一种抗肝损伤的组合物及其制备方法

摘要

本发明涉及一种抗肝损伤的组合物及其临床制剂和制备方法，所述组合物以重量份计，由以下组分组成：三七粉100~300份，西洋参粉80~120份，枳椇子提取物75~90份，灵芝提取物60~75份，该配方具有多管齐下，养治结合、标本兼治的功效。经试验验证，本发明所体用的组合物使用安全，能有效减轻肝脏变性，具备显著的抗肝损伤效果。

权利要求

1.一种抗肝损伤的组合物，其特征在于，以重量份计，由以下组分组成：三七粉190 210份，西洋参粉95 105份，枳椇子提取物82 84份，灵芝提取物66 68份，所~ ~ ~ ~述组合物中三七粉为100 200目，西洋参粉为200 400目。

~ ~

2.根据权利要求1所述的一种抗肝损伤的组合物，其特征在于，以重量份计，由以下组分组成：三七粉200份，西洋参粉100份，枳椇子提取物83份，灵芝提取物67份。

3.一种如权利要求1或2所述的抗肝损伤的组合物的临床制剂，其特征在于，所述制剂的剂型为片剂、粉剂、颗粒剂或硬胶囊剂。

4.如权利要求3所述的临床制剂，其特征在于，为硬胶囊剂。

5.一种如权利要求4所述的临床制剂的制备方法，其特征在于，具体如下： 按量称取三七粉、西洋参粉进行超微粉碎，再按量称取灵芝提取物和枳椇子提取物， 混合均匀，干法制粒，然后用胶囊填充机进行填充，控制囊重0.1‑0.5g/粒，即得。

说明书

一种抗肝损伤的组合物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种组合物，具体涉及一种抗肝损伤的组合物及其制备方法。

背景技术

[0002] 肝损伤主要由病毒、药物、酒精、环境等因素造成,是世界范围内的常见病、多发病。肝损伤疾病的病因复杂，其机制至今还不很明确，但目前认为主要涉及细胞器损伤、细胞结构的改变、脂质过氧化、脂肪代谢障碍、酶活性的改变、离子平衡破坏等，西医治疗分为药物治疗和手术治疗，药物治疗多采用干扰素等昂贵药物，手术治疗采用人工肝以及肝移植，手术成本昂贵，风险大。

[0003] 中医药具备治疗病症多靶点多途径的优势，肝损伤临床多表现为乏力、纳差、肝区疼痛、黄疸等，可归属于“胁痛”、“黄疸”、“积聚”等范畴，病机为正气不足、瘀血内结、湿邪损伤、湿热内蕴、肝郁脾虚，可概述为“虚、热、瘀、阻”，属于中医“癥瘕”、“络病”等范畴。虽然，一些中药组合物对于肝损伤有一定的疗效，但是组方比较复杂，因此，有必要发明一种组方简单、疗效确切的抗肝损伤组合物。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种组方简单、疗效确切的抗肝损伤组合物，并同时提供其制备方法。

[0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

[0006] 一种抗肝损伤的组合物，以重量份计，由以下组分组成：

[0007] 三七粉100～300份，西洋参粉80～120份，枳椇子提取物75～90份，灵芝提取物60～75份。

[0008] 进一步的，上述抗肝损伤的组合物，以重量份计，由以下组分组成：

[0009] 三七粉150～250份，西洋参粉90～110份，枳椇子提取物80～85份，灵芝提取物65～70份。

[0010] 进一步的，上述抗肝损伤的组合物，以重量份计，由以下组分组成：

[0011] 三七粉190～210份，西洋参粉95～105份，枳椇子提取物82～84份，灵芝提取物66～68份。

[0012] 作为优选，在本发明的一个实施方案中，一种具有抗肝损伤的组合物，以重量份计，由以下组分组成：

[0013] 三七粉200份，西洋参粉100份，枳椇子提取物83份，灵芝提取物67份。

[0014] 上述组合物中三七粉为100～200目，西洋参粉为500‑800目。

[0015] 本发明另一方面是提供上述抗肝损伤的组合物的临床制剂，所述制剂的剂型为片剂、粉剂、颗粒剂或硬胶囊剂，优选硬胶囊剂。

[0016] 本发明再一方面是提供上述临床制剂的制备方法，具体如下：按量称取三七粉、西洋参粉进行超微粉碎，再按量称取灵芝提取物和枳椇子提取物，混合均匀，干法制粒，然后用胶囊填充机进行填充，控制囊重0.1‑0.5g/粒，即得。

[0017] 本发明的抗损伤的中药组合物中，各组分的药理作用如下：

[0018] 枳椇子，为鼠李科植物枳椇的带有肉质果柄的果实或种子。枳椇子味甘，性平，入胃经。《本草拾遗》中记载“止渴除烦，去膈上热，润五脏，利大小便。”明代的《证治准绳》中记载“解酒无如枝矩子之妙”。《中华本草》记载“解酒毒”，《本草纲目》中记载“止呕逆”。为中药解酒毒的要药。现代研究证实枳椇子具有解酒、护肝、抗纤维化、抗肿瘤、抗衰老及镇静、镇痛的作用，药理研究为汉医药视野下的枳椇子认知提供了很好的解读。而今，枳椇子除做解酒之外，多随机配伍用于湿、热、淤导致的酒精性脂肪肝、酒精性肝病的治疗。

[0019] 三七，为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。具有化瘀止血，活血定痛的功效。《本草求真》记载了“专入肝胃。兼入心大肠。”《本草纲目拾遗》(1765年)记载“人参补气第一，三七补血第一，味同而功异等”故称人参三七，为中药之最珍贵者。气虚久则血行无力，血不行日久则为瘀。三七具有去瘀生新、消肿定痛，行血不伤新，止血不留瘀的特点。现代药理表明，三七可通过抑制胶原的分泌与沉积达到抗肝纤维化作用；在进一步的实验表明，三七总皂苷可降低透明质酸、Ⅳ型胶原、丙二醇的含量；同时升高超氧化物歧化酶的含量，减缓大鼠肝纤维化进程；可抑制肝星状细胞的活化及减少胶原纤维的产生，改善肝纤维化病理分级。

[0020] 西洋参，为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。西洋参性凉，味甘微苦，入心、肺、脾经，具有补气养阴之效，适用于气虚阴亏、虚热烦倦等症。《本草求原》：清肺肾，凉心脾以消暑，解酒。现代药理研究证实，西洋参多糖能减弱氧化损伤，增强辐照小鼠免疫功能；对大鼠肝超微结构均出现明显改善，且肝组织氧化应激减弱，ATM、γH2AX蛋白表达量减少，提示西洋参有助于修复电磁辐射后大鼠肝细胞损伤，其机制可能与改善肝脏超微结构、减轻氧化应激损伤有关。

[0021] 灵芝，为多孔菌科真菌灵芝的子实体。性甘，味平。具有治虚劳，咳嗽，气喘，失眠，消化不良的功效。经科学研究表明，灵芝的功效与作用在保肝护肝上表现得很明显，灵芝可谓保护肝脏的“仙草”。灵芝对多种理化及生物因素引起的肝损伤有保护作用。无论在肝脏损害发生前还是发生后，服用灵芝都可保护肝脏，减轻肝损伤。灵芝还能促进肝脏对药物、毒物的代谢，对于中毒性肝炎有确切的疗效。目前关于灵芝多糖对急性酒精性肝损伤的抗炎、保肝作用机制尚未明确，大量研究表明，灵芝多糖可通过抑制肝脏组织炎性反应递质的形成，继而降低一氧化氮合酶(NOS)活性，抑制机体炎性反应；还可通过抑制自由基脂质过氧化，保护细胞膜完整性，发挥保肝作用。灵芝多糖对血清AST、ALT、三酰甘油、总胆固醇、游离脂肪酸、IL‑1β、IL‑6、TNF‑α含量及油红O染色评分较模型组降低，提示灵芝多糖对急性酒精性肝损伤小鼠亦具有显著的保肝、降脂、抗炎、抑制脂肪沉积等作用。

[0022] 本发明的组合物，可以添加包括糊精、麦芽糊精、β‑环状糊精、可溶性淀粉、赤藓糖醇、罗汉果甜苷、异麦芽酮糖醇等的一种或者几种作为辅料，并按照现代生产方法制备成为片剂、颗粒剂、硬胶囊剂等形式的产品。

[0023] 与现有技术相比，本发明根据中医药理论，将三七、西洋参粉、枳椇子提取物、灵芝提取物相配伍，针对病机为正气不足、瘀血内结、湿热内蕴、肝郁脾虚，治法以清热利湿、活血祛瘀为主要原则，其中三七为君，主要起活血祛瘀，通脉行血；以西洋参粉、枳椇子提取物为臣，清热生津、补气养阴、润五脏；灵芝提取物补气补虚，益肝肾，为佐药。该配方中灵芝提取物、三七粉、西洋参粉均为补益之品，因其味甘性缓，经常在补的同时，出现湿邪。故与枳具子提取物配伍，利尿祛湿，弥补报道中“西洋参、三七、灵芝”不能治湿证缺陷。该配方具有多管齐下，养治结合、标本兼治的功效。经试验验证，本发明所体用的组合物使用安全，能有效减轻肝脏变性，具备显著的抗肝损伤效果。

[0024] 本技术采用超微粉工艺制备西洋参粉，一方面使药物细胞破壁，提高中药药效，可以节约原药材；另一方面，仍然保持了中药的全成分入药，使产品的微生物含量及灰尘得以控制，超细粉碎以理论来讲未破坏中药材的内部结构，保留中药材的质、气、味，四气五味尤存。可以遵循中医学的辩证施治和理法用药原则。

附图说明

[0025] 图1对化学性肝损伤辅助保护作用，阴性对照组肝脏(油红O染色×200)；

[0026] 图2对化学性肝损伤辅助保护作用，模型对照组肝脏(油红O染色×200)；

[0027] 图3对化学性肝损伤辅助保护作用，实施例1肝脏(油红O染色×200)；

具体实施方式

[0028] 本发明公开了一种具有胃粘膜损伤保护作用的组合物及制备方法，本领域技术人员可以借鉴本发明的内容，结合中药的相关原理，适当改进工艺参数来实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明范围内。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

[0029] 为了更好地理解本发明而不是限制本发明的范围，在本申请中所用的表示用量、百分比的所有数字、以及其他数值，在所有情况下都应理解为以词语“大约”所修饰。各个数字参数至少应被看作是根据所报告的有效数字和通过常规的四舍五入方法而获得的。

[0030] 以下通过实施例来进一步阐述本发明，但实施例不对本发明做任何限定。

[0031] 本部分提取物均由陕西嘉禾生物科技公司提供。其中西洋参粉制备方法：

[0032] 1.净选：将西洋参置净选操作台上，拣净杂质、异物、虫蛀、霉变及非药用部位；

[0033] 2.清洗：将净选合格的西洋参置于气泡式洗药机中，用水清洗原料至表面干净无泥土；

[0034] 3.灭菌干燥：将清洗的三七平铺于洁净的灭菌盘中，平铺厚度为1～3cm，打开前门将灭菌盘放入灭菌柜中，灭菌温度100‑125℃，灭菌时间设定10‑50min，干燥温度≤80℃，干燥时间设定为20‑60min。

[0035] 4.破碎：将灭菌干燥好的西洋参，用破碎机破碎粒径80目颗粒；

[0036] 5.粉碎：将破碎好的西洋参颗粒，用超微粉碎机于‑5～‑10℃的低温下进行气流超微粉碎，得到平均粒径为500‑800目的微粉。

[0037] 实施例1：组合物

[0038] 一、组成：

[0039]

[0040]

[0041] 二、制备方法：

[0042] 步骤二：称量三七粉200份、西洋参粉100份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物83份、枳椇子提取物67份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充机进行填充，控制囊重0.45g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0043] 实施例2：组合物

[0044] 一、组成：

[0045] 组分 重量份数三七粉 200份
西洋参粉 100份
枳椇子提取物 82份
灵芝提取物 68份

[0046] 二、制备方法：

[0047] 称量三七粉200份、西洋参粉100份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物68份、枳椇子提取物82份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充剂进行填充，控制囊重0.5g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0048] 实施例3：组合物

[0049] 一、组成：

[0050]组分 重量份数
三七粉 198份
西洋参粉 102份
枳椇子提取物 83份
灵芝提取物 68份

[0051] 二、制备方法：

[0052] 称量三七粉198份、西洋参粉102份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物68份、枳椇子提取物83份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充剂进行填充，控制囊重0.3g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0053] 实施例4：组合物

[0054] 一、组成：

[0055] 组分 重量份数三七粉 202份
西洋参粉 98份
枳椇子提取物 84份
灵芝提取物 66份

[0056] 二、制备方法：

[0057] 称量三七粉202份、西洋参粉98份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物66份、枳椇子提取物84份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充剂进行填充，控制囊重0.2g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0058] 实施例5：组合物

[0059] 一、组成：

[0060] 组分 重量份数三七粉 205份
西洋参粉 95份
枳椇子提取物 82份
灵芝提取物 66份

[0061] 二、制备方法：

[0062] 称量三七粉205份、西洋参粉95份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物66份、枳椇子提取物82份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充剂进行填充，控制囊重0.4g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0063] 实施例6：组合物

[0064] 一、组成：

[0065]组分 重量份数
三七粉 190份
西洋参粉 105份
枳椇子提取物 84份
灵芝提取物 68份

[0066] 二、制备方法：

[0067] 称量三七粉190份、西洋参粉105份进行超微粉碎，三七粉为200目，西洋参粉为600目，再称量灵芝提取物68份、枳椇子提取物84份，混合均匀，干法制粒。将颗粒用胶囊填充剂进行填充，控制囊重0.3g/粒，装囊完毕，进行内外包装，得到成品。

[0068] 对比例1：组合物

[0069] 一、组成：

[0070]组分 重量份数
三七粉 200份
西洋参提取物 100份
枳椇子提取物 83份
灵芝提取物 67份

[0071] 二、制备方法：同实施例1。

[0072] 其中，西洋参提取物的制备：

[0073] 将干燥后的西洋参粉碎，过60目筛网，向混合物中加入重量比为8倍量的去离子水，浸泡1h，回流提取1h，然后以5000r/min，离心10min，获得上清液，再向残渣中加入重量比为5倍量的去离子水，回流提取0.5h，离心，获得上清液，合并两次上清液，将混合上清液冷冻干燥得到西洋参提取物。

[0074] 对比例2：组合物

[0075] 一、组成：

[0076]组分 重量份数
三七提取物 200份
西洋参粉 100份
枳椇子提取物 83份
灵芝提取物 67份

[0077] 二、制备方法：同实施例1。

[0078] 其中，三七提取物的制备：

[0079] 向三七粉中加入重量比10倍的乙醇溶液于温度25℃下浸提4h，经过滤、浓缩滤液，经冷冻干燥得到三七提取物。

[0080] 对比例3：组合物

[0081] 一、组成：

[0082]组分 重量份数
三七粉 200份
枳椇子提取物 83份
灵芝提取物 67份

[0083] 二、制备方法：同实施例1。

[0084] 对比例4：组合物

[0085] 一、组成：

[0086] 组分 重量份数三七粉 200份
西洋参粉 100份
枳椇子提取物 83份

[0087] 二、制备方法：同实施例1。

[0088] 实施例7：本发明组合物对肝损伤辅助作用的评价

[0089] 1、材料和方法

[0090] 1.1受试物：实施例1‑6的组合物，对比例1‑4的组合物，称取各个组合物6.75g加纯水分别定容至100ml作为各实验组，各取纯水100ml作为空白对照组和模型对照组。配置时及使用前充分摇匀。

[0091] 1.2实验动物：SPF级SD大鼠，雄性，体重180‑220g，120只。

[0092] 1.3实验方法：采用酒精肝损伤模型：以50％乙醇造成雄性小鼠化学性肝损伤模型[0093] 1.3.l剂量分组及受试样品给予时间：实验设实施例1‑6组、对比例1‑4组、空白对照组和模型对照组，共12组，每组10只动物，每日经口灌胃给予相应受试物，小鼠灌胃容量均未0.2ml/10g.BW，空白对照组和肝损伤模型对照组给予等量纯水。动物每周称重两次，按体重拜年话调整受试物灌胃量。

[0094] 1.3.2实验操作：各组灌胃30天后，模型组及各实验组一次性灌胃给予50％乙醇14ml/kg.BW，阴性对照组给予等容量的纯水，禁食16小时称重后处死动物，暴露完整胃，结扎幽门，灌注适量10％甲醛溶液，固定20min，然后沿胃大弯剪开，肝脏称重计算脏/体比值，取0.5g肝脏制备肝匀浆后进行各项指标(MDA、还原型GSH、TG)的检测及肝脏病理组织学检查。

[0095] 1.4数据处理：用多个实验组和对照组间均数的两两比较方法进行统计。

[0096] 2、检测指标

[0097] 2.1体重

[0098] 2.2肝匀浆中MDA、还原型GSH、TG

[0099] 2.3肝脏病理组织学检查

[0100] 2.3.1病理观察材料将各组动物肝脏从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹III染色。在光学显微镜下观察肝细胞损伤程度。

[0101] 2.3.2病理诊断标准

[0102] 2.3.1.1评价方法

[0103] 镜检，从肝脏的一段视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。

[0104] 2.3.2.2评分

[0105] 分贝记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，累计所观察视野的病变总分。

[0106] 肝细胞内脂滴散在，稀少 0分

[0107] 含脂滴的肝细胞不超过1/4 1分

[0108] 含脂滴的肝细胞不超过1/2 2分

[0109] 含脂滴的肝细胞不超过3/4 3分

[0110] 肝组织几乎被脂滴替代 4分

[0111] 2.3.2.3结果判定

[0112] 满足任一条件，可判定受试样品有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。

[0113] 2.3.2.3.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性。

[0114] 2.3.2.3.2肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性

[0115] 3试验结果

[0116] 3.1对小鼠体重的影响

[0117] 受试物对各组小鼠体重均无明显影响，与模型对照组和阴性对照组比较，差异均无显著性(均为P＞0.05)。(见表1)

[0118] 表1本发明组合物对小鼠体重的影响(均数±标准差)

[0119] 组别 动物只数 0周重(g) 4周重(g)阴性对照组 10 19.5±1.0 43.7±2.1
模型对照组 10 19.4±1.0 42.6±1.4
实施例1 10 19.9±0.9 42.5±2.8
实施例2 10 19.8±1.1 43.0±2.4
实施例3 10 20.0±1.1 43.5±2.4
实施例4 10 19.4±1.2 42.7±1.6
实施例5 10 19.6±1.0 42.8±2.0
实施例6 10 19.7±0.9 43.0±2.5
对比例1组 10 19.9±1.0 42.9±1.9
对比例2组 10 20.0±0.9 43.3±2.2
对比例3组 10 19.7±1.0 42.5±1.7
对比例4组 10 20.1±1.2 42.9±2.1

[0120] 3.2对肝匀浆中MDA、还原型GSH和TG的影响

[0121] 按照14ml/kg.BW的剂量给与50％酒精16h后与阴性对照组比较，肝损伤模型组小鼠肝匀浆中MDA、TG含量升高，还原型GSH降低，均有显著性差异(均为P＜0.01)，说明本次实验模型成功。与模型对照组比较，实施例1‑6小鼠肝匀浆中MDA、TG含量显著性降低；实施例1‑6小鼠肝匀浆中还原性GSH显著升高。通过实施例与对比例实验数据对比，实施例小鼠肝匀浆中MDA、TG数值指标整体低于对比例，还原型GSH数值指标高于对比例。其中实施例1效果最优，实施例2‑4次之，实施例5‑6稍差。通过实施例与对比例1‑4实验数据对照，进一步验证了三七和西洋参全粉入药效果优于三七和西洋参提取物，配伍种缺少了西洋参或灵芝，效果显著变差，具体数据结果见表2。

[0122] 表2：本发明组合物对小鼠肝匀浆中MDA、还原型GSH和TG测定值(均数±标准差)[0123]

[0124] 注：各实验组与模型对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01.

[0125] 3.3对小鼠肝脏病理组织学的影响

[0126] 模型对照组与阴性对照组比较，肝脏脂肪细胞变性评分在统计学上由显著性差异(P＜0.01)，该动物试验模型成立，成功复制出了试验小鼠就行性肝损伤模型。实施例1‑6与模型组相比较，肝细胞脂肪变性程度明显减轻，统计学上由显著差异(均P＜0.05)，判断为阳性(见表3)。从表3实验数据可知，实施例1‑6对肝细胞脂肪变性减轻程度大于对比例1‑4。将实验按照肝细胞脂肪变性减轻程度从大到小排序：实施例1＞实施例2‑4＞实施例5‑6＞对比例1‑4。阴性对照组、模型对照组和实施例1典型的病理组织学检查图片见附1‑3，实验结果见表3。

[0127] 表3：本发明组合物对小鼠肝脏病组织学的影响(均数±标准差)

[0128]实验组 动物只数 X P
空白对照组 10 1.00±0.75 0.000
模型对照组 10 3.05±0.48 ‑‑
实施例1 10 2.55±0.64 0.042
实施例2 10 2.62±0.51 0.046
实施例3 10 2.65±0.68 0.048
实施例4 10 2.69±0.74 0.045
实施例5 10 2.67±0.73 0.047
实施例6 10 2.63±0.87 0.047
对比例1组 10 2.78±0.62 0.161
对比例2组 10 2.75±0.72 0.157
对比例3组 10 2.84±0.81 0.164
对比例4组 10 2.82±0.75 0.162

[0129] 结论：(1)各剂量组小鼠体重增长均无显著性差异；(2)在模型成立的情况下，小鼠肝匀浆中MDA和TG含量均显著性降低，还原性GSH含量显著显升高。(3)病理学显示，实施例1‑6能显著性减轻肝脏脂肪变性成都，本次动物实验结果表明：肝脏MDA、GSH和TG三项指标及病理组织学检查结果均为阳性。

[0130] 实施例8：安全性试验

[0131] 本发明实施例2‑7制备得到的硬胶囊，分别进行小鼠急性毒性试验、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30天喂养试验和Ames试验检验结果如下：

[0132] (1)实施例1‑6得到的硬胶囊对两种性别的SPF级昆明钟小鼠急性经口毒性试验，24h内两次灌胃剂量达到12.0g/kg.bw(相当于人体推荐日摄入量0.045g/kg.bw的267倍)，在14天的观察期内动物未见明显中毒症状和死亡，测得MTD值大于12.0g/kg.bw，一句急性毒性分级评价标准规定，属实际无毒级。

[0133] (2)小鼠骨髓细胞微核试验和精子畸形试验结果为阴性。

[0134] (3)30天喂养试验结果表明：将样品按照1.125g/kg.bw、2.250g/kg.bw、4.500g/kg.bw剂量(分别相当于人体推荐日摄入量0.045g/kg.bw的25倍、50倍、100倍)对SPF级Wistar大鼠连续给予30天，动物未见明显的中毒症状和死亡。各实施例制备的胶囊各剂量组大鼠体重、进食量、食物利用率、血液学、脏器重量、脏/体比值以及病理组织学等指标与阴性对照组比较，差异均无显著性，血液生化也未见明显异常改变，本试验条件下未发现有明显毒性。

[0135] (4)实施例1‑6对鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100\TA104四株试验菌株，在加与不加S9时，8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量组，本实验条件下受试物对测试菌株无明显抑菌作用，且各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照菌洛数2倍，也无剂量‑反应关系，Ames试验结果为阴性。