外泌体代谢物作为双相情感障碍标志物的应用

摘要

本发明提供了外泌体代谢物作为双相情感障碍标志物的应用。具体地，本发明提供了检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断双相情感障碍患病风险的检测系统中的应用，所述外泌体代谢物包括：磷酸；鹅去氧胆酸；溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0；N‑乙酰基蛋氨酸；13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸；甘氨酸；1‑萘乙酸；2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸；D‑2‑氨基丁酸；生物蝶呤；氨基葡萄糖；溶血卵磷脂酰胆碱18:0；溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0；溶血卵磷脂酰胆碱20:1；以及PAF C‑16。本发明能够对双相情感障碍的发病机理及研究新的靶向治疗手段提供积极帮助。

权利要求

1.检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断双相情感障碍患病风险的检测系统中的应用，其特征在于，所述外泌体代谢物包括：磷酸；

鹅去氧胆酸；

溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0；

N‑乙酰基蛋氨酸；

13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸；

甘氨酸；

1‑萘乙酸；

2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸；

D‑2‑氨基丁酸；

生物蝶呤；

氨基葡萄糖；

溶血卵磷脂酰胆碱18:0；

溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0；

溶血卵磷脂酰胆碱20:1；以及PAF C‑16；

所述样品为外周血。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述外泌体代谢物还包括以下中的一种或多种：

尿囊素；

L‑(‑)‑阿拉伯醇；

木糖醇；

反,反‑粘康酸；

DL‑苄基琥珀酸；

乙酸顺式‑3‑己烯酯；

烟酰胺；

胆固醇；

十六碳酰胺；

油酸酰胺；

2‑乙酰基呋喃；

2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸；

十八碳‑6‑烯酸酯；

油酸；

肌醇；

核糖醇；

α‑D‑葡萄糖；

D‑半乳糖；

D‑葡萄糖；

D‑甘露糖；

葡萄糖酸；

溶血卵磷脂酰胆碱16:0；

乙酸己酯；

乙酰水杨酸。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述外泌体代谢物水平包括外周血血清表达水平。

4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，溶血卵磷脂酰胆碱18:0、溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0、溶血卵磷脂酰胆碱20:1以及PAF C‑16的表达水平升高，待测个体双相情感障碍患病风险升高。

5.根据权利要求1或4所述的应用，其特征在于，磷酸、鹅去氧胆酸、溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0、N‑乙酰基蛋氨酸、13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸、甘氨酸、1‑萘乙酸、2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸、D‑2‑氨基丁酸、生物蝶呤以及氨基葡萄糖的表达水平降低，待测个体双相情感障碍患病风险升高。

6.一种评估双相情感障碍发病风险的检测系统，特征在于，该检测系统包括检测单元和分析单元，所述检测单元用于检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水平，所述样品为外周血，所述外泌体代谢物包括：磷酸；

鹅去氧胆酸；

溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0；

N‑乙酰基蛋氨酸；

13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸；

甘氨酸；

1‑萘乙酸；

2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸；

D‑2‑氨基丁酸；

生物蝶呤；

氨基葡萄糖；

溶血卵磷脂酰胆碱18:0；

溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0；

溶血卵磷脂酰胆碱20:1；以及PAF C‑16；

所述分析单元用于对检测单元的检测结果进行分析，评估待测个体双相情感障碍患病风险。

7.根据权利要求6所述的检测系统，其特征在于，所述外泌体代谢物还包括以下中的一种或多种：

尿囊素；

L‑(‑)‑阿拉伯醇；

木糖醇；

反,反‑粘康酸；

DL‑苄基琥珀酸；

乙酸顺式‑3‑己烯酯；

烟酰胺；

胆固醇；

十六碳酰胺；

油酸酰胺；

2‑乙酰基呋喃；

2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸；

十八碳‑6‑烯酸酯；

油酸；

肌醇；

核糖醇；

α‑D‑葡萄糖；

D‑半乳糖；

D‑葡萄糖；

D‑甘露糖；

葡萄糖酸；

溶血卵磷脂酰胆碱16:0；

乙酸己酯；

乙酰水杨酸。

8.根据权利要求6所述的检测系统，其特征在于，所述分析单元用于对检测单元的检测结果进行分析时，根据OPLS‑DA分析中的VIP值确定各外泌体代谢物的权重，从而给出待测个体双相情感障碍患病风险评估结果。

说明书

外泌体代谢物作为双相情感障碍标志物的应用

技术领域

[0001] 本发明是关于一种诊断双相情感障碍患者用的生物标志物及相关应用，具体地说，是关于利用外泌体脂代谢产物诊断双相情感障碍疾病疑似患者的技术，属于生物学和
医学技术领域。

背景技术

[0002] 双相情感障碍（bipolardisorder，BD）又称为躁郁症，是一种既有躁狂发作或轻躁狂发作，又伴有抑郁发作的心境障碍。患者最主要的特点是情绪起伏不定，常常因为一些细
小和无关紧要的事情，无法克制地悲伤或兴奋激动。

[0003] 目前，双相情感障碍的病因仍不清楚。研究显示，生物化学、神经内分泌、遗传、生物节律等多种因素和双相情感障碍的发生相关。患者发病时，会有冲动行为、攻击行为，造
成自伤或者伤人，对患者本人、患者家属及社会造成很大的负担。因此，发现疾病的生物标
志物，开发有效治疗方法十分必要。

[0004] 当前临床上对双相情感障碍的诊断主要是根据病人的详细病史与精神症状，通过汉密尔顿和杨氏躁狂量表等主观评分来做综合判断，由于医师的主观经验不同，诊断结果
也存在差异。为了使双相情感障碍的诊断更加客观，减少人为因素，提高诊断的一致性和准
确度，近年来世界各地的科研工作者一直致力于寻找双相情感障碍的生物标志物，建立有
效的检测方法。

发明内容

[0005] 本发明的一个目的是提供一种新的双相情感障碍生物标志物。

[0006] 本发明的另一目的在于提供所述双相情感障碍生物标志物的相关应用。

[0007] 本发明所提供的新的双相情感障碍生物标志物包括外泌体代谢物。

[0008] 外泌体，一种包含了复杂 RNA 和蛋白质的直径为40‑100 nm的盘状囊泡，由于其内含物携带特异性的蛋白质、脂质以及功能性的mRNA (lncRNA，外泌体代谢物，siRNA)等生
物活性物质，不同细胞来源的外泌体具有不同的功能，主要在体内参与了机体免疫应答、抗
原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等生理过程。近年来，外泌体因其在神经系统疾病中
发挥着重要的作用，越来越受到人们的关注。

[0009] 本案发明人在一项研究中，发现一些外泌体代谢产物可以作为双相情感障碍生物标志物。

[0010] 根据本发明的具体实施方案，本发明发现的可作为双相情感障碍生物标志物的外泌体代谢产物包括以下外泌体代谢产物中的一种或多种：

[0011] Allantoin(尿囊素), L‑Arabitol(L‑(‑)‑阿拉伯醇), Xylitol(木糖醇), Trans,Trans‑Muconic Acid(反,反‑粘康酸), DL‑Benzylsuccinic acid(DL‑苄基琥珀
酸), Cis‑3‑Hexenylacetate(乙酸顺式‑3‑己烯酯), Nicotinamide(烟酰胺), 
Phosphoric Acid(磷酸), Cholesterol(胆固醇), Hexadecanamide(十六碳酰胺), 
Oleamide(油酸酰胺), 2‑Acetylfuran(2‑乙酰基呋喃), 2'‑Deoxycytidine 5'‑
Diphosphate(2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸), Petroselinic Acid(十八碳‑6‑烯酸酯), Oleate
(油酸), Chenodeoxycholic Acid(鹅去氧胆酸), Lysope 14:0(溶血卵磷脂酰乙醇胺14:
0), N‑Acetylmethionine(N‑乙酰基蛋氨酸), 13‑oxo‑9Z,11E‑octadecadienoic acid
(13‑氧代‑9Z，11E‑十八碳二烯酸), Glycine(甘氨酸), 1‑Naphthylacetic Acid(1‑萘乙
酸), 2‑Aminoethanesulfonic Acid(2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸), D‑2‑Aminobutyric Acid
(D‑2‑氨基丁酸), Biopterin(生物蝶呤), Glucosamine(氨基葡萄糖), Myoinositol(肌
醇), Ribitol(核糖醇), Α‑D‑Glucose(α‑D‑葡萄糖), D‑Galactose(D‑半乳糖), D‑
Glucose(D‑葡萄糖), D‑Mannose(D‑甘露糖), Gluconic Acid(葡萄糖酸), Lysopc 16:0
(溶血卵磷脂酰胆碱16:0), Lysopc 18:0(溶血卵磷脂酰胆碱18:0), Hexyl Acetate(乙酸
己酯), Aspirin(乙酰水杨酸), Lysope 18:0(溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0), Lysopc 20:1
(溶血卵磷脂酰胆碱20:1), PAF C‑16。

[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供了检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断双相情感障碍患病风险的检测系
统中的应用，所述外泌体代谢物包括：

[0013] 磷酸；

[0014] 鹅去氧胆酸；

[0015] 溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0；

[0016] N‑乙酰基蛋氨酸；

[0017] 13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸；

[0018] 甘氨酸；

[0019] 1‑萘乙酸；

[0020] 2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸；

[0021] D‑2‑氨基丁酸；

[0022] 生物蝶呤；

[0023] 氨基葡萄糖；

[0024] 溶血卵磷脂酰胆碱18:0；

[0025] 溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0；

[0026] 溶血卵磷脂酰胆碱20:1；以及

[0027] PAF C‑16。

[0028] 在本发明的一些更具体实施方案中，本发明的检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水平的试剂材料和/或仪器设备在制备用于诊断双相情感障碍患病风险的检测系统
中的应用中，所述外泌体代谢物还包括以下中的一种或多种：

[0029] 尿囊素；

[0030] L‑(‑)‑阿拉伯醇；

[0031] 木糖醇；

[0032] 反,反‑粘康酸；

[0033] DL‑苄基琥珀酸；

[0034] 乙酸顺式‑3‑己烯酯；

[0035] 烟酰胺；

[0036] 胆固醇；

[0037] 十六碳酰胺；

[0038] 油酸酰胺；

[0039] 2‑乙酰基呋喃；

[0040] 2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸；

[0041] 十八碳‑6‑烯酸酯；

[0042] 油酸；

[0043] 肌醇；

[0044] 核糖醇；

[0045] α‑D‑葡萄糖；

[0046] D‑半乳糖；

[0047] D‑葡萄糖；

[0048] D‑甘露糖；

[0049] 葡萄糖酸；

[0050] 溶血卵磷脂酰胆碱16:0；

[0051] 乙酸己酯；

[0052] 乙酰水杨酸。

[0053] 根据本发明的一些具体实施方案，本发明的应用中，所述外泌体代谢物水平包括外周血表达水平。

[0054] 根据本发明的一些具体实施方案，本发明的应用中，所述外泌体代谢物水平包括外周血血清表达水平。

[0055] 根据本发明的一些具体实施方案，本发明中，所检测的Myoinositol(肌醇)，Ribitol(核糖醇)，Α‑D‑Glucose(α‑D‑葡萄糖)，D‑Galactose(D‑半乳糖)，D‑Glucose(D‑葡
萄糖)，D‑Mannose(D‑甘露糖)，Gluconic Acid(葡萄糖酸)，Lysopc 16:0(溶血卵磷脂酰胆
碱16:0)，Lysopc 18:0(溶血卵磷脂酰胆碱18:0)，Hexyl Acetate(乙酸己酯)，Aspirin(乙
酰水杨酸)，Lysope 18:0(溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0)，Lysopc 20:1(溶血卵磷脂酰胆碱20:
1)，PAF C‑16中的一种或多种的表达水平升高，待测个体双相情感障碍患病风险升高；

[0056] 根据本发明的一些优选具体实施方案，溶血卵磷脂酰胆碱18:0、溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0、溶血卵磷脂酰胆碱20:1以及PAF C‑16中的一种或多种的表达水平升高，待测个
体双相情感障碍患病风险升高。

[0057] 根据本发明的一些具体实施方案，本发明中，所检测的Allantoin(尿囊素)，L‑Arabitol(L‑(‑)‑阿拉伯醇)，Xylitol(木糖醇)，Trans,Trans‑Muconic Acid(反,反‑粘康
酸)，DL‑Benzylsuccinic acid(DL‑苄基琥珀酸)，Cis‑3‑Hexenylacetate(乙酸顺式‑3‑己
烯酯)，Nicotinamide(烟酰胺)，Phosphoric Acid(磷酸)，Cholesterol(胆固醇)，
Hexadecanamide(十六碳酰胺)，Oleamide(油酸酰胺)，2‑Acetylfuran(2‑乙酰基呋喃)，2'‑
Deoxycytidine 5'‑Diphosphate(2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸)，Petroselinic Acid(十八碳‑
6‑烯酸酯)，Oleate(油酸)，Chenodeoxycholic Acid(鹅去氧胆酸)，Lysope 14:0(溶血卵磷
脂酰乙醇胺14:0)，N‑Acetylmethionine(N‑乙酰基蛋氨酸)，13‑oxo‑9Z,11E‑
octadecadienoic acid(13‑氧代‑9Z，11E‑十八碳二烯酸)，Glycine(甘氨酸)，1‑
Naphthylacetic Acid(1‑萘乙酸)，2‑Aminoethanesulfonic Acid(2‑氨基乙烷磺酸/牛磺
酸)，D‑2‑Aminobutyric Acid(D‑2‑氨基丁酸)，Biopterin(生物蝶呤)，Glucosamine(氨基
葡萄糖)中的一种或多种的表达水平降低，待测个体双相情感障碍患病风险升高。

[0058] 根据本发明的一些优选具体实施方案，磷酸、鹅去氧胆酸、溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0、N‑乙酰基蛋氨酸、13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸、甘氨酸、1‑萘乙酸、2‑氨基乙烷磺
酸/牛磺酸、D‑2‑氨基丁酸、生物蝶呤以及氨基葡萄糖中的一种或多种的表达水平降低，待
测个体双相情感障碍患病风险升高。

[0059] 另一方面，本发明还提供了一种评估双相情感障碍发病风险的检测系统（装置），该检测系统包括检测单元，所述检测单元用于检测来自待测个体的样品中外泌体代谢物水
平，所述外泌体代谢物包括：

[0060] 磷酸；

[0061] 鹅去氧胆酸；

[0062] 溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0；

[0063] N‑乙酰基蛋氨酸；

[0064] 13‑氧代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸；

[0065] 甘氨酸；

[0066] 1‑萘乙酸；

[0067] 2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸；

[0068] D‑2‑氨基丁酸；

[0069] 生物蝶呤；

[0070] 氨基葡萄糖；

[0071] 溶血卵磷脂酰胆碱18:0；

[0072] 溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0；

[0073] 溶血卵磷脂酰胆碱20:1；以及

[0074] PAF C‑16。

[0075] 根据本发明的具体实施方案，本发明的检测系统的检测单元，所检测的外泌体代谢物还包括以下中的一种或多种：

[0076] 尿囊素；

[0077] L‑(‑)‑阿拉伯醇；

[0078] 木糖醇；

[0079] 反,反‑粘康酸；

[0080] DL‑苄基琥珀酸；

[0081] 乙酸顺式‑3‑己烯酯；

[0082] 烟酰胺；

[0083] 胆固醇；

[0084] 十六碳酰胺；

[0085] 油酸酰胺；

[0086] 2‑乙酰基呋喃；

[0087] 2'‑脱氧胞苷5'‑二磷酸；

[0088] 十八碳‑6‑烯酸酯；

[0089] 油酸；

[0090] 肌醇；

[0091] 核糖醇；

[0092] α‑D‑葡萄糖；

[0093] D‑半乳糖；

[0094] D‑葡萄糖；

[0095] D‑甘露糖；

[0096] 葡萄糖酸；

[0097] 溶血卵磷脂酰胆碱16:0；

[0098] 乙酸己酯；

[0099] 乙酰水杨酸。

[0100] 根据本发明的具体实施方案，本发明的评估双相情感障碍发病风险的检测系统还包括分析单元，该分析单元用于对检测单元的检测结果进行分析，评估待测个体双相情感
障碍患病风险。

[0101] 根据本发明的具体实施方案，本发明的评估双相情感障碍发病风险的检测系统中，所述分析单元用于对检测单元的检测结果进行分析时，根据OPLS‑DA分析中的VIP值确
定各外泌体代谢物的权重，从而给出待测个体双相情感障碍患病风险评估结果。

[0102] 根据本发明的具体实施方案，各外泌体代谢物的权重是根据OPLS‑DA分析中的VIP值确定，在代谢组学上，VIP值大于1即表示有显著变化，其值越大，权重越大。具体地，各外
泌体代谢物的变化情况如表2、表3所示，log2FC>0表示上调，log2FC<0表示下调。当本发明
的外泌体代谢物包括磷酸、鹅去氧胆酸、溶血卵磷脂酰乙醇胺14:0、N‑乙酰基蛋氨酸、13‑氧
代‑9Z,11E‑十八碳二烯酸、甘氨酸、1‑萘乙酸、2‑氨基乙烷磺酸/牛磺酸、D‑2‑氨基丁酸、生
物蝶呤、氨基葡萄糖、溶血卵磷脂酰胆碱18:0、溶血卵磷脂酰乙醇胺18:0、溶血卵磷脂酰胆
碱20:1以及PAF C‑16时，各外泌体代谢物的权重可参照表2或表3中的VIP值所确定。当本发
明的外泌体代谢物还包括尿囊素、L‑(‑)‑阿拉伯醇、木糖醇、反,反‑粘康酸、DL‑苄基琥珀
酸、乙酸顺式‑3‑己烯酯、烟酰胺、胆固醇、十六碳酰胺、油酸酰胺、2‑乙酰基呋喃、2'‑脱氧胞
苷5'‑二磷酸、十八碳‑6‑烯酸酯、油酸、肌醇、核糖醇、α‑D‑葡萄糖、D‑半乳糖、D‑葡萄糖、D‑
甘露糖、葡萄糖酸、溶血卵磷脂酰胆碱16:0、乙酸己酯、乙酰水杨酸中的一种或多种时，各外
泌体代谢物的权重可参照表2中的VIP值所确定。

[0103] 根据本发明的具体实施方案，本发明的评估双相情感障碍发病风险的检测系统中，所述样品为外周血。

[0104] 可用本领域中任何的可行技术检测外泌体代谢物的表达水平。

[0105] 根据本发明的具体实施方案，本发明中，所述检测所述外泌体代谢物的表达水平的试剂材料和/或仪器设备可以是任何可行的检测所述外泌体代谢物的表达水平的技术中
所用到的试剂材料和/或仪器设备等。

[0106] 本发明的评估双相情感障碍发病风险的检测系统，可以是虚拟装置，只要能实现所述检测单元以及评估单元的功能即可。所述的检测单元可以是包括各种检测试剂材料
和/或检测仪器设备等；所述的数据分析单元可以是任何可以实现对检测单元的检测结果
进行分析处理而得出双相情感障碍患病风险评估状况的运算仪器、模块或是虚拟设备，例
如可以是预先将各种可能的检测结果与对应的患病风险情况制定相应的数据图表，将检测
单元的检测结果对照该数据图表即能得出双相情感障碍发病风险评估结果。

[0107] 在本发明的一些具体实施方案中，利用本发明所筛选出的15个外泌体代谢标志物，能得到较理想的ROC 曲线图，AUC指标高达83.8%。在测试集样本里也表现出良好的区分
效果，AUC指标为 97.1%。并且能较好地将双相情感障碍与精神分裂症和抑郁症区分开，AUC
指标分别为88.6%和77.1%。

[0108] 应用本发明的技术，能够对双相情感障碍的发病机理及研究新的靶向治疗手段提供积极帮助。

附图说明

[0109] 图1为Zetaview检测本发明实施例1中提取到的外泌体的粒径分布的图谱。

[0110] 图2为本发明实施例2中数据OPLS‑DA分析的S‑plot图。横坐标表示主成分与代谢物的协相关系数，纵坐标表示主成分与代谢物的相关系数，越靠近右上角和左下角的代谢
物表示差异越显著，深色的点表明这些代谢物的VIP值大于等于1，浅色的点表示这些代谢
物的VIP值小于1。

[0111] 图3A为本发明筛选出的15个生物标志物在训练集分类结果的ROC曲线图，AUC指标83.8%，图中灰度部分区域为 95%的置信区间。

[0112] 图3B为本发明筛选出的15个生物标志物在测试集分类结果的ROC曲线图，AUC指标97.1%，图中灰度部分区域为 95%的置信区间。

[0113] 图3C为本发明筛选出的15个生物标志物区分双相情感障碍和精神分裂症的ROC曲线图，AUC指标88.6%，图中灰度部分区域为 95%的置信区间。

[0114] 图3D为筛选出的生物标志物区分双相情感障碍和抑郁症的ROC曲线图，AUC指标77.1%，图中灰度部分区域为 95%的置信区间。

具体实施方式

[0115] 为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。实施例中未注明
具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照所选商品的说明书进行。

[0116] 实施例1

[0117] 受试者为佛山市第三人民医院收治的双相情感障碍患者32例，并招募40名年龄和性别匹配的健康志愿者作为对照。此外还包括了31例抑郁症患者和42例精神分裂症患者。
所有参与诊断工作的医师均具有精神科执业医师资格并有10 年以上的精神科从业经验，
熟练使用SCID‑1检查表，熟练掌握ICD‑10和DSM‑V诊断标准，采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)
和躁狂量表（BRMS）对双相情感障碍患者的精神病理状态进行评估评估；采用PNASS量表对
精神分裂症患者的精神病理状态进行评估；采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD) 和蒙哥马利抑
郁量表(MADRS)对抑郁病人的精神病理状态进行评估，操作规范统一，一致性检测达到要求
(Kappa＝0  .68～0  .82) ，排除患有合并症的抑郁患者。所有参与者在纳入研究之前都给
出了书面知情同意书。研究方案已由佛山市第三人民医院伦理委员会批准。所有受试者均
为汉族人，具体临床信息见表1。

[0118] 表1.受试者临床信息

[0119]

[0120] 1.外泌体提取：

[0121] 从每位受试者收集约4ml外周血，并使其在室温下凝结1小时，然后将样品在3000×g下离心10分钟以获得血清。然后将血清存放于在‑80℃低温冰箱内或直接分析。

[0122] 使用0 .22μm滤膜进行过滤，将滤液进行10000G离心1小时，使用30kd超滤管进行浓缩超滤清洗外泌体悬液，加入20mlPBS第1次110000g离心70min，去上清留5mL管底液,重
悬并轻轻吹打管底液体；第2次110000g离心70min，离心后可见管底淡黄色沉淀，去上清剩
1mL管底液，用PBS重悬并补足至离心管规定体积；第3次110000g离心70min，小心去上清，将
收集到的外泌体转移到1.5mL的Eppendorf管中，‑80℃冰箱中保存备用。

[0123] 2.外泌体的鉴定：

[0124] 纳米颗粒示踪分析仪检测外泌体粒径：将收集的外泌体用PBS稀释至颗粒浓度为106/mL，用1mL注射器注入纳米颗粒跟踪分析仪进行分析，并保存分析数据。

[0125] 分析仪操作参数及结果参见图1所示，显示粒径大小符合外泌体典型特征，且浓度为2 .8E+13/mL。

[0126] 实施例2

[0127] 在对实施例1的样本进行外泌体提取后，将样本进行全外泌体代谢物分析，并将表达丰度进行统计分析。

[0128] 1.筛选显著差异外泌体代谢物

[0129] 本实施例中，有143个样本的表达量，其中40个健康对照，32个双相情感障碍患者，31个抑郁患者和40个精神分裂症患者。本实施例中，共350个外泌体代谢物进入差异分析。

[0130] 本实施例中，采用OPLS‑DA做差异分析，定义p值＞1.0为差异代谢物，最终筛选得到38个差异代谢物(表2)。图2显示了OPLS‑DA分析的S‑plot图，其中横坐标表示主成分与代
谢物的协相关系数，纵坐标表示主成分与代谢物的相关系数，越靠近右上角和左下角的代
谢物表示差异越显著，深色的点表明这些代谢物的VIP值大于等于1，浅色的点表示这些代
谢物的VIP值小于1。

[0131] 表2.第一批数据差异外泌体代谢物

[0132]

[0133] 实施例3

[0134] 对训练集16例对照样本及12例双相情感障碍样本进行随机森林算法模型训练，本发明中从第一批数据差异表达外泌体代谢物中进一步分析筛选外泌体代谢标志物，并经过
多方面分析研究，最终筛选得到15个差异代谢物(表3)。

[0135] 表3.从训练集筛选出的外泌体代谢标志物

[0136]

[0137] 分析结果：

[0138] 1.筛选外泌体代谢标志物

[0139] 本发明所筛选出来15个外泌体代谢标志物在训练集中的表达量情况参见表2。其ROC曲线如图3A所示。15个外泌体代谢标志物在训练集样本中地AUC指标为83.8%。

[0140] 2.验证筛选出的外泌体代谢标志物

[0141] 通过测试集样本验证训练集里筛选出的15个外泌体代谢标志物诊断准确性，其ROC曲线如图3B所示。测试集样本包括24例对照样本，20例双相情感障碍样本。15个外泌体
代谢标志物在测试集样本中的AUC指标为87.1%。

[0142] 此外，本发明还测试了所筛选的外泌体代谢标志物区分双相情感障碍和精神分裂症、抑郁症患者的效果，测试样本包括42例精神分裂症患者和31例抑郁症患者。15个外泌体
代谢标志物在区分双相情感障碍患者和精神分裂症患者的ROC曲线如图3C所示，其AUC指标
为88.6%。15个外泌体代谢标志物在区分双相情感障碍患者和抑郁症患者的ROC曲线如图3D
所示，其AUC指标为77.1%。

[0143] 以上结果表明本发明筛选出来的外泌体代谢物可以作为诊断双相情感障碍病人的生物标志物。