小分子抑制剂在预防及治疗呼吸道病毒性肺炎中的应用

摘要

本申请提供小分子抑制剂在预防及治疗呼吸道病毒性肺炎中的应用。具体而言，涉及AhR抑制剂在治疗或改善病毒感染中的新用途。本申请提供的治疗病毒感染的抑制剂可有效抑制血管紧张素转化酶2的表达，从而阻断病毒感染肺部组织，AhR抑制剂有望成为预防及治疗病毒感染引发的肺部疾病的潜在药物。

权利要求

1.AhR抑制剂在制备药物中的用途，其中：

所述药物用于选自以下的任一项或组合：预防病毒性肺炎的发生或复发、治疗病毒性肺炎或其症状；

所述病毒是SARS‑COV2或其变体；

所述AhR抑制剂是CH223191；

所述药物制备成选自以下的剂型：注射剂、喷雾剂、气雾剂、滴鼻剂、口服剂、适用于粘膜施用的剂型。

2.根据权利要求1所述的用途，所述AhR抑制剂在单位制剂中的量是10mg至10g。

3.根据权利要求1所述的用途，所述AhR抑制剂在单位制剂中的量是10mg至80mg。

4.根据权利要求1所述的用途，其中：

所述治疗体现为选自以下的一项或组合：改善血氧饱和度、改善PaO2/FiO2、缓解呼吸窘迫、降低RRS呼吸系统阻力、改善ERS、改善PV‑k水平、改善Eta水平、改善DLCO水平、调节血管紧张素转化酶2的表达水平、提高存活率、延长生存期。

5.根据权利要求1所述的用途，所述预防是指延迟或阻止疾病向重症或危重症发展、降低发展为重症或危重症的风险。

6.根据权利要求1所述的用途，所述病毒性肺炎选自以下的一项：轻型、普通型、重型、危重型。

说明书

小分子抑制剂在预防及治疗呼吸道病毒性肺炎中的应用

[0001] 本申请要求专利申请202010552732.7(优先权日2020年6月17日)的优先权。

技术领域

[0002] 本申请涉及生物、医学、临床领域。具体而言，涉及小分子抑制剂及其在预防和治疗病毒性肺炎中的用途。

背景技术

[0003] 全球冠状病毒大流行已经给世界各国造成了巨大的影响。该病毒在不到6个月的时间内已传播到全世界几乎每个国家。其中一些国家已经经历了第二波爆发，而俄罗斯、巴西、印度和非洲部分地区等其他国家仍处于第一波爆发中。

[0004] 这次新型的病原体于2020年2月11日被世界卫生组织(WHO)命名为严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS‑CoV‑2)。SARS‑CoV‑2是2019年冠状病毒(COVID‑19)的病因，分别与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS‑CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS‑CoV)属于同一病毒家族该病毒分别于2003年和2012年命名。然而，与以前的新型冠状病毒相关疾病不同，COVID‑19大流行导致各国出现了较高的发病率和死亡率。

[0005] 新型冠状病毒肺炎COVID‑19，一旦进入重症阶段，其进程就会变得非常难以掌控，并很容易导致患者死亡。目前，SARS‑COV‑2感染导致患者死亡的原因尚不明确。一般认为，病毒进入是介导致病过程的第一步。血管紧张素转换酶2(ACE2)是气道上皮细胞表面表达的一种膜受体。在21世纪初，科学家开始对ACE2进行深入的研究。ACE2被证实是SARS‑COV和HCoV‑NL63这两种人冠状病毒的宿主细胞受体，可以与冠状病毒的刺突蛋白相互作用。这种相互作用由刺突蛋白的RBD结构域介导，并且被认为是病毒与细胞进行膜融合的关键步骤。ACE2是新发现的一种致命性新型冠状病毒SARS‑CoV‑2(2019‑nCoV)的宿主细胞受体。阻断S蛋白和ACE2之间的相互作用是治疗冠状病毒感染的有效方法。

[0006] 因此，如何提供可以将受体ACE2可作为治疗性靶点对病毒感染进行有效的干预，从而有效预防新冠感染肺部组织，成为当前有待解决的问题。

发明内容

[0007] 根据本公开的一些实施方案，提供了一种AhR(芳烃受体，arylhydrocarbon receptor)抑制剂，其可用作病毒性肺炎制剂。所述病毒性肺炎制剂包含AhR抑制剂。

[0008] 在本公开中，术语“抑制剂”是指天然化合物或合成化合物，其抑制(或减小或下调)基因和/或蛋白的表达、和/或抑制(或减小或下调)基因和/或蛋白的活性、和/或调节与该基因和/或蛋白的相关信号传导通路。作为非限制性的示例，所述抑制剂可以作用于基因和/或蛋白的以下任一环节或组合：例如但不限于翻译、翻译后加工、稳定性、降解、核定位、胞质定位、转录、转录后加工、激活、失活、修饰、信号传导。抑制剂允许是竞争性的、非竞争性的、完全拮抗的、或部分拮抗的。

[0009] 因此，AhR抑制剂是指具有以下作用的化合物：抑制(或减小或下调)AhR编码基因的表达、和/或AhR的表达、和/或AhR的活性、和/或调节AhR相关信号传导通路(例如，但不限于AhR相关信号传导通路的上游)。根据本公开的一些实施方案，提供了AhR抑制剂在制备药物中的用途，其中所述药物用于选自以下的任一项或组合：预防病毒性肺炎的发生或复发、治疗病毒性肺炎或其症状。

[0010] 在一些实施方案中，所述病毒选自以下的一种或组合：冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、亨德拉病毒、尼派病毒、风疹病毒、鼻病毒、腺病毒、呼肠病毒、柯萨奇病毒、ECHO病毒、及其变体。

[0011] 在一些实施方案中，所述药物制备成选自以下的剂型：注射剂、喷雾剂、气雾剂、滴鼻剂、口服剂、适用于粘膜施用的剂型。

[0012] 适用于本公开的AhR抑制剂例如但不限于现有技术中公开的化合物：WO2019036657、WO2018195397、CN106860471A、WO2013034685、WO2012015914。

[0013] 在一些示例性实施方案中，所述AhR抑制剂选自以下的一种或组合：AhR拮抗剂1、α‑NF、CB7993113、CMLD‑2166、CH223191、DMF、GNF351、PDM2、StemRegenin 1、SR1、IDO抑制剂。

[0014] 在一些实施方案中，提供了一种IDO(吲哚胺2,3‑双加氧化酶，indoleamine 2,3‑dioxygenase)抑制剂，其可用作病毒性肺炎制剂。所述病毒性肺炎制剂包含IDO抑制剂。

[0015] IDO(例如IDO1)是位于AhR信号传导通路上游的活性分子。因此，作用于IDO的抑制剂能够间接地调节AhR的活性。

[0016] IDO抑制剂是指具有以下作用的化合物：抑制(或减小或下调)IDO编码基因的表达、和/或IDO的表达、和/或IDO的活性。

[0017] 在本领域中，IDO抑制剂按结构通常可分为以下几个类型：

[0018] ‑色氨酸类似物：示例性的化合物是色氨酸的N‑甲基衍生物L1MT；

[0019] ‑醌类化合物：主要从天然产物中获得；

[0020] ‑咪唑及三氮唑类化合物：4‑苯并咪唑及其衍生物可与亚铁血红素的铁原子配位，具有较强的IDO抑制活性。示例性的化合物是NewLink Genetics公司的NLG919；

[0021] ‑N‑羟基脒类化合物：N‑羟基脒类化合物可以与亚铁血红素的铁原子结合，同时和旁边酰胺基上的氮原子形成氢键。示例性的化合物是INCB024360。

[0022] 适用于本公开的IDO抑制剂例如但不限于现有技术中公开的化合物：CN106866648B、CN106883224B、CN107501272B、CN109438513B、CN109748838B、
CN105567690B、CN107260743B、WO2015173764。

[0023] 在一些示例性的实施方案中，所述IDO抑制剂选自以下的一种或组合：色氨酸类似物、醌及其衍生物、咪唑及其衍生物、三氮唑及其衍生物、N‑羟基脒及其衍生物。

[0024] 在一些实施方案中，所述IDO抑制剂选自以下的一种或组合：1‑MT、Epacadostat、DO‑IN‑2、NLG919、PF‑06840003、INCB024360、Exiguamine A、苯并咪唑。

[0025] 在一些实施方案中，所述AhR抑制剂在单位制剂中的量是10mg至10g。可以提及10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、
600mg、700mg、800mg、900mg、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、3.5g、4g、4.5g、5g、5.5g、6g、6.5g、7g、
7.5g、8g、8.5g、9g、9.5g、10g或前述任意两个数值间的范围。

[0026] 在一些实施方案中，单位制剂中IDO抑制剂的量是1g至10g。

[0027] 在另一些实施方案中，所述AhR抑制剂在单位制剂中的量是10mg至80mg。

[0028] 在一些实施方案中，所述冠状病毒选自：SARS、SARS‑COV2、及其变体。

[0029] 在一些实施方案中，治疗体现为选自以下的一项或组合：

[0030] 改善血氧饱和度、改善PaO2/FiO2、缓解呼吸窘迫、降低RRS呼吸系统阻力、改善ERS、改善PV‑k水平、改善Eta水平、改善DLCO水平、调节ACE2的表达水平、延迟或阻止疾病向重症发展、提高存活率、延长生存期。

[0031] 在一些实施方案中，所述病毒性肺炎选自：轻型、普通型、重型、危重型。

[0032] 根据一些实施方案，提供了一种药物组合物，其包含AhR抑制剂、以及任选地可药用载体。

[0033] 在一些实施方案中，所述药物组合物用于选自以下的任一项或组合：预防病毒性肺炎的发生或复发、治疗病毒性肺炎或其症状。

[0034] 在一些实施方案中，所述病毒选自以下的一种或组合：冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人偏肺病毒、亨德拉病毒、尼派病毒、风疹病毒、鼻病毒、腺病毒、呼肠病毒、柯萨奇病毒、ECHO病毒、及其变体。

[0035] 在一些实施方案中，所述冠状病毒选自：SARS、SARS‑COV2、及其变体。

[0036] 在一些实施方案中，所述药物组合物是选自以下的剂型：注射剂、喷雾剂、气雾剂、滴鼻剂、口服剂、适用于粘膜施用的剂型。

[0037] 根据一些实施方案，提供了一种预防或治疗病毒性肺炎的方法，包括向受试者施用预防有效量或治疗有效量的AhR抑制剂。在一些实施方案中，可以提及的施用途径包括但不限于：肌内、静脉内、皮下、皮内、口服、鼻内、呼吸道、经粘膜、舌下、肠胃外。

[0038] 在根据本申请的方法的一些实施方案中，“有效量”或“有效剂量”指获得任一种或多种有益的或所需的治疗结果所必需的药物、化合物、药物组合物的量。有益的或所需的结果包括：改善临床结果(如，减少发病率、死亡率、改善一个或多个症状)、减轻严重程度、延迟病症的发作(包括病症或其并发症、在病症发展过程中呈现的中间病理表型、生物化学、组织学和/或行为症状)。

[0039] 在一些实施方案中，所述单位制剂为满足一次给药所需有效成分(AhR抑制剂)的制剂，如一单位(针)针剂等。

[0040] 患者一次施用所需的药物的量可以方便地通过计算患者的体重和该患者一次用药所需单位体重剂量的乘积得到。例如，在制备药物的过程中，一般认为成人体重为50‑70kg，可以最初可以通过实验动物与人的单位体重剂量之间的等效剂量换算关系来确定用药量。例如，可以根据FDA、SFDA等药品管理机构提出的指导意见，也可参考(黄继汉等，“药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算”，《中国临床药理学与治疗学》，2004Sep；
9(9)：1069‑1072)来确定。

[0041] 在本公开的实施方式中，可以使用按照人和小鼠的体表面积折算系数0.0026来换算人和小鼠的剂量。

[0042] 在本公开的方案中，例如，针对体重为20g的小鼠，IDO抑制剂以1000mg/kg的量施用给小鼠(例如对于20g的小鼠，将IDO抑制剂用水配制为5mg/mL的溶液，小鼠每天灌服该溶液4mL)。

[0043] 根据一些实施方案，还提供了一种预防呼吸道病毒性肺炎患者转为重症的方法，包括患有呼吸道病毒性肺炎的患者或具有转为重症的发生趋势的个体施用所述抗呼吸道病毒性肺炎制剂的过程。具体过程为静脉或口服AhR抑制剂。

[0044] 根据本公开的方案，可以根据需要控制抗呼吸道病毒性肺炎制剂中的AhR抑制剂的量，方便对不同阶段的病毒性肺炎患者的给药。

[0045] 不限于任何理论束缚，干扰素是病毒入侵的第一个警报，其信号激活一系列抗病毒基因，以发挥直接抗病毒作用。然而，延迟的干扰素反应可能通过产生高水平炎症因子的固有免疫细胞的募集和激活，引起机体免疫病理学改变。本申请人研究中发现IFN‑β和IFN‑γ上调BAES‑2B细胞中血管紧张素转化酶2的表达，从而导致病毒感染肺部组织。实验研究出乎意料的发现，AhR抑制剂有效阻断IFN‑β和IFN‑γ诱导产生的血管紧张素转化酶2，能够实现对预防危重症呼吸道病毒性肺炎病毒肺炎患者的临床价值。

[0046] 在根据本申请的方法的一些实施方案中，患者是指病毒携带者，尤其是因病毒的存在而已经出现或可能出现症状的患者。在具体的实施方案中，患者尤其是具有发展为重症或危重症风险的患者。

附图说明

[0047] 图1显示了使用Kyn处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞时，发现Kyn在蛋白水平上均能显著诱导ACE2表达，而且通过添加AhR抑制剂CH223191消除了Kyn诱导的ACE2表达。

[0048] 图2显示了使用IFN‑β或IFN‑γ处理BAES‑2B细胞和小鼠II型肺泡上皮细胞也导致ACE2表达上调，但可以被IDO抑制剂1‑MT或者AhR抑制剂CH223191破坏。

[0049] 图3显示用FICZ处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞导致BAES‑2B和原代鼠肺泡上皮细胞中ACE2表达上调。

[0050] 图4显示用Kyn和干扰素均能有效刺激AhR从BAES‑2B细胞或小鼠II型肺泡上皮细胞的胞质转移至细胞核。

[0051] 图5显示用AHR抑制剂可以有效抑制SARS‑COV‑2造成的肺部损伤。

[0052] 图6显示用AHR抑制剂可以有效降低SARS‑COV‑2的病毒载量。

具体实施方式

[0053] 下述实施例中使用的各种细胞系、药物及实验动物：BEAS‑2B人肺上皮细胞系购自中国典型物保藏中心CCTCC；SARS‑COV‑2来源于中国医学科学院医学实验动物研究所；6‑8周龄雌性Balb/c小鼠购自中国医学科学院协和医学院实验动物中心；3‑4岁年龄恒河猴来源于中国医学科学院协和医学院实验动物研究所；IDO抑制剂(1‑MT)购自美国SIGMA公司；AhR抑制剂(CH223191)购自美国MCE公司。

[0054] 实施例1.Kyn在通过AHR途径显著诱导ACE2表达

[0055] 一、实验步骤：

[0056] 1.准备试剂：无Ca2+/Mg2+HBSS+5％FBS+2mM EDTA+胶原酶+透明质酸酶，预热至372+ 2+
℃；处死小鼠，剪取肺脏；去除支气管和淋巴结；用无Ca /Mg PBS洗净肺内容物；将肺脏剪成尽可能小的小块，放入50mL离心管中，加20mL第一步骤准备的试剂；水平摇床37℃250rpm振摇20min；200目滤网过滤上清液至新的50mL离心管中，剩余肠道组织再加20mL第一步骤准备的试剂；水平摇床37℃250rpm振摇20min；200目滤网过滤上清液至刚才的50mL离心管；
滤液400g离心5min，获得的细胞沉淀为肺上皮细胞，用PBS洗涤三次，用于后续实验。

[0057] 2.分为下组：对照组(PBS处理)和Kyn组(0.4mM Kyn处理48小时)，Kyn加AHR抑制剂(0.4mM Kyn和4μM CH223191处理48小时)。

[0058] 3.Western印记检测蛋白表达：不同处理的样本，加入蛋白酶抑制剂；冰上裂解30min；12000g 4℃离心20min，吸取上清到新的1.5mL EP管，即为细胞总蛋白；可直接进行蛋白定量，或放于‑80℃暂存。

[0059] 4.BCA蛋白定量：取各蛋白样本少量用RIPA裂解液进行5倍和10倍稀释，吸取25μL加入到96孔板中；将蛋白标准品原液(4μg/μL)用RIPA裂解液进行倍比稀释，各浓度吸取25μL加入到96孔板中，最后一孔加25μL RIPA裂解液，浓度依次为：1.6μg/μL，0.8μg/μL，0.4μg/μL，0.2μg/μL，0.1μg/μL，0.05μg/μL，0.025μg/μL，0μg/μL；将蛋白显色液与稀释液1:50混合，96孔板每孔加200μL；37℃反应30min；用酶标仪读取各孔562nm处的吸光度值，根据标准品的浓度与吸光度绘制标准曲线，根据蛋白样本的吸光度值计算蛋白浓度。

[0060] 5.配制胶板：组装好制胶板，配分离胶，在加入TEMED吹匀后即刻灌胶(0.75mm胶槽灌3.2mL分离胶，1mm胶槽灌5mL分离胶)，避免产生气泡；在分离胶上加一层异丙醇，保证分离胶上缘平整，约40min分离胶凝固后可在两相界面看到一条折光线；倒掉异丙醇，用滤纸吸干，吸水时不得碰到分离胶，放置10min待异丙醇挥发；配浓缩胶，加入TEMED吹匀后即刻灌胶，随即插入梳子，避免有气泡在胶中，约30min浓缩胶凝固；制好的胶板可立即点样进行电泳，也可用水润湿的滤纸包裹放于4℃保存。

[0061] 6.SDS‑PAGE电泳：根据需要上样的蛋白总量和各样本的蛋白浓度，计算所需各样本体积，吸取相应体积到新的1.5mL EP管，加入上样缓冲液，金属浴100℃煮10min；装配电泳组件，倒入1×SDS‑PAGE电泳缓冲液，弃去上层泡沫，在电泳液中竖直向上拨出梳子；点入煮过的蛋白样和蛋白标记物，并用1×上样缓冲液补齐各样本体积；将电泳组件放入电泳槽，倒入1×SDS‑PAGE电泳缓冲液至刻度线；开始电泳，样本在浓缩胶时恒压80V，进入分离胶后恒压120V，当溴酚蓝到达胶底部时停止电泳。

[0062] 7.转膜：电泳结束前半小时将滤纸和剪好的NC膜浸泡在4℃预冷的转膜缓冲液中；电泳结束后取出胶，按分子量标准切出目的蛋白所在区域；在转膜缓冲液中装配转膜组件，由负极到正极依次为：滤纸、胶、NC膜、滤纸；将转膜组件放入电泳槽，倒入1L转膜缓冲液；接通电源，恒流200mA在冰中转膜，转膜时间根据蛋白分子量决定。

[0063] 8.抗体孵育：转膜完毕，取出NC膜放于5％BSA封闭液(BSA用TBST溶解)中，室温水平摇床慢摇封闭2h；将膜放于5％BSA稀释的一抗中，室温慢摇孵育1h后，放于4℃孵育过夜；过夜后将膜取出(一抗加叠氮钠回收利用，4℃保存)，放入盛有TBST的平皿中，室温快摇洗膜，每次10min，洗4次；将膜放于5％BSA稀释的二抗中，室温慢摇孵育2h；将膜取出放入盛有TBST的平皿中，室温快摇洗膜，每次10min，洗4次。

[0064] 9.化学发光显影：洗膜完毕将膜浸泡在TBST中拿入暗室；ECL显色剂A、B液等体积2
混合，5cm的膜显色剂总量1mL即可；在暗室桌上铺一层PE手套，镊子夹取膜在吸水纸上蘸干后平放于PE手套上，在膜上均匀滴加显色剂混合液；关灯，可见膜上目的条带逐渐发亮，夹取膜在吸水纸上蘸干显色液，放入X光片盒中，盖一层透明塑料纸；取出一张X光片放入盒中，盖上盒盖，根据发光亮度不同调整曝光时间；时间到后，取出X光片放入洗片机，若对条带不满意，可再取X光片放入盒中，调整曝光时间。

[0065] 二、实验结果

[0066] WESTERN印记显示使用Kyn处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞时，发现Kyn在蛋白水平上均能显著诱导ACE2表达，而且通过添加AhR抑制剂CH223191消除了Kyn诱导的ACE2表达。

[0067] 实施例2.干扰素β在通过IDO‑AHR途径诱导ACE2表达

[0068] 一、实验步骤

[0069] 1.准备试剂：Ca2+/Mg2+HBSS+5％FBS+2mM EDTA+胶原酶+透明质酸酶，预热至37℃；2+ 2+
处死小鼠，剪取肺脏；去除支气管和淋巴结；用无Ca /Mg PBS洗净肺内容物；将肺脏剪成尽可能小的小块，放入50mL离心管中，加20mL第一步骤准备的试剂；水平摇床37℃250rpm振摇
20min；200目滤网过滤上清液至新的50mL离心管中，剩余肠道组织再加20mL第一步骤准备的试剂；水平摇床37℃250rpm振摇20min；200目滤网过滤上清液至刚才的50mL离心管；滤液
400g离心5min，获得的细胞沉淀为肺上皮细胞，用PBS洗涤三次，用于后续实验。

[0070] 2.分为下组：对照组(PBS处理)，干扰素β组(1ng/ml INFβ处理48小时)，干扰素β组加IDO抑制剂(1ng/ml INFβ和0.2mM 1‑MT处理48小时)和干扰素β组加AHR抑制剂(1ng/ml INFβ和4μM CH223191处理48小时)。

[0071] 3.Western印记检测、BCA蛋白定量、配制胶板、SDS‑PAGE电泳、转膜、抗体孵育、化学发光显影的操作同上实施例1所述。

[0072] 二、实验结果

[0073] WESTERN印记显示使用干扰素β处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞时，发现干扰素β在蛋白水平上均能显著诱导ACE2表达，而且通过添加IDO1抑制剂1‑MT或者AhR抑制剂CH223191消除了干扰素β诱导的ACE2表达。

[0074] 实施例3.干扰素γ在通过IDO‑AHR途径诱导ACE2表达

[0075] 一、实验步骤

[0076] 1.小鼠肺泡细胞分离的操作同上实施例1所述。

[0077] 2.分为下组：对照组(PBS处理)，干扰素γ组(10ng/ml INFγ处理48小时)，干扰素γ组加IDO抑制剂(10ng/ml INFγ和0.2mM 1‑MT处理48小时)和干扰素γ组加AHR抑制剂(10ng/ml INFγ和4μM CH223191处理48小时)。

[0078] 3.Western印记检测、BCA蛋白定量、配制胶板、SDS‑PAGE电泳、转膜、抗体孵育、化学发光显影的操作同上实施例1所述。

[0079] 二、实验结果

[0080] WESTERN印记显示使用干扰素γ处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞时，发现干扰素γ在蛋白水平上均能显著诱导ACE2表达，而且通过添加IDO1抑制剂1‑MT或者AhR抑制剂CH223191消除了干扰素γ诱导的ACE2表达。

[0081] 实施例4.FICZ在通过AHR诱导ACE2表达

[0082] 一、实验步骤

[0083] 1.小鼠肺泡细胞分离的操作同上实施例1所述。

[0084] 2.分为下组：对照组(PBS处理)、FICZ组(1μM FICZ处理48小时)。

[0085] 3.Western印记检测、BCA蛋白定量、配制胶板、SDS‑PAGE电泳、转膜、抗体孵育、化学发光显影的操作同上实施例1所述。

[0086] 二、实验结果

[0087] WESTERN印记显示使用FICZ处理BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞时，发现FICZ在蛋白水平上均能显著诱导ACE2表达。

[0088] 实施例5.干扰素刺激AHR的核定位现象

[0089] 一、实验步骤

[0090] 1.小鼠肺泡细胞分离的操作同上实施例1所述。

[0091] 2.分为下组：对照组(PBS处理)，干扰素β组(1ng/ml干扰素β处理48小时)、干扰素γ组(10ng/ml干扰素γ处理48小时)、Kyn组(0.4mM Kyn处理48小时)。

[0092] 3.Western印记检测、BCA蛋白定量、配制胶板、SDS‑PAGE电泳、转膜、抗体孵育、化学发光显影的操作同上实施例1所述。

[0093] 二、实验结果

[0094] 用干扰素处理的BAES‑2B和小鼠II型肺泡上皮细胞，发明人发现相比于对照组小鼠(PBS组)，免疫荧光染色的结果显示干扰素处理组和Kyn处理组的AHR明显上调表达，并且出现入核定位。

[0095] 实施例6.AHR抑制剂逆转SARS‑COV‑2病毒造成肺组织损伤现象并且明显降低病毒载量

[0096] 一、实验步骤

[0097] 恒河猴采用非暴露式气管内注入法。正常组经气管一次性注入与处理组等量生理6
盐水，处理组经气管一次性灌肺10 单位的SARS‑CoV‑2病毒颗粒。注入后，立即将动物充分直立旋转，使药物在肺内分布均匀，等待1周造模处理。肺组织的采集：将恒河猴麻醉后，进行安乐死，开胸取出肺组织，用预备生理盐水清洗掉肺组织表面的血污，尽量迅速进行上述操作后随即将组织存于–80℃保存。把一部分的肺组织立即放入4％多聚甲醛中保存，用于HE染色的制备和RNA原位杂交。

[0098] 二、实验结果

[0099] 用SARS‑CoV‑2感染的恒河猴的肺组织，发明人发现相比于对照组小鼠(MOCK组，未感染病毒)，HE染色的结果显示小鼠肺组织损伤明显，而使用AhR抑制剂可以明显逆转SARS‑CoV‑2造成恒河猴肺组织损伤(图5)。并且，发明人发现AhR抑制剂组相比于感染组恒河猴，RNA原位杂交的结果显示恒河猴肺组织病毒载量明显下降，而使用AhR抑制剂可以明显降低SARS‑CoV‑2的病毒载量(图6)。

[0100] 综上，本申请的方案具有以下效果：

[0101] 1.本申请的抗呼吸道病毒性肺炎制剂AhR抑制剂，可有效抑制病毒诱导机体呼吸系统表达的ACE2，其有望成为治疗冠状病毒感染的肺部疾病的潜在药物。

[0102] 2.病毒感染后，机体会产生大量的IFN‑β以及IFN‑γ，这两种细胞因子本是要发挥抗病毒的作用，然而却产生了其他负面作用(即促进肺部产生更多的ACE2，再次诱导病毒更多的进入人体肺部细胞)。AhR抑制剂(IDO通过AhR通路发挥作用)逆转了这种负面作用。

[0103] 3.本申请的抗冠状病毒肺炎制剂还可以通过增强全身免疫反应，进而杀灭病毒，具有安全性高、无毒副作用的优点。