(1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法

摘要

本发明提供一种(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分析检测方法，通过高效液相色谱仪，磷酸二氢铵缓冲液和甲醇/乙腈的混合液为流动相，梯度洗脱，检测波长220nm。本发明采用的梯度洗脱可实现各杂质的有效分离，各吸收峰分离度≥1.4，进样精密度良好，RSD＜2％，方法耐用性好，可用于替格瑞洛研发和生产过程中的质量控制。

权利要求

1.一种用高效液相色谱检测(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的方法，其特征在于：以Waters xbridge shield RP18为色谱柱，流动相A为磷酸氢二铵缓冲溶液，流动相B为乙腈和甲醇的混合溶液，按以下梯度洗脱：时间，min 流动相A，v/v 流动相B，v/v

0 92 8

5 92 8

44 10 90

50 10 90

51 92 8

60 92 8

检测波长220nm，柱温23℃～27℃，流速0.6～1mL/min，进样量：10μL～20μL，流动相A的pH为4.8～5.2，流动性B中乙腈和甲醇的体积比为2:8，所述检测的有关物质选自如下化合物或其游离碱：

说明书

(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分

离检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物分析领域，具体涉及(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法。

背景技术

[0002] 药品内在质量直接影响其临床疗效和安全性，有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。基于安全性和生产实际情况的考虑，可允许含有一定限量的无害或低毒性的有关物质，但对毒性较大，危害人体健康、无效或影响药物稳定性的有关物质必须严格控制。因此，有关物质的检测是控制药物质量的关键指标。

[0003] (1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐为合成替格瑞洛的起始物料，其有关物质结构如下：

[0004]

[0005] 目前暂无文献报道(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离检测方法。

发明内容

[0006] 本发明提供一种用高效液相色谱检测(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的方法，其特征在于：以十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为磷酸氢二铵缓冲溶液，流动相B为乙腈和甲醇的混合溶液，按以下梯度洗脱：

[0007]时间(min) 流动相A(v/v) 流动相B(v/v)
0 90‑95 5‑10
5 90‑95 5‑10
44 10 90
50 10 90
51 90‑95 5‑10
60 90‑95 5‑10

[0008] 检测波长220nm，柱温20℃～30℃，流速0.5～2mL/min，进样量：1μL～100μL。

[0009] 本发明实施方案，其中所述的乙腈和甲醇的体积比为2:8。

[0010] 本发明实施方案，其中所述的梯度为：

[0011]时间(min) 流动相A(v/v) 流动相B(v/v)
0 92 8
5 92 8
44 10 90
50 10 90
51 92 8
60 92 8

[0012] 检测波长220nm，柱温20℃～30℃，流速0.6～1.0mL/min，进样量：10μL～20μL。

[0013] 本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为3～7。

[0014] 本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为4～6。

[0015] 本发明实施方案，其中所述的磷酸氢二铵缓冲溶液pH为4.5～5.5。

[0016] 本发明实施方案，其中所述的色谱柱为Waters xbridge shield RP18。

[0017] 本发明实施方案，其特征在于检测的有关物质选自如下化合物或其游离碱：

[0018]

[0019] 分离度，用于评价待测物质与被分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统分离效能的关键指标。用R表示，R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R<1时，两峰有部分重叠，当R＝1.0时，分离度可达98％，当R＝1.5时，分离度可达99.7％。

附图说明

[0020] 图1实施例1条件a的152‑20有关物质分离色谱图；

[0021] 图2实施例1条件f的152‑20有关物质分离色谱图；

[0022] 图3对照品152‑19A的色谱图，保留时间t＝13.684min；

[0023] 图4对照品152‑19B的色谱图，保留时间t＝13.316min；

[0024] 图5对照品152‑20C的色谱图，保留时间t＝10.996min；

[0025] 图6对照品152‑19Z的色谱图，保留时间t＝12.986min；

[0026] 图7对照品152‑80的色谱图，保留时间t＝38.963min；

[0027] 图8对照品152‑20的色谱图，保留时间t＝16.565min；

[0028] 图9混合溶液的分离色谱图，保留时间11.298min的为152‑20C，保留时间13.354min的为152‑19Z，保留时间为13.827min的为152‑19B，保留时间14.191min的为152‑
19A，保留时间16.601min的为152‑20，保留时间38.963min的为152‑80。

[0029] 实施例1色谱条件的筛选

[0030] 通过色谱柱、流动相、洗脱梯度、柱温、流速等进行筛选确定色谱条件，详见表1。

[0031] 表1(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质检测条件的筛选[0032]

[0033]

[0034] 实验结果发现：当采用f条件：Waters xbridge shield RP18为色谱柱，流动相为磷酸氢二铵缓冲溶液、乙腈/甲醇，梯度洗脱，(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质的分离度达到较好的效果。

[0035] 实施例2方法专属性

[0036] 色谱条件：

[0037] 以Waters xbridge shield RP18为色谱柱，紫外检测波长220nm，柱温25℃，进样体积20μL，流速0.8mL/min。

[0038] 流动相的配制：流动相A：5.28g磷酸氢二铵加1000mL水溶解后，用磷酸调pH至5.0；

[0039] 流动相B：乙腈/甲醇＝20:80(v/v)，梯度程序如表2所示。

[0040] 表2 梯度程序

[0041] 时间(min) 磷酸氢二铵缓冲溶液(v/v) 乙腈/甲醇＝20:80(v/v)0 92 8
5 92 8
44 10 90
50 10 90
51 92 8
60 92 8

[0042] 稀释剂：本品为盐酸盐，易溶于水和有机相，考虑溶剂效应，选择乙腈‑水(20:80，v/v)作为本品的稀释剂，在HPLC中峰形良好，空白无干扰。

[0043] 溶液配制：

[0044] 1)选择对照物质152‑20及其杂质152‑20C、152‑19Z、152‑19A、152‑19B、152‑80；

[0045] 2)杂质贮备液：分别称取各杂质，用稀释剂稀释，配制成1mg/mL 152‑19A、1mg/mL 152‑19B、0.5mg/mL 152‑20C、0.5mg/mL 152‑19Z、0.5mg/mL 152‑80，精密量入各杂质溶液
1.0mL，稀释100倍。

[0046] 3)混合溶液：分别称取152‑20约5mg，置10mL量瓶中，加稀释液使溶解，精密量入上述杂质贮备液1.0mL，并加稀释液至刻度，摇匀。(152‑20：0.5mg/mL；杂质152‑19A,152‑19B：1μg/mL；杂质152‑20C，152‑19Z，152‑80：0.5μg/mL)，在上述色谱条件下取各杂质溶液和混合溶液各20μL分别进样，记录色谱图，对照品溶液定位如图3‑8所示，混合溶液如图9所示，本方法对152‑20及其有关物质分离情况见表3。

[0047] 表3(1R,2S)‑2‑(3,4‑二氟苯基)环丙胺盐酸盐及其有关物质分离情况[0048]

[0049] 备注：152‑19A和152‑19B相邻较近，考察两者分离度，故分离度写相同数值。

[0050] 实施例3精密度实验

[0051] 取混合溶液，连续进样6次，记录色谱图，并对结果进行评价，结果见表4。

[0052] 表4 进样精密度实验结果

[0053]

[0054] 进样精密度测试结果显示：进样精密度溶液中152‑20以及各杂质的峰面积RSD％≤2％，此方法检测152‑20及其有关物质，进样精密度好。

[0055] 实施例4耐用性实验

[0056] 通过将色谱条件的流速、流动相pH值、检测波长、柱温等进行调整，测定结果不受影响的承受程度，耐用性结果见表5～表7。

[0057] 表5 不同流速的测试结果

[0058]

[0059] 耐用性不同流速测试结果显示：本测试方法在流速0.6mL/min及1.0mL/min之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。

[0060] 表6 流动相不同pH值的测试结果

[0061]

[0062] 耐用性不同pH测试结果显示：本测试方法在pH4.8及pH5.2之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。

[0063] 表7 不同柱温的测定结果

[0064]

[0065] 耐用性不同柱温测试结果显示：本测试方法在柱温23℃及27℃之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。