1.17 (d, J = 2.4 Hz, 18H)。
[0064] 实施例7：
[0065] 体外抗HBV活性，本发明实施例制备的试验药品及阳性对照药替比夫定作体外抗HBV病毒药效评价试验。步骤如下：
[0066] 药物抗病毒活性检测：取生长良好的HepG2.2.15 细胞1瓶，用胰酶消化后，制成单细胞混悬液，用细胞计数板计数，用含10% FBS血清的DMEM培养基，调整细胞密度到 2 ×
5
10 个/mL ，接种于培养板（96孔，每孔 100uL )。置于二氧化碳培养箱，于5%CO2，37℃ 培养
至80%接触抑制。吸去上清，加入10μmol/L试验药物培养液，同时加入对照药品替比夫定培
养液，另外设细胞空白对照孔。每个浓度梯度和细胞空白对照设置3个复孔。置于二氧化碳
培养箱，于37℃培养3d/6d/9d，吸取上清液，离心、采用荧光定量PCR 法检测上清中 HBV‑
DNA含量，结果见表 1。
5
10 个/mL ，接种于培养板（96孔，每孔 100uL )。置于二氧化碳培养箱，于5%CO2，37℃ 培养
至80%接触抑制。吸去上清，加入10μmol/L试验药物培养液，同时加入对照药品替比夫定培
养液，另外设细胞空白对照孔。每个浓度梯度和细胞空白对照设置3个复孔。置于二氧化碳
培养箱，于37℃培养3d/6d/9d，吸取上清液，离心、采用荧光定量PCR 法检测上清中 HBV‑
DNA含量，结果见表 1。
[0067] 表 1
[0068] 。
[0069] 由表中结果可知，表中化合物都对HepG2.2.15 细胞分泌HBV DNA具有良好的抑制作用，且化合物Q06的抑制率高于阳性对照药替比夫定，具有较好的应用前景。
[0070] 前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变
和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应
用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及
各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应
用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及
各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。