一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培育方法转让专利
申请号 : CN202111476770.X
文献号 : CN114214424B
文献日 : 2022-12-20
发明人 : 安小鹏 , 李富 , 侯金星 , 曹斌云 , 宋宇轩 , 张磊 , 李广 , 付明哲 , 舒国伟
申请人 : 西北农林科技大学
摘要 :
本发明提供了一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培育方法，涉及新品种选育技术领域。本发明所述引物组，以CDC14A基因的AA型和/或RBPJL基因的TT型作为高产奶基因型，利用所述引物组可以早期筛选出具有高产奶特性的奶山羊。本发明还提供了所述引物组在培育高产奶奶山羊新品种中的应用，以含有CDC14A基因的AA型和/或RBPJL基因的TT型的阿尔卑斯奶山羊为原始父本，以含有CDC14A基因的AA型和/或RBPJL基因的TT型的本地地方品种关中奶山羊为原始母本，每代均经过高产基因型检测，依次通过二元杂交、级进杂交和横交固定，得到奶山羊新品种。所述奶山羊新品种具有双亲优点。
权利要求 :
1.一种检测奶山羊高产奶的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测奶山羊种质的基因组DNA为模板，利用引物组进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，当细胞分裂周期蛋白14A基因存在AA突变，和/或重组免疫信号结合蛋白基因存在TT突变，则待测奶山羊种质具有高产奶特性；
所述引物组包括针对细胞分裂周期蛋白14A基因和/或重组免疫信号结合蛋白基因设计得到的特异性引物对；
针对细胞分裂周期蛋白14A基因设计的特异性引物对包括CDC14A‑F和CDC14A‑R，所述CDC14A‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CDC14A‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
针对重组免疫信号结合蛋白基因设计的特异性引物对包括RBPJL‑F和RBPJL‑R，所述RBPJL‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述RBPJL‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述CDC14A的NCBI登录号为NC_030810.1，AA突变发生在奶山羊3号染色体的77727500位；所述RBPJL的NCBI登录号为NC_030820.1，TT突变发生在奶山羊13号染色体73139883位。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：94℃预变性2分钟；
94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃延伸2分钟。
3.权利要求1所述方法中应用的引物组在培育高产奶奶山羊中的应用。
4.一种高产奶奶山羊的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：利用权利要求1或2所述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，依次进行二元杂交、级进杂交和横交固定，得到奶山羊新品种；
在进行所述级进杂交和横交固定前，分别利用权利要求1或2所述方法对选择的亲本进行检测，筛选具有高产奶特性的亲本进行所述级进杂交和横交固定。
5.根据权利要求4所述的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用权利要求1或2所述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
（2）利用权利要求1或2所述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
（3）利用权利要求1或2所述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，将F2代杂交羊中的公羊和母羊横交固定，得到奶山羊新品种。
6.根据权利要求5所述的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用权利要求1或2所述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
（2）利用权利要求1或2所述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
（3）利用权利要求1或2所述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F3代杂交羊；
（4）利用权利要求1或2所述方法对F3代杂交羊中的母羊进行检测，将F3代杂交羊中的公羊和母羊横交固定，得到奶山羊新品种。
7.根据权利要求5所述的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用权利要求1或2所述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
（2）利用权利要求1或2所述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
（3）利用权利要求1或2所述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F3代杂交羊；
（4）以F2代杂交羊中具有高产奶特性的母羊与F3代杂交羊中具有高产奶特性的公羊进行横交固定，得到奶山羊新品种；
或以F2代杂交羊中具有高产奶特性的公羊与F3代杂交羊中具有高产奶特性的母羊进行横交固定，得到奶山羊新品种。
说明书 :
一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培
育方法
技术领域
[0001] 本发明属于新品种选育技术领域，具体涉及一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培育方法。
背景技术
[0002] 羊奶易消化好吸收，不易发生乳糖不耐症和过敏反应，营养保健功能十分显著，市场开发潜力巨大。
[0003] 培育出产奶量高，耐粗饲的奶山羊新品种，则成为奶业发展的基础，但是目前的产奶羊高产奶检测手段较为单一，只能在开始产奶后才能进行统计，大大延长了新品种的开发和利用时间。
发明内容
[0004] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培育方法，可早期筛查产奶性能，并且培育的高产奶奶山羊新品种生产性能良好，产奶量高，乳质量好，产奶稳定。
[0005] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0006] 本发明提供了一组奶山羊高产奶检测引物组，所述引物组包括针对细胞分裂周期蛋白14A基因和/或重组免疫信号结合蛋白基因设计得到的特异性引物对。
[0007] 优选的，针对细胞分裂周期蛋白14A基因设计的特异性引物对包括CDC14A‑F和CDC14A‑R，所述CDC14A‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CDC14A‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0008] 针对重组免疫信号结合蛋白基因设计的特异性引物对包括RBPJL‑F和RBPJL‑R，所述RBPJL‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述RBPJL‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0009] 本发明还提供了一种包含上述引物组的奶山羊高产奶检测试剂盒。
[0010] 本发明还提供了一种检测奶山羊高产奶的方法，包括以下步骤：以待测奶山羊种质的基因组DNA为模板，利用上述引物组进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，当细胞分裂周期蛋白14A基因存在AA突变，和/或重组免疫信号结合蛋白基因存在TT突变，则待测奶山羊种质具有高产奶特性。
[0011] 优选的，所述PCR扩增的程序包括：94℃预变性2分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃延伸2分钟。
[0012] 本发明还提供了上述引物组或上述试剂盒在培育高产奶奶山羊中的应用。
[0013] 本发明还提供了一种高产奶奶山羊的培育方法，包括以下步骤：利用上述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，依次进行二元杂交、级进杂交和横交固定，得到奶山羊新品种；
[0014] 在进行所述级进杂交和横交固定前，分别利用上述方法对选择的亲本进行检测，筛选具有高产奶特性的亲本进行所述级进杂交和横交固定。
[0015] 优选的，包括以下步骤：
[0016] （1）利用上述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0017] （2）利用上述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0018] （3）利用上述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，将F3代杂交羊中的公羊和母羊横交固定，得到奶山羊新品种。
[0019] 优选的，包括以下步骤：
[0020] （1）利用上述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0021] （2）利用上述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0022] （3）利用上述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F3代杂交羊；
[0023] （4）利用上述方法对F3代杂交羊中的母羊进行检测，将F3代杂交羊中的公羊和母羊横交固定，得到奶山羊新品种。
[0024] 优选的，包括以下步骤：
[0025] （1）利用上述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，进行二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0026] （2）利用上述方法对F1代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0027] （3）利用上述方法对F2代杂交羊中的母羊进行检测，筛选具有高产奶特性的母羊为母本与具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊进行级进杂交，生产F3代杂交羊；
[0028] （4）以F2代杂交羊中具有高产奶特性的母羊与F3代杂交羊中具有高产奶特性的公羊进行横交固定，得到奶山羊新品种；
[0029] 或以F2代杂交羊中具有高产奶特性的公羊与F3代杂交羊中具有高产奶特性的母羊进行横交固定，得到奶山羊新品种。
[0030] 有益效果：本发明提供了一组奶山羊高产奶检测引物组，以细胞分裂周期蛋白14A（CDC14A）基因的AA型和/或重组免疫信号结合蛋白（RBPJL）基因的TT型作为高产奶基因型，利用所述引物组可以早期筛选出具有高产奶特性的奶山羊。
[0031] 本发明还提供了所述引物组在培育高产奶奶山羊新品种中的应用，以含有CDC14A基因的AA型和/或RBPJL基因的TT型的阿尔卑斯奶山羊为原始父本，以含有CDC14A基因的AA型和/或RBPJL基因的TT型的本地地方品种关中奶山羊为原始母本，每代均经过高产基因型检测，依次通过二元杂交、级进杂交和横交固定，得到奶山羊新品种。按照本发明所述培育方法获得的奶山羊新品种不仅具有关中奶山羊耐粗饲、产羔率高和体质结实的特点，还具有阿尔卑斯奶山羊体格大、抗逆性强、乳房形状好、乳品质好、产奶量高的优点。
附图说明
[0032] 图1为本发明实施例1所述方法的流程图；
[0033] 图2为引进法系阿尔卑斯奶山羊原始父本照片；
[0034] 图3为选育出的奶山羊新品种。
具体实施方式
[0035] 本发明提供了一组奶山羊高产奶检测引物组，所述引物组包括针对细胞分裂周期蛋白14A基因和/或重组免疫信号结合蛋白基因设计得到的特异性引物对。
[0036] 在本发明中，所述细胞分裂周期蛋白14A（CDC14A）基因发生AA突变，重组免疫信号结合蛋白（RBPJL）基因发生TT突变，都会引起奶山羊高产奶，因此本发明以CDC14A和/或RBPJL作为生物标志物，检测所述CDC14A和/或RBPJL的基因型。在本发明中，所述CDC14A的NCBI登录号为NC_030810.1，AA突变发生在奶山羊3号染色体的77727500位；所述RBPJL的NCBI登录号为NC_030820.1，TT突变发生在奶山羊13号染色体73139883位。
[0037] 本发明针对细胞分裂周期蛋白14A基因设计的特异性引物对优选包括CDC14A‑F和CDC14A‑R，所述CDC14A‑F的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.1所示：5’‑TCTACTGACCAGCACAATG‑3’，所述CDC14A‑R的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.2所示：5’‑AGCGACCTAACCTACACT‑3’；针对重组免疫信号结合蛋白基因设计的特异性引物对优选包括RBPJL‑F和RBPJL‑R，所述RBPJL‑F的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.3所示：5’‑AAGTTCATCCCAAGCCCGTAT‑3’，所述RBPJL‑R的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.4所示：5’‑ TTGCCGTGGCCCTAGCATC‑3’。
[0038] 本发明还提供了一种包含上述引物组的奶山羊高产奶检测试剂盒。
[0039] 本发明所述试剂盒中优选还包括进行PCR扩增的试剂，如在本发明实施例中所使用的2×Es Taq mix。
[0040] 本发明还提供了一种检测奶山羊高产奶的方法，包括以下步骤：以待测奶山羊种质的基因组DNA为模板，利用上述引物组进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，当细胞分裂周期蛋白14A基因存在AA突变，和/或重组免疫信号结合蛋白基因存在TT突变，则待测奶山羊种质具有高产奶特性。
[0041] 本发明对所述基因组DNA的来源并没有特殊限定，优选包括全血DNA、组织DNA或RNA反转录得到的cDNA。
[0042] 本发明利用所述模板和引物组配制PCR体系进行PCR扩增，所述PCR体系以20μl计，优选包括：2×Es Taq mix 10μl，上游引物F 0.8μl，下游引物R 0.8μl，DNA模板0.5ng，和余量的双蒸水，所述PCR扩增的程序优选包括：94℃预变性2分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃延伸2分钟。
[0043] 本发明对扩增产物进行测序，如在CDC14A基因的扩增产物的36bp存在AA突变，和/或在RBPJL基因的扩增产物的201bp存在TT突变，均被认定为具有高产奶特性。
[0044] 本发明还提供了上述引物组或上述试剂盒在培育高产奶奶山羊中的应用。利用本发明所述的引物组或试剂盒，无论是筛选具有高产奶特性的亲本，还是筛选具有高产奶特性的后代，都能早期筛选出来，可缩短育种年限。
[0045] 本发明还提供了一种高产奶奶山羊的培育方法，包括以下步骤：利用上述方法对阿尔卑斯奶山羊和关中奶山羊进行检测，筛选具有高产奶特性的阿尔卑斯奶山羊为父本，以具有高产奶特性的关中奶山羊为母本，依次进行二元杂交、级进杂交和横交固定，得到奶山羊新品种；
[0046] 在进行所述级进杂交和横交固定前，分别利用上述方法对选择的亲本进行检测，筛选具有高产奶特性的亲本进行所述级进杂交和横交固定。
[0047] 本发明在所述横交固定后优选还包括按照新品种选育标准进行选育提高，从而得到奶山羊新品种。本发明对具体的选育提高方法不作特别限定。本发明对具体的父、母本养殖方法不作特别限定，本领域常规养殖方法均可。
[0048] 在本发明中，所述检测的方法优选与上述相同，在此不再赘述。为方便撰写，本发明优选的方案将经过上述方法的检测后，筛选出来的具有高产奶特性的亲本以基因型表征。
[0049] 在本发明的一种优选方案中，所述培育方法优选包括如下步骤：
[0050] （1）以含有AA型或TT型的高产阿尔卑斯奶山羊为原始父本，以含有AA型或TT型的关中奶山羊为原始母本，二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0051] （2）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为父本，以含有AA型或TT型的F1代杂交羊为母本，级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0052] （3）将含有AA型或TT型的F2代杂交羊的公羊和母羊横交固定，然后按照新品种选育标准进行选育提高，得到奶山羊新品种。
[0053] 在本发明的另一种优选方案中，所述培育方法包括如下步骤：
[0054] （1）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为原始父本，以含有AA型或TT型的关中奶山羊为原始母本，二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0055] （2）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为父本，以含有AA型或TT型的F1代杂交羊为母本，级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0056] （3）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为父本，以含有AA型或TT型的F2代杂交羊为母本，级进杂交，生产F3代杂交羊；
[0057] （4）将含有AA型或TT型的F3代杂交羊的公羊和母羊横交固定，然后按照新品种选育标准进行选育提高，得到奶山羊新品种。
[0058] 在本发明的另一种优选方案中，所述培育方法包括如下步骤：
[0059] （1）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为原始父本，以含有AA型或TT型的关中奶山羊为原始母本，二元杂交，生产F1代杂交羊；
[0060] （2）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为父本，以含有AA型或TT型的F1代杂交羊为母本，级进杂交，生产F2代杂交羊；
[0061] （3）以含有AA型或TT型的阿尔卑斯奶山羊为父本，以含有AA型或TT型的F2代杂交羊为母本，级进杂交，生产F3代杂交羊；
[0062] （4）将含有AA型或TT型的F3代杂交羊的公羊和含有AA型或TT型的F2代杂交羊中的母羊横交固定，或者将含有AA型或TT型的F2代杂交羊中的公羊和含有AA型或TT型的F3代杂交羊中的母羊横交固定，然后按照新品种选育标准进行选育提高，得到奶山羊新品种。
[0063] 在本发明中，除对亲本羊进行高产奶特性的检测外，还包括其他条件的筛选，如原始父本的选择标准优选包括：9月龄体重≥45kg，成年体重≥100kg，精子活力≥0.7，射精量≥1.5ml，女儿第一泌乳期的平均泌乳量≥700kg；优选还包括：体格健壮，结构匀称，体型优良，睾丸发育良好。本发明所述原始母本的选择标准优选包括：3月龄体重≥25kg，9龄体重≥35kg，产羔率≥270%，第一泌乳期的平均泌乳量≥650kg；优选还包括：头狭长，鼻梁隆起，耳长，颈细长，被毛全白，中等体格，体质良好，背腰平直，尾尖上翘。耐粗饲，抗病力强，性早熟，羔羊成活率高，生长发育快，乳房性状良好，产奶量高。
[0064] 当以F1代杂交羊为级进杂交的母本时，所述母本的选择标准优选包括：初生体重≥3.6kg，3月龄体重≥22kg，9月龄体重≥37kg，成年体重≥72kg。当以F2代杂交羊为级进杂交的母本时，所述母本的选择标准优选包括：初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥21kg，9月龄体重≥36kg，成年体重≥70kg。
[0065] 在本发明中，步骤（4）中所述公羊的选择标准优选包括：初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥23kg，9月龄体重≥40kg，成年体重≥90kg；所述母羊的选择标准优选包括：产羔率≥260%，年泌乳期≥290天，平均泌乳量≥750kg，乳脂率≥3.8%，乳蛋白≥3.3%，干物质≥
11.6%，初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥20kg，9月龄体重≥35kg，成年体重≥70kg。
11.6%，初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥20kg，9月龄体重≥35kg，成年体重≥70kg。
[0066] 在本发明中，所述新品种选育方法以表型选育为主，以生产性能及后裔测定结果选择选配公羊及选配方案。在新品种杂交选育和横交固定过程中，本发明优选采用人工授精的方法对母羊进行个体选配，选择能够提高或改善母羊品质的公羊进行精准选配，以提高选育强度和速度。得到奶山羊新品种后，本发明优选对新品种进行快速扩繁和推广。在本发明中，所述扩繁优选采用人工授精和本交相结合的方法，同时采用胚胎移植借腹产羔的方法(以当地存栏虽较大的关中奶山羊母羊为受体羊，将新品种的新鲜胚胎移植到受体羊的体内，借腹产羔)提高扩繁速度，缩短世代间隔，促进育种进程。
[0067] 利用本发明的所述培育方法培育得到的新品种具有抗病力强、产奶性能好、乳质优良、产羔率高等优点：
[0068] (A) 表型特征
[0069] 按本发明所述方法培育得到的奶山羊新品种面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，体质结实、结构匀称、体躯宽长，肋骨开张，前胸突出且丰满，背腰长而平直，四肢健壮，肢势端正，蹄质坚实，蹄形端正。母羊后肢飞节间距宽，能容纳较大的乳房；乳房发育良好、容积较大、基部宽附良好，乳头长且端部向前延伸，两侧乳房均衡对称，乳房皮肤薄，有弹性，乳头间距宽，位置大小适中，乳静脉粗大弯曲明显，排乳速度快。
[0070] （B） 产乳性能
[0071] 按本发明所述方法培育得到的奶山羊新品种成年母羊年泌乳期≥290天，平均泌乳量≥750kg，乳脂率≥3.8%，乳蛋白≥3.3%，干物质≥11.6%。
[0072] （C）生长性能
[0073] 按本发明所述方法培育得到的奶山羊新品种9月龄母羊、公羊体重不低于35kg、40kg；成年母羊和公羊体重不低于60kg、90kg。
[0074] （D）繁殖性能
[0075] 按本发明所述方法培育得到的奶山羊新品种公、母羊4 5月龄性成熟，母羊初配年~龄10月龄左右，经产母羊产羔率230%以上。
[0076] 下面结合实施例对本发明提供的一组检测优质高产奶山羊的引物组、测定方法和奶山羊的培育方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0077] 实施例1
[0078] 实验地点： 陕西省陇县
[0079] 按图1所示流程设计实验：
[0080] 1.组建育种基础群
[0081] 对引进的阿尔卑斯奶山羊（图2）和本地饲养的关中奶山羊进行生产性能测定，并结合系谱档案资料进行遗传评估，高产基因型检测，选择含有AA型或TT型的阿尔卑斯公羊和含有AA型或TT型的关中奶山羊母羊，组建育种基础群。其中，公、母比例1：30。
[0082] 其中AA型或TT型的检测方法为：以全血基因组DNA为模板，配制20μl的PCR反应体系：2×Es Taq mix 10μl，上游引物F 0.8μl，下游引物R 0.8μl，DNA模板0.5ng，和余量的双蒸水；
[0083] PCR扩增的程序为：94℃预变性2分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃延伸2分钟。
[0084] 对扩增产物进行测序，如在CDC14A基因的扩增产物的36bp存在AA突变则认为含有AA型，或具有AA基因型；在RBPJL基因的扩增产物的201bp存在TT突变，则认为含有TT型，或具有TT基因型；下同。
[0085] 基础群中阿尔卑斯奶山羊的选择标准为：体格健壮，体躯宽长，腰部结实，体型匀称，结构良好，头较长，被毛黑色，乳头大，乳房发育良好。9月龄体重≥45kg，成年体重≥100kg，精子活力≥0.7，射精量≥1.5ml，女儿第一泌乳期的平均泌乳量≥700kg；关中奶山羊的选择标准为：头狭长，鼻梁降起，耳大下垂，颈细长，被毛全白，体格中等，体质结实，背腰平直，尾扁圆，尾尖上翘。耐粗饲，抗病力强，羔羊生长发育快，3月龄体重≥25kg，9龄体重≥35kg，产羔率≥270%，第一泌乳期的平均泌乳量≥650kg，乳房结构好，泌乳量多。
[0086] 2.杂交选育
[0087] （1）在育种基础群中以阿尔卑斯奶山羊为父本，以关中奶山羊为母本，进行二元杂交， 生产F1代杂交羊。对母羊的生产性能进行评估，选择能够提高或改善母羊品质的公羊，采用人工授精的方法对母羊进行个体精准选配，以提高选育强度和速度。F1代杂交羊中父本阿尔卑斯奶山羊和母本关中奶山羊的血液各占二分之一 ；
[0088] （2）选择F1代杂交羊中的具有AA和/或TT的优秀母羊为母本，以基础群中的阿尔卑斯奶山羊为父本，进行级进杂交，生产F2代杂交羊。其中，选择级进杂交用F1代杂交羊优秀母羊的选择标准为耐粗饲，抗病力强，生长发育快，初生体重≥3.6kg，3月龄体重≥22kg，9月龄体重≥37kg，成年体重≥72kg。体格健壮，面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，前胸突出且丰满，背腰长而平直，乳房发育好，容积大、基部宽、附着好，乳头间距宽、位置大小适中，产奶量高。F2代杂交羊中阿尔卑斯奶山羊血液占四分之三，关中奶山羊的血液占四分之一；
[0089] （3）选择F2代杂交羊中的具有AA和/或TT的优秀母羊为母本，以基础群中的阿尔卑斯奶山羊为父本，进行级进杂交，生产F3代杂交羊。其中选择级进杂交用F2代优秀母羊的标准为：耐粗饲，抗病力强，生长发育快，初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥21kg，9月龄体重≥36kg，成年体重≥70kg。体格健壮，面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，前胸突出且丰满，背腰长而平直，乳房结构良好，容积大、基部宽、附着好，乳头间距宽、位置大小适中，泌乳量多，排乳速度快。F3代杂交羊中阿尔卑斯奶山羊血液占八分之七，关中奶山羊的血液占八分之一；
[0090] 3.横交固定和选育提高
[0091] （1）选择F2代杂交羊中的个体大、乳用体型明显、乳房结构好、同胞数量较多的公羊和母羊进行横交固定，并以此进行多代选育提高，选择个体大、产奶性能好、泌乳期长且稳定、产奶多、产羔率较高的羊组建新品种核心群和育种群；其中公羊和母羊均具有AA和/或TT基因型；
[0092] （2）选择F3代杂交羊中的个体大、乳用体型明显、乳房结构好、同胞数较多的公羊和母羊进行横交固定，并以此进行多代选育提高，选择个体大、产奶性能好、泌乳期长且稳定、产奶量高、产羔率较高的羊组建新品种的核心群和育种群；其中公羊和母羊均具有AA和/或TT基因型；
[0093] （3）选择F2代杂交羊中的优秀个体（公羊或母羊）与F3代中的优秀个体（母羊或公羊，与F2代中的性别相反）进行横交固定，并以此进行多代选育提高，选择个体大、产奶性能好，泌乳期长且稳定、产奶量高、产羔率较高的羊组建新品种的核心群和育种群；其中公羊和母羊均具有AA和/或TT基因型；
[0094] 以上选择F2代和F3代横交固定用公羊标准：面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，体质强健、结构匀称、体躯宽长，臀部发育良好，雄性特征明显，睾丸大，左右对称，附着好，四肢健壮，肢势端正，蹄质坚实，底部平正。耐粗饲，抗病力强，生长发育快，初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥23kg，9月龄体重≥40kg，成年体重≥90kg。
[0095] 以上选择F2代、F3代横交固定用母羊标准：面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，体质结实、结构匀称、体躯宽长，肋骨开张，前胸突出且丰满，背腰长而平直，产羔率230%以上；乳房发育好、容积大、基部宽、附着好，乳头长且端部向前延伸。两侧乳房均衡对称，乳房皮肤薄，有弹性，乳头间距宽、位置大小适中，乳静脉粗大弯曲明显，排乳速度快，年泌乳期≥290天，平均泌乳量≥750kg，乳脂率≥3.8%，乳蛋白≥3.3%，干物质≥11.6%。四肢结实，肢势端正，后肢飞节间距宽，蹄形端正，蹄质坚实。耐粗饲，抗病力强，生长发育快，初生体重≥3.5kg，3月龄体重≥20kg，9月龄体重≥35kg，成年体重≥70kg。
[0096] 实施例2
[0097] 对实施例1培育得到的新品种进行外貌特征和生产性能的评价，如图3所示。
[0098] （A）表型特征：
[0099] 奶山羊新品种面部有2条白色条纹，尾根、四肢下部被毛是白色，体质强健、结构匀称、体躯宽长，肋骨开张，前胸突出且丰满，背腰长而平直，四肢健壮，肢势端正，蹄质坚实，蹄形端正。母羊后肢飞节间距宽，能容纳较大的乳房；乳房发育好、容积大、基部宽、附着好，乳头长且端部向前延伸，两侧乳房均衡对称，乳房皮肤薄，有弹性，乳头间距宽，位置大小适中，乳静脉粗大弯曲明显，排乳速度快。
[0100] （B）产乳性能
[0101] 奶山羊新品种成年母羊年泌乳期≥290天，平均泌乳量≥750kg，乳脂率≥3.8%，乳蛋白≥3.3%，干物质≥11.6%。
[0102] （C）生长性能
[0103] 奶山羊新品种9月龄母羊、公羊体重不低于35kg、40kg；成年母羊和公羊体重不低于60kg、90kg。
[0104] （D）繁殖性能
[0105] 奶山羊新品种公、母羊4 5月龄性成熟，母羊初配年龄10月龄左右，经产母羊产羔~率230%以上。
[0106] 以上评价结果表明：按本发明提供的方法得到的新品种能在保持有关中奶山羊耐粗饲、产羔率高、体质结实的同时，还具有阿尔卑斯奶山羊产奶量高、少有遗传缺陷和特有易感疾病、体格大的优点。按照本发明提供的方法获得的奶山羊新品种抗逆性强，产奶量高，乳品质好，产羔率高等优点。
[0107] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。