黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用

摘要

本发明属于医药制备技术领域，公开了一种黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用。本发明提供的黄酮醇类衍生物对于植物生长具有较好的抗衣原体增殖作用，可以用于制备抗衣原体感染药物，作为抗衣原体感染药物的活性成分，具有较好的医药用途。

权利要求

1.式І所示结构的黄酮醇类衍生物或其药学上可成的盐在制备抗衣原体感染药物中的应用，式 І；

所述衣原体为沙眼衣原体、肺炎衣原体和鼠变种衣原体中的一种或几种。

2.一种抗衣原体感染药物，其特征在于，所述抗衣原体感染药物包括活性成分和药学上可以接受的载体，所述活性成分为式І所示结构的黄酮醇类衍生物或其药学上可成的盐，式 І；

所述衣原体为沙眼衣原体、肺炎衣原体和鼠变种衣原体中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的抗衣原体感染药物，其特征在于，所述药学上可接受的载体选自稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂中的一种或多种。

说明书

黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及医药领域，涉及一种黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用，尤其涉及一种二氢黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用。

背景技术

[0002] 衣原体是一类具有独特两相发育周期、严格真核细胞内寄生的原核细胞型革兰氏阴性病原体，能感染任何动物导致多种疾病的发生。其中主要的致病性衣原体主要包含沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。生殖道沙眼衣原体感染是全球最常见的性传播疾病之一。据报道，每年大约有1.3亿的生殖道沙眼衣原体新增感染患者，已经上升为性传播疾病的首位。当沙眼衣原体侵入人体后，能诱导产生特异性细胞免疫和体液免疫，且常常造成持续感染、隐性感染和反复感染而出现一系列的临床疾病，产生严重的并发症。当孕妇感染后，还可通过产道将沙眼衣原体传染给新生儿，导致新生儿结膜炎和新生儿肺炎等能危及生命的严重感染。同时还有一些生殖道沙眼衣原体感染的病人会增加HIV感染的风险。而肺炎衣原体则是人类呼吸道疾病的重要病原体，超过60％的人群一生中至少经受过一次肺炎衣原体引起的呼吸道感染，而且常常反复感染。肺炎衣原体感染可引起各种急慢性呼吸道疾病，7％‑10％的社区获得性肺炎就是由肺炎衣原体感染引起的，5％的支气管炎和鼻窦炎也是由肺炎衣原体感染引起的体慢性感染与心血管疾病相关，已引起各国学者的高度重视。此外，从中风病人的血块和阿尔茨海默症病人的大脑中，均分离出了肺炎衣原体。

[0003] 二氢黄酮醇类化合物是一类结构比较特殊的黄酮类成分。该类成分为黄酮类C2‑3位的双键氢化后的衍生物，此类成分多数带有羟基或甲氧基，C3位上带有羟基的，通称为二氢黄酮醇类。该类成分分布广泛，在大多数高等植物中均有报道。二氢黄酮醇类衍生物作为生物制剂在抗肿瘤，抗氧化等方面表现除了巨大的潜能。此外，还具有抗炎等生物活性。但是，B环发生复杂重排的二氢黄酮类化合物在自然界中含量极低，同时尚没有关于其生物活性方面的报道。

发明内容

[0004] 有鉴于此，本发明的目的是提供黄酮醇类衍生物在制备抗衣原体感染药物中的应用，具体提供了黄酮醇类衍生物或其药学上可成的盐在制备抗衣原体药物中的应用，此黄酮醇类衍生物对衣原体具有良好的抑制增殖作用，同时使其子代失活而丧失传播能力，具有较好的抗衣原体感染活性。

[0005] 本发明提供了以下技术方案：

[0006] 式I所示结构的黄酮醇类衍生物或其药学上可成的盐在制备抗衣原体感染药物中的应用，

[0007]

[0008] 进一步的，所述衣原体为沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体中的一种或几种。

[0009] 本发明还提供了式I所示黄酮醇类衍生物制备方法，包括如下步骤：

[0010] 1)初步提取：将新鲜松叶经无水乙醇萃取后，室温下减压浓缩至干，得松叶提取物；云南松Pinus yunnanensis Franch的新鲜松叶；

[0011] 2)反相中低压色谱柱纯化：将步骤1)得到的植物提取物溶于适量甲醇，加至装有反相硅胶的色谱柱，依次采用体积浓度为20％的乙醇溶液、体积浓度为30％的乙醇溶液、体积浓度为40％的乙醇溶液、体积浓度为50％的乙醇溶液、体积浓度为60％的乙醇溶液、体积浓度为70％的乙醇溶液、体积浓度为80％的乙醇溶液、体积浓度为100％的乙醇溶液洗脱，取经过体积浓度为30％的乙醇溶液和体积浓度为40％的乙醇溶液洗脱的流份；

[0012] 3)反相高效液相色谱纯化：将步骤2)得到的流份经反相高效液相色谱分离提纯，得黄酮醇类衍生物，其结构如式I所示。

[0013] 本发明还提供了一种抗衣原体感染药物，所述抗衣原体感染药物包括活性成分和药学上可以接受的载体，所述活性成分为式I所示结构的黄酮醇类衍生物或其药学上可成的盐，

[0014]

[0015] 进一步的，所述衣原体为沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体中的一种或几种。

[0016] 进一步的，所述药学上可接受的载体选自稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂中的一种或多种。

[0017] 与现有技术相比，本发明提供了一种新的黄酮醇类衍生物，通过体外试验证实，本发明提供的黄酮醇类衍生物具有较好的抗衣原体增殖活性，尤其对沙眼衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体具有良好的抑制增殖作用，同时使其子代失活而丧失传播能力，具有较好的抗衣原体感染活性，可以作为抗衣原体感染药物的活性成分，具有广泛的用途。

附图说明

[0018] 图1为本发明实施例1制备得到的黄酮醇类衍生物的HPLC液相色谱图；

[0019] 图2为本发明实施例1得到的黄酮醇类衍生物的氢谱数据图；

[0020] 图3为本发明实施例1得到的黄酮醇类衍生物的碳谱数据图；

[0021] 图4为本发明实施例1得到的黄酮醇类衍生物的抗衣原体活性免疫荧光图。

具体实施方式

[0022] 为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的黄酮醇类衍生物及其制备方法进行详细描述。

[0023] 实施例1、结构式为式I化合物的制备

[0024] 本发明采用实验室培养条件下常规条件下提取，纯化等步骤，来制备本发明化合物。其中所采用的植物为云南松新鲜松叶(Pinusyunnanensis Franch)。

[0025] 具体化合物的过程如下：1)提取

[0026] 采集云南松新鲜松叶(5.2kg)，阴干后粉碎，用无水乙醇于室温下提取(5L*3)，萃取液减压浓缩至干，得到转化物残渣约1071.8g。

[0027] 2)反相硅胶色谱柱纯化

[0028] 将所得残渣溶于适量甲醇，加至装有120g反相硅胶(120埃，30–50目)的色谱柱，用甲醇‑水系统梯度洗脱(30％‑100％甲醇)，收集洗脱组分，其中30％组分‑40％组分为主要采集部位。

[0029] 3)反相高效液相色谱纯化

[0030] 合并组分用反相高效液相色谱分析、纯化。分析条件为：色谱柱Hedera C18A‑5μm，4.6mm I.D×250mm (江苏汉邦科技)，洗脱系统为甲醇–水等度洗脱，具体条件：甲醇–水(35:65，V/V，甲酸：0.1％)，流速为2.0mL/min。检测波长为220nm，柱温25℃，进样量20μL。得到结构式为式I等次生代谢产物，即黄酮醇类衍生物，其HPLC液相色谱图、氢谱数据图、碳谱数据图如图1‑3所示。

[0031] 化合物I，(R)‑6‑oxo‑4‑((2R,3R)‑3,5,7‑trihydroxy‑4‑oxochroman‑2‑yl)‑3,6‑20
dihydro‑2H‑pyran‑2‑carboxylic acid，黄色无定形粉末：化合物旋光度；[α] D+17.1(c ‑1
0.023,MeOH)；红外光谱主要吸收峰(IR)νmax:3445, 3023，2920,1736,1636,1132,1067cm ；
‑
核磁共振氢谱以及碳谱数据,见表1；高分辨ESI质谱数据： (HRESIMS)m/z 335.0403[M‑H](calc.for C15H12O9335.0403)。

[0032] 表1.化合物1的氢谱和碳谱数据(氘代甲醇)

[0033]

[0034] 以上结果表明，所得化合物结构如式I所示。

[0035] 实施例2：本发明化合物I的抗衣原体活性

[0036] (1)实验材料

[0037] 仪器与试剂：二氧化碳培养箱；酶标仪(Bio‑TEKELx800)；荧光倒置显微镜(Olympus IX51)；RPM I 1640培养基(Gibcol BRL)，RnaseA、胎牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶(上海生物工程有限公司)、HeLa/Hep2细胞。测试所用致病衣原体株：沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)、肺炎衣原体 (Chlamydiapneumoniae,Cpn)，鼠变种衣原体(Chlamydia muridarum Nigg，MoPn)购于中国医学科学院微生物研究所。

[0038] 测试样品：云南松松针次生代谢产物Ⅰ，纯度在90％以上，化合物以DMSO溶解后稀释。

[0039] (2)实验方法

[0040] 1)式Ⅰ对宿主细胞细胞毒活性实验：将宿主细胞(HeLa/Hep2细胞)培养至覆盖培养皿底部90％以上，获取细胞悬液，离心弃掉培养基，加入4mL完全培养基后，用移液枪轻轻吹打均匀，台酚蓝染色后进行细胞计数，然后将细胞均匀接种于96孔板(90μL，4×104/mL)中，孵育过夜。根据实验要求每孔加入10 μL不同浓度的苔藓提取物，培养48后。在其中加入10μLWST‑1检测试剂，继续孵育两个小时，计算式Ⅰ对细胞生长增殖的相对抑制率及半数有效抑制浓度(IC50)。

[0041] 2)式Ⅰ所示化合物的外抗衣原体活性实验：将复苏的宿主细胞接种于24孔板上，孵育24小时后，将沙眼衣原体，肺炎衣原体以及鼠变种衣原体以MOI＝0.2感染贴壁24小时的宿主细胞，感染的同时加入不同浓度的黄酮醇类衍生物式Ⅰ，26小时候后收获细胞，测定衣原体的滴度，同时，甲醇固定进行免疫荧光染色，抗衣原体活性免疫荧光图如图4所示。观察实验结果，从而判断式Ⅰ对野生型衣原体的体外抗衣原体活性结果，结果如表2所示。

[0042] 表2.化合物I的抑制衣原体生长活性测试结果(IC50，μM)

[0043]

[0044] 结果表明，本发明的化合物I具有良好的抑制衣原体增殖活性，可以作为抗衣原体药物的活性成分。

[0045] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。