一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法

摘要

本发明公开了一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，涉及微生物检测领域。包括以下步骤：1)样品前处理：将凝结芽孢杆菌样品经超声处理、摇床震荡制得菌液；2)活菌数检测：将菌液和检测培养基混合均匀，倒入水琼脂平板,形成双层平板，恒温培养，进行活菌计数，检测培养基包括蛋白胨、抗菌肽、山梨醇、麦芽糖、萘磺酸盐甲醛缩合物和轻质碳酸钙。本申请结合益生菌活菌检测的基础方法，针对检测培养基的成分、样品的前处理条件、双平板的培养方式进行全面优化，有效避免低溶度凝结芽孢杆菌受杂菌污染，为凝结芽孢杆菌提供有力的生长环境，检测步骤简单，具备计数结果平行性好、重现性好、培养周期短、精准定量且受人为因素影响小等特点。

权利要求

1.一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）样品前处理：将凝结芽孢杆菌颗粒或粗样品加入到无菌生理盐水中，超声处理，加入吐温80和灭菌后的玻璃珠，摇床震荡，稀释后制得菌液；

2）活菌数检测：将菌液和检测培养基混合均匀，所述菌液和检测培养基的体积比为1：

15，然后倒入水琼脂平板,所述水琼脂平板包括2wt%琼脂粉和余量的水，静置待凝固，形成双层平板，将双层平板恒温培养，进行活菌计数；

其中，所述检测培养基的PH为7.0‑7.2，所述检测培养基为半固体培养基，所述检测培养基包括以下重量份原料：蛋白胨8份‑12份、抗菌肽0.05份‑0.2份、山梨醇1份‑5份、麦芽糖

10份‑30份、萘磺酸盐甲醛缩合物0.5份‑1.5份、轻质碳酸钙0.5份‑2份、牛肉膏3份‑15份、酵母粉2份‑10份、三水合磷酸氢二钾0.1份‑0.5份、七水合硫酸镁0.2份‑1份、四水合硫酸锰

0.05份‑0.5份和琼脂粉8份‑10份；所述抗菌肽选用CAS NO:116229‑36‑8，sigma。

2.如权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，其特征在于，所述检测培养基的制备方法为：S101、称取所需量蛋白胨、山梨醇、牛肉膏、酵母粉、麦芽糖，加蒸馏水溶解，制得盐溶液A；

S102、称取所需量三水合磷酸氢二钾、七水合硫酸镁、四水合硫酸锰，加蒸馏水溶解，制得盐溶液B；

S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再加入所需的琼脂粉，加热溶解琼脂粉，然后加入所需量的轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，灭菌制得无菌培养基；

S104、抗菌肽和萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别用蒸馏水溶解，无菌过滤，制得无菌混溶液；

S105、将无菌混溶液加入无菌培养基中，混合均匀，保温备用。

3.如权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，其特征在于，在步骤1)中，所述超声处理的功率为240W‑480W，超声时间为5min‑8min，所述摇床震荡时间为20min‑

40min。

4.如权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，其特征在于，在步骤2）中，恒温培养的温度为37℃‑50℃，时间为24h‑48h。

说明书

一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及微生物检测领域，尤其涉及一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法。

背景技术

[0002] 凝结芽孢杆菌作为替代抗生素的一种益生菌，目前已广泛使用，它以能产有机酸、抗逆性强、抑制病原菌等优点脱颖而出，并且它也是替代乳酸菌的优秀产品，有效的避免了乳酸菌的抗逆性差，保存期短等缺点。凝结芽孢杆菌具有耐受高温、高压，同时对胃酸和胆汁有较高的耐受性，所以它是集乳酸菌与芽孢杆菌优点于一身，因此也是畜牧行业研究的重点。

[0003] 益生菌的活菌数是目前评价产品质量的指标之一，理想的活菌计数方法应具备计数结果平行性好、重现性好等特点，但是，由于凝结芽孢杆菌多数是通过液体深层发酵，经喷雾干燥得来干粉，因在发酵过程中存在糖类及小肽等多种培养基及代谢产物，经高温喷雾干燥后，凝结芽孢杆菌与其吸附交联在一起，这就造成了菌体密度过高，菌体之间紧密结合在一起，形成生物膜而不易分离，从而使用现有益生菌活菌计数方法，检测时因处理的方式不同，导致凝结芽孢杆菌活菌数检测差异很大。另外由于凝结芽孢杆菌属于兼性厌氧菌，生长速度不如其他芽孢杆菌快，所以低浓度凝结芽孢杆菌很容易被其他芽孢杆菌污染，从而导致凝结芽孢杆菌无法检出。

[0004] 因此，急需研制出针对凝结芽孢杆菌进行的精准定量且重现性好的活菌数检测方案。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，以解决目前凝结芽孢杆菌活菌数检测重现性、精准性差的技术问题。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明目的提供了一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，包括以下步骤：

[0007] 1)样品前处理：将凝结芽孢杆菌颗粒或粗样品加入到无菌生理盐水中，超声处理，加入吐温80和灭菌后的玻璃珠，摇床震荡，稀释后制得菌液；

[0008] 2)活菌数检测：将菌液和检测培养基混合均匀，然后倒入水琼脂平板,静置待凝固，形成双层平板，将双层平板恒温培养，进行活菌计数；

[0009] 其中，所述检测培养基包括以下重量份原料：蛋白胨8份‑12份、抗菌肽0.05份‑0.2份、山梨醇1份‑5份、麦芽糖10份‑30份、萘磺酸盐甲醛缩合物0.5份‑1.5份和轻质碳酸钙0.5份‑2份。

[0010] 通过采用上述方案，本申请结合益生菌活菌检测的基础方法，针对凝结芽孢杆菌样品检测培养基的成分、样品的前处理条件、双平板的培养方式等进行全面优化，低浓度的抗菌肽可以有效防止杂菌的污染，并且对凝结芽孢杆菌没有伤害，有效避免较低溶度的凝结芽孢杆菌受杂菌污染，麦芽糖和山梨醇作为碳源，两种碳源对凝结芽孢杆菌有很好促生长作用，萘磺酸盐甲醛缩合物可以更好的打散疏水颗粒，让凝结芽孢杆菌更好的释放，轻质碳酸钙能够中和凝结芽孢杆菌生长过程中产生的有机酸，从而平衡培养基的pH值，为凝结芽孢杆菌提供有力的生长环境，该方法检测步骤简单，具备计数结果平行性好、重现性好、培养周期短、精准定量且受人为因素影响小等特点。

[0011] 作为优选方案，所述检测培养基还包括以下重量份原料：牛肉膏3份‑15份、酵母粉2份‑10份、三水合磷酸氢二钾0.1份‑0.5份、七水合硫酸镁0.2份‑1份、四水合硫酸锰0.05份‑0.5份和琼脂粉8份‑10份。

[0012] 作为优选方案，所述抗菌肽的分子量为1000‑4000。

[0013] 作为优选方案，在步骤2)中，所述菌液和检测培养基的体积比为1：15。

[0014] 作为优选方案，所述检测培养基为半固体培养基。

[0015] 通常采用上述方案，检测培养基近似半固体培养基，有利于凝结芽孢杆菌生长的辨别，因凝结芽孢杆菌属于兼性厌氧菌，同时更有利于菌体的厌氧生长。

[0016] 作为优选方案，所述检测培养基的PH为7.0‑7.2。

[0017] 作为优选方案，所述检测培养基的制备方法为：

[0018] S101、称取所需量蛋白胨、山梨醇、牛肉膏、酵母粉、麦芽糖，加蒸馏水溶解，制得盐溶液A；

[0019] S102、称取所需量三水合磷酸氢二钾、七水合硫酸镁、四水合硫酸锰，加蒸馏水溶解，制得盐溶液B；

[0020] S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再加入所需的琼脂粉，加热溶解琼脂粉，然后加入所需量的轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，灭菌制得无菌培养基；

[0021] S104、抗菌肽和萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别用蒸馏水溶解，无菌过滤，制得无菌混溶液；

[0022] S105、将无菌混溶液加入无菌培养基中，混合均匀，保温备用。

[0023] 作为优选方案，所述水琼脂平板包括2wt％琼脂粉和余量的水。

[0024] 作为优选方案，在步骤1)中，所述超声处理的功率为240W‑480W，超声时间为5min‑8min，所述摇床震荡时间为20min‑40min。

[0025] 作为优选方案，在步骤2)中，恒温培养的温度为37℃‑50℃，时间为24h‑48h。

[0026] 通过采用上述方案，对检测阶段的培养温度、超声、震荡时间参数进行优化控制，该凝结芽孢杆菌活菌数的检测重现性较好，检测结果精准。

[0027] 相比于现有技术，本发明实施例具有如下有益效果：

[0028] 本申请结合益生菌活菌检测的基础方法，针对凝结芽孢杆菌样品检测培养基的成分、样品的前处理条件、双平板的培养方式等进行全面优化，低浓度的抗菌肽可以有效防止杂菌的污染，有效避免较低溶度的凝结芽孢杆菌受杂菌污染，为凝结芽孢杆菌提供有力的生长环境，该方法检测步骤简单，具备计数结果平行性好、重现性好、培养周期短、精准定量且受人为因素影响小等特点。

具体实施方式

[0029] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0030] 鉴于目前凝结芽孢杆菌检测存在的问题，本申请研究出特有的凝结芽孢杆菌检测方法，特有的前处理方式，结合益生菌活菌检测的基础方法，针对凝结芽孢杆菌样品检测培养基成分、前处理条件、培养方式等进行全面优化，提供了一种特有的凝结芽孢杆菌产品中活菌数检测的方法，该方法具备计数结果平行性好、重现性好、精准定量且受人为因素影响小等特点，显著提高凝结芽孢杆菌活菌检测合格率。

[0031] 本申请提供一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，包括以下步骤：S1、检测培养基制备；S2、样品前处理；S3、活菌数的检测。

[0032] 在其中一个实施方式中，S1中检测培养基包括蛋白胨8g‑12g/L、抗菌肽0.05g‑0.2g/L、山梨醇1g‑5g/L、牛肉膏3g‑15g/L、酵母粉2g‑10g/L、麦芽糖10g‑30g/L、三水合磷酸氢二钾0.1g‑0.5g/L、七水合硫酸镁0.2g‑1g/L、四水合硫酸锰0.05g‑0.5g/L、萘磺酸盐甲醛缩合物0.5g‑1.5g/L、琼脂粉8g‑10g/L和轻质碳酸钙0.5g‑2g/L，加入蒸馏水定容至1L,pH7.0‑7.2。

[0033] 在其中一个实施方式中，抗菌肽的选用分子量在1000‑4000适宜。

[0034] 在其中一个实施方式中，抗菌肽选用sigma(CAS  NO:116229‑36‑8，分子量1483.89，纯度≥95％)。

[0035] 低浓度的抗菌肽可以有效防止杂菌的污染，并且对凝结芽孢杆菌没有伤害，因凝结芽孢杆菌容易被生长速度快的芽孢杆菌类污染，如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等，一旦被污染，即使污染数量极小，也没有办法检测准确，因此加入本申请限定浓度的抗菌肽，可以有效避免杂菌污染。

[0036] 同时，麦芽糖和山梨醇作为碳源，两种碳源对凝结芽孢杆菌有很好促生长作用，相较于常用的葡萄糖更有利于菌种长效生长，因为葡萄糖使凝结芽孢杆菌大量快速产酸，快速降低生长体系pH值，并且葡萄糖还能带来底物抑制效应，从而对于凝结芽孢杆菌的生长具有抑制作用，因此本申请采用山梨醇和麦芽糖为碳源，对凝结芽孢杆菌生长具有促进作用。

[0037] 此外，萘磺酸盐甲醛缩合物，作为分散剂，是很强的阴离子表面活性剂，可以更好的打散疏水颗粒，让菌更好的释放；轻质碳酸钙能够中和凝结芽孢杆菌生长过程中产生的有机酸，从而平衡培养基的pH值，为凝结芽孢杆菌提供有力的生长环境；检测培养基近似半固体培养基，有利于凝结芽孢杆菌生长的辨别，因凝结芽孢杆菌属于兼性厌氧菌，同时更有利于菌体的厌氧生长。

[0038] 在其中一个实施方式中，S1中检测培养基的配置过程包括以下步骤：

[0039] S101、称取所需量蛋白胨、山梨醇、牛肉膏、酵母粉、麦芽糖溶解于适量蒸馏水中，充分溶解，制得盐溶液A；

[0040] S102、称取所需量三水合磷酸氢二钾、七水合硫酸镁、四水合硫酸锰，分别加少量水溶解，制得盐溶液B；

[0041] S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再将所需的琼脂粉加入到搅拌均匀的溶液中，加热煮沸，使琼脂充分溶解，然后加入所需量的轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，于115℃灭菌20min，制得无菌培养基备用；

[0042] S104、抗菌肽和萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别溶解于蒸馏水中，在无菌条件下过0.22um滤膜除菌，制得无菌混溶液备用；

[0043] S105、将无菌混溶液加入冷却到的50℃的无菌培养基中，混合均匀，保温备用。

[0044] 在其中一个实施方式中，S2中样品前处理包括以下步骤：

[0045] S201、颗粒或粗样品需要研磨或粉碎，其他样品直接称取即可，取凝结芽孢杆菌样品1g‑10g,加入到0.5％无菌生理盐水的三角瓶中，温度为40℃，功率240W‑480W，超声5‑8分钟，制得菌悬液；

[0046] S202、将吐温80按质量为0.1％的量加入S201超声后的菌悬液中，摇匀。再加入少许灭菌后的玻璃珠，玻璃珠直径为0.56‑0.60cm；200转速率摇床，温度为25℃，恒温震荡20‑40分钟，然后用无菌水稀释到所需检测梯度的菌液，即可检测。

[0047] 3、活菌数的检测：

[0048] S301、2wt％水琼脂平板制备：2wt％琼脂粉加水混合后，在121℃灭菌30min，得到水琼脂，冷却后倒10‑15ml至无菌平板中，注意铺平，超净台吹半小时或室温放置1h以上，等其完全凝固，制得2wt％水琼脂平板备用；

[0049] S302、按菌液：检测培养基体积比为1：15比例，将步骤2处理好的菌液加入步骤1的检测培养基中，每板共16mL混合液,在漩涡混合仪上混合均匀，防止起泡，然后倒入2wt％水琼脂平板,静置待凝固，形成双层平板。

[0050] S303、将双层平板置于恒温培养箱中，培养温度37℃‑50℃下培养，培养时间24h‑48h，进行活菌计数。

[0051] 以下结合具体的实施例进行描述，以说明本申请技术方案的实际效果。

[0052] 实施例一

[0053] 一种凝结芽孢杆菌活菌数的检测方法，包括以下步骤：

[0054] 1、检测培养基的制备：

[0055] S101、称取所需量10g/L蛋白胨、3g/L山梨醇、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、15g/L麦芽糖溶解于适量蒸馏水中，充分溶解，制得盐溶液A；

[0056] S102、称取所需量0.2g/L三水合磷酸氢二钾、0.5g/L七水合硫酸镁、0.1g/L四水合硫酸锰，分别加少量水溶解，制得盐溶液B；

[0057] S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再将所需的10g/L琼脂粉加入到搅拌均匀的溶液中，加热煮沸，使琼脂充分溶解，然后加入所需量的1g/L轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，于115℃灭菌20min，制得无菌培养基备用；

[0058] S104、0.1g/L抗菌肽和1g/L萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别溶解于蒸馏水中，在无菌条件下过0.22um滤膜除菌，制得无菌混溶液备用；

[0059] S105、将无菌混溶液加入冷却到的50℃的无菌培养基中，混合均匀，PH为7.0‑7.2，保温备用。

[0060] 2、样品前处理：

[0061] S201、颗粒或粗样品需要研磨或粉碎，其他样品直接称取即可，取凝结芽孢杆菌样品1g‑10g,加入到0.5％无菌生理盐水的三角瓶中，温度为40℃，功率240W，超声8分钟，制得菌悬液；

[0062] S202、将吐温80按质量为0.1％的量加入S201超声后的菌悬液中，摇匀。再加入少许灭菌后的玻璃珠，玻璃珠直径为0.56‑0.60cm；200转速率摇床，温度为25℃，恒温震荡30分钟，然后用无菌水稀释到所需检测梯度的菌液，即可检测。

[0063] 3、活菌数的检测：

[0064] S301、水琼脂平板制备：底层为水琼脂层：2％琼脂粉加水混合后，在121℃灭菌30min，得到水琼脂，冷却后倒10‑15ml至无菌平板中，注意铺平，超净台吹半小时或室温放置1h以上，等其完全凝固，制得水琼脂平板备用；

[0065] S302、按菌悬液：检测培养基体积比为1：15比例，将步骤2处理好的菌液加入步骤1的检测培养基中，每板共16mL混合液,在漩涡混合仪上混合均匀，防止起泡，然后倒入水琼脂平板,静置待凝固，形成双层平板。

[0066] S303、将双层平板置于恒温培养箱中，培养温度45℃下培养，培养时间36h，进行活菌计数。

[0067] 实施例二

[0068] 1、检测培养基的制备：

[0069] S101、称取所需量8g/L蛋白胨、5g/L山梨醇、15g/L牛肉膏、10g/L酵母粉、10g/L麦芽糖溶解于适量蒸馏水中，充分溶解，制得盐溶液A；

[0070] S102、称取所需量0.1g/L三水合磷酸氢二钾、0.2g/L七水合硫酸镁、0.05g/L四水合硫酸锰，分别加少量水溶解，制得盐溶液B；

[0071] S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再将所需的9g/L琼脂粉加入到搅拌均匀的溶液中，加热煮沸，使琼脂充分溶解，然后加入所需量的0.5g/L轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，于115℃灭菌20min，制得无菌培养基备用；

[0072] S104、0.05g/L抗菌肽和0.5g/L萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别溶解于蒸馏水中，在无菌条件下过0.22um滤膜除菌，制得无菌混溶液备用；

[0073] S105、将无菌混溶液加入冷却到的50℃的无菌培养基中，混合均匀，PH为7.0‑7.2，保温备用。

[0074] 2、样品前处理：

[0075] S201、颗粒或粗样品需要研磨或粉碎，其他样品直接称取即可，取凝结芽孢杆菌样品1g‑10g,加入到0.5％无菌生理盐水的三角瓶中，温度为40℃，功率300W，超声7分钟，制得菌悬液；

[0076] S202、将吐温80按质量为0.1％的量加入S201超声后的菌悬液中，摇匀。再加入少许灭菌后的玻璃珠，玻璃珠直径为0.56‑0.60cm；200转速率摇床，温度为25℃，恒温震荡40分钟，然后用无菌水稀释到所需检测梯度的菌液，即可检测。

[0077] 3、活菌数的检测：

[0078] S301、水琼脂平板制备：底层为水琼脂层：2％琼脂粉加水混合后，在121℃灭菌30min，得到水琼脂，冷却后倒10‑15ml至无菌平板中，注意铺平，超净台吹半小时或室温放置1h以上，等其完全凝固，制得水琼脂平板备用；

[0079] S302、按菌悬液：检测培养基体积比为1：15比例，将步骤2处理好的菌液加入步骤1的检测培养基中，每板共16mL混合液,在漩涡混合仪上混合均匀，防止起泡，然后倒入水琼脂平板,静置待凝固，形成双层平板。

[0080] S303、将双层平板置于恒温培养箱中，培养温度50℃下培养，培养时间24h，进行活菌计数。

[0081] 实施例三

[0082] 1、检测培养基的制备：

[0083] S101、称取所需量12g/L蛋白胨、1g/L山梨醇、3g/L牛肉膏、2g/L酵母粉、30g/L麦芽糖溶解于适量蒸馏水中，充分溶解，制得盐溶液A；

[0084] S102、称取所需量0.5g/L三水合磷酸氢二钾、1g/L七水合硫酸镁、0.5g/L四水合硫酸锰，分别加少量水溶解，制得盐溶液B；

[0085] S103、将盐溶液A加入到盐溶液B中，充分搅拌均匀，再将所需的8g/L琼脂粉加入到搅拌均匀的溶液中，加热煮沸，使琼脂充分溶解，然后加入所需量的2g/L轻质碳酸钙，蒸馏水定容到所需量，于115℃灭菌20min，制得无菌培养基备用；

[0086] S104、0.2g/L抗菌肽和1.5g/L萘磺酸盐甲醛缩合物按所需量分别溶解于蒸馏水中，在无菌条件下过0.22um滤膜除菌，制得无菌混溶液备用；

[0087] S105、将无菌混溶液加入冷却到的50℃的无菌培养基中，混合均匀，PH为7.0‑7.2，保温备用。

[0088] 2、样品前处理：

[0089] S201、颗粒或粗样品需要研磨或粉碎，其他样品直接称取即可，取凝结芽孢杆菌样品1g‑10g,加入到0.5％无菌生理盐水的三角瓶中，温度为40℃，功率480W，超声5分钟，制得菌悬液；

[0090] S202、将吐温80按质量为0.1％的量加入S201超声后的菌悬液中，摇匀。再加入少许灭菌后的玻璃珠，玻璃珠直径为0.56‑0.60cm；200转速率摇床，温度为25℃，恒温震荡20分钟，然后用无菌水稀释到所需检测梯度的菌液，即可检测。

[0091] 3、活菌数的检测：

[0092] S301、水琼脂平板制备：底层为水琼脂层：2％琼脂粉加水混合后，在121℃灭菌30min，得到水琼脂，冷却后倒10‑15ml至无菌平板中，注意铺平，超净台吹半小时或室温放置1h以上，等其完全凝固，制得水琼脂平板备用；

[0093] S302、按菌悬液：检测培养基体积比为1：15比例，将步骤2处理好的菌液加入步骤1的检测培养基中，每板共16mL混合液,在漩涡混合仪上混合均匀，防止起泡，然后倒入水琼脂平板,静置待凝固，形成双层平板。

[0094] S303、将双层平板置于恒温培养箱中，培养温度37℃下培养，培养时间48h，进行活菌计数。

[0095] 对比例1

[0096] 采用地方标准DB41T 1902‑2019《饲料添加剂‑凝结芽孢杆菌》的方法进行检测。

[0097] 对比例2

[0098] 采用山东某发酵企业标准检测凝结芽孢杆菌。

[0099] 对比例3

[0100] 采用国标GB/T 26428‑2010《饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌》的方法进行检测。

[0101] 性能检测实验

[0102] 在市场上采集不同含量的凝结芽孢杆菌样品，分别为：凝结1(100*108CFU/g)、凝8 8 8
结2(500*10CFU/g)、凝结3(1000*10CFU/g)、凝结4(8*10CFU/g)，四个样品均按照实施例
1、实施例2、实施例3、对比例1、对比例2、对比例3进行检测，平行检测3次，检测结果如下表1所示。

[0103] 表1‑实施例1‑3和对比例1‑3的活菌数检测结果

[0104]

[0105]

[0106] 结合表1中实施例1‑3和对比例1‑3的检测结果可知，对比例1‑3得到的活菌数结果平行性非常差，活菌数结果有高有低，不能准确评价产品质量，且对比例部分检测结果低于标签值，受其他因素干扰的影响大。而本申请的检测方法，重现性较好，平行检测结果的稳定性好，且活菌数结果远高于标签值，可以很好的检出样品中低浓度凝结芽孢杆菌，有效避免了其他杂菌的干扰。

[0107] 以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步的详细说明，应当理解，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限定本发明的保护范围。特别指出，对于本领域技术人员来说，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。