一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺及其应用

摘要

本发明涉及海门冬多酚提取技术领域，具体公开一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺及其应用。所述方法包括：（1）将海门冬粉与深度共熔溶液混合后进行超声萃取，得粗提取液。（2）去除所述粗提取液中固体物质，取清液，得含多酚的海门冬提取液。相对于传统溶剂‑超声辅助提取法和传统溶剂‑均质辅助提取法，本发明的提取法对海门冬进行提取时可以得到数量更多、含量更高的多酚化合物，而且本发明的提取法具有节约损耗、提高效率、绿色环保等优点。

权利要求

1.一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：（1）将海门冬粉与深度共熔溶液混合后进行超声萃取，得粗提取液；

（2）去除所述粗提取液中固体物质，取清液，得含多酚的海门冬提取液；

所述深度共熔溶液是由深度共熔溶剂溶于水形成溶液；所述深度共熔溶剂为甜菜碱和乙酰丙酸的组合；

所述深度共熔溶剂的各组合中，前一组分与后一组分的摩尔比为1:2。

2.根据权利要求1所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述深度共熔溶液的含水量为30 50%。

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3.根据权利要求1所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，氢受体和氢供体混合后进行磁力搅拌加热，直至形成澄清液体，冷却至室温后加水混匀，得深度 共熔溶液。

4.根据权利要求3所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，所述搅拌加热为80℃加热。

5.根据权利要求1所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述海门冬粉与深度共熔溶液的质量体积比为1:20 30 g/mL。

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6.根据权利要求1所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，步骤（1）中，所述超声萃取的功率为240 480 W，时间为10 40 min，温度为40 60℃。

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7.根据权利要求1‑6任一项所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，所述深度共熔溶液的含水量为30%，所述超声萃取的功率为320 W，时间30 min，温度为40℃，所述海门冬粉与深度共熔溶液的质量体积比为1 : 20 30 g/mL。

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8.根据权利要求1‑6任一项所述的海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，其特征在于，步骤（2）中，将所述粗提取液经过离心或过滤，然后取上清液，即得含多酚的海门冬提取液。

说明书

一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺及其

应用

技术领域

[0001] 本发明涉及海门冬多酚提取技术领域，尤其涉及一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺及其应用。

背景技术

[0002] 本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

[0003] 多酚作为植物中的天然活性物质，近几年在健康方面的作用越来越重要。研究表明，在植物中存在的多酚化合物，包括酚酸、黄酮等化合物，可以减缓心血管疾病、神经退行性疾病和癌症的病发等疾病。

[0004] 热带大型可食用海藻是南海的特色资源，种类繁多，尤其是在我国海南省，海藻资源非常丰富。然而，海南省海藻资源的开发利用却相对滞后。目前，海南省海藻主要通过制备胶质用于工业或食品行业、制成干制品用于食用、用于饲料行业。海藻的食用和药用价值高，但是目前其经济产值并不高，主要源于其深加工、高值化利用比例不高。海门冬，作为海南省特色海藻，是一种分布于热带和温带海洋生态系统的一种红藻。在红藻中，海门冬被认为是生产生物活性代谢物的最具前景的物种之一，有着广泛的应用前景。在此前的研究中表明，海藻中的多酚具有抗氧化、抗酶活性、抗糖尿病、减肥、抗癌、抗菌等多种药理活性的调节机体代谢的作用。而海门冬中多酚尚未被研究。

[0005] 传统有机溶剂如乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯等在食品、制药等工业中广泛用于提取制备天然活性成分。然而，大量的传统有机溶剂具有污染环境、易残留等缺点。因此寻找一种高效、绿色、快速的方法提取海门冬中抗氧化多酚化合物是非常重要的。

发明内容

[0006] 针对上述的问题，本发明提出一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，相对于传统溶剂‑超声辅助提取法和传统溶剂‑均质辅助提取法，本发明的提取法对海门冬进行提取时可以得到数量更多、含量更高的多酚，而且本发明的提取法具有节约损耗、提高效率、绿色环保等优点。

[0007] 具体地，为实现上述目的，本发明的技术方案如下所示：

[0008] 在本发明的第一方面，公开一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，包括步骤：

[0009] (1)将海门冬粉与深度共熔溶液混合后进行超声萃取，得粗提取液；

[0010] (2)去除所述粗提取液中固体物质，取清液，得含多酚的海门冬提取液。

[0011] 进一步地，步骤(1)中，所述深度共熔溶液是由深度共熔溶剂溶于水形成溶液，所述深度共熔溶液的含水量为30～50％。

[0012] 进一步地，所述深度共熔溶剂包括氢受体和氢供体。优选地，所述深度共熔溶剂包括：甜菜碱和乙酰丙酸的组合、L‑脯氨酸和乙二醇的组合、L‑脯氨酸和乙酰丙酸的组合、氯化胆碱和乙酰丙酸的组合中的任意一种。

[0013] 更优选地，所述深度共熔溶剂为甜菜碱和乙酰丙酸的组合。实验表明，这种深度共熔溶剂对提取海门冬多酚的效率有显著提高，这是由于深共熔溶剂具有较强的溶解性，从而溶解细胞壁释放多酚。另外，根据相似相溶原理，甜菜碱和乙酰丙酸组成的深度共熔溶剂的极性与海门冬多酚化合物的极性较为接近，从而能够高效的提取多酚。

[0014] 进一步地，所述深度共熔溶剂的各组合中，前一组分(即氢受体)与后一组分(即氢供体)的摩尔比为1:2。试验证明，保持在该范围内时具有更好的提取效果。

[0015] 进一步地，将所述氢受体和氢供体混合后进行磁力搅拌加热(优选为80℃加热)，直至形成澄清液体，冷却至室温后加水混匀，得深度共熔溶液。

[0016] 进一步地，步骤(1)中，所述海门冬粉与深度共熔溶液的质量体积比为1:20～30g/mL，试验证明，该比例下具有更佳的提取效果。

[0017] 进一步地，步骤(1)中，所述超声处理的功率为240～480W，时间为10～40min，温度为40～60℃，在本发明中，采用超声波辅助提取法萃取海门冬中多酚，能够通过超声波的空化力提高传质速率，并改善细胞内物质向溶剂的释放，从而增加生物活性物质的释放量，而且有助于提高多酚的抗氧化活性。

[0018] 优选地，所述深度共熔溶液的含水量为30％，所述超声处理的功率为320W，时间30min，温度为40℃。

[0019] 进一步地，步骤(2)中，将所述粗提取液经过离心或过滤，然后取清液，即得得含多酚的海门冬提取液。

[0020] 在本发明的第二方面，公开所述海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺提取的含多酚的提取液在治疗心血管疾病、神经退行性疾病、癌症等药物的制备中的应用。

[0021] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0022] (1)本发明提出了一种高效环保的深共熔溶剂偶联超声辅助提取的方法，可以有+效提高海门冬中多酚含量以及抗氧化活性FRAP、ABTS 。实验证明，利用不同溶剂提取得到的含多酚的海门冬提取液中检测到的多酚化合物的数量和含量差别较大。用这些溶剂提取了11～27种多酚化合物，其中：用本发明的提出的DES提取能检测出上述所有多酚化合物，Et‑UAE可以提取出24种多酚。多酚含量以DES‑UAE的最高，为Et‑UAE的1.45倍和ACE‑UAE的
1.56倍。

[0023] (2)而且本发明的工艺能够提取到两种传统溶剂提取不到的成分：阿魏酸、表没食子儿茶素没食子酸酯，而这2种物质无法采用传统溶剂从海门冬中被提取出来。因此，本发明的方法能够更加全面、准确地对海门冬多酚成分进行检测。另外，虽然4‑溴苯酚可被DES‑UAE、Et‑UAE、Me‑UAE、Et‑HAE、Me‑HAE所提取，但DES‑UAE的提取率远远高于其他，分别为Et‑UAE和Me‑UAE的53.4倍和12.14倍。

附图说明

[0024] 构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

[0025] 图1为实施例中采用不同的深度共熔溶液(DESs)对海门冬进行提取时，得到的提取液中总黄酮含量(TFC)图。

具体实施方式

[0026] 在接下来的描述中进一步阐述了本发明的具体细节用于充分理解本发明。本发明中的说明书所使用的术语只是为了用于说明本发明的优点和特点，不是旨在于限制本发明。

[0027] 除非另行定义，本发明中所使用的所有专业与科学术语属于本发明的技术领域的技术人员所理解的含义相同。如无特殊说明，本发明所使用的药品或试剂均按照产品说明书使用或采用所属领域的常规使用方法。现根据说明书附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步说明。

[0028] 下列实施例中，采用的海门冬是2020年7月于海南省三亚市蜈支洲岛海域进行全株采样而来，采样后用干净海水洗净泥沙，装入自封袋，放置于冰盒中暂存运回学校。海藻用超纯水漂洗除去表面灰尘，‑50℃冷冻干燥24h，粉碎，冻存备用。氯化胆碱、乳酸等用于制备DES溶剂的试剂购于阿拉丁生化科技有限公司(中国广州)。

[0029] 橙皮苷、黄芩素、香叶木素、芦丁、槲皮苷、金合欢素、反式肉桂酸、表儿茶素、香草+醛等标准品购于广州齐云生物技术公司。其他标准品购买于Sigma公司。FRAP、ABTS试剂盒购于南京建成公司。

[0030] 仪器设备：

[0031] UV‑1800型紫外可见分光光度计： 日本岛津有限公司；

[0032] 冻干机： 博登仪器有限公司；

[0033] TP350+加热型磁力搅拌器 杭州米欧

[0034] Agilent1200型液相色谱仪： 美国Agilent科技有限公司；

[0035] SB25‑12DTD超声波清洗仪 宁波新芝

[0036] Eyelan‑1100旋转蒸发仪： 东京理化器械株式会社；

[0037] Tecan Infinite M200多功能酶标仪： 瑞士Tecan科技有限公司；

[0038] XHF‑D均质机： 郑州博邦科贸有限公司。

[0039] 第一实施例

[0040] 一种海门冬多酚的深共熔溶剂耦合超声辅助提取工艺，包括：

[0041] (1)深度共熔溶液的制备：将不同的氢键受体和氢键供体按比例混合后进行磁力搅拌加热(优选为80℃加热)，直至形成澄清液体，冷却至室温后加水混匀，得到含水量均为30％(质量浓度)的不同组分的16种深度共熔溶液(DESs)，具体如表1所示。

[0042] (2)将48份每份2g的海门冬样品粉末分别和每份20mL的步骤(1)制备的16种DESs混合溶液加入16支离心管中(每种DESs做3个重复提取)，混合均匀后在320W超声功率萃取混合物30min，温度为40℃。完成后以10000rpm的速率离心15min获得上清液，即得含有多酚的海门冬提取液。

[0043] (3)利用硝酸铝‑亚硝酸钠比色法测定海门冬提取液TFC：以儿茶素为标准品绘制标准曲线，分别取不同浓度的标准溶液或海门冬提取液稀释液30μL置于1.5mL离心管中，加入超纯水150μL。然后加入5％亚硝酸钠溶液(9μL)，摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝溶液(18μL)，摇匀，放置6min；加入1mol/L氢氧化钠溶液(60μL)后加超纯水至300μL，摇匀，放置15min，点板，于酶标仪上在510nm处测定吸光值。绘制标准曲线得回归方程为Y＝997.89X‑
5.4803，R2＝0.9991，其中：X为儿茶素浓度(mg/mL)，Y为吸光值。根据标曲回归方程计算出海门冬提取液TFC，以每克干制样品中所含儿茶素当量(mg CE/g DW)表示。

[0044] 表1不同DESs的组成

[0045]

[0046]

[0047] (表1中数据为平均值±标准偏差(n＝3)。最后一列中不同小写字母表示有显著差异(p<0.05))。

[0048] 图1显示了采用不同DESs提取获得的海门冬提取液TFC。DESs溶剂的极性、溶解性因其组成成分的不同而不同，它们对多酚的溶解能力也不同，结果表明，DES‑15(甜菜碱‑乙酰丙酸)提取液中TFC含量最高(13.53mg CE/g DW)。与提取含量最低两组分DES‑8(氯化胆碱‑木糖醇)(0.47mg CE/g DW)和DES‑3(氯化胆碱‑草酸)(0.60mg CE/g DW)相比，甜菜碱‑乙酰丙酸提取率提高23～29倍。其次DES‑10(L‑脯氨酸‑乙酰丙酸)，DES‑5(氯化胆碱‑乙酰丙酸)两组含量之间无显著差异(p>0.05)，但显著低于DES‑15(甜菜碱‑乙酰丙酸)。因此，本研究将用甜菜碱‑乙酰丙酸所制成的DES溶剂作为最佳溶剂，进行后续的研究。

[0049] 第二实施例

[0050] 将2g海门冬粉与40mL第一实施例中提取效果最佳的DES(摩尔比为1:2的甜菜碱‑乙酰丙酸，DES‑15)制成的深度共熔溶液混合，在优选超声条件下(DES中的含水量30％，超声处理的功率为320W，时间为30min，温度为40℃)下，采用第一实施例步骤(2)的方法获得海门冬提取液，记为DES‑UAE。

[0051] 利用硝酸铝‑亚硝酸钠比色法测定海门冬提取液TFC(参考第一实施例)。

[0052] 第三实施例

[0053] 将2g海门冬粉分别与40mL超纯水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮混合，在优选超声条件下(同第二实施例)，采用第一实施例步骤(2)的方法获得海门冬提取液，且由本实施例所述超纯水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮作为溶剂得到的海门冬提取液分别记为W‑UAE、Et‑UAE、Me‑UAE、ACE‑UAE。

[0054] 利用硝酸铝‑亚硝酸钠比色法测定海门冬提取液TFC(参考第一实施例)。

[0055] 第四实施例

[0056] 将2g海门冬粉分别与40mL超纯水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮混合后在4℃以及5000rpm的条件下均质提取5min，然后将得到的粗提取液在离心机中以13000rpm的速率离心10min，取上清液，即得海门冬提取液，且由本实施例所述超纯水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮作为溶剂得到的海门冬提取液分别记为W‑HAE、Et‑HAE、Me‑HAE、ACE‑HAE。

[0057] 利用硝酸铝‑亚硝酸钠比色法测定得到的海门冬提取液中TFC含量(参考第一实施例)。

[0058] 提取效果检测

[0059] (1)为了验证本发明提出的DES耦合超声辅助提取海门冬中多酚的高效性，将其与传统溶剂‑超声辅助提取法(即第三实施例)和传统溶剂‑均质辅助提取法(即第四实施例)进行比较，利用硝酸铝‑亚硝酸钠比色法，测定对第二实施例、第三实施例、第四实施例中得+到的9种海门冬提取液TFC。另外，抗氧活性测定采用ABTS 、还原铁的抗氧化能力(FRAP)试剂盒进行测定，具体方法参照说明书。ABTS法中以Trolox为标准品，ABTS值根据trolox标准曲线计算而来，单位为毫摩尔Trolox当量/50g海门冬干重(mM TE/50g DW)，FRAP法中以FeSO4为标准品，FRAP值根据FeSO4标准曲线计算而来，单位为mmol硫酸亚铁当量/50g海门冬干重(mMFe(II)/50g DW)。

[0060] 结果如表2所示。可以看出，DES提取所得提取液中TFC、FRAP、ABTS+含量最高与用传统溶剂(水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮)相比，DES‑UAE法提取得到的TFC提高22.0‑+288.0倍，FRAP、ABTS值分别提高14～97倍、10～20倍，表明DES溶剂提取的高效；传统溶剂的超声辅助提取与均质提取结果相比，无论是用水、70％乙醇、70％甲醇、70％丙酮作为溶剂提取，通过超声辅助提取得到的TFC及抗氧化活性都较传统均质提取效率高，TFC提高了+
1.16‑2.65倍，FRAP提高了2.14‑7.08倍，ABTS提高了1.06～1.24倍(p<0.05)。

[0061] 表2第二、三、四实施例中海门冬提取液中TFC及抗氧化活性结果

[0062]

[0063] (表2中同一列不同小写字母(a‑g)表示之间有显著差异(p<0.05))。

[0064] (2)采用超高效液相色谱‑Xevo triple quadrupole质谱联用仪(Micromass Waters,Milford,MA,USA)，即UHPLC‑MS，对第二实施例得到的海门冬提取液中的酚物质进行检测。检测器：二极管阵列检测器(diode array detector，DAD)。流动相为：A(0.25％乙酸水溶液)、B(0.25％乙酸甲醇溶液)，洗脱程序为0–3min，5％B；10min，25％B；16min，50％B；20min，70％B；26–30min，100％B；31–36min，5％B。流速：0.3mL/min，检测波长280nm。组成鉴定由质谱多反应监测检测。柱温为35℃；离子源：电喷雾(ESI)；毛细管电压：2.8kV(‑)；毛细管温度：300℃；监测模式：正、负离子模式；离子扫描范围，100‑1000m/z。定性分析由组分经UHPLC‑MS分析、与文献报道进行对比后获得其基本结构，然后购买相关标准品，标准品进行UHPLC‑MS分析，进行比对后推断。定量分析由样品色谱峰面积外标法定量，与标准品比对确认的多酚组分，其含量根据其标准曲线计算，含量以每克干海藻中所含该多酚组分的微克(μg/g DW)表示。

[0065] 表3为采用UHPLC‑MS对第二、三、四实施例制备的海门冬提取液中多酚成分鉴定的结果。所有多酚物质的鉴定方法为通过使用UHPLC‑MS分析和前人研究中MS数据对比，推断出化合物基本结构后，购买相关标准品，然后与标准品在UHPLC‑MS上的数据进行比较，鉴定出具体结构。可以看出：初步鉴定出27种多酚化合物。其中包含7种酚酸(香草酸、2‑羟基苯甲酸、香草醛、对香豆酸、阿魏酸、迷迭香酸、反式肉桂酸)、18种黄酮及其衍生物(儿茶素、杨梅苷、槲皮素、香叶木素、白矢车菊素、矢车菊素等)，2种溴苯酚(4‑溴苯酚，2,4‑二溴苯酚)。

[0066] 鉴定出7种酚酸及其衍生物。峰1、峰2碎片离子为脱CO2而产生，故推断为香草酸，2‑羟基苯甲酸。峰3碎片离子为脱甲基、醛基产生，故推断为香兰素。峰4、峰5的[M‑H]‑分别– –
为m/z为163.1、193，其碎片离子m/z 119[M–H–CO2] ，91.0[M‑H–CO2‑C2H4] (峰4)，178.0[M‑– –
H–CH3] ，149.0[M‑H–CO2] (峰5)，为此分别鉴定为对香豆酸、阿魏酸。迷迭香酸(峰6)，为二–
羟基苯基乳酸和咖啡酸的酯化产物，其母离子[M‑H]为m/z 358.96，碎片离子为m/z196.96(二羟基苯基‑乳酸)，碎片离子m/z 161.0是由于咖啡酸碎片离子中H2O丢失所致。峰7主要碎片离子为脱CO而产生，故推断为反式肉桂酸。

[0067] 鉴定出18种黄酮及其衍生物。峰8‑12，为儿茶素类物质，碎片离子由脱CO2或者儿–茶素单元或者RDA碎裂而产生。峰13、14的母离子[M‑H]分别为m/z 317.0和301.0，其产物碎片离子并且黄烷3‑醇的RDA片段(m/z 179.0、151.0)被确定为杨梅苷、槲皮素。峰15的母– – – –
离子[M‑H]为m/z 447.0，其碎片离子m/z 301.0[M‑H] ，179.0[M‑H]、151.0[M‑H]而被推断为槲皮苷。峰16、17、18的主要碎片离子由糖苷(‑131.93Th，‑308.11Th或‑308Th)损失而+
产生。峰19、20的母离子[M+H]分别为m/z 301.0、285.0，拥有相同碎片离子m/z 153.0，由+
C‑环RDA裂解产生，故推断为香叶木素和黄芩素。峰21的[M+H]为271.0，其产物碎片离子m/+ +
z 227.0[M+H‑CO2] ，为此可推断为芹菜素。峰22的母离子[M+H]为m/z 285.0，其碎片离子–
m/z 153.0为C环的RDA裂解产生，而被推断为金合欢素。峰23的母离子[M‑H] 为m/z ‑ ‑
286.84，碎片离子m/z 258.97[M‑H‑CO] ，为此被推导为香橙素。峰24、25的母离子[M‑H] 分‑ ‑ ‑
别为306.92,286.91，而碎片离子为[M‑H‑152] ,[M‑H‑152‑CO] (峰24)，[M‑H‑150] ,[M‑H‑‑
150‑CO](峰25)，故推断为白矢车菊素和矢车菊素。

[0068] 此外，鉴定出2种溴苯酚，分别为4‑溴苯酚(峰26)，2,4‑二溴苯酚(峰27)。

[0069] 表3第二、三、四实施例的海门冬提取液中多酚成分鉴定结果

[0070]

[0071]

[0072] (2)采用超高效液相色谱‑Xevo triple quadrupole质谱联用仪(Micromass Waters,Milford,MA,USA)，即UHPLC‑MS，对第二、三、四实施例得到的9种海门冬提取液中的酚物质进行检测，测试条件和方法同上。测试结果如表4和表5所示，可以看出：不同溶剂提取获得的海门冬提取液中多酚化合物含量存在明显差异。DES‑UAE提取出7种酚酸、17种黄酮、2种溴苯酚组成，从含量上看，香兰素、阿魏酸、槲皮素、矢车菊素、槲皮苷、对香豆酸、反式肉桂酸、2,4‑二溴苯酚是主要的多酚组成，其他为痕量；其中，含量最高的为矢车菊素(335.89±4.85μg/g DW),第二高的为阿魏酸(74.34±1.25μg/g DW)，分别占多酚含量的62.60％和13.85％。W‑UAE由3种酚酸、7种黄酮、1种溴苯酚组成,从含量上看，矢车菊素为主要的多酚组成(含量为255.24±4.65μg/g DW，占多酚含量的98.62％)，其他为痕量,。Et‑UAE由6种酚酸、16种黄酮、2种溴苯酚组成。从含量上看，香兰素、矢车菊素、2,4‑二溴苯酚是主要的多酚组成，其他为痕量。在这几种多酚中，矢车菊素含量最高(301.35±6.48μg/g DW)，其次高的是2,4‑二溴苯酚(59.80±1.87μg/g DW)，分别占多酚含量的81.97％和
16.23％。Me‑UAE由4中酚酸、11中黄酮、2中溴苯酚组成,从含量上看香兰素、矢车菊素为主要多酚，分别占多酚含量的15.60％和80.41％。ACE‑UAE由5种酚酸、14种黄酮、2种溴苯酚组成,从含量上看，香兰素、矢车菊素、2,4‑二溴苯酚是主要的多酚组成，其他为痕量。其中，含量最高的为矢车菊素(313.25±7.88μg/g DW)，其次为2,4‑二溴苯酚(26.18±0.24μg/g DW)，分别占多酚含量的88.07％和7.36％。考虑到海门冬中多酚化合物的数量和总含量，DES‑UAE的提取效率最高，其次是Et‑UAE。

[0073]

[0074]

[0075]

[0076] 进一步地，对比表3和表4的测试结果，可以看出，利用不同溶剂提取得到的海门冬提取液中多酚化合物的数量和含量差别较大，可提取11～27种多酚化合物。其中：用本发明的提出的DES‑UAE提取能检测出上述所有多酚化合物。Et‑UAE可以提取出24种多酚物质。多酚含量以DES‑UAE的最高，为Et‑UAE的1.45倍(p<0.05)和ACE‑UAE的1.56倍(p<0.05)。多酚含量最低的为Me‑HAE提取，其次为Me‑UAE提取(p<0.05)。此外，4‑溴苯酚被DES‑UAE、Et‑UAE、Me‑UAE、Et‑HAE、Me‑HAE所提取，但DES‑UAE的提取率远远高于其他，分别为Et‑UAE和Me‑UAE的53.4倍和12.14倍。而阿魏酸、表没食子儿茶素没食子酸酯只被DES‑UAE所提取，分别占多酚含量的13.85％、0.22％。

[0077] 以上所述仅说明了本发明的几个实施方式，并不能因此而理解是对本发明专利范围的限制。应当指出，对于本领域的其他人员来说，在不脱离本发明的构思和范围的情况下，还可进行修改替换改进等，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的专利保护范围应以所描述的根据权利要求为准。