包含黄连及荆芥混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物

摘要

本发明涉及包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物。在利用本发明的黄连及荆芥提取物的情况下，可提供无毒副作用且可安全地用于人体的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物或用于预防或改善炎症性肠病的饲料组合物。

权利要求

1.一种用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物，其以黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分，其中所述黄连及荆芥的混合提取物利用碳数为1至4的醇或其水溶液提取，且其中所述黄连及荆芥的混合提取物为以1～30:1的重量比混合黄连与荆芥的混合提取物。

2.根据权利要求1所述的药剂学组合物，其中所述炎症性肠病选自由溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠白塞病、未定型结肠炎、细菌性肠炎、病毒性肠炎、阿米巴肠炎、出血性直肠溃疡、缺血性结肠炎及结核性肠炎组成的组中。

3.根据权利要求1所述的药剂学组合物，其中所述药剂学组合物抑制作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2或巨噬细胞炎症蛋白2的活化。

4.根据权利要求1所述的药剂学组合物，其中所述醇为乙醇。

5.根据权利要求4所述的药剂学组合物，其中所述醇的浓度为20％至99％。

6.一种用于预防或改善炎症性肠病的饲料组合物，其以黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分，其中所述黄连及荆芥的混合提取物利用碳数为1至4的醇或其水溶液提取，且其中所述黄连及荆芥的混合提取物为以1～30:1的重量比混合黄连与荆芥的混合提取物。

7.根据权利要求6所述的饲料组合物，其中所述醇为乙醇。

8.根据权利要求7所述的饲料组合物，其中所述醇的浓度为20％至99％。

9.黄连及荆芥的混合提取物在制造用于预防或治疗炎症性肠病的组合物中的用途，其中所述黄连及荆芥的混合提取物利用碳数为1至4的醇或其水溶液提取，且所述黄连及荆芥的混合提取物为以1～30:1的重量比混合黄连与荆芥的混合提取物。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述炎症性肠病选自由溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠白塞病、未定型结肠炎、细菌性肠炎、病毒性肠炎、阿米巴肠炎、出血性直肠溃疡、缺血性结肠炎及结核性肠炎组成的组中。

11.根据权利要求9所述的用途，其中所述组合物抑制作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2或巨噬细胞炎症蛋白2的活化。

12.根据权利要求9所述的用途，其中所述醇为乙醇。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述醇的浓度为20％至99％。

说明书

包含黄连及荆芥混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗

炎症性肠病的药剂学组合物

技术领域

[0001] 本发明涉及包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物。

[0002] 本申请要求于2019年4月29日提交且申请号为第10‑2019‑0050088号的韩国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

背景技术

[0003] 炎症性疾病是全球最重要的健康问题之一。炎症通常为对于外部物质或有害刺激的身体组织的保护反应。炎症的原因与下列因素相关：如细菌、病毒及寄生虫的感染性原因；如烧伤或辐射照射的物理原因；如毒素、药物或工业制剂的化学药品；如过敏及自身免疫反应的免疫反应；或者氧化应激。

[0004] 炎症的特征在于，疼痛、发红、肿胀、发热及感染区域的功能损失。这些症状为在免疫系统的细胞之间发生的复杂的相互作用的结果。由于细胞的反应，最终生成各种炎症介质的相互作用网络。

[0005] 另外，炎症性疾病中代表性疾病有炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)。炎症性肠病是指溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)、克罗恩氏病(Crohn's disease，CD)、白塞氏病等在肠道因不明原因发生炎症或溃疡的慢性炎症性疾病。

[0006] 众所周知，炎症性肠病表现出如体重减少、伴随黏液或血液的腹泻、发热、肠蠕动障碍、结肠的短缩的肠道病理征象。在几乎所有溃疡性结肠炎患者中发现直肠炎症，且炎症范围遍及整个大肠。因此，若具有炎症性肠病，则在肠黏膜中分泌各种炎症细胞因子，并激活炎症信号转导。

[0007] 溃疡性结肠炎为反复发作的顽固性消化系统的肠疾病，临床上的主要症状为腹痛、腹泻及粘液脓血便，主要在黏膜及黏膜下层示出病变。正常结肠组织分为黏膜、黏膜下层、肌肉层及肠膜4层。根据溃疡性结肠炎的发生，在黏膜和黏膜下层示出病理学变化。随着溃疡的形成，发生炎症的细胞向相邻层浸润，在隐窝脓肿(crypt abscess)和周围血管中观察到炎症的发生及出现如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的各种炎症细胞的非特异性变化。该病常见于欧洲或美国等以肉食为主的国家，最近，在韩国也呈显著增加的趋势。但是，该病的发病原因和发病机制比较复杂，确切病因尚不明确。

[0008] 克罗恩氏病为自身免疫疾病之一的慢性炎症性肠病，以大多数病例发生在小肠和大肠的交界处而周知。美国医生克罗恩于1932年发现，因而命名为克罗恩氏病。克罗恩氏病是一种疑难病，由于该病的发现时间不长，病因尚不明确。普遍认为是免疫系统的过度免疫反应，但并不确定。因此，该病是一种未发现根治方法的疾病，饮食习惯、肠内感染、抗生素的使用等因素可能对其产生影响。在克罗恩氏病中，在胃肠道中偶尔会发现炎症，并影响肠的透壁(transmural)。因此，形成瘘管(fistula)，从而发生肠道与其他器官的并发症。

[0009] 目前，作为炎症性肠病的治疗剂，使用阻断前列腺素(prostaglandins)的生成的5‑氨基水杨酸(5‑aminosalicylic  acid，5‑ASA)系列药物，例如柳氮磺吡啶
(sulfasalazine)等，或者使用类固醇的免疫抑制剂。但是，当长期服用这种药物时，具有与药物的容量相关而产生副作用、毒性及耐药性的问题。

[0010] 另外，天然提取物或包含其的组合物用于缓解并治疗包括各种炎症的疾病。这是因为天然物非常多样化且提供高特异性的生理活性，并具有显著减少化学药剂的副作用的优点。因此，利用这种天然物的对于炎症性肠病有效的治疗方法或药物研发的必要性备受关注。

发明内容

[0011] 技术问题

[0012] 本发明人努力研究以研发对于炎症性肠病有效的天然物药品。结果，发现黄连及荆芥的混合提取物具有优秀的抗炎效果，从而完成了本发明。

[0013] 因此，本发明的目的在于，提供包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物。

[0014] 本发明的另一目的在于，提供包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的用于预防或改善炎症性肠病的饲料组合物。

[0015] 本发明的还有一目的在于，提供炎症性肠病的预防、改善或治疗方法，其包括向受试者(subject)给药包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的药剂学组合物的步骤。

[0016] 技术方案

[0017] 根据本发明的一实施方式，本发明提供包含黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物。

[0018] 在本说明书中，术语“混合提取物”或“混合草药提取物”是指黄连提取物与荆芥提取物的混合物或者黄连与荆芥的混合物的提取物两者。

[0019] 黄连(Coptis Rhizome)为毛茛科(Ranunculaceae)多年生草本植物的草药，为黄连(Coptis japonica Makino)、中国黄连(Coptis chinensis Franchet)、三角叶黄连(Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao)或云连(Coptis teeta Wallich)的根茎去除根后的部分。

[0020] 荆芥(Schizonepeta tenuifolia Briquet)为唇形科(Labiatae)一年生草木，是指其地上部分的荆芥(Schizonepetae Herba)或花穗(花梗)的荆芥穗(Schizonepetae Spica)。

[0021] 在本说明书中，术语“炎症性肠病”是指在肠道，即，小肠、大肠等发生炎症的疾病，包括肠道中的非正常慢性炎症反复改善或复发的疾病。并且，包括原因不明的特异性肠炎、原因不明的非特异性肠炎及其他疾病引起的肠炎，例如肠白塞病。

[0022] 在本说明书中，术语“治疗”是指通过给药本发明的组合物来改善或治愈炎症性肠病的症状的所有行为。

[0023] 并且，在本说明书中，术语“预防”是指通过给药本发明的组合物来抑制或延迟炎症性肠病的症状的所有行为。

[0024] 在本说明书中，术语“包含……作为有效成分”是指包含足以实现黄连及荆芥的混合提取物的功效或活性的量。

[0025] 包含在本发明的组合物的黄连及荆芥的混合提取物为天然植物材料，无细胞毒性。包含在本发明的组合物中的黄连及荆芥的混合提取物的用量上限可由普通技术人员在适当范围内选择并实施。

[0026] 在本说明书中使用的术语“提取物”具有本领域通常用作粗提物(crude extract)的含义，广义上，还包括追加分馏(fractionation)提取物的分馏物。即，黄连及荆芥的提取物不仅包括利用提取溶剂获取的提取物，还包括在此追加适用纯化过程来获取的提取物。例如，将上述提取物通过具有规定分子量的截取值的超滤膜来获取的分馏物、通过各种色谱(为了根据大小、电荷、疏水性或亲和性的分离而制备)分离等追加实施的各种纯化方法获取的分馏物也包括在本发明的黄连及荆芥的提取物中。

[0027] 本发明的药剂学组合物可包含药剂学上可接受的载体。上述药剂学上可接受的载体通常用于制剂，包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等，但并不限定于此。除上述成分之外，本发明的药剂学组合物还可包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。适合的药剂学上可接受的载体及制剂详细记载于雷明顿药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)(19th ed.,1995)中。

[0028] 并且，本发明的药剂学组合物还可包含本领域公知的具有炎症性肠病治疗效果的有效成分。例如，为糖皮质类固醇(glucocorticosteroid)等的类固醇、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、美沙拉秦(mesalazine)等的5‑氨基水杨酸系统药物、肿瘤坏死因子α(TNF‑α)单克隆抗体。

[0029] 本发明的药剂学组合物可口服给药或胃肠外给药，在胃肠外给药的情况下，可通过静脉注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、透皮注射等给药。

[0030] 本发明的药剂学组合物的适当剂量根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病理状况、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应敏感性等因素而不同，熟练的医生可容易确定及处方对于所需的治疗或预防有效的剂量。根据本发明的优先实例，本发明的药剂学组合物的1天剂量为0.001mg/kg～1000mg/kg。

[0031] 本发明的药剂学组合物根据本发明所属技术领域的普通技术人员容易实施的方法利用药剂学上可接受的载体和/或赋形剂来制剂化，由此以单位容量形态制备或者引入至多容量容器内来制备。在此情况下，剂型可以为油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液形态，还可以为提取剂、粉末剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂形态，还可包括分散剂或稳定剂。

[0032] 在本发明的一实例中，上述炎症性肠病选自由溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、克罗恩氏病(crohn's disease)、肠白塞病(intestinal behcet's disease)、未定型结肠炎(indeterminate colitis)、细菌性肠炎、病毒性肠炎、阿米巴肠炎、出血性直肠溃疡、缺血性结肠炎及结核性肠炎组成的组中，但并不局限于此。更具体地，上述炎症性肠病为溃疡性结肠炎或克罗恩氏病。

[0033] 在本发明的一实例中，上述药剂学组合物抑制作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β(IL‑1β)、白细胞介素‑17(IL‑17)、白细胞介素‑23(IL‑23)、CCL2或巨噬细胞炎症蛋白2(MIP‑2)的活化。

[0034] 在本说明书中，术语“活化”是指相应基因被表达或者表达来生产具有功能性的相应基因的蛋白质。并且，“抑制活化”是指不表达相应基因或者即使表达也生产具有功能性的相应基因的蛋白质，或者包括其表达水平显著低而实质上不表达。

[0035] 在本发明的一实例中，在上述黄连及荆芥的混合提取物中，黄连与荆芥以1～30:1～30、1～20:1～20、1～15:1～15、1～10:1～10、1～8:1～8、1～7:1～7、1～6:1～6、1～5:1～5、1～4:1～4、1～3:1～3、1～2:1～2或1:1的重量比混合，但并不限定于此。更具体地，上述黄连与荆芥的混合重量比为1～30:1、1～20:1、1～15:1、1～10:1、1～8:1、1～7:1、1～6:1、1～5:1、1～4:1、1～3:1、1～2:1、20:1、15:1、10:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1或1:
1。

[0036] 根据本发明的实施例，在上述黄连及荆芥的混合提取物中，在黄连与荆芥以1～10:1的重量比包含的情况下，示出优秀的炎症缓解效果。

[0037] 在本发明的组合物中利用的黄连及荆芥的混合提取物中，在对黄连、荆芥或它们的组合处理提取溶剂来获取的情况下，可利用各种提取溶剂。优选地，可利用极性溶剂或非极性溶剂。适合极性溶剂的包括(i)水、(ii)醇(优选地，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇)、(iii)乙酸、(iv)二甲基甲酰胺(DMFO，dimethyl‑formamide)及(v)二甲亚砜(DMSO，dimethyl sulfoxide)。

[0038] 适合非极性溶剂的包括丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸甲酯、氟代烷、戊烷、己烷、2,2,4‑三甲基戊烷、癸烷、环己烷、环戊烷、二异丁烯、1‑戊烯、1‑氯丁烷、1‑氯戊烷、邻二甲苯、二异丙醚、2‑氯丙烷、甲苯、1‑氯丙烷、氯苯、苯、二乙醚、二乙硫、氯仿、二氯甲烷、1,2‑二氯乙烷、苯胺、二乙胺、乙醚、四氯化碳及四氢呋喃(THF)。

[0039] 在本发明中，当提取黄连、荆芥或它们的组合时，可以使用热水提取法、冷浸提取法、回流提取法、常温提取法或超声波提取法。

[0040] 在本发明的一实例中，上述黄连及荆芥的混合提取物可利用选自水、碳数为1个至4个的醇或它们的混合物中的一种以上的溶剂提取。

[0041] 在本发明的一具体例中，上述醇为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇。更具体地，上述醇为乙醇。

[0042] 在本发明的一具体例中，上述乙醇的浓度为20体积百分比至99体积百分比。更具体地，上述乙醇的浓度为20体积百分比至75体积百分比、20体积百分比至55体积百分比、20体积百分比至35体积百分比、25体积百分比至99体积百分比、25体积百分比至75体积百分比、25体积百分比至55体积百分比、25体积百分比至35体积百分比、55体积百分比至99体积百分比、55体积百分比至75体积百分比，但并不限定于此。最具体地，上述乙醇的浓度为20体积百分比至30体积百分比或65体积百分比至75体积百分比。

[0043] 在本发明的一实例中，上述黄连及荆芥的混合提取物为在70℃至100℃的温度下热水提取的热水提取物。更具体地，上述黄连及荆芥的混合提取物为在75℃至100℃、80℃至100℃、85℃至100℃、90℃至100℃、75℃至95℃、80℃至95℃、85℃至95℃的温度下热水提取的热水提取物，但并不限定于此。最具体地，上述黄连及荆芥的混合提取物为在90℃至95℃的温度下热水提取的热水提取物。

[0044] 根据本发明的实施例，本发明的黄连及荆芥的混合提取物在热水提取物及乙醇提取的情况下，均示出显著的抗炎效果，在黄连与荆芥的重量比以1:1、2:1、4:1、8:1、10:1的比例混合的情况下，示出显著的抗炎效果，尤其，在以10:1的比例混合的情况下，示出优秀的抗炎效果。

[0045] 根据本发明的另一实施方式，本发明提供包含黄连及荆芥的混合提取物的用于预防或改善炎症性肠病的饲料组合物。

[0046] 包含在发明的组合物的黄连及荆芥提取物为天然植物材料，长期以来，将其用作食品及民间药物，因此，可预测，从中提取的本发明的提取物也无毒副作用。因此，黄连及荆芥提取物可用作医药品、饲料组合物。

[0047] 关于包含在本发明的饲料组合物的黄连及荆芥的提取的内容与关于包含在上述药剂学组合物的黄连及荆芥的混合提取物的提取的内容相同，因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略对于二者之间相同内容的记载。

[0048] 根据本发明的还有一实施方式，本发明提供黄连及荆芥的混合提取物的制备方法，其包括：步骤(i)，向黄连及荆芥分别添加提取溶剂或者向混合的黄连及荆芥添加提取溶剂来提取；步骤(ii)，将通过上述提取步骤形成的提取物分别在常温条件下搅拌并过滤；以及步骤(iii)，减压浓缩上述过滤液。

[0049] 在本发明的一实例中，上述提取溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇。更具体地，上述醇为乙醇。

[0050] 在本发明的一具体例中，上述乙醇的浓度为20体积百分比至99体积百分比。更具体地，上述乙醇的浓度为20体积百分比至75体积百分比、20体积百分比至55体积百分比、20体积百分比至35体积百分比、25体积百分比至99体积百分比、25体积百分比至75体积百分比、25体积百分比至55体积百分比、25体积百分比至35体积百分比、45体积百分比至99体积百分比、45体积百分比至75体积百分比，但并不限定于此。最具体地，上述乙醇的浓度为45体积百分比至70体积百分比。根据本发明的实施例，在上述乙醇的浓度为45体积百分比至70体积百分比的情况下，示出最优秀的提取收率。

[0051] 关于本发明的制备方法中的提取的内容与关于包含在上述药剂学组合物的黄连及荆芥的混合提取物的提取的内容相同，因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略对于二者之间相同内容的记载。

[0052] 根据本发明的又一实施方式，本发明提供炎症性肠病的预防、改善或治疗方法，其包括向受试者给药包含如上所述的本发明的黄连及荆芥的混合提取物作为有效成分的药剂学组合物的步骤。

[0053] 在本说明书中使用的术语“给药”或“向……给药”是指本将发明的组合物的治疗或预防有效量给药至患有上述对象疾病或者具有患有上述对象疾病的可能性的受试者(个体)来在受试者的体内形成相同量。只要可到达目标组织，本发明的组合物的给药途径则可通过所有途径口服给药或胃肠外给药。并且，本发明的组合物还可利用将有效成分递送至靶细胞、组织或器官的任意装置来给药。

[0054] 上述组合物的“治疗有效量”是指足以向要接受组合物的受试者提供治疗或预防效果的组合物的含量，因此，为包括“预防有效量”的含义。

[0055] 在本发明的一实例中，上述受试者可选自由人类、猴、牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔及豚鼠组成的组中，但并不限定于此。更具体地，上述受试者为人类。

[0056] 炎症性肠病作为本发明的预防方法的对象疾病，与关于上述药剂学组合物的对象疾病的定义相同。

[0057] 本发明的上述炎症性肠病的预防或治疗方法为包括给药本发明一实施方式的药剂学组合物的步骤的方法，因此，为了避免本说明书过于复杂，将省略关于上述药剂学组合物的重复内容的记载。

[0058] 发明的效果

[0059] 本发明的特征及优点概括如下。

[0060] 黄连及荆芥的混合提取物抑制作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2或巨噬细胞炎症蛋白2的活性，由此示出预防或治疗炎症性肠病的功效。

[0061] 本发明可提供如下的用于预防或治疗炎症性肠病的药剂学组合物或用于预防或改善炎症性肠病的饲料组合物，即，由于上述功效，在利用本发明的黄连及荆芥提取物的情况下，可无毒副作用且安全地用于人体。

附图说明

[0062] 图1示出葡聚糖硫酸钠(DSS，Dextran Sulfate Sodium)诱导结肠炎小鼠中的各给药组的第10天的疾病活动指数(DAI，Disease Activity Index)值。

[0063] 图2示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的各给药组的肠黏膜指数。

[0064] 图3示出二硝基苯磺酸(DNBS，Dinitrobenzene sulfonic acid)诱导结肠炎小鼠中的各给药组的存活率(％)。

[0065] 图4示出二硝基苯磺酸诱导结肠炎小鼠中的各给药组的肠长度。

[0066] 图5示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的各给药组的14天内的体重变化率(％)。

[0067] 图6为示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的各给药组的第10天的疾病活动指数值。

[0068] 图7示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的第10天的疾病活动指数值。

[0069] 图8示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的肿瘤坏死因子α表达水平的相对值。

[0070] 图9示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的白细胞介素‑1β表达水平的相对值。

[0071] 图10示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的白细胞介素‑17表达水平的相对值。

[0072] 图11示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的白细胞介素‑23表达水平的相对值。

[0073] 图12示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的巨噬细胞炎症蛋白2表达水平的相对值。

[0074] 图13示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合提取物给药组的CCL2表达水平的相对值。

[0075] 图14示出通过脂多糖(LPS)诱导炎症的巨噬细胞株中的单一提取物及各种混合比例的混合草药提取物给药组的一氧化氮(NO)生成量。

[0076] 图15示出通过脂多糖诱导炎症的巨噬细胞株中的根据提取溶剂的浓度的混合草药提取物给药组的一氧化氮生成量。

[0077] 图16示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合草药提取物给药组的体重变化率(％)。

[0078] 图17示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合草药提取物给药组的第10天的疾病活动指数值。

[0079] 图18为示出葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠中的单一提取物及混合草药提取物给药组的肠长度。

具体实施方式

[0080] 以下，通过实施例更详细地说明本发明。这些实施例仅用于更加具体地说明本发明，根据本发明的主旨，本发明的范围并不局限于这些实施例，这对本领域的普通技术人员而言是显而易见的。

[0081] 实施例

[0082] 在本说明书全文中，在未另行提及的情况下，为了示出特定物质的浓度而使用的“％”表示：固体/固体为(重量/重量)％，固体/液体为(重量/体积)％，液体/液体为(体积/体积)％。

[0083] 实施例1：制备单一草药提取物粉末

[0084] 购入洗涤及干燥后状态的24种草药，即，乌梅(Mume Fructus)、诃子(Terminaliae Fructus)、旱莲草(Ecliptae Herba)、山药(Dioscoreae Rhizoma)、卷柏(Selaginellae Herba)、荆芥(Schizonepeta tenuifolia Briquet)、玄草(Geranii Herba)、补骨脂(Psoraleae Semen)、侧柏叶(Thujae Orientalis Folium)、槐花(Sophorae Flos)、苦参(Sophorae Radix)、黄连(Coptis Rhizome)、大蓟(Cirsii Herba)、地榆(Sanguisorbae Radix)、五倍子(Galla Rhois)、槟榔(Arecae Semen)、升麻(Cimicifugae Rhizoma)、樗白皮(Ailanthi Radicis Cortex)、独活(Araliae Continentalis Radix)、葛根(Puerariae Radix)、桔梗(Platycodonis Radix)、五味子(Schisandrae Fructus)、麦门冬(Liriopis Tuber)及木耳(Auriculariae Polyporus)。

[0085] 向上述乌梅、诃子、旱莲草、山药、卷柏、荆芥、玄草、补骨脂、侧柏叶、槐花、苦参、黄连、大蓟、地榆、五倍子、槟榔、升麻、樗白皮、独活、葛根、桔梗、五味子、麦门冬及木耳分别添加重量的10倍的70％(v/v)乙醇水溶液，并在常温条件下，充分搅拌72小时并提取。过滤提取液并在50℃～65℃的温度下减压浓缩后，进行冷冻干燥来分别提取上述24种草药的单一提取物粉末，在下述表1示出它们的收率。

[0086] 表1

[0087] 单一草药提取物的提取收率

[0088]

[0089]

[0090] 实施例2：对于葡聚糖硫酸钠诱导肠炎模型的单一草药提取物的效果实验

[0091] 将8周龄雄性小鼠(C57BL/6)驯化饲养一周以上后，分类为正常组、给药葡聚糖硫酸钠(DSS；36000MW～50000MW，安倍医疗(MP Biomedicals)，美国(USA))来诱发溃疡性结肠炎后给药蒸馏水的葡聚糖硫酸钠及蒸馏水给药组(阴性对照组)、葡聚糖硫酸钠及5‑氨基水杨酸(5‑ASA；东京化成工业株式会社(Tokyo Chemical Industry Co.)，日本(Japan))给药组(阳性对照组)及葡聚糖硫酸钠及在实施例1中制备的各单一草药提取物给药组(实验组)。

[0092] 葡聚糖硫酸钠诱导肠炎模型以示出与人的溃疡性结肠炎相似的形态学变化及症状而周知。将葡聚糖硫酸钠以2.5％的比例稀释在饮用水并供给100mL，每隔2天更换。利用葡聚糖硫酸钠诱导5天后，更换为饮用水。

[0093] 用作阳性对照组药物的5‑氨基水杨酸以25mg/kg稀释在饮用水，从实验开始之日起，每天口服给药一次，共给药14天。从实验开始之日起，各单一草药提取物以100mg/kg的剂量每天口服给药一次，共给药14天。

[0094] 实验开始后，每天测量各组的小鼠体重来计算体重减少率，并确认粪便状态及是否血便。对于上述三种指标，根据下述表2的基准计算分数。

[0095] 表2

[0096] 用于计算疾病活动指数的分数计算基准

[0097] 分数 体重减少率 粪便状态 出血0 ＜1％ 正常 正常
1 1～5％ ‑ ‑
2 5～10％ 不粘在肛门周围的稀便 轻微出血
3 10～15％ ‑ ‑
4 ＞15％ 粘在肛门周围的腹泻 可见出血

[0098] 将以上述表2的分数计算为基准来计算的总和用作疾病活动指数，并在下述表3及图1示出。

[0099] 表3

[0100] 各给药组的疾病活动指数值

[0101] 对象 第10天的疾病活动指数值正常组 0.0
阴性对照组 7.3
阳性对照组 2.4
诃子 3.8
卷柏 4.0
荆芥 2.4
玄草 2.8
补骨脂 5.0
侧柏叶 2.6
黄连 2.0
五倍子 8.0
樗白皮 3.3
葛根 5.0
麦门冬 3.8

[0102] 如上述表3所示，黄连给药组的疾病活动指数值为2.0，示出最低值，荆芥给药组的疾病活动指数值为2.4，示出与阳性对照组相同的值。

[0103] 在实验的最后一天，利用二氧化碳气体牺牲小鼠后，取出大肠部位。从去除的大肠，测量大肠长度，并以纵向切割来确认肠黏膜的状态。

[0104] 在下述表4示出所测量的上述大肠的长度。

[0105] 表4

[0106]

[0107]

[0108] 测量结肠组织中的黏膜溃疡诱发部位及受损的黏膜层的长度后，通过计算其数值的平均值来计算肠黏膜指数。在下述表5及图2示出其结果。

[0109] 表5

[0110] 各给药组的肠黏膜指数

[0111] 对象 肠黏膜指数正常组 0.00
阴性对照组 3.75
阳性对照组 1.00
诃子 1.75
卷柏 1.20
荆芥 1.00
玄草 0.80
补骨脂 2.00
侧柏叶 1.40
黄连 2.20
五倍子 1.60
樗白皮 2.50
葛根 1.80
麦门冬 2.80

[0112] 如上述表5所示，玄草给药组的肠黏膜指数为最低的0.80，之后，荆芥给药组的肠黏膜指数为1.00，示出与阳性对照组相同的值。

[0113] 结果可知，通过给药葡聚糖硫酸钠来诱发肠炎的结果，与阴性对照组相比，在给药诃子、卷柏、荆芥、玄草、补骨脂、侧柏叶、黄连、五倍子、樗白皮、葛根、麦门冬等11种草药提取物的组中示出疾病活动指数值或肠黏膜指数得以改善的效果。

[0114] 实施例3：对于二硝基苯磺酸诱导肠炎模型的单一草药提取物的效果实验

[0115] 将8周龄雄性小鼠(C57BL/6)驯化饲养一周以上后，分类为正常组、给药二硝基苯磺酸(DNBS；西格玛奥德里奇(Sigma‑Aldrich)，美国(USA))来诱发炎症性肠病后给药蒸馏水的二硝基苯磺酸及蒸馏水给药组(阴性对照组)、二硝基苯磺酸及5‑氨基水杨酸给药组(阳性对照组)及二硝基苯磺酸及在实施例2中筛选的11种草药提取物(诃子、卷柏、荆芥、玄草、补骨脂、侧柏叶、黄连、五倍子、樗白皮、葛根、麦门冬)给药组(实验组)。

[0116] 二硝基苯磺酸诱导肠炎模型诱发由T细胞介导的免疫反应，因此与人的克罗恩氏病具有密切关联而周知。二硝基苯磺酸在50％的乙醇/蒸馏水以40mg/mL准备，利用导管向小鼠的直肠内缓慢注射0.1mL。用作阳性对照组药物的5‑氨基水杨酸以25mg/kg稀释在饮用水，并从实验开始之日起，每天口服给药一次，共给药5天。从实验开始之日起，各单一草药提取物以100mg/kg的剂量每天口服给药一次，共给药5天，每天确认存活率。在下述表6及图3示出其结果。

[0117] 表6

[0118] 各给药组的存活率(％)

[0119]对象 存活率(％)
正常组 100
阴性对照组 25
阳性对照组 60
黄连 40
玄草 40
卷柏 40
荆芥 40

[0120] 如上述表6所示，由于给药二硝基苯磺酸，大多数给药组中的个体死亡，但4种草药提取物给药组均示出40％的存活率。

[0121] 在实验的最后一天，利用二氧化碳气体牺牲小鼠后，取出大肠部位并测量大肠长度。在下述表7及图4示出其结果。

[0122] 表7

[0123] 各给药组的肠长度

[0124] 对象 肠长度(cm)正常组 7.96
阴性对照组 4.98
阳性对照组 7.10
黄连 7.04
玄草 6.58
卷柏 6.64
荆芥 6.23

[0125] 如表7所示，测量肠长度的结果，确认与阴性对照组相比，黄连、玄草、荆芥及卷柏的草药提取物给药组的肠长度减少程度得以改善。

[0126] 结果，可知黄连、玄草、荆芥及卷柏具有优秀的肠炎改善或治疗效果。

[0127] 实施例4：单一草药提取物的各个浓度的效果实验

[0128] 将8周龄雄性小鼠(C57BL/6)驯化饲养一周以上后，分类为正常组、葡聚糖硫酸钠及蒸馏水给药组(阴性对照组)、葡聚糖硫酸钠及5‑氨基水杨酸给药组(阳性对照组)、葡聚糖硫酸钠及在实施例1中制备的各单一草药提取物(黄连、玄草、卷柏、荆芥等4种)给药组(实验组)。

[0129] 葡聚糖硫酸钠以2.5％稀释在饮用水并供给100mL，每隔2天更换。为了评估单一草药提取物的各个浓度的效果，将葡聚糖硫酸钠共给药6天后，更换为饮用水。

[0130] 将5‑氨基水杨酸以25mg/kg稀释在饮用水来口服给药。

[0131] 从开始之日起，将各单一草药提取物以10mg/kg、30mg/kg及100mg/kg的剂量每天给药一次，共给药14天，每天确认体重变化、粪便状态及是否血便。在表8及图5示出上述体重变化。

[0132] 表8

[0133] 各给药组的各个浓度的体重变化率

[0134]

[0135]

[0136] 如上述表8所示，确认在黄连给药组中，体重变化率随着浓度的增加而减少。相反，在荆芥给药组中，体重变化率随着浓度的增加而增加，在玄草及卷柏给药组中，体重变化率未根据浓度示出显著差异。

[0137] 并且，基于确认上述体重变化、粪便状态及是否血便的结果计算了疾病活动指数值，在下述表9及图6示出其结果。

[0138] 表9

[0139] 各给药组的疾病活动指数值

[0140]对象 第10天的疾病活动指数值
正常组 0.2
阴性对照组 6.1
阳性对照组 4.8
黄连_10 4.0
黄连_30 3.6
黄连_100 1.6
荆芥_10 4.1
荆芥_30 4.6
荆芥_100 4.2
玄草_10 5.6
玄草_30 5.6
玄草_100 4.8
卷柏_10 4.6
卷柏_30 5.2
卷柏_100 5.6

[0141] 如上述表9所示，在黄连给药组中，疾病活动指数值随着浓度的增加显著减少。相反，分别给药荆芥、玄草及卷柏的组中，疾病活动指数值根据浓度没有示出显著差异。

[0142] 实施例5：比较单一提取物及混合提取物的效果

[0143] 将8周龄雄性小鼠(C57BL/6)驯化饲养一周以上后，分类为正常组、葡聚糖硫酸钠给药组、葡聚糖硫酸钠和蒸馏水给药组(阴性对照组)、葡聚糖硫酸钠和5‑氨基水杨酸给药组(阳性对照组)、葡聚糖硫酸钠和100mg/kg的黄连提取物给药组、葡聚糖硫酸钠和10mg/kg的荆芥提取物给药组以及葡聚糖硫酸钠和100mg/kg的黄连提取物及10mg/kg的荆芥提取物给药组(混合提取物给药组)。

[0144] 葡聚糖硫酸钠以2.5％稀释在饮用水来以100mL供给，每隔2天更换。将葡聚糖硫酸钠给药5天后，更换为饮用水。

[0145] 将用作阳性对照组药物的5‑氨基水杨酸以25mg/kg稀释在饮用水并口服给药。

[0146] 以100mg/kg的黄连、10mg/kg的荆芥及110mg/kg的黄连与荆芥的10:1混合物的剂量每天口服给药一次，共给药14天，每天确认体重变化率、粪便状态及是否血便。基于上述实验结果确认了疾病活动指数值并在下述表10及图7中示出。

[0147] 表10

[0148] 各给药组的第10天的疾病活动指数值

[0149] 对象 第10天的疾病活动指数值正常组 0.0
阴性对照组 5.3
阳性对照组 2.8
黄连100 0.7
荆芥10 2.2
黄连100及荆芥10 0.4

[0150] 如上述表10所示，确认100mg/kg的黄连单一给药组、100mg/kg的荆芥单一给药组及黄连与荆芥的混合给药组均具有小于阳性对照组的疾病活动指数值。并且，确认混合给药组与单一给药组相比具有更低的疾病活动指数值。

[0151] 实施例6：测定作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2及巨噬细胞炎症蛋白2的表达变化

[0152] 使用TRIzol(英杰(Invitrogen)，美国(USA))从在实施例5中回收的小鼠的大肠分离了核糖核酸(RNA)。之后，使用执行逆转录聚合酶链反应(RT‑PCR)来获取的互补脱氧核糖核酸(cDNA)来执行对于作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2及巨噬细胞炎症蛋白2特异性的通过引物(primer)和SYBR green(宝生物(Takara)，日本(Japan))的定量聚合酶链反应(quantitative PCR)。由此获取的核糖核酸的表达水平将磷酸甘油醛脱氢酶信使核糖核酸(GAPDH mRNA)用作标准基因来以与无处理组(正常组)相比相对变化量来示出。在下述表11至表16及图8至图13示出上述实验结果。在下述表17示出与用于上述实验的小鼠基因有关的引物序列。

[0153] 表11

[0154] 与各给药组有关的肿瘤坏死因子α表达水平(相对值)

[0155]对象 肿瘤坏死因子α表达水平
正常组 1.00
阴性对照组 3.91
阳性对照组 2.16
黄连100 1.54
荆芥10 2.12
黄连100及荆芥10 1.22

[0156] 表12

[0157] 与各给药组有关的白细胞介素‑1β表达水平(相对值)

[0158]对象 白细胞介素‑1β表达水平
正常组 1.00
阴性对照组 5.94
阳性对照组 2.28
黄连100 3.87
荆芥10 4.15
黄连100及荆芥10 1.57

[0159] 表13

[0160] 与各给药组有关的白细胞介素‑17表达水平(相对值)

[0161]对象 白细胞介素‑17表达水平
正常组 1.00
阴性对照组 5.12
阳性对照组 1.77
黄连100 3.62
荆芥10 2.03
黄连100及荆芥10 1.55

[0162] 表14

[0163] 与各给药组有关的白细胞介素‑23表达水平(相对值)

[0164]对象 白细胞介素‑23表达水平
正常组 1.00
阴性对照组 5.51
阳性对照组 1.65
黄连100 2.65
荆芥10 2.91
黄连100及荆芥10 1.60

[0165] 表15

[0166] 与各给药组有关的巨噬细胞炎症蛋白2表达水平(相对值)

[0167]对象 巨噬细胞炎症蛋白2表达水平
正常组 1.00
阴性对照组 5.21
阳性对照组 1.86
黄连100 2.85
荆芥10 4.50
黄连100及荆芥10 1.68

[0168] 表16

[0169] 与各给药组有关的CCL2表达水平(相对值)

[0170]

[0171]

[0172] 表17

[0173] 对于小鼠基因的引物序列

[0174]

[0175] 如表11至表16所示，在作为炎症因子的肿瘤坏死因子α、白细胞介素‑1β、白细胞介素‑17、白细胞介素‑23、CCL2及巨噬细胞炎症蛋白2的表达水平中，确认混合给药组具有小于单一给药组的值。结果，可知与单一给药组相比，混合给药组的炎症抑制效果优秀。

[0176] 实施例7：制备混合草药提取物粉末

[0177] 为了制备混合草药提取物粉末，使用洗涤及干燥的黄连(Coptis Rhizome)、荆芥(Schizonepetae Spica及Schizonepetae Herba)。以在表18记载的重量比(w/w)混合上述黄连、荆芥后，添加10倍的70％(v/v)乙醇水溶液，并在常温条件下，搅拌72小时后获取提取液。之后，过滤各个提取液来在50℃至65℃的温度下减压浓缩，进行冷冻干燥来获取粉末状态的混合草药提取物，它们的收率如下。

[0178] 表18

[0179] 各种混合比例的提取物的收率

[0180]区分 黄连 荆芥 提取收率(％)
实施例7‑1 1 1 12.25
实施例7‑2 2 1 14.05
实施例7‑3 4 1 15.97
实施例7‑4 8 1 16.78
实施例7‑5 10 1 16.75

[0181] 实施例8：制备各个提取溶剂的混合草药提取物粉末

[0182] 将洗涤及干燥的黄连(Coptis Rhizome)、荆芥(Schizonepetae Spica及Schizonepetae Herba)用于实验。将上述黄连、荆芥以10:1的重量比(w/w)混合后，添加10倍的25％(v/v)、50％(v/v)、70％(v/v)及95％(v/v)乙醇水溶液，并在常温条件下，搅拌72小时后获取提取液。并且，将上述黄连、荆芥以10:1的重量比(w/w)混合后，添加10倍的蒸馏水，并在保持90℃～95℃的温度下回流提取3小时，由此获取提取液。之后，过滤各个提取液，并在50℃至65℃的温度下减压浓缩，进行冷冻干燥来获取粉末状态的混合草药提取物，它们的收率如下。

[0183] 表19

[0184] 各个提取溶剂的混合草药提取物的提取收率

[0185]提取溶剂 黄连 荆芥 提取收率(％)
热水提取 10 1 16.06
25％的乙醇 10 1 18.68
50％的乙醇 10 1 21.29
70％的乙醇 10 1 20.56
95％的乙醇 10 1 4.37

[0186] 实施例9：对于由脂多糖诱导的巨噬细胞株的一氧化氮(NO，Nitric Oxide)生成的单一及混合草药提取物的效果实验

[0187] 利用包含10％的胎牛血清(FBS)的RPMI培养基(英杰(Invitrogen)，美国(USA))，在5％的CO2培养箱中以37℃的温度培养小鼠的巨噬细胞株Raw264.7细胞(美国模式培养物4
集存库(ATCC)，美国(USA))。以每孔5×10的细胞数在24孔板准备上述细胞并稳定。24小时后，去除细胞的上清液，并在上述细胞以20μg/mL的浓度处理实施例1的单一草药提取物及实施例7的混合草药提取物。30分钟后，在上述细胞追加处理100ng/mL的脂多糖。24小时后，回收细胞的上清液，并实施用于测定一氧化氮的生成变化的格里斯试验(Griess test)，利用NaNO2(Sodium Nitrite)的各个浓度的标准曲线计算一氧化氮的浓度。在下述表20及图
14示出其结果。

[0188] 如图14所示，由于脂多糖的处理，巨噬细胞中的炎症因子一氧化氮的生成增加至4.62μM水平(阴性对照组)。在执行脂多糖处理和单一草药提取物的实验组中，一氧化氮的浓度分别减少至2.75μM、3.93μM左右，相反，在处理混合草药提取物的实验组中，一氧化氮的浓度分别减少至1.69μM、1.71μM、1.41μM、1.79μM、1.99μM，与处理单一草药提取物时相比，示出显著高的一氧化氮生成抑制能力。因此，确认本发明的混合草药提取物示出优秀的抗炎症功效。

[0189] 表20

[0190] 各给药组的一氧化氮生成量

[0191] 对象 一氧化氮生成量(μM)正常组 1.10
阴性对照组 4.62
黄连 2.75
荆芥 3.93
黄连:荆芥＝10:1 1.69
黄连:荆芥＝8:1 1.71
黄连:荆芥＝4:1 1.41
黄连:荆芥＝2:1 1.79
黄连:荆芥＝1:1 1.99

[0192] 实施例10：对于由脂多糖诱导的巨噬细胞株的一氧化氮生成的热水及提取溶剂(乙醇)的各个浓度的混合草药提取物的效果实验

[0193] 利用10％的胎牛血清的RPMI培养基(英杰(Invitrogen)，美国(USA))，在5％的CO2培养箱中以37℃的温度培养小鼠的巨噬细胞株Raw264.7细胞(美国模式培养物集存库4
(ATCC)，美国(USA))。以每孔5×10的细胞数在24孔板准备上述细胞并稳定。24小时后，去除细胞的上清液，并在上述细胞以20μg/mL的浓度处理实施例8的热水及提取溶剂(乙醇)的各个浓度的混合草药提取物。30分钟后，在上述细胞追加处理100ng/mL的脂多糖。24小时后，回收细胞的上清液，并实施用于测定一氧化氮的生成变化的格里斯试验，利用NaNO2(Sodium Nitrite)的各个浓度的标准曲线计算一氧化氮的浓度。在下述表21及图15示出其结果。

[0194] 如图15所示，由于脂多糖的处理，巨噬细胞中的炎症因子一氧化氮的生成增加至4.62μM水平(阴性对照组)。在执行脂多糖处理和热水及提取溶剂(乙醇)的各个浓度的混合草药提取物的实验组中，所测定的一氧化氮的浓度分别为2.22μM、1.48μM、1.73μM、1.45μM、
1.55μM，在所有提取物实验组中确认显著的一氧化氮的生成抑制能力。

[0195] 表21

[0196] 各给药组的一氧化氮生成量

[0197] 对象 一氧化氮生成量(μM)正常组 1.10
阴性对照组 4.62
0％的乙醇(热水提取) 2.22
25％的乙醇 1.48
50％的乙醇 1.73
70％的乙醇 1.45
95％的乙醇 1.55

[0198] 实施例11：对于葡聚糖硫酸钠诱导肠炎模型的单一及混合草药提取物的效果实验[0199] 将8周龄雄性小鼠(C57BL/6)驯化饲养一周以上后，分类为正常组、给药葡聚糖硫酸钠(DSS；36000MW～50000MW，安倍医疗(MP Biomedicals)，美国(USA))来诱发溃疡性结肠炎给药蒸馏水的葡聚糖硫酸钠及蒸馏水给药组(阴性对照组)、葡聚糖硫酸钠及5‑氨基水杨酸(5‑ASA；东京化成工业株式会社(Tokyo Chemical Industry Co.)，日本(Japan))给药组(阳性对照组)以及葡聚糖硫酸钠及在实施例1中制备的黄连、荆芥提取物和在实施例7中制备的混合草药提取物给药组(实验组)。

[0200] 葡聚糖硫酸钠诱导肠炎模型以示出与人的溃疡性结肠炎相似的形态学变化及症状而周知。将葡聚糖硫酸钠以2.5％的比例稀释在饮用水来以100mL供给，每隔2天更换。利用葡聚糖硫酸钠诱导5天后，更换为饮用水。

[0201] 用作阳性对照组药物的5‑氨基水杨酸以25mg/kg稀释在饮用水，并从实验开始之日起，每天口服给药一次，共给药10天。从实验开始之日起，各混合草药提取物以50mg/kg的剂量每天口服给药一次，共给药10天。

[0202] 实验开始后，每天测量各组小鼠的体重来计算体重减少率。在表22及图16示出上述体重变化。

[0203] 表22

[0204] 各给药组的体重变化率

[0205]

[0206]

[0207] 如上述表22所示，在黄连:荆芥＝1:1及10:1比例混合草药提取物给药组中的体重变化率示出黄连单独提取物、荆芥单独提取物及阳性对照组给药组的数值。尤其，当给药黄连:荆芥＝10:1比例混合草药提取物时，观察到显著低于1:1比例混合草药提取物的体重变化率。

[0208] 并且，基于确认上述体重变化、粪便状态及是否血便的结果计算了疾病活动指数值，在下述表23及图17示出其结果。

[0209] 表23

[0210] 各给药组的疾病活动指数值

[0211]对象 第10天的疾病活动指数值
正常组 0.0
阴性对照组 7.8
阳性对照组 4.8
黄连 6.8
荆芥 4.6
黄连:荆芥＝1:1 5.0
黄连:荆芥＝10:1 3.0

[0212] 如上述表23所示，黄连:荆芥＝1:1比例混合草药提取物给药组中的疾病活动指数值低于黄连单独提取物给药组，示出与阳性对照组及荆芥单独提取物给药组相似的值。黄连:荆芥＝10:1比例混合草药提取物给药组中的疾病活动指数值低于黄连单独提取物、荆芥单独提取物及阳性对照组给药组的数值。

[0213] 实验的最后一天，利用二氧化碳气体使小鼠牺牲后，去除大肠部位。从去除的大肠测量大肠的长度，在下述表24及图18示出其结果。

[0214] 表24

[0215] 各给药组的肠长度

[0216] 对象 肠长度(cm)正常组 8.26
阴性对照组 5.65
阳性对照组 7.04
黄连 6.63
荆芥 6.44
黄连:荆芥＝1:1 7.25
黄连:荆芥＝10:1 7.78

[0217] 如上述表24所示，黄连:荆芥＝1:1及10:1比例混合草药提取物给药组中的肠长度高于黄连单独提取物、荆芥单独提取物及阳性对照组给药组的数值。尤其，当给药黄连:荆芥＝10:1比例混合草药提取物时，显著高于1:1比例混合草药提取物的肠长度。

[0218] 结果，通过给药葡聚糖硫酸钠来诱发肠炎的结果，与单独草药提取物给药组相比，黄连及荆芥的混合草药提取物给药组中示出体重变化率、疾病活动指数值或肠长度得以改善的效果。

[0219] 以下，说明包含本发明的提取物的组合物的制剂例，但这并不限定本发明，而使仅具体说明本发明。

[0220] 制剂例

[0221] 制剂例1.制备散剂

[0222] 实施例7‑5的黄连及荆芥的混合提取物       500mg

[0223] 乳糖                                    100mg

[0224] 滑石粉                                  10mg

[0225] 混合上述成分并填充在密封袋来制备散剂。

[0226] 制剂例2..制备片剂

[0227]

[0228] 混合上述成分并根据常规片剂制备方法压片来制备片剂。

[0229] 制剂例3.制备胶囊剂

[0230]

[0231] 根据常规胶囊剂制备方法混合上述成分并填充在明胶胶囊来制备为胶囊剂。

[0232] 制剂例4.制备液体制剂

[0233]

[0234] 根据常规的液体制剂的制备方法向纯水添加各个成分并溶解，添加适量的柠檬香后混合上述成分，并添加纯水来将总量调节为100ml，之后，填充至褐色瓶并灭菌以制备液体制剂。

[0235] 上述组成比以优选实施例混合组成较适合于嗜好饮料的成分根据需求阶层、需求国家、使用用途等地区、民族嗜好随机变更其配合比来实施也无妨。