2-氨基-3-吲哚基丁酸或3-甲基吡咯烷-2-羧酸作为植物免疫诱抗剂的应用

摘要

本发明公开了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸作为植物免疫诱抗剂的应用。将2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸作为天然活性物质开发为植物免疫诱抗剂可用于提高植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力，有效阻止真菌、细菌和病毒对植物的侵染，进而降低致病水平；同时，能显著提高植物对高温、低温、干旱和盐胁迫的耐受能力。2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸具有安全、环保、高效的特点。

权利要求

1.2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸在制备对生物胁迫的植物免疫诱抗剂中的应用；所述的生物胁迫选自真菌、细菌、病毒胁迫中的任意一种或几种，所述的真菌为小麦白粉病菌；所述的细菌为丁香假单胞菌；所述的病毒为番茄斑萎病毒。

2.2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸在提高植物对生物胁迫中的应用,所述的生物胁迫选自真菌、细菌、病毒胁迫中的任意一种或几种，所述的真菌为小麦白粉病菌；所述的细菌为丁香假单胞菌；所述的病毒为番茄斑萎病毒。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的植物选自小麦、烟草、拟南芥。

4.一种提高植物对生物胁迫抗性的方法，其特征在于向目标植物施加0.1‑10000 nM的

2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸；所述的生物胁迫选自真菌、细菌、病毒胁迫中的任意一种或几种，所述的真菌为小麦白粉病菌；所述的细菌为丁香假单胞菌；所述的病毒为番茄斑萎病毒。

说明书

2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸作为植物免疫

诱抗剂的应用

技术领域

[0001] 本发明属于农业生物农药领域，涉及2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸作为植物免疫诱抗剂的应用。

背景技术

[0002] 在农业生产中，由于高温、低温、干旱和盐等非生物胁迫所造成的损失非常巨大。近年来，全球极端天气频繁出现，农业植物所面临的胁迫也日益严重。高温和低温严重影响植物的生长发育，进而影响植物的产量和品质。干旱是影响植物生存、生长和分布最重要的逆境胁迫因素之一，当前全球干旱、半干旱地区面积约占总耕地面积的40％以上，近年来由于全球性气候恶化使得干旱发生周期越来越短，干旱程度越来越重，对粮食生产构成的威胁也越来越大。其次，土壤盐碱化是阻碍全球作物生长和生产力的主要非生物限制因素，对生物圈及生态结构造成的有害影响很大，中国盐碱地面积位居世界第三，占世界盐碱地面积的10％左右。因此，针对当前实际生产中不同作物面临的主要非生物胁迫状况，开发旨在减轻植物危害水平的产品和技术对于保障农业安全生产显得尤为迫切。

[0003] 除了非生物胁迫外，植物在生长发育过程当中还不断受到各种病虫害的威胁。农业生产中众多病害一旦发生，往往会造成作物大面积严重减产甚至绝收。因此，重要农业病虫害的预防就显得尤为重要。目前，植物病害的防治主要采取施用农药直接杀死病原菌的策略，但长期、大量使用杀菌剂，加之施药方法不够科学，不仅带来了农产品残留超标、作物药害、病原菌抗药性、环境污染、生物多样性降低等一系列问题，也使传统植保的“杀灭”策略面临失效的风险，严重威胁农业的可持续发展和粮食生产安全。所以，开发环保、高效、经济的植物免疫剂，在作物发病前或早期阶段通过增强植物自身的抵抗能力来降低或者抑制作物发病水平，从而实现少用或不用化学杀菌剂的目标，对于实现农业绿色生产具有十分重要的意义。

[0004] 植物免疫诱抗剂是一类新概念农药，其通过激活植物的免疫系统并调节植物的新陈代谢，从而增强植物抗病和抗逆能力。植物免疫诱抗剂本身没有直接的杀菌活性，主要通过促使植物利用自身的天然免疫系统来防治病害，而不依赖外源农药直接杀死病原体，因此病菌不易对其产生抗药性，符合有效保护农业生物多样性的条件下实现绿色防控的思路。此外，在自然界，植物的生长通常并不只是受到单一胁迫，而是多种胁迫并存，如干旱和高温胁迫常常同时发生，对植物造成更严重的危害。植物自身虽然存在免疫系统，但其抵抗逆境胁迫的能力是有限的，通过植物免疫诱抗剂的使用能够增加植物的抗逆水平。因此，植物免疫诱抗剂作为新兴农药的一类，为农业可持续发展和病害的有效绿色防治和提供了新的发展思路，是绿色植保未来发展的主要方向。

[0005] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸，分子式为C12H14N2O2，分子量218克/摩尔，为浅棕色晶体。该化合物的化学合成方法很多，但是过程都比较繁琐(Han et al.,2001；Liu et al.,2012)。有研究表明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸是一些天然产物如Maremycin和具有抗癌活性的链霉黑素(Streptonigrin)生物合成途径的中间产物(Zou et al.,2013；Kong et al.,2016)。小叶链霉菌(Streptomyces flocculus)合成链霉黑素的第一步可能就是合成2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸(Gould&Chaug,1977)。Hartley等人利用S.flocculus酶进行体外酶催化试验发现S‑腺苷甲硫氨酸(S‑adenosylmethionine)的甲基可以转移到色氨酸上而合成2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸(Hartley&Speedie,1984)。此外，科学家对一种超嗜热古菌—强烈火球菌
(Pyrococcus furiosus)的色氨酸合酶亚基进行改造后发现，该酶可以利用苏氨酸与吲哚结合直接反应合成2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸(Herger et al.,2016；Boville et al.,2018)。
截至目前，由于2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸是合成一些抗病毒和抗肿瘤天然产物的中间物，因此对于它的研究主要集中在化学合成方法，体外酶催化和生物合成途径的方面。而对于生物合成的研究又仅限于原核生物小叶链霉菌。在广泛的真核生物中是否存在该化合物、以及其生物活性等方面到目前为止还是空白，未有过报道。

[0006] 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸，分子式为C6H11NO2，分子量为129克/摩尔，为无色晶体。最早关于该化合物的报道在1964年，化学合成的方式首次得到了3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸。随后的活性研究发现，该化合物可以抑制抗生素链霉菌(Streptomyces antibioticus)中放线菌素(actinomycin)的合成(Yoshida et al.,1964；Mauger et al.,1966；Katz et al.,1968；Yoshida et al.,1968)。对来自青霉菌(Penicillium sp.)环状七肽Paraherquamide A的研究发现，其结构中含有β‑甲基‑β‑羟基脯氨酸组分(Stocking et al.,2001)。2003年，Tan等人从海洋真菌柱顶孢霉(Scytalidium.sp.)的发酵液中分离得到两种新环状七肽Scytalidamides A和B，发现对Scytalidamides B进行水解可得到3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸(Tan et al.,2003)。Fredenhagen等人对白地霉(Geotrichum candidum)合成的多种多肽neoefrapeptins A‑N进行了水解，发现其中4种多肽含有3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的结构(Fredenhagen et al.,2006)。截至目前，对于3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的研究多集中在多肽水解和生物合成途径方面，还没有关于其游离存在的报道的，并且其生物活性等方面的研究到目前为止也还是空白。

发明内容

[0007] 本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸作为植物免疫诱抗剂的应用。

[0008] 本发明的另一目的是提供一种免疫诱抗剂。

[0009] 本发明的又一目的是提供一种提高植物对生物和/或非生物胁迫抗性的方法。

[0010] 本发明的目的可通过以下技术方案实现：

[0011] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸是从链格孢菌中分离得到的天然产物。

[0012] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸结构式如下：

[0013]

[0014] 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸结构式如下：

[0015]

[0016] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和/或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在制备植物免疫诱抗剂中的应用。

[0017] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和/或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在提高植物对非生物胁迫和/或生物胁迫中的应用。

[0018] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和/或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在提高植物对高温、低温、干旱和/或盐胁迫中的应用。

[0019] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和/或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在提高植物对真菌、细菌、病毒胁迫中的应用。

[0020] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和/或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在防治植物真菌性病害、细菌性病害和/或病毒性病害中的应用。

[0021] 所述的真菌性病害优选小麦白粉病；所述的细菌性病害优选丁香假单胞菌病害；所述的病毒性病害优选番茄斑萎病。

[0022] 所述的植物，选自粮食作物、经济作物、蔬菜。所述的粮食作物优选小麦，所述的经济作物优选茶叶、棉花，所述的蔬菜优选番茄。

[0023] 一种植物免疫诱抗剂，包含2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸中的任意一种或两种。

[0024] 作为本发明的一种优选，所述的植物免疫诱抗剂，包含组分A：2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸中的任意一种或两种，组分B：表面活性剂。作为本发明的进一步优选，所述的表面活性剂为吐温20，吐温20在植物免疫诱抗剂中的浓度优选0.02％(v/v)。

[0025] 作为本发明的进一步优选，所述的植物免疫诱抗剂中2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的浓度为0.1‑10000nM浓度。

[0026] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的已有相关研究并未涉及天然微生物代谢产物和生物农药领域的报道。植物免疫诱抗剂属于新型农药，是未来植保领域绿色防控的主要发展方向。我国免疫诱抗剂的发展处于刚起步阶段，获得正式登记的产品屈指可数。因此，发展天然植物免疫诱抗剂，并推动其产业化，对于保障农业生产安全、提高农产品竞争力具有重要的意义。2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在相关诱导免疫抗逆性实验中均表现良好，能够提高植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力。

[0027] 由腐生型真菌链格孢菌中分离的天然代谢产物2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于防治病害的方法，其详细内容和实施方案如下：在0.1‑10000nM浓度(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)范围，可有效抑制病毒、细菌和真菌在植物上的侵染和扩散，抑制病害的发生与蔓延，提高植物对高温、低温、干旱和盐胁迫的抵抗能力。

[0028] 一种提高植物对生物胁迫抗性的方法，包括提前向植物施加本发明所述的植物免疫诱抗剂；所述的生物胁迫选自真菌、细菌、病毒胁迫中的任意一种或多种。

[0029] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于防治番茄斑萎病的方法，在0.1‑10nM浓度下(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)，可在烟草接种番茄斑萎病毒(TSWV)3天后显著抑制病毒的扩散。15天后调查烟草病害情况，发现2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理的烟草植株的病情指数均显著降低。在低浓度10nM时，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸可有效抑制TSWV在烟草叶片上的表达，其病情指数、相对免疫效果和病毒含量分别为30.42、67.36％和0.17。在低浓度10nM时，3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸也可有效抑制TSWV在烟草叶片上的表达，其病情指数、相对免疫效果和病毒含量分别为21.44、75.73％和0.16。

[0030] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于防治细菌病害的方法，其在浓度为100‑10000nM浓度范围(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)，随着处理浓度的提高，拟南芥叶片中细菌PstDC3000积累量逐渐下降，当2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理浓5
度为10000nM时，每毫克叶片中细菌个数为4.79×10 ，与空白对照相比细菌个数减少
85.039％，病情指数为29.58。当3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理浓度为10000nM时，每毫克叶片
5
中细菌个数为1.64×10 ，与空白对照相比细菌个数减少94.92％，病情指数为23.26。这一结果说明，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸均能够激发拟南芥自身免疫，抑制细菌在植物体内的繁殖，降低细菌积累量，延缓并抑制病害的发展。

[0031] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于防治小麦白粉病的方法，其在浓度100‑10000nM范围(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)，在小麦接种白粉病菌10天后进行调查，发现随着处理浓度的升高，小麦感染白粉病的病情指数下降，相对免疫效果提高，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸在高浓度10000nM处理时，病情指数为29.70，相对免疫效果为68.42％。3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸在高浓度10000nM处理时，病情指数为30.26，相对免疫效果为68.57％。

[0032] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸用于田间预防小麦白粉病的方法，其在1000nM处理浓度下小麦的病情指数、相对免疫效果和千粒重分别为45.44、40.55％和27.39g，均明显好于阿泰灵处理和助剂对照组。综上2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对小麦白粉病的发生与扩散起到显著的抑制作用。

[0033] 一种提高植物对非生物胁迫抗性的方法,包括向植物施加本发明所述的植物免疫诱抗剂；所述的非生物胁迫选自高温、低温、干旱和/或盐胁迫中的任意一种或多种。

[0034] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于提高植物对高温抵抗能力的方法，其浓度在1‑1000nM之间的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)对黑麦草幼苗和拟南芥进行处理诱导，发现处理组的植株经45℃高温处理12h后在室温恢复7d后，光合性能指数PIABS均高于对照组，热害指数均低于对照组。这一结果说明通过外源喷施2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸溶液有效缓解了高温对幼苗造成的伤害水平。

[0035] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于提高植物对低温的抵抗能力的方法，用1‑1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸溶液(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)对茶叶幼苗进行叶面喷施处理，发现在‑4℃低温胁迫24h后，经过1nM、10nM、100nM和1000nM处理的茶叶幼苗的光合性能指数PIABS均显著高于对照组，冷害指数明显低于对照组，说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸均能够有效缓解了低温对茶叶幼苗造成的伤害，提高了茶叶对低温胁迫的抵抗能力。

[0036] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于提高植物对干旱胁迫的抵抗能力的方法，用100和1000nM的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸溶液(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)对两叶一心的水培小麦进行叶面喷施处理，发现在25％聚乙二醇‑6000(PEG‑6000)胁迫下，经过100nM和1000nM处理的小麦各生物量显著高于对照组，这一结果说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸提高了小麦对干旱胁迫的抗性。

[0037] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用于提高植物对盐胁迫的抵抗能力的方法，用1‑1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸溶液(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)对两片真叶期的水培棉花进行叶面喷施处理，发现在100mM NaCl胁迫下，各喷施了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的处理组，棉花死亡率及盐害指数均低于对照组，这一结果说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸提高了棉花对盐的耐性水平。

[0038] 有益效果

[0039] 本发明的主要优点和积极效果如下：

[0040] 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸均为天然产物，结构简单，生物提取方式简便。由于本发明确认了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够诱导植物对农业生产中存在的部分危害严重的病害产生免疫活性，以及能够诱导植物对于目前农业生产中所面临的较为突出的非生物胁迫产生抗逆性，具有开发成天然植物免疫诱抗剂的潜力。

[0041] 本发明发现了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸具有较高的广谱免疫诱导活性，在0.1nM的低浓度下就能诱导烟草产生免疫反应阻止番茄斑萎病的发生和蔓延；在浓度为100nM时，能够抑制丁香假单胞菌PstDC3000在拟南芥叶片中的积累，降低拟南芥的病情指数；在浓度为1000nM时，就能够诱导小麦对白粉病产生53.58％的相对免疫效果。在应对非生物胁迫方面，在浓度为1‑1000nM时，能够诱导黑麦草和拟南芥提高对高温的抵抗能力，以及小麦对干旱和茶叶对低温的抵抗能力；在浓度为100nM时，能够显著提高棉花对盐渍的抵抗能力。2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸用量低，对环境无污染，是高效、环保的生物农药，这指明了该物质在农业生产上的巨大利用价值和广阔应用前景。

[0042] 本发明可以用于控制发生于农田主要的真菌性病害，如小麦白粉病；病毒性病害，如番茄斑萎病；细菌性病害，如丁香假单胞菌引起的病害等。这表明该化合物能够诱导植物对多类型病害产生免疫反应。同时，其能够诱导植物抵抗自然界多种非生物胁迫，如高温、低温、干旱和盐胁迫，为缓解各类胁迫对植株产生的伤害提供技术参考。

[0043] 本发明发现了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸或3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸做茎叶处理可以阻止多种农业生产中主要病害的发生和蔓延，能够减轻作物在生长发育过程中所受的多种非生物胁迫的抑制。2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸使用方便，可以起到提前预防的作用，降低多种生物和非生物胁迫所引起的植物的伤害水平，减少农药的使用量，节约生产成本。此外，由于2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸是天然存在的一种结构简单的代谢产物，属于α‑氨基酸，具有很高的环境和生物安全性，属于绿色、高效的生物农药范畴。

具体实施方式

[0044] 发明人从腐生型植物病源真菌—链格孢菌中分离提纯得到了2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸，对其结构进行了鉴定。随后对其进行了生物活性、适用范围及作物安全性研究，发现该物质为天然植物免疫诱抗剂，具备开发为生物农药的潜力。同时，其研究思路为生物农药的发展以及病害的防治和非生物胁迫的缓解提供了新的发展方向。本发明的实质性特点可以从下述的实施方案和实施例中得以体现，但这些不应视为是对发明的任何限制。

[0045] 实施例1(本发明化合物的生物合成、提取方法及结构鉴定)

[0046] (1)链格孢菌的培养

[0047] 葡萄糖硝酸钠培养基：葡萄糖，40.0g；NaNO3，1.0g；NH4Cl，0.25g；KH2PO4，1.0g；KCl，0.25g；NaCl，0.25g；MgSO4·7H2O，0.5g；FeSO4·7H2O，0.01g；ZnSO4·7H2O，0.01g；酵母提取物，1g，加水定容至1L，调pH到5.5。

[0048] 链格孢菌培养方法为：PDA培养基活化保存的菌株，7d后，选取生长一致的菌落，打取直径为5mm的菌饼，接种到500mL培养基内，接种量为每100mL一个菌饼。将接种菌块的培养基放置到恒温摇床内，培养条件为：140rpm，25℃，黑暗培养7d。

[0049] (2)化合物的提取

[0050] 从培养7d后的发酵液中将菌丝分离出来。采用离心机进行分离，离心条件为10000rpm，5min。除去上清液，将菌丝从瓶底取出放入研钵中，用液氮快速将其研磨成均匀粉末。粉末装入离心管中，加5mL水后摇匀，静置萃取1h。采用离心的方式去除沉淀，离心条件为10000rpm，5min。所得到的上清液即为氨基酸的粗提物。

[0051] (3)HPLC法分离提纯2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸：

[0052] 利用高效液相色谱对化合物粗提物进行分离提纯，采用双流动相法进行洗脱。洗‑1脱条件为A:60％水(含0.1％甲酸)，B：40％乙腈，紫外检测波长为256nm，流速2mL min 经过分离，可以除去粗提物中的杂质，得到单一组分的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸，出峰时间为
9.6min，此方法可以有效的分离链格孢菌中的该化合物。

[0053] 分离得到的浅棕色晶体利用核磁共振和质谱的方式对其结构进行鉴定。

[0054] 核磁结果如下：1H NMR(500MHz,Deuterium Oxide)δ7.67‑7.56(m,1H,Ph),7.23‑7.16(d,J＝10Hz,1H,NHCH),7.19‑7.12(m,1H,Ph),7.11‑7.00(m,1H,Ph),4.18‑4.01(dd,J1＝5Hz,J2＝5Hz,1H,CH‑NH2),3.89‑3.69(m,1H,CHCH3),1.42‑1.28(d,J1＝10Hz,J2＝5Hz,3H,CHCH3).

[0055] 13C NMR(125MHz,Deuterium Oxide)δ173.24(CHCOOH),136.61(Ph),129.53(Ph),123.94(NHCH),122.38(Ph),119.54(Ph),118.47(Ph),113.16(Ph),112.08(CHNH),62.55(CHNH2),31.31(CHCH3),13.11(CHCH3)。

[0056] 质谱显示该化合物的分子离子峰为：219.1028[M+H]+，确定其分子式为：C12H14N2O2。结合核磁氢谱和碳谱的结果确定该化合物为2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸。

[0057] (4)HPLC法分离提纯：

[0058] 利用高效液相色谱对氨基酸粗提物进行分离提纯，采用双流动相法进行洗脱。洗‑1脱条件为A:60％水(含0.1％甲酸)，B：40％乙腈，紫外检测波长为256nm，流速2mL min 经过分离，可以除去粗提物中的杂质，得到单一组分的3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸，出峰时间为
5.9min，此方法可以有效的分离链格孢菌中的该化合物。

[0059] 分离得到的3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸利用核磁和质谱的方式对其结构进行鉴定,[0060] 核磁结果如下：1H NMR(500MHz,Deuterium Oxide)δ12.39(br,1H,OH),3.52(d,J＝10Hz,1H,CH‑NH),2.75‑2.49(m,2H,CH2NH),2.05‑1.98(m,1H,CHCH3),1.66‑1.41(m,2H,CH2CH),1.11(d,J＝10Hz,3H,CHCH3)。

[0061] 13C NMR(125MHz,Deuterium Oxide)δ174.56(CHCOOH),73.73(CHCOOH),43.51(CH2NH),38.26(CHCH3),35.93(CH2CH),14.87(CHCH3)。

[0062] 质谱显示该化合物的分子离子峰为：130.0802[M+H]+，确定其分子式为：C6H11NO2。结合核磁氢谱和碳谱的结果确定该化合物为3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸。

[0063] 实施例2(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导烟草抗番茄斑萎病毒侵染)

[0064] 番茄斑萎病毒取自中国云南省，初始毒源放于‑80℃冰箱进行保存，采取摩擦接种的方法将其接种在本氏烟叶片上对病毒进行活化，提取病毒质粒利用大肠杆菌感受态细胞进行转化，涂布到抗性平板上培养，挑取单菌落进行PCR筛选，选取阳性菌落用于测序和后续的质粒提取，将测序正常的质粒加入到农杆菌感受态细胞中，采用电击法进行农杆菌转化，取转化后的农杆菌菌液涂布于相应抗性的筛选平板上，28℃(±1)培养48h。挑取转化平板上的农杆菌单菌落，置于5mL含有相应抗性的LB培养基中，28℃，180rpm过夜培养。6000rpm离心2min收集菌体，用农杆菌处理缓冲液(10mM  MgCl2、10mM  MES、10μM Acetosyringone)悬浮菌体，使悬浮液的OD600值为0.5，28℃避光处理3h后待用。

[0065] 取2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸用蒸馏水溶解后再用蒸馏水梯度稀释成0nM、0.1nM、1nM和10nM的溶液。将本氏烟草种子播于小盆中，22(±1)℃，12h/12h光照，培养5周。挑选健康的烟草植株(8‑10片叶为宜)用上述浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液对其行茎叶喷雾处理，间隔24小时重复进行处理一次，共进行两次处理。24小时后，用1mL注射器抽取浓度均一的农杆菌菌液，将注射器的注射口直接压在烟草叶片背面的小孔上，缓慢推进菌液，使整个叶片浸润。将浸润后的烟草移到22(±1)℃，12h/12h光照的条件下培养。3d后进行显微镜观察记录；同时进行取样，采用Western‑blot结合Image J软件对蛋白条带的灰度进行分析，测定叶片内病毒相对蛋白含量。15d后观察烟草叶片发病情况，参照GB/T23222—2008《烟草病虫害分级及调查方法》，记录病情指数，公式如下：

[0066]

[0067]

[0068] 番茄斑萎病毒病分级标准(以株为单位分级调查)：

[0069] 0级：全株无病；

[0070] 1级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化；

[0071] 3级：三分之一叶片花叶但叶片不变形，或植株矮化成正常株高的四分之三以上；

[0072] 5级：三分之一至二分之一叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，或植株矮化成正常株高的三分之二至四分之三；

[0073] 7级：二分之一至三分之二叶片花叶，或变形或少数主侧脉坏死，或植株矮化成正常株高的二分之一至三分之二；

[0074] 9级：全株叶片花叶，严重变形或坏死，或病株矮化成正常株高的二分之一以上。

[0075] 表1不同浓度2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对番茄斑萎病毒侵染烟草的影响

[0076]

[0077]

[0078] 表1结果表明，在2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度范围为0.1‑10nM时，各处理均能显著降低番茄斑萎病毒对烟草的侵染，烟草感染番茄斑萎病毒的病情指数低于50，相对免疫效果为45％以上，且在本浓度范围内随着浓度的升高，烟草感染番茄斑萎病毒的病情指数显著降低，与对照相比相对免疫效果均显著提高，烟草叶片内病毒蛋白含量均显著下降。在处理浓度为10nM时，烟草对番茄斑萎病毒的免疫效果最佳，病情指数、相对免疫效果和病毒含量分别为30.42、67.36％和0.17。以上结果说明，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够提高烟草对番茄斑萎病毒的免疫能力，有效抑制番茄斑萎病毒在烟草中的扩散。

[0079] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导烟草抗番茄斑萎病毒侵染效果，结果见表2：

[0080] 表:2不同浓度3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸对番茄斑萎病毒侵染烟草的影响

[0081]

[0082] 表2结果表明，在3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度范围为0.1‑10nM时，各处理均能显著降低番茄斑萎病毒对烟草的侵染，烟草感染番茄斑萎病毒的病情指数低于50，相对免疫效果为50％以上，且在本浓度范围内随着浓度的升高，烟草感染番茄斑萎病毒的病情指数显著降低，与对照相比相对免疫效果均显著提高，烟草叶片内病毒蛋白含量均显著下降。在处理浓度为10nM时，烟草对番茄斑萎病毒的免疫效果最佳，病情指数、相对免疫效果和病毒含量分别为21.44、75.73％和0.16。以上结果说明，3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够提高烟草对番茄斑萎病毒的免疫能力，有效抑制番茄斑萎病毒在烟草中的扩散。

[0083] 实施例3(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导拟南芥抗丁香假单胞菌侵染)

[0084] 取2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸用无菌水溶解后再用无菌水梯度稀释成100nM、1000nM和10000nM的溶液，另设空白对照，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂。将丁香假单胞菌PstDC3000涂布于LB平板上，28℃培养48h；挑取单克隆菌落接种到含有2mL培养基的50mL离心管中，28℃，250rpm在摇床上培养，每1‑2h监测菌液OD600值变化，在OD600值达到0.8之前停止培养细菌；转移1mL菌液至无菌的1.5mL离心管中，8000rpm离心2min，收集沉淀；去掉上清，用10mM的氯化镁洗涤沉淀3次并离心，最后将PstDC3000重悬在10mM氯化镁，使其OD600值达到0.001备用。将拟南芥种子用75％酒精浸泡3min，然后用无菌水洗涤4次，种在装有1/
2MS培养基的培养皿中，每个培养皿播12颗种子，将带种子的1/2MS培养皿在4℃下春化3d以‑2 1
打破休眠，然后置于22℃、光照强度为100μE m s‑ (16h光/8h黑暗)的培养室中，幼苗生长2周时将上述不同浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸缓慢倒入培养皿中，直至淹没整个拟南芥幼苗，保持2‑3分钟，然后将处理液从培养皿中倾倒干净，每隔24h处理一次，共处理2次，第2次处理24h后用同样的淹没方法将PstDC3000悬浮液(OD600＝0.01)接种到拟南芥叶片上，接种后用医用透气胶贴将培养皿封闭好，放置于培养室中继续培养。3d后测定不同处理细菌个数，并观察拟南芥发病情况，计算病情指数，计算方式与实施例2病情指数计算公式相同。

[0085] PstDC3000引起的病害分级标准(以叶片为单位)：

[0086] 0级：叶面上无病斑；

[0087] 1级：病斑面积占整片叶面积的0％‑10％；

[0088] 2级：病斑面积占整片叶面积的10％‑25％；

[0089] 3级：病斑面积占整片叶面积的25％‑50％；

[0090] 4级：病斑面积占整片叶面积的50％‑75％；

[0091] 5级：病斑面积占整片叶面积的75％‑100％。

[0092] 表3不同浓度2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对叶片中细菌个数和病情指数的影响[0093]

[0094] 表3结果表明，随着2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度的上升，每毫克叶片中的细菌个数逐渐下降。处理浓度为100nM、1000nM和10000nM时，每毫克叶片中细菌个数减少76.75％、80.97％和85.03％，病情指数分别降低51.25％、53.92％和64.42％。说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够激发植物产生对丁香假单胞菌的免疫能力，抑制细菌在植物叶片中的积累，降低植株发病水平。

[0095] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导拟南芥抗丁香假单胞菌侵染效果，结果见表4：

[0096] 表4不同浓度3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸对叶片中细菌个数和病情指数的影响[0097]

[0098] 表4结果表明，随着3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度的上升，每毫克叶片中的细菌个数逐渐下降。处理浓度为100nM、1000nM和10000nM时，每毫克叶片中细菌个数减少70.78％、80.90％和94.90％，病情指数分别降低41.13％、52.47％和72.69％。说明3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够激发植物产生对丁香假单胞菌的免疫能力，抑制细菌在植物叶片中的积累，降低植株发病水平。

[0099] 实施例4(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导小麦抗白粉病菌侵染)

[0100] 取2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸用蒸馏水溶解后再用蒸馏水梯度稀释成100nM、1000nM和10000nM的溶液，另设空白对照。小麦(NAU0686)种子催芽后，种于灭菌土培养钵中，放入23(±1)℃光照12h的温室中培养。当幼苗长至1叶1心期时，用上述浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液对小麦幼苗进行茎叶喷雾处理，间隔24小时重复进行处理一次，共进行两次处理，
24h后将新鲜的小麦白粉菌孢子均匀的撒在小麦叶片上，每处理3盆，每盆20株。10d后调查各处理的小麦病情等级，按《农药田间药效试验准则》(一)中的小麦白粉病分级标准记载发病程度，并计算病情指数和相对免疫效果，计算方式与番茄斑萎病病情指数和相对免疫效果计算公式相同，结果如表5所示。

[0101] 小麦白粉病分级标准(以叶片为单位)：

[0102] 1级：病斑面积占整片叶面积的5％以下；

[0103] 3级：病斑面积占整片叶面积的6％‑15％；

[0104] 5级：病斑面积占整片叶面积的16％‑25％；

[0105] 7级：病斑面积占整片叶面积的26％‑50％；

[0106] 9级：病斑面积占整片叶面积的50％以上。

[0107] 表5不同浓度2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对小麦病情指数和相对免疫效果的影响[0108]

[0109] 表5的结果表明，随着2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度的上升，易感病品种小麦的病情指数下降，相对免疫效果提高。各处理的病情指数均存在显著性差异。当浓度分别为10nM、100nM、1000nM和10000nM时，病情指数分别为73.34、63.41、43.67、29.70，相对免疫效果为
22.04％、32.59％、53.58和68.43％。当2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度大于1000nM时，易感病品种小麦感染白粉病的病情指数低于50，而相对免疫效果超过50％，在浓度10000nM时效果最佳。以上结果说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够提高小麦对真菌病害白粉病的免疫能力，从而抑制白粉病菌在小麦叶片中的侵染和扩散，阻止小麦白粉病的发展与蔓延。

[0110] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导小麦抗白粉病菌侵染效果，结果见表6：

[0111] 表6不同浓度3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸对小麦病情指数和相对免疫效果的影响[0112]

[0113] 表6的结果表明，随着3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度的上升，易感病品种小麦的病情指数下降，相对免疫效果提高。各处理的病情指数均存在显著性差异。当浓度分别为10nM、100nM、1000nM和10000nM时，病情指数分别为72.16、54.17、40.41、30.26，相对免疫效果为
25.04％、43.73％、58.02和68.57％。当3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度大于1000nM时，易感病品种小麦感染白粉病的病情指数低于50，而相对免疫效果超过50％，在浓度10000nM时效果最佳。以上结果说明3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够提高小麦对真菌病害白粉病的免疫能力，从而抑制白粉病菌在小麦叶片中的侵染和扩散，阻止小麦白粉病的发展与蔓延。

[0114] 实施例5(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导小麦抗白粉病菌侵染的田间试验)

[0115] 用1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液(加入体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20)在田间进行茎叶喷雾处理，以喷施体积百分比为0.02％的表面活性剂吐温20为助剂对照，以喷施30g/亩的阿泰灵为阳性对照，每个处理三次重复。调查各处理的小麦病情等级，按《农药田间药效试验准则》(一)中的小麦白粉病分级标准记载发病程度，并计算病情指数和相对免疫效果，计算方式与番茄斑萎病病情指数和相对免疫效果计算公式相同。待收获的小麦种子晾干后，对不同处理小麦种子的千粒重进行测定。

[0116] 小麦白粉病分级标准(以叶片为单位)：

[0117] 1级：病斑面积占整片叶面积的5％以下；

[0118] 3级：病斑面积占整片叶面积的6％‑15％；

[0119] 5级：病斑面积占整片叶面积的16％‑25％；

[0120] 7级：病斑面积占整片叶面积的26％‑50％；

[0121] 9级：病斑面积占整片叶面积的50％以上。

[0122] 表7 1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对小麦病情指数和相对免疫效果及千粒重的影响

[0123]

[0124] 由表7结果可以看出，1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液处理可有效提高小麦对真菌病害白粉病的免疫能力，经过该浓度处理的小麦的病情指数降低了40.55％，显著低于助剂对照组；与助剂对照比，相对免疫效果提高了40％、千粒重增加了10.80％。与阿泰灵对照组相比，喷施1000nM 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸后，小麦的相对免疫效果提高12％，说明喷施2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够有效提高小麦对真菌病害白粉病的免疫能力。

[0125] 实施例6(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导黑麦草抵抗高温胁迫)

[0126] 取2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸用蒸馏水溶解后再用蒸馏水梯度稀释成1nM、10nM、100nM和1000nM的溶液，另设空白对照，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂。每个浓度设置4组重复，同时设置常温空白对照。黑麦草种子按照每盆0.8g称重，并播种于直径8.5cm的盆‑2 ‑1钵中，在温度25℃、湿度60％‑70％、光强200μmol m s (12h光照/12h黑暗)的温室中种植。
黑麦草生长7d后开始进行处理，处理的方法为叶面喷施2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液，24h喷施两次。在第二次喷施24h后，将其转移至温度45℃的光照培养箱进行高温胁迫处理12h，将植株取出转移至25℃的温室恢复7d，观察统计植株的受害情况并计算热害分级。其中热害分级标准见表8，热害指数计算公式如下。热害结果见表6。

[0127]

[0128] 表8热害分级标准

[0129]

[0130] 表9 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸对高温胁迫下黑麦草的影响

[0131]

[0132] 表9的结果表明，经过2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理的黑麦草在高温胁迫后的热害指数明显低于对照组，且随着处理浓度的增加，热害指数逐渐降低。处理浓度上升到1000nM时，黑麦草的热害指数降低了65％。可见，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够缓解高温胁迫对黑麦草植株的损伤，提高黑麦草对高温胁迫的抵抗能力。

[0133] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导黑麦草抵抗高温胁迫想过，结果见表10：

[0134] 表10 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸对高温胁迫下黑麦草的影响

[0135]

[0136] 表10的结果表明，经过3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理的黑麦草在高温胁迫后的热害指数明显低于对照组，且随着处理浓度的增加，热害指数逐渐降低。处理浓度上升到1000nM时，黑麦草的热害指数降低了68％。可见，3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够缓解高温胁迫对黑麦草植株的损伤，提高黑麦草对高温胁迫的抵抗能力。

[0137] 实施例7(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导拟南芥抵抗高温胁迫)

[0138] 拟南芥种子按照每盆50粒左右播种于直径8.5cm的盆钵中，在温度25℃、湿度‑2 ‑160％‑70％、光强100μmol m s (16h光照/8h黑暗)的温室中种植。在拟南芥正常生长21d时开始进行处理。实验设置0、1、10、100和1000nM，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂，设置四组重复。其中喷雾处理方法与实施例5中黑麦草的处理方法相同。在第二次处理24h后，将其转移至温度45℃的光照培养箱进行高温胁迫处理12h，用植物效率Handy‑PEA测定拟南芥叶圆片的叶绿素荧光。将植株取出转移至25℃的温室恢复7d，观察统计植株的受害情况并计算热害分级，结果如表11所示。

[0139] 表11 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理对高温胁迫下拟南芥的影响

[0140]

[0141] 表11的结果表明，在高温胁迫条件下，经过2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理的拟南芥光合性能指数PIABS显著上升，热害指数明显下降。随着2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度的升高，拟南芥的热害指数逐渐降低，同时光合性能指数PIABS相较于对照组明显上升，尤其是1000nM浓度下拟南芥的光合性能指数PIABS大幅提高，相较于对照提高了20倍，而热害指数降低了65％。由此可见，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够缓解高温胁迫对拟南芥光合作用活性造成的伤害，提高拟南芥对高温胁迫的抵抗能力。

[0142] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导拟南芥抵抗高温胁迫的效果，结果见表12：

[0143] 表12 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理对高温胁迫下拟南芥的影响

[0144]

[0145] 表12的结果表明，在高温胁迫条件下，经过3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理的拟南芥光合性能指数PIABS显著上升，热害指数明显下降。随着3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度的升高，拟南芥的热害指数逐渐降低，同时光合性能指数PIABS相较于对照组明显上升，尤其是1000nM浓度下拟南芥的光合性能指数PIABS大幅提高，相较于对照提高了23倍，而热害指数降低了68％。由此可见，3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够缓解高温胁迫对拟南芥光合作用活性造成的伤害，提高拟南芥对高温胁迫的抵抗能力。

[0146] 实施例8(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导茶树抗低温胁迫)[0147] 供试茶树为扦插苗白叶1号。选择长势较一致的茶苗移入直径18cm的塑料盆钵中，置于温度25℃，湿度60％‑70％的温室使之适应生长一周左右进行实验。实验设置0、1、10、100和1000nM，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂。其中喷雾处理方法与实施例1中黑麦草的处理方法相同，低温胁迫的时间为24h，温度设置为‑4℃。胁迫完成后将茶苗取出，常温暗处理30min后用植物效率Handy‑PEA测定茶苗顶部叶片的叶绿素荧光，随后置于25℃温室恢复3d，观察统计其冷害状况并进行分级。其中冷害指数统计分级标准见表13，计算公式如下，结果如表14所示。

[0148]

[0149] 表13冷害分级标准

[0150]

[0151] 表14 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理对低温胁迫下茶叶的影响

[0152]

[0153] 表14的结果表明，经过2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理，茶叶在低温胁迫条件的光合性能指数PIABS显著上升，冷害指数明显下降。其中以1000nM的效果最佳，该浓度处理的茶叶PIABS提高了52％，冷害指数降低了40％。由此可见，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够缓解低温胁迫对茶叶幼苗光合系统的伤害，提高茶叶对低温胁迫的抵抗能力。

[0154] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导茶树抗低温胁迫的效果，结果见表15

[0155] 表15 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理对低温胁迫下茶叶的影响

[0156]

[0157]

[0158] 表15的结果表明，经过3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理，茶叶在低温胁迫条件的光合性能指数PIABS显著上升，冷害指数明显下降。其中以1000nM的效果最佳，该浓度处理的茶叶PIABS提高了138％，冷害指数降低了48％。由此可见，3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够缓解低温胁迫对茶叶幼苗光合系统的伤害，提高茶叶对低温胁迫的抵抗能力。

[0159] 实施例9(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导小麦抗干旱胁迫)[0160] 用6目的网筛作为容器水培小麦，每筛50粒，每隔两天更换一次1/2Hoagland营养液，待小麦生长到两叶一心时期开始叶面喷施2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液，2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度为0、100和1000nM，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂；连续喷施两天后，在第三天将水培营养液替换成含有25％PEG‑6000的1/2Hoagland营养液进行胁迫处理，干旱胁迫6d后复水处理，在正常的营养液中恢复生长7d后观察测定旱害指数，并测定其根长和生物量。结果如表17所示。

[0161] 叶片旱害与盐害后的表现特征类似，借用盐害的评估指标引入旱害率及旱害指数，旱害指数公式如下，旱害分级标准见表16。

[0162]

[0163] 表16旱害分级标准

[0164]

[0165] 表17 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理对干旱胁迫下小麦生物量与旱害指数的影响[0166]

[0167] 表17的结果表明，随着处理浓度的增加小麦对干旱胁迫的抵御能力在逐步增强。两个处理浓度下小麦的鲜重、干重、根长均高于对照组，这使得小麦旱害指数明显降低。例如和对照组相比，1000nM浓度的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理使小麦幼苗根长显著增加了
10.86％，地上和地下部分鲜重分别提高了44.93％和54.98％，旱害指数降低了44％。这说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能提高小麦抗干旱胁迫的能力。

[0168] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导小麦抗干旱胁迫的效果，结果见表18：

[0169] 表18 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理对干旱胁迫下小麦生物量与旱害指数的影响[0170]

[0171] 表18的结果表明，随着处理浓度的增加小麦对干旱胁迫的抵御能力在逐步增强。两个处理浓度下小麦的鲜重、干重、根长均高于对照组，这使得小麦旱害指数明显降低。例如和对照组相比，1000nM浓度的3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理使小麦幼苗根长显著增加了
12.58％，地上和地下部分鲜重分别提高了44.08％和36.55％，旱害指数降低了61％。这说明3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能提高小麦抗干旱胁迫的能力。

[0172] 实施例10(2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导棉花抗盐胁迫)[0173] 实验材料为“泗抗一号”棉花，用500mL塑料杯进行水培，每隔两天更换一次1/2Hoagland营养液。当棉花幼苗生长至第二片真叶完全展开时用2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸溶液进行叶面喷施，实验设置0、1、10、100和1000nM浓度，同时加入0.02％吐温20作为表面活性剂。每24h喷施一次，共2次，处理后第二天向1/2Hoagland营养液加入NaCl使其终浓度为
100mM，进行盐胁迫处理。每个处理三次重复。盐胁迫三天后复水处理，观察棉花的盐害症状，并计算盐害指数，计算公式如下：

[0174]

[0175] 表19盐害分级标准

[0176]

[0177] 表20 2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸处理对盐胁迫下棉花的影响

[0178]

[0179] 表20的结果表明，棉花的盐害指数随着2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸浓度的升高而下降，各处理的植株死亡率均低于对照。当浓度为1000nM时，盐害指数和死亡率均最低，分别为44％和27％。以上结果说明2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸能够诱导棉花对盐胁迫产生较好的抗性。

[0180] 按照相同方法考察3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸诱导棉花抗盐胁迫的效果，结果见表21：

[0181] 表:21 3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸处理对盐胁迫下棉花的影响

[0182]

[0183] 表21的结果表明，棉花的盐害指数随着3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸浓度的升高而下降，各处理的植株死亡率均低于对照。当浓度为1000nM时，盐害指数和死亡率均最低，分别为39％和24％。以上结果说明3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸能够诱导棉花对盐胁迫产生较好的抗性。

[0184] 化学合成的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸也具有与生物提取的2‑氨基‑3‑吲哚基丁酸和3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸相同的效果。2‑氨基‑3‑羟基‑3‑甲基丁酸和
3‑甲基吡咯烷‑2‑羧酸的制备方法及来源不影响其作为免疫诱抗剂的应用和效果。