丹皮酚及其衍生物在预防和治疗白斑综合征中的应用转让专利
申请号 : CN202210117249.5
文献号 : CN114146071B
文献日 : 2023-02-28
发明人 : 王高学 , 凌飞 , 刘天强 , 陈诚
申请人 : 西北农林科技大学深圳研究院
摘要 :
本发明属于植物源抗病毒技术领域，公开了丹皮酚及其衍生物在预防和治疗水产动物白斑综合征中的应用。动物实验研究表明，丹皮酚及其衍生物具有良好的抗白斑综合征病毒WSSV的作用。丹皮酚及其衍生物可用于制备白斑综合征的相关治疗药物，有望开发成水产养殖中的绿色生物药剂。
权利要求 :
1.丹皮酚及其衍生物作为唯一活性成分在制备治疗水产动物白斑综合征药物中的应用，所述丹皮酚衍生物选自2,5‑二甲氧基苯酚、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲腈、4‑甲氧基‑1,2‑苯二酚、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲酸、5‑甲氧基‑2‑甲基苯酚、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲醛、2‑羟基‑
4‑甲氧基苯丙酮、2‑羟基‑4‑甲氧基苯丁酮、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯基)‑2‑苯乙酮、2‑乙基‑
5‑甲氧基苯酚、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯)乙醇、2‑溴‑1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯基)乙酮；
2,4‑二甲氧基苯乙酮、2‑氟‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑乙酰基5‑甲氧基苯氧乙酸、对甲氧基苯乙酮、2‑乙氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑丁氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑己氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑癸氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑十四烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮；
2,4‑二羟基苯乙酮、4‑溴‑2‑羟基苯乙酮、4‑氟‑2‑羟基苯乙酮、4‑苄氧基‑2‑羟基苯乙酮、4‑乙氧基‑2‑羟基苯乙酮、2‑羟基‑4‑甲基苯乙酮、4‑氯‑2‑羟基苯乙酮、2‑羟基苯乙酮、
2‑羟基‑4‑乙氧基苯乙酮、4‑烯丙氧基‑2‑羟基苯乙酮；
2‑羟基‑3,4‑二甲氧基苯乙酮、2‑羟基‑4,5‑二甲氧基苯乙酮、2‑羟基‑4,6‑二甲氧基苯乙酮、丹皮酚磺酸钠、5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯乙酮；
2,4‑二甲氧基苯甲酸、2‑4二羟基苯甲酸、4‑羟基‑2‑甲基苯乙酮、2,4‑二甲基苯乙酮、对羟基苯乙酮、5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲酸、5‑溴‑2‑乙氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑丁氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑己氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑癸氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑十四烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、5‑溴‑2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、3‑烯丙基‑2,4‑二羟基苯乙酮。
说明书 :
丹皮酚及其衍生物在预防和治疗白斑综合征中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于植物源抗病毒药物技术领域，涉及水产养殖抗白斑综合征病毒活性物质的筛选，具体涉及丹皮酚及其衍生物在预防和治疗白斑综合征中的应用。
背景技术
[0002] 丹皮酚（2‑羟基‑4‑甲氧基苯乙酮）是从毛茛科植物牡丹的根皮中分离提取出的一种酚酮类化合物。丹皮酚可以从牡丹根皮中提取得到。因其结构简单易于合成，合成原料廉价易得，合成丹皮酚主要通过两步完成：第一步，以间苯二酚为原料，采取不同方法乙酰化制备2,4‑二羟基苯乙酮；第二步，将制备好的2,4‑二羟基苯乙酮进一步甲基化合成2‑羟基‑4‑甲氧基苯乙酮，即丹皮酚。
[0003] 丹皮酚类化合物具有多种独特的生物效应，广泛应用于科学研究、临床医学以及农业生产。其生物效应主要体现在两个方面：第一，丹皮酚可作用于乙酰胆碱酯酶（AChE），显著影响突触部位神经冲动正常传递；其二，丹皮酚穿过血脑屏障运转机制表明，其能主动通过H+/OC逆向转运器穿过血脑屏障进入大脑。在农业生产方面，丹皮酚主要用于防治病虫害、抑制植物病原真菌以及使水果蔬菜保持新鲜；在临床医学方面，丹皮酚主要用于解热镇痛、抗风湿以及治疗湿疹，但丹皮酚及其衍生物的研究目前尚未涉及动物抗病毒活性。
[0004] 白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV）导致的对虾白斑综合征病毒病是迄今为止危害对虾产业最大的疫病。该病防控研究的重点主要集中在免疫增强剂、灭活病毒颗粒“疫苗”、RNAi、中草药提取物和抗逆性苗种培育等。由于虾类在疫苗防控中的缺陷，药物防控仍然是生产中最直接、最有效的手段。但是，金刚烷胺、鸟嘌呤类似物和病毒唑等水产抗病毒药物已被禁用，临床应用水产抗病毒药物寥寥无几。因此，开展抗病毒渔药创新研究，对满足产业迫切需求、保障水产品安全和环境友好具有重要的意义。
发明内容
[0005] 丹皮酚作为一种特有结构的小分子的酚类化合物，生物活性广泛，且化学性质稳定、结构易于修饰、廉价易得，其具有作为药物开发先导结构的诸多优越条件。丹皮酚及其衍生物开发新药物前景广阔。本发明的目的在于探索丹皮酚及其衍生物在水产养殖抗病毒方面的可行性，为抗病毒绿色渔药创新研究拓展新途径。
[0006] 本发明提出丹皮酚在制备抗甲壳类水产动物病毒药物中的应用。基于本发明的实验动物验证，丹皮酚对白斑综合征病毒WSSV具有抑制活性，可用于预防和治疗水产动物白斑综合征。
[0007] 还有，本发明提出丹皮酚衍生物在制备抗甲壳类水产动物病毒药物中的应用。基于同样的技术效果，丹皮酚衍生物可用于预防和治疗水产动物白斑综合征。
[0008] 本发明所述丹皮酚衍生物选自下列化合物1‑61中的任一种或多种。
[0009] 2,5‑二甲氧基苯酚（化合物1）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲腈（化合物2）、4‑甲氧基‑1,2‑苯二酚（化合物3）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲酸（化合物4）、5‑甲氧基‑2‑甲基苯酚（化合物
5）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲醛（化合物6）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯丙酮（化合物7）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯丁酮（化合物8）、2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮（化合物9）、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯基)‑
2‑苯乙酮（化合物10）、2‑乙基‑5‑甲氧基苯酚（化合物11）、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯)乙醇（化合物12）、溴化丹皮酚（化合物13）、丹皮酚缩苯基氨基硫脲（化合物14）、丹皮酚亚胺基乙酸钾（化合物15）；
5）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲醛（化合物6）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯丙酮（化合物7）、2‑羟基‑4‑甲氧基苯丁酮（化合物8）、2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮（化合物9）、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯基)‑
2‑苯乙酮（化合物10）、2‑乙基‑5‑甲氧基苯酚（化合物11）、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯)乙醇（化合物12）、溴化丹皮酚（化合物13）、丹皮酚缩苯基氨基硫脲（化合物14）、丹皮酚亚胺基乙酸钾（化合物15）；
[0010] 2,4‑二甲氧基苯乙酮（化合物16）、2‑烯丙基氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物17）、2‑氟‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物18）、2‑乙酰基5‑甲氧基苯氧乙酸（化合物19）、对甲氧基苯乙酮（化合物20）、丹皮酚乙酸‑2‑溴‑乙基酯（化合物21）、丹皮酚乙酸‑2‑（硝基氧基）乙基酯（化合物22）、2‑乙氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物23）、2‑丁氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物24）、2‑己氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物25）、2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物26）、2‑癸氧基‑
4‑甲氧基苯乙酮（化合物27）、2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物28）、2‑十四烷氧基‑
4‑甲氧基苯乙酮（化合物29）、2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物30）；
4‑甲氧基苯乙酮（化合物27）、2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物28）、2‑十四烷氧基‑
4‑甲氧基苯乙酮（化合物29）、2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物30）；
[0011] 2,4‑二羟基苯乙酮（化合物31）、4‑溴‑2‑羟基苯乙酮（化合物32）、4‑氟‑2‑羟基苯乙酮（化合物33）、4‑苄氧基‑2‑羟基苯乙酮（化合物34）、4‑乙氧基‑2‑羟基苯乙酮（化合物35）、2‑羟基‑4‑甲基苯乙酮（化合物36）、4‑氯‑2‑羟基苯乙酮（化合物37）、2‑羟基苯乙酮（化合物38）、4‑烯丙氧基‑2‑羟基苯乙酮（化合物39）；
[0012] 2‑羟基‑3,4‑二甲氧基苯乙酮（化合物40）、2‑羟基‑4,5‑二甲氧基苯乙酮（化合物41）、2‑羟基‑4,6‑二甲氧基苯乙酮（化合物42）、丹皮酚磺酸钠（化合物43）、5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物44）；
[0013] 2,4‑二甲氧基苯甲酸（化合物45）、2‑4二羟基苯甲酸（化合物46）、2‑羟基‑4‑正辛氧基二苯甲酮（化合物47）、4‑羟基‑2‑甲基苯乙酮（化合物48）、2,4‑二甲基苯乙酮（化合物49）、对羟基苯乙酮（化合物50）、5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲酸（化合物51）、2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮‑5‑磺酸钠（化合物52）、5‑溴‑2‑乙氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物53）、5‑溴‑2‑丁氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物54）、5‑溴‑2‑己氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物55）、5‑溴‑
2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物56）、5‑溴‑2‑癸氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物57）、5‑溴‑2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物58）、5‑溴‑2‑十四烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物59）、5‑溴‑2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物60）、3‑烯丙基‑2,4‑二羟基苯乙酮（化合物61）。
2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物56）、5‑溴‑2‑癸氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物57）、5‑溴‑2‑十二烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物58）、5‑溴‑2‑十四烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物59）、5‑溴‑2‑十六烷氧基‑4‑甲氧基苯乙酮（化合物60）、3‑烯丙基‑2,4‑二羟基苯乙酮（化合物61）。
[0014]
[0015]
[0016]
[0017] 基于动物实验研究结果，本发明提出一种抗甲壳类水产动物白斑综合征病毒的药物，所述药物的活性成分包括丹皮酚。本领域技术人员易于知晓，在丹皮酚可用于预防和治疗水产动物白斑综合征的基础上，配伍药学上可供选择的载体或助剂，将所述药物制备成便于水产养殖使用的制剂或疫苗。对药学上可供选择的载体或助剂，本发明不做限定。
[0018] 基于动物实验研究结果，本发明提出一种抗甲壳类水产动物白斑综合征病毒的药物，所述药物的活性成分包括丹皮酚衍生物。所述丹皮酚衍生物选自化合物1‑61中的任一种或多种。本领域技术人员易于知晓，在丹皮酚衍生物可用于预防和治疗水产动物白斑综合征的基础上，配伍药学上可供选择的载体或助剂，将所述药物制备成便于水产养殖使用的制剂或疫苗。对药学上可供选择的载体或助剂，本发明不做限定。
[0019] 基于动物实验研究结果，本发明提出一种抗甲壳类水产动物白斑综合征病毒的药物，所述药物的活性成分包括丹皮酚、丹皮酚衍生物。所述丹皮酚衍生物选自化合物1‑61中的任一种或多种。本领域技术人员易于知晓，在丹皮酚、丹皮酚衍生物可用于预防和治疗水产动物白斑综合征的基础上，配伍药学上可供选择的载体或助剂，将所述药物制备成便于水产养殖使用的制剂或疫苗。对药学上可供选择的载体或助剂，本发明不做限定。
[0020] 还需要特别说的是，鉴于丹皮酚衍生物众多。本发明仅验证了丹皮酚衍生物（化合物1‑61）对白斑综合征病毒的生物活性。在本发明的教导或技术启示下，本领域技术人员还可以继续验证化合物1‑61外的其它丹皮酚衍生物，至少两种化合物1‑61中丹皮酚衍生物的组合，丹皮酚和至少一种化合物1‑61中丹皮酚衍生物的组合等的抑制白斑综合征病毒活性。
[0021] 与现有技术相比，本发明具有的有益效果或优点：
[0022] 本发明首次验证并揭示了丹皮酚及其衍生物抗白斑综合征病毒的生物活性。动物实验研究发现，丹皮酚及其衍生物能够显著抑制白斑综合征病毒在南美白对虾体内的复制，并同时提高受白斑综合征病毒感染的南美白对虾的存活率。丹皮酚及其衍生物对甲壳类水产养殖中的白斑综合征病毒具有良好的抗病毒作用，可应用于防治由白斑综合征病毒引发的水产动物病害。
[0023] 丹皮酚及其衍生物具有低毒、低残留、低成本、绿色安全的特性，可利用其生物活性对危害甲壳类水产养殖的白斑综合征病毒进行防治，为水产养殖绿色生物药剂的开发和研制提供了新路径，拓展了丹皮酚及其衍生物的新用途。
附图说明
[0024] 图1是绝对定量标准曲线。
具体实施方式
[0025] 下面结合附表和实施例对本发明内容作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。本发明实施例旨在说明丹皮酚及其衍生物的抗白斑综合征病毒活性。
[0026] 实施例1
[0027] 本实施例阐述的是丹皮酚及其一号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定。
[0028] （1）试验材料
[0029] 病毒材料：白斑综合征病毒由国家海洋局第三海洋研究所提供，西北农林科技大学水产病害实验室保存。
[0030] 待测药液的配制：分别准确称取化合物1‑15标准品，用色谱级甲醇配制成浓度为100 mg/mL的标准液，再用甲醇稀释成不同的浓度10、15、20、30、40、60、80 mg/mL；用0.22 μm有机系针头滤器过滤，并转入棕色的色谱瓶中作为标准品稀释液使用。
[0031] 实验动物：实验采用南美白对虾，购自陕西咸阳水族市场。
[0032] （2）安全性评价
[0033] 在进行抗病毒活性测定前，开展丹皮酚及其衍生物对南美白对虾的安全性评价。随机挑选健康的南美白对虾分组，每组5只，放置于水温为25℃的塑料箱中用于试验处理。
试验设置空白对照组和药物处理组。空白对照组仅注射TM缓冲液，药物处理组则是注射不同浓度的化合物。化合物的测试浓度为：50、150、200mg/kg。药物注射体积为100 μL/只。药物注射后，连续72 h观察并记录虾的存活状况。
试验设置空白对照组和药物处理组。空白对照组仅注射TM缓冲液，药物处理组则是注射不同浓度的化合物。化合物的测试浓度为：50、150、200mg/kg。药物注射体积为100 μL/只。药物注射后，连续72 h观察并记录虾的存活状况。
[0034] 安全性评价结果表明，在所测试的时间（72 h）和浓度（50 200 mg/kg）范围内，丹~皮酚及其衍生物对南美白对虾是安全的，同时，南美白对虾并未表现出不适症状。
[0035] （3）抗病毒活性检测
[0036] 随机挑选健康的南美白对虾，每种分为3组（WSSV处理组、化合物与WSSV共处理组，空白对照组），每组30只，设置3个平行实验。试验于25℃养殖水体中进行。化合物的测试浓度均为50 mg/kg。每只南美白对虾注射处理液的体积为100 μL。药物处理方式为WSSV病毒7
和单体化合物预混后立即腹部注射（每只虾的病毒用量为6.9×10copies，预混：在25℃下病毒液同药液混匀后立刻注射），分别在24 h后每个处理组随机挑取5只南美白对虾，采集虾的鳃组织，‑80 ℃保存待用。
和单体化合物预混后立即腹部注射（每只虾的病毒用量为6.9×10copies，预混：在25℃下病毒液同药液混匀后立刻注射），分别在24 h后每个处理组随机挑取5只南美白对虾，采集虾的鳃组织，‑80 ℃保存待用。
[0037] 采集的样品分别用于WSSV基因组DNA拷贝数的绝对定量。使用绝对荧光定量PCR检测处理样品鳃组织中病毒基因组拷贝数。用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取采集的组织样品DNA。使用超微量分光光度计检测提取DNA浓度和纯度，然后将DNA浓度统一调整为50 ng/μL。通过RT‑qPCR和构建的绝对定量标准曲线（图1）定量组织中的病毒拷贝数。
[0038] 南美白对虾鳃组织DNA的提取：
[0039] 1）称取10 mg左右的组织材料，充分研磨，放入装有200 μL GA缓冲液的离心管中，涡旋振荡15 sec；
[0040] 2）加入20 μL Proteinase K（20 mg/mL）溶液，涡旋混匀，简短离心去除管盖内壁的水珠，56℃放置，直至组织完全溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
[0041] 3）加入200 μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
[0042] 4）加入200 μL无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠；
[0043] 5）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000 rpm离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中；
[0044] 6）向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD，12000 rpm离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
[0045] 7）向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW，12000 rpm离心30 sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中；
[0046] 8）重复操作步骤7）；
[0047] 9）将吸附柱CB3放回收集管中，12000 rpm离心2 min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；
[0048] 10）将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50μL洗脱缓冲液ddH2O，室温放置2‑5 min，12000 rpm离心2 min，将溶液收集到离心管中；
[0049] 11）将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12000 rpm离心2 min，获得DNA产物，并将DNA产物置于‑20℃保存备用。
[0050] 使用CFX‑96实时进行PCR定量检测。定量引物使用VP28141，引物序列见表1。定量试剂盒用Vazyme的AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix。定量反应体系见表2，反应程序见表3。
[0051] 表1，引物VP28141的序列
[0052]
[0053] 表2，RT‑qPCR反应体系
[0054]
[0055] 表3，RT‑qPCR反应程序
[0056]
[0057] （4）存活率检测
[0058] 确定安全浓度后，在体内测试丹皮酚及其衍生物对南美白对虾的保护作用。将健康的南美白对虾随机分为3组，每组100只，分别注射TM缓冲液（对照组）、TM‑WSSV混合物（阳性对照组）和药物‑WSSV混合物（处理组，50 mg/kg）。各组南美白对虾观察7 d并记录死亡情况。其中，存活率计算公式为：存活率 (%) =处理组存活数/每组的总数×100%。
[0059] 表4，丹皮酚一号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定
[0060]
[0061] 由表4可知，丹皮酚及其一号位衍生物显著降低了WSSV在南美白对虾体内的拷贝数，具有良好的抗WSSV的生物活性，其中2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮、1‑(2‑羟基‑4‑甲氧基苯基)‑2‑苯乙酮对病毒的抑制率最高，达到了88%。
[0062] 由表4可知，丹皮酚及其衍生物能够显著减少感染WSSV 南美白对虾的死亡率。试验期间，TM缓冲液处理的南美白对虾未发现死亡或者仅少量的南美白对虾出现死亡。WSSV处理的南美白对虾，出现大量死亡，在8 d时的存活率为0%。用丹皮酚及其一号位衍生物处理的患病南美白对虾存活率有所提高，其中2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮组存活率最高，达到了57%。
[0063] 由表4可知，丹皮酚及其一号位衍生物能够显著抑制WSSV南美白对虾体内复制，并同时提高受WSSV感染南美白对虾的存活率。
[0064] 实施例2
[0065] 本实施例给出丹皮酚及其二号位衍生物的抗白斑综合征病毒活性测定。
[0066] 本实施例所用试验材料，抗病毒活性检测方法，WSSV基因组DNA拷贝数的绝对定量同实施例1。试验结果见表5。
[0067] 表5，丹皮酚二号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定
[0068]
[0069] 由表5可知，丹皮酚及其二号位衍生物显著降低了WSSV在南美白对虾体内的拷贝数，具有良好的抗WSSV的生物活性，其中2‑烯丙基氧基‑4‑甲氧基苯乙酮对病毒的抑制率最高，达到了89.36%。
[0070] 由表5可知，丹皮酚及其二号位衍生物能够显著减少感染WSSV南美白对虾的死亡率。试验期间，TM缓冲液处理的南美白对虾未发现死亡或者仅少量的南美白对虾出现死亡。WSSV处理的南美白对虾，出现大量死亡，在8 d时的存活率为0%。用丹皮酚及其衍生物处理的患病南美白对虾存活率有所提高，其中2‑辛氧基‑4‑甲氧基苯乙酮、2‑癸氧基‑4‑甲氧基苯乙酮组存活率最高，均达到了56%。
[0071] 由表5可知，丹皮酚及其衍生物能够显著抑制WSSV南美白对虾体内复制，并同时提高受WSSV感染南美白对虾的存活率。
[0072] 实施例3
[0073] 本实施例给出丹皮酚及其四号位衍生物的抗白斑综合征病毒活性测定。
[0074] 本实施例所用试验材料，抗病毒活性检测方法，WSSV基因组DNA拷贝数的绝对定量同实施例1。试验结果见表6。
[0075] 表6，丹皮酚四号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定
[0076]
[0077] 由表6可知，丹皮酚及其四号位衍生物显著降低了WSSV在南美白对虾体内的拷贝数，具有良好的抗WSSV的生物活性，其中4‑苄氧基‑2‑羟基苯乙酮对病毒的抑制率最高，达到了92%。
[0078] 由表6可知，丹皮酚及其四号位衍生物能够显著减少感染WSSV南美白对虾的死亡率。试验期间，TM缓冲液处理的南美白对虾未发现死亡或者仅少量的南美白对虾出现死亡。WSSV处理的南美白对虾，出现大量死亡，在8 d时的存活率为0%。用丹皮酚及其衍生物处理的患病南美白对虾存活率有所提高，其中4‑苄氧基‑2‑羟基苯乙酮组存活率最高，达到了
58%。
58%。
[0079] 由表6可知，丹皮酚及其衍生物能够显著抑制WSSV南美白对虾体内复制，并同时提高受WSSV感染南美白对虾的存活率。
[0080] 实施例4
[0081] 本实施例给出丹皮酚及其他位衍生物的抗白斑综合征病毒活性测定。
[0082] 本实施例所用试验材料，抗病毒活性检测方法，WSSV基因组DNA拷贝数的绝对定量同实施例1。试验结果见表7。
[0083] 表7，丹皮酚四号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定
[0084]
[0085] 由表7可知，丹皮酚及其其他位衍生物显著降低了WSSV在南美白对虾体内的拷贝数，结果证明了丹皮酚及其其他位衍生物具有良好的抗WSSV的生物活性，其中5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯乙酮对病毒的抑制率最高，达到了85%。
[0086] 为了进一步证明丹皮酚及其其他位衍生物的抗WSSV活性，如表7所示，丹皮酚及其其他位衍生物能够显著减少感染WSSV南美白对虾的死亡率。试验期间，TM 缓冲液处理的南美白对虾未发现死亡或者仅少量的南美白对虾出现死亡。WSSV 处理的南美白对虾，出现大量死亡，在8 d 时的存活率为0%。用丹皮酚及其衍生物处理的患病南美白对虾存活率有所提高，其中丹皮酚磺酸钠组存活率最高，达到了53%。
[0087] 另外，丹皮酚及其衍生物能够显著抑制WSSV南美白对虾体内复制，并同时提高受WSSV感染南美白对虾的存活率。
[0088] 实施例5
[0089] 本实施例给出丹皮酚及其多位置衍生物的抗白斑综合征病毒活性测定。
[0090] 本实施例所用试验材料，抗病毒活性检测方法，WSSV基因组DNA拷贝数的绝对定量同实施例1。试验结果见表8。
[0091] 表8，丹皮酚四号位衍生物抗白斑综合征病毒活性测定
[0092]
[0093] 由表8可知，丹皮酚及其多位置衍生物显著降低了WSSV在南美白对虾体内的拷贝数，结果证明了丹皮酚及其多位置衍生物具有良好的抗WSSV的生物活性，其中5‑溴‑2‑羟基‑4‑甲氧基苯甲酸对病毒的抑制率最高，达到了85%。
[0094] 为了进一步证明丹皮酚及其多位置衍生物的抗WSSV活性，如表8所示，丹皮酚及其多位置衍生物能够显著减少感染WSSV 南美白对虾的死亡率。试验期间，TM 缓冲液处理的南美白对虾未发现死亡或者仅少量的南美白对虾出现死亡。WSSV 处理的南美白对虾，出现大量死亡，在8 d时的存活率为0%。用丹皮酚及其衍生物处理的患病南美白对虾存活率有所提高，其中2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮‑5‑磺酸钠组存活率最高，达到了54%。
[0095] 另外，丹皮酚及其衍生物能够显著抑制WSSV南美白对虾体内复制，并同时提高受WSSV感染南美白对虾的存活率。
[0096] 如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。