4-(7-氮杂吲哚)-2-氨基嘧啶类化合物及其应用转让专利
申请号 : CN202111271794.1
文献号 : CN113816957B
文献日 : 2023-04-07
发明人 : 叶青 , 褚国栋 , 胡冬奥 , 许长奇
申请人 : 浙江工业大学
摘要 :
本发明公开了4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其应用，所述4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物具有如下结构通式：其中，R1选自下列的任意一种：氢,碳原子数为1‑5的直链烷基、支链烷基、环烷基或烯基；R2选自氢或卤素。本发明设计合成的4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物是一类新型的NF‑κB诱导激酶(NIK)抑制剂，适合于以INIK为靶点的药物开发，得到的药物可用于治疗白血病和多发性骨髓瘤胶质瘤等恶性肿瘤。
权利要求 :
1.一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐在制备NF‑κB诱导激酶介导疾病治疗药物中的应用，其特征在于该类化合物具有如下结构通式：
取代基R1为H、Me、异丙基、正丁基、烯丙基或环戊基，R2为Cl。
说明书 :
4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其应用。
背景技术
[0002] 近年来，癌症统计数据表明，中国的癌症发病率和死亡率一直在上升，使癌症成为自2010年以来的主要死亡原因及公共卫生问题。庞大的患者人群与远未被满足的临床治疗需求，驱使越来越多的研究团队及制药企业投入到抗肿瘤药物的研制中。随着分子生物学的发展，使得抗肿瘤药物的研发理念正在从传统抗肿瘤药物转变到靶向抗肿瘤药物，并逐渐成为肿瘤治疗的研究热点，且越来越多的靶向药物进入临床。NF‑κB诱导激酶(NIK)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，也称为MAP3K14，是NF‑κB非经典信号通路中一个关键性激酶，研究表明，NIK在细胞中的过度表达与霍奇金淋巴瘤、淋巴白血病、多发性骨髓瘤、外周T细胞淋巴瘤和其他实体瘤等多种肿瘤的发生发展息息相关，因此，开发高效的NIK抑制剂对相关肿瘤的治疗具有重要的应用价值。
发明内容
[0003] 本发明的目的是提供一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物，可作为NF‑κB诱导激酶(NIK)抑制剂，并用于治疗NIK介导的相关疾病。
[0004] 所述的一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物，其特征在于该类化合物结构通式如式(6)所示：
[0005]
[0006] 其中，R1选自下列的任意一种：氢,碳原子数为1‑5的直链烷基、支链烷基、环烷基或烯基；R2选自氢或卤素。
[0007] 所述的一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物的制备方法，其特征在于以式1所示的5‑溴‑7‑氮杂吲哚为原料，在三氯化铝的催化下与乙酰氯发生傅克酰基化反应制得化合物2，然后化合物2在氢化钠的作用下与对甲苯磺酰氯发生N‑苯磺酰基化反应得到化合物3，化合物3与N,N‑二甲基甲酰胺二甲缩醛发生缩合反应得到化合物4，化合物4与盐酸胍在碳酸钾作用下环合得到化合物5，接着在四三苯基磷钯和碘化亚铜的催化下与2‑甲基‑3‑丁炔‑2‑醇发生Sonogashira反应得到目标化合物6a，然后化合物6a与不同的卤代物发生N‑烷基化反应得到目标化合物6b～6f。此外，化合物5与NCS发生氯化反应得到化合物7，化合物7与2‑甲基‑3‑丁炔‑2‑醇发生Sonogashira反应得到目标化合物6g，化合物6g与不同的卤代物发生N‑烷基化反应得到目标化合物6h～6l，反应式如下所示：
[0008]
[0009] 所述的一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐作为NF‑κB诱导激酶(NIK)抑制剂的应用。
[0010] 所述的一类4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类化合物及其药学上可接受的盐在制备NF‑κB诱导激酶(NIK)介导疾病治疗药物中的应用。
[0011] 通过采用上述技术，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0012] 本发明设计合成的4‑(7‑氮杂吲哚)‑2‑氨基嘧啶类衍生物是一类新型的高效NF‑κB诱导激酶(NIK)抑制剂，适合于以NF‑κB诱导激酶(NIK)为靶点的药物开发，得到的药物可用于白血病、多发性骨髓瘤等恶性肿瘤的治疗。
具体实施方式
[0013] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
[0014] 实施例1：1‑(5‑溴‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)乙‑1‑酮(化合物2)的制备[0015] 在三口瓶中加入5‑溴‑7‑氮杂吲哚(10.0g,50.7mmol)、三氯化铝(20.2g，15.2mmol)和无水二氯甲烷(100mL)，冷却至0‑5℃，搅拌0.5h后滴加乙酰氯(10.8mL，
15.2mmol)，滴毕继续反应1h。反应结束后将反应液倒入冷水(400mL)中，用乙酸乙酯萃取(4×100mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂为(PE:EA＝1:1,v/v)，得到白色固体9.7g，收率为
1
80％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.71(s,1H),8.56(d,J＝2.3Hz,1H),8.54(s,1H),8.40(d,J＝2.3Hz,1H),2.47(s,3H).
15.2mmol)，滴毕继续反应1h。反应结束后将反应液倒入冷水(400mL)中，用乙酸乙酯萃取(4×100mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂为(PE:EA＝1:1,v/v)，得到白色固体9.7g，收率为
1
80％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.71(s,1H),8.56(d,J＝2.3Hz,1H),8.54(s,1H),8.40(d,J＝2.3Hz,1H),2.47(s,3H).
[0016] 实施例2：1‑(5‑溴‑1‑甲苯磺酰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)乙‑1‑酮(化合物3)的制备
[0017] 在三口瓶中加入化合物2(9.7g,40.7mmol)、无水DMF(40mL)，冷却至0‑5℃，加入质量分数60％的氢化钠(2.4g,61.0mmol)，搅拌0.5h后加入4‑甲基苯磺酰氯(11.6g,61.0mmol)，加完后升至室温反应1h。反应结束后将反应液倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(5×50mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂为(PE:EA＝2:1,v/v)，得到淡黄色固体12.1g，收
1
率为76％。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),8.50(d,J＝2.3Hz,1H),
8.34(s,1H),8.14(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),2.58(s,3H),2.42(s,3H).[0018] 实施例3：1‑(5‑溴‑1‑甲苯磺酰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)‑3‑(二甲基氨基)丙‑2‑烯‑1‑酮(化合物4)的制备
1
率为76％。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ8.76(d,J＝2.3Hz,1H),8.50(d,J＝2.3Hz,1H),
8.34(s,1H),8.14(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),2.58(s,3H),2.42(s,3H).[0018] 实施例3：1‑(5‑溴‑1‑甲苯磺酰基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)‑3‑(二甲基氨基)丙‑2‑烯‑1‑酮(化合物4)的制备
[0019] 在三口瓶中加入化合物3(12.1g,30.8mmol)、N,N‑二甲基甲酰胺二甲缩醛(16.3mL,123.1mmol)和无水DMF(50mL)，在氮气保护下于110℃反应3h。反应结束后，将反应液冷却至室温后倒入水(200mL)中，用乙酸乙酯萃取(5×50mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开1
剂为(PE:EA＝1:1,v/v)，得到淡黄色固体7.5g，收率为60％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.81(s,1H),8.74(d,J＝2.3Hz,1H),8.50(d,J＝2.3Hz,1H),8.03(d,J＝8.2Hz,2H),7.46(d,J＝
8.2Hz,2H),2.97(s,3H),2.36(s,3H).
剂为(PE:EA＝1:1,v/v)，得到淡黄色固体7.5g，收率为60％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.81(s,1H),8.74(d,J＝2.3Hz,1H),8.50(d,J＝2.3Hz,1H),8.03(d,J＝8.2Hz,2H),7.46(d,J＝
8.2Hz,2H),2.97(s,3H),2.36(s,3H).
[0020] 实施例4：4‑(5‑溴‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)嘧啶‑2‑胺(化合物5)的制备[0021] 在三口瓶中加入化合物4(7.5g,16.7mmol)、盐酸胍(2.4g,25.0mmol)、无水碳酸钾(4.6g,33.3mmol)和乙二醇单甲醚(70mL)，在氮气保护下回流反应5h。反应结束后将反应液冷却至室温后倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯萃取(4×50mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×150mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂1
为(DCM:EA＝1:2,v/v)，得到淡黄色固体1.5g，收率为31％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.44(s,1H),9.12(d,J＝2.3Hz,1H),8.44(d,J＝3.0Hz,1H),8.36(d,J＝2.3Hz,1H),8.14(d,J＝
5.3Hz,1H),7.06(d,J＝5.4Hz,1H),6.62(s,2H).
为(DCM:EA＝1:2,v/v)，得到淡黄色固体1.5g，收率为31％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.44(s,1H),9.12(d,J＝2.3Hz,1H),8.44(d,J＝3.0Hz,1H),8.36(d,J＝2.3Hz,1H),8.14(d,J＝
5.3Hz,1H),7.06(d,J＝5.4Hz,1H),6.62(s,2H).
[0022] 实施例5：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6a)的制备
[0023] 在三口瓶中加入化合物5(1.0g,3.4mmol)、2‑甲基‑3‑丁炔‑2‑醇(840mg,10mmol)、碘化亚铜(26.3mg,0.1mmol)、四三苯基磷钯(39.8mg,0.3mmol)、三乙胺(20mL)和N,N‑二甲基甲酰胺(20mL)中，在氮气保护下于90℃反应5h。反应结束后将反应液冷却至室温并倒入水(150mL)中，用乙酸乙酯萃取(4×30mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂为(DCM:MeOH＝20:1,1
v/v)，得到淡黄色固体620mg，收率为61％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.1Hz,
1H),8.46(s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),
6.60(s,2H),5.51(s,1H),3.88(s,3H),1.52(s,6H).
v/v)，得到淡黄色固体620mg，收率为61％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.1Hz,
1H),8.46(s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),
6.60(s,2H),5.51(s,1H),3.88(s,3H),1.52(s,6H).
[0024] 实施例6：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6b的制备)
[0025] 在三口瓶中加入化合物6a(58.6mg,0.2mmol)、无水DMF(10mL)，冷却至0‑5℃，加入质量分数60％的氢化钠(8.8mg,0.22mmol)，搅拌0.5h后再加入碘甲烷(85.2mg,0.6mmol)，加完后升至室温反应1h。反应结束后将反应液倒入水中(50mL)，乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使1
用硅胶柱层析纯化，展开剂为(DCM:MeOH＝30:1,v/v)，得到淡黄色固体6b，收率为45％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.1Hz,1H),8.46(s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),6.60(s,2H),5.51(s,1H),3.88(s,3H),1.52(s,
6H).
用硅胶柱层析纯化，展开剂为(DCM:MeOH＝30:1,v/v)，得到淡黄色固体6b，收率为45％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.1Hz,1H),8.46(s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.2Hz,1H),6.98(d,J＝5.2Hz,1H),6.60(s,2H),5.51(s,1H),3.88(s,3H),1.52(s,
6H).
[0026] 实施例7：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1‑异丙基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6c的制备)
[0027] 在三口瓶中加入化合物6a(58.6mg,0.2mmol)、无水DMF(10mL)，冷却至0‑5℃，加入质量分数60％的氢化钠(8.8mg,0.22mmol)，搅拌0.5h后再加入溴代异丙烷(73.8mg,0.6mmol)，加完后升至60℃反应2h。反应结束后将反应液倒入水中(50mL)，乙酸乙酯萃取(3×10mL)，合并有机相并用饱和食盐水洗涤(3×30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残留物使用硅胶柱层析纯化，展开剂为(DCM:MeOH＝30:1,v/v)，得到淡黄色固体6c，收率为
1
49％。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ8.71(d,J＝1.9Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝5.4Hz,1H),8.03(s,1H),6.95(d,J＝5.4Hz,1H),5.27–5.20(m,1H),5.18(s,2H),
1.82(s,6H),1.59(s,6H).
1
49％。H NMR(500MHz,Chloroform‑d)δ8.71(d,J＝1.9Hz,1H),8.43(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝5.4Hz,1H),8.03(s,1H),6.95(d,J＝5.4Hz,1H),5.27–5.20(m,1H),5.18(s,2H),
1.82(s,6H),1.59(s,6H).
[0028] 实施例8：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1‑正丁基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6d的制备)
[0029] 反应步骤如实施例7，将其中的溴代异丙烷换成同等摩尔量的溴代正丁烷，反应得1
到黄色固体6d，收率为67％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.52(s,1H),
8.34(d,J＝2.0Hz,1H),8.16(d,J＝5.3Hz,1H),7.02(d,J＝5.3Hz,1H),6.60(s,2H),5.51(s,1H),4.31(t,J＝7.2Hz,2H),1.90–1.78(m,2H),1.53(s,6H),1.31–1.25(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H).
到黄色固体6d，收率为67％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.89(d,J＝2.0Hz,1H),8.52(s,1H),
8.34(d,J＝2.0Hz,1H),8.16(d,J＝5.3Hz,1H),7.02(d,J＝5.3Hz,1H),6.60(s,2H),5.51(s,1H),4.31(t,J＝7.2Hz,2H),1.90–1.78(m,2H),1.53(s,6H),1.31–1.25(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H).
[0030] 实施例9：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1‑烯丙基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6e的制备)
[0031] 反应步骤如实施例7，将其中的溴代异丙烷换成同等摩尔量的3‑溴代丙烯，反应得1
到黄色固体6e，收率为48％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.46(s,1H),
8.35(d,J＝2.0Hz,1H),8.17(d,J＝5.3Hz,1H),7.03(d,J＝5.3Hz,1H),6.62(s,2H),6.18‑
6.03(m,1H),5.51(s,1H),5.27‑5.18(m,1H),5.14‑5.05(m,1H),4.95(dt,J＝5.7,1.6Hz,
2H),1.53(s,6H).
到黄色固体6e，收率为48％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.46(s,1H),
8.35(d,J＝2.0Hz,1H),8.17(d,J＝5.3Hz,1H),7.03(d,J＝5.3Hz,1H),6.62(s,2H),6.18‑
6.03(m,1H),5.51(s,1H),5.27‑5.18(m,1H),5.14‑5.05(m,1H),4.95(dt,J＝5.7,1.6Hz,
2H),1.53(s,6H).
[0032] 实施例10：4‑(3‑(2‑氨基嘧啶‑4‑基)‑1‑环戊基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6f的制备)
[0033] 反应步骤如实施例7，将其中的溴代异丙烷换成同等摩尔量的溴代环戊烷，反应得1
到黄色固体6f，收率为40％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.91(d,J＝2.0Hz,1H),8.57(s,1H),
8.34(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.3Hz,1H),7.13(d,J＝5.3Hz,1H),6.59(s,2H),5.51(s,1H),5.31–5.17(m,1H),2.25–2.11(m,2H),2.01–1.84(m,4H),1.78–1.67(m,2H),1.53(s,6H).
到黄色固体6f，收率为40％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.91(d,J＝2.0Hz,1H),8.57(s,1H),
8.34(d,J＝2.1Hz,1H),8.16(d,J＝5.3Hz,1H),7.13(d,J＝5.3Hz,1H),6.59(s,2H),5.51(s,1H),5.31–5.17(m,1H),2.25–2.11(m,2H),2.01–1.84(m,4H),1.78–1.67(m,2H),1.53(s,6H).
[0034] 实施例11：4‑(5‑溴‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑3‑基)‑5‑氯嘧啶‑2‑胺(化合物7的制备)
[0035] 在三口瓶中加入化合物5(1.0g,3.5mmol)、N‑氯代琥珀酰亚胺(470.0mg,3.5mmol)和乙腈(60ml)，加热至85℃反应4h。反应结束后将反应冷却至0℃，过滤得到黄色固体1
918.0mg，收率为82％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.63(s,1H),9.17(d,J＝2.3Hz,1H),8.61(d,J＝3.1Hz,1H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),8.26(s,1H),6.97(s,2H).
918.0mg，收率为82％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.63(s,1H),9.17(d,J＝2.3Hz,1H),8.61(d,J＝3.1Hz,1H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),8.26(s,1H),6.97(s,2H).
[0036] 实施例12：4‑(3‑(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6g的制备)
[0037] 反应步骤重复实施例5，不同之处仅在于将其中的化合物5换成同等摩尔量的化合1
物7，反应得到6g，收率为35％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.56(s,1H),8.91(d,J＝2.1Hz,
1H),8.55(d,J＝3.0Hz,1H),8.33(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),6.93(s,2H),5.48(s,1H),
1.53(s,6H).
物7，反应得到6g，收率为35％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ12.56(s,1H),8.91(d,J＝2.1Hz,
1H),8.55(d,J＝3.0Hz,1H),8.33(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),6.93(s,2H),5.48(s,1H),
1.53(s,6H).
[0038] 实施例13：4‑(3‑(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1‑甲基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6h的制备)
[0039] 反应步骤重复实施例6，不同之处仅在于将其中的化合物6a换成同等摩尔量的化1
合物6g，反应得到6h，收率为48％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.95(d,J＝2.1Hz,1H),8.71(s,
1H),8.39(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(s,1H),6.93(s,2H),5.48(s,1H),3.93(s,3H),1.53(s,
6H).
合物6g，反应得到6h，收率为48％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.95(d,J＝2.1Hz,1H),8.71(s,
1H),8.39(d,J＝2.1Hz,1H),8.26(s,1H),6.93(s,2H),5.48(s,1H),3.93(s,3H),1.53(s,
6H).
[0040] 实施例14：4‑(3‑(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1‑异丙基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6i的制备)
[0041] 反应步骤重复实施例7，不同之处仅在于将其中的化合物6a换成同等摩尔量的化1
合物6g，反应得到6i，收率为59％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.66(s,1H),8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.28(s,1H),6.93(s,2H),5.49(s,1H),5.24–5.03(m,1H),
1.55(d,J＝6.8Hz,6H),1.53(s,6H).
合物6g，反应得到6i，收率为59％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.0Hz,1H),8.66(s,1H),8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.28(s,1H),6.93(s,2H),5.49(s,1H),5.24–5.03(m,1H),
1.55(d,J＝6.8Hz,6H),1.53(s,6H).
[0042] 实施例15：4‑(3‑(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1‑正丁基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6j的制备)
[0043] 反应步骤重复实施例8，不同之处仅在于将其中的化合物6a换成同等摩尔量的化1
合物6g，反应得到6j，收率为47％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.93(d,J＝2.1Hz,1H),8.70(s,1H),8.37(d,J＝2.1Hz,1H),8.27(s,1H),6.92(s,2H),5.48(s,1H),4.38(t,J＝7.2Hz,
2H),1.88–1.78(m,2H),1.53(s,6H),1.33–1.26(m,2H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H).
合物6g，反应得到6j，收率为47％。H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.93(d,J＝2.1Hz,1H),8.70(s,1H),8.37(d,J＝2.1Hz,1H),8.27(s,1H),6.92(s,2H),5.48(s,1H),4.38(t,J＝7.2Hz,
2H),1.88–1.78(m,2H),1.53(s,6H),1.33–1.26(m,2H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H).
[0044] 实施例16：4‑(3‑(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1‑烯丙基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6k的制备)
[0045] 反应步骤重复实施例9，不同之处仅在于将其中的化合物6a换成同等摩尔量的化1
合物6g，反应得到6k，收率为33％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.95(d,J＝2.1Hz,1H),8.67(s,
1H),8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),6.94(s,2H),6.24–6.00(m,1H),5.49(s,1H),
5.23–5.18(m,1H),5.12–5.05(m,1H),5.02(dt,J＝5.5,1.6Hz,2H),1.53(s,6H).
合物6g，反应得到6k，收率为33％。HNMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.95(d,J＝2.1Hz,1H),8.67(s,
1H),8.38(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H),6.94(s,2H),6.24–6.00(m,1H),5.49(s,1H),
5.23–5.18(m,1H),5.12–5.05(m,1H),5.02(dt,J＝5.5,1.6Hz,2H),1.53(s,6H).
[0046] 实施例17：4‑(3(2‑氨基‑5‑氯嘧啶‑4‑基)‑1‑环戊基‑1H‑吡咯并[2,3‑b]吡啶‑5‑基)‑2‑甲基丁‑3‑炔‑2‑醇(化合物6l的制备)
[0047] 反应步骤重复实施例10，不同之处仅在于将其中的化合物6a换成同等摩尔量的化1
合物6g，反应得到6l，收率为55％.H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.62(s,1H),8.38(d,J＝2.1Hz,1H),8.28(s,1H),6.93(s,2H),5.49(s,1H),5.31–5.20(m,1H),
2.24–2.15(m,2H),2.04–1.95(m,2H),1.95–1.85(m,2H),1.81–1.72(m,2H),1.53(s,6H).[0048] 实施例18：NIK酶活性测试
合物6g，反应得到6l，收率为55％.H NMR(500MHz,DMSO‑d6)δ8.90(d,J＝2.1Hz,1H),8.62(s,1H),8.38(d,J＝2.1Hz,1H),8.28(s,1H),6.93(s,2H),5.49(s,1H),5.31–5.20(m,1H),
2.24–2.15(m,2H),2.04–1.95(m,2H),1.95–1.85(m,2H),1.81–1.72(m,2H),1.53(s,6H).[0048] 实施例18：NIK酶活性测试
[0049] ADP‑Glo™；Kinase Assay(ADP‑Glo™；激酶检测试剂盒)是一个发光法激酶检测试剂盒，它检测激酶反应中所形成的ADP；ADP被转化成ATP，然后ATP再被Ultra‑Glo™；萤光素酶转化成光。发光信号与激酶活性正相关。该试剂盒适合检测化合物对多种纯化激酶活性的影响，使之成为初级筛选和研究激酶作用的选择性的理想工具。ADP‑Glo™；激酶检测试剂盒可用于检测几乎任何可生成ADP的酶(比如，激酶或ATP酶)的活性，ATP浓度可高达1mM。
[0050] 利用上述激酶检测试剂盒，测试本发明实施例5～17中制备的目标化合物6a～6l对NIK的抑制活性，测试过程为：将相应的目标化合物样品用二甲基亚砜(DMSO)溶解，低温保存，DMSO在最终体系中的浓度控制在不影响检测活性的范围之内，目标化合物样品的DMSO溶液即为样品待测液。初筛选择单浓度条件下，例如20μg/ml，对样品的活性进行测试。对于在一定条件下表现出活性的样品，例如抑制率％inhibition大于50％，测试活性剂量依赖关系，即IC50/EC50值，通过样品活性对样品浓度进行非线性拟和得到，计算所用软件为Graphpad Prism 4，拟合所使用的模型为sigmoidaldose‑response(varible slope)，对于大多数抑制剂筛选模型，将拟合曲线底部和顶部设定为0和100。一般情况下，每个样品在测试中均设置复孔(n≥2)，在结果中以标准偏差(Standard Deviation,SD)或者标准误差(Standard Error,SE)表示，测试结果见表1。
[0051] 表1目标化合物对NIK的抑制活性
[0052]
[0053] aSE：标准误差平均值
[0054] 本说明书所述的内容仅仅是对发明构思实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式。