长春胺PEG衍生物与在制备治疗糖尿病周围神经病变、糖尿病足及肺纤维化药物中的应用转让专利
申请号 : CN202111432744.7
文献号 : CN114249721B
文献日 : 2023-10-17
发明人 : 沈旭 , 蒋晟 , 王佳颖 , 张阔军 , 黄玉洁 , 张文波 , 许瑞 , 卢之瑀
申请人 : 南京中医药大学 , 中国药科大学
摘要 :
本发明涉及一种PEG化长春胺衍生物与应用。本发明具体公开了一种如式Ⅰ和Ⅱ所示PEG化长春胺衍生物及其药学上可接受的盐、其代谢前体、其代谢产物或其异构体。本发明通过实验表明，这类长春胺衍生物不仅能够促进外周感觉神经元突起生长、改善糖尿病鼠神经传导速度以及感觉缺失症状，还能够促进糖尿病鼠足部溃疡伤口的愈合，从而对糖尿病并发症周围神经病变及糖尿病足都具有良好的治疗作用。本实验通过实验表明，这类长春胺衍生物还能够明显降低博来霉素诱导的小鼠肺部纤维化程度，对肺部组织起到保护作用。
权利要求 :
1.一种长春胺PEG衍生物，其特征在于，包括如式Ⅰ和Ⅱ所示化合物；所述的化合物的结构式如下所示：式Ⅰ和式Ⅱ中：
L为
X为
Y为
t为1或2；
1 1‑1
R为氢、未取代或R 取代的C1‑6烷基或C3‑10环烷基；
1‑1
R 为羟基；
n是0～100的整数；
为具有包含‑(OCH2CH2)n‑的直链聚乙二醇；
2
R为‑O(R)；
2
R为氢或C1‑6烷基。
2.一种如权利要求1所述的长春胺PEG衍生物，其特征在于，所述的如式Ⅰ所示化合物为以下任一化合物：。
3.一种如权利要求1所述的式Ⅰ所示化合物的制备方法，其合成包括以下步骤：在溶剂二氯甲烷中，在碱二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶作用下，将如式Ⅲ所示化合物与如式Ⅳ所示化合物进行如下所示的缩合反应，即可；
其中，L和R的定义如权利要求1所述。
4.一种如权利要求1所述的式Ⅱ所示化合物的制备方法，其合成包括以下步骤：在溶剂二氯甲烷中，在碱二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶作用下，将如式Ⅴ所示化合物与如式Ⅲ所示化合物进行如下所示的缩合反应，即可；
其中，X和Y的定义如权利要求1所述。
5.一种药物组合物，其包括如权利要求1或2所述的如式Ⅰ和式Ⅱ所示化合物、其药学上可接受的盐。
6.一种如权利要求1或2所述的如式Ⅰ和式Ⅱ所示化合物、其药学上可接受的盐在制备预防或治疗糖尿病并发症药物中的用途；所述的糖尿病为1型糖尿病和2型糖尿病。
7.一种如权利要求1或2所述的如式Ⅰ和式Ⅱ所示化合物、其药学上可接受的盐在制备预防或治疗肺纤维化疾病药物中的用途。
说明书 :
长春胺PEG衍生物与在制备治疗糖尿病周围神经病变、糖尿病
足及肺纤维化药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药和化学合成领域，具体涉及一种长春胺衍生物的制备方法、药物组合物及其在治疗与外周神经元轴突损伤、外周相关的神经病变和糖尿病足以及肺纤维化药物中的应用。
背景技术
[0002] 糖尿病是一种严重的世界性疾病。据估计，到2045年，糖尿病患者的人数将达到6.29亿。糖尿病现已成为继心血管疾病和肿瘤之后，第三位威胁人类健康和生命的非传染性疾病。在我国，糖尿病已从少见病变成流行病，近30年患病率从平均0.67％飙升到
11.6％。糖尿病患者若没有采取有效的控制治疗方法，就易被糖尿病并发的多种疾病所困扰，包括糖尿病性神经病变、肾病以及糖尿病足等，出现双目失明、肾衰竭，甚至导致肢体残疾和死亡。
11.6％。糖尿病患者若没有采取有效的控制治疗方法，就易被糖尿病并发的多种疾病所困扰，包括糖尿病性神经病变、肾病以及糖尿病足等，出现双目失明、肾衰竭，甚至导致肢体残疾和死亡。
[0003] 糖尿病周围神经病变(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)是因为长期高血糖而引发的糖尿病慢性神经病变，发病率高达50％～80％，是糖尿病最常见的一种慢性并发症。糖尿病周围神经病变可累及运动神经、感觉神经和自主神经，产生运动及感觉障碍。临床上，糖尿病周围神经病变患者的振动和热感知阈值会增加，这些阈值会随着周围神经中所有纤维的变性而发展为感觉丧失。目前，糖尿病周围神经病变的诊断方法主要是通过感觉检测、电生理检测、神经纤维形态学检查、影像学检查等。然而，糖尿病周围神经病变临床表现多样，国内外分类方法各不相同，筛查和检查方法种类繁杂，且诊断标准不一，其防治一直以来都是临床的难点。虽然随着科学技术的快速发展，科学家们对于糖尿病周围神经病变的研究有了突破性的进展，但是仍然缺乏根治糖尿病周围神经病变的特效药。因此，研究和开发新型治疗策略和新型化合物刻不容缓。
[0004] 糖尿病足(Diabetic foot，DF)是因长期的高血糖导致糖尿病血管病变和(或)神经病变和感染，进而导致糖尿病患者足或下肢组织坏死的一种病变。糖尿病足是糖尿病最严重并发症之一，是糖尿病患者致残、致死的主要原因之一，也是造成社会沉重负担的重大公共卫生问题。随着糖尿病发病率的增加，糖尿病足的患病人数也逐年上升。我国50岁以上的糖尿病患者，糖尿病足的发病率高达8.1％。不幸的是，糖尿病足预后很差，甚至比大多数癌症的病死率和致残率还高(除肺癌、胰腺癌等)。并且糖尿病足治疗费用昂贵，需要长期接受治疗，临床上主要通过医疗护理使患者的足部溃疡得以愈合，避免截肢的危险。但这些护理并不能完全根治糖尿病足，并且容易复发。所以，研究糖尿病足的发病机制，开发糖尿病足新型有效的治疗药物具有非常重要的现实意义。
[0005] 肺纤维化(Pulmonary fibrosis，PF)是一种慢性、进行性、致死性的肺部疾病，是多种疾病的终末期，其发病机制至今仍不明确。肺纤维化严重影响人体呼吸功能，表现为干咳、进行性呼吸困难(自觉气不够用)，且随着病情和肺部损伤的加重，患者呼吸功能不断恶化。特发性肺纤维化发病率和死亡率逐年增加，诊断后的平均生存期仅2.8年，死亡率高于大多数肿瘤，被称为一种“类肿瘤疾病”。目前，对肺纤维化患者的治疗多采用吡非尼酮、尼达尼布、氧疗、有创/无创机械通气，肺移植。但这些方法费用成本高，疗效不显著，移植供体不足或免疫排斥反应、患者医从性差限制了其广泛应用。因此，积极探索肺纤维化的发病机制及研发新的干预药物就显得十分重要。
[0006] 长春胺(Vincamine)是一种单萜类吲哚生物碱，发现于马达加斯加长春花。它能增加脑血流量、耗氧量和葡萄糖利用率，改善痴呆和记忆障碍。长春胺作为一种具有益智功能的保健品已在美国上市。然而和许多天然产物一样，长春胺也面临着水溶性差，代谢不稳定，作用时间短等问题。从前期的工作可知，长春胺具有治疗糖尿病并发症及肺纤维化疾病的潜力。因此，寻找新型长春胺衍生物对于糖尿病并发症及肺纤维化的治疗具有重要意义。
[0007] 聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG)是由环氧乙烷与水或乙二醇逐步发生加成聚合而得到的一类分子量较低的水溶性聚醚。小分子量的低聚聚乙二醇为无色、无臭有吸湿性的粘稠液体，分子中既有醚链，又有羟基，故具有独特的溶解性能，生物相容性好，在医药、材料和工程等领域具有很重要的应用前景。
发明内容
[0008] 本发明要解决的技术问题是利用PEG无毒、易于结合的特性，将其与长春胺连接起来，克服长春胺不溶于水的特性。本发明提供了一种长春胺衍生物、其制备方法、药物组合物及应用。本发明的PEG化长春胺衍生物结构稳定，水溶性好，对糖尿病周围神经病变、糖尿病足以及肺纤维化均具有较好的治疗效果。
[0009] 本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
[0010] 本发明提供了一种长春胺PEG衍生物，包括如式Ⅰ和式Ⅱ所示化合物、其药学上可接受的盐、其代谢前体、其代谢产物或其异构体，其结构如下所示：
[0011]
[0012] 式Ⅰ和式Ⅱ中：
[0013] L为单键、 氨基酸、或、氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0014] X和Y独立地选自单键、 氨基酸、或、氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0015] t为1‑6的整数；
[0016] R1为氢、未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基、C6‑10芳基、C3‑10环烷基、“杂原子选自N、O、S中的一种或多种，杂原子数为1‑3个的”5‑10元杂芳基、或、“杂原子选自N、O、S中的一种或多种，杂原子数为1‑3个的”4‑10元杂环烷基、C3‑10环烷基‑(C1‑4烷基)‑、或、C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑；
[0017] R1‑1为卤素、羟基、氨基或C1‑4烷基；
[0018] n是0～500的整数；
[0019] 为具有包含‑(OCH2CH2)n‑的直链、树形、星形或超支化结构的聚乙二醇；
[0020] R为‑O(R2)、‑NH(R3)、或、‑COOH；
[0021] R2为氢或C1‑6烷基；
[0022] R3为氢或C1‑6烷基。
[0023] 当L为氨基酸时，所述的氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸；
[0024] 当L为氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的氨基酸相同或不同；
[0025] 当L为氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的二‑六肽为二‑四肽；
[0026] 当X和Y独立地选自氨基酸时，所述的氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸；
[0027] 当X和Y独立地选自氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的氨基酸相同或不同；
[0028] 当X和Y独立地选自氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的二‑六肽为二‑四肽；
[0029] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的R1‑1的个数为一个或多个，当存在多1‑1 1‑1
个R 时，所述的R 可相同或不同；
个R 时，所述的R 可相同或不同；
[0030] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为C1‑4烷基；
[0031] 当R1为C6‑10芳基时，所述的C6‑10芳基为苯基；
[0032] 当R1为C3‑10环烷基时，所述的C3‑10环烷基为C3‑6环烷基；
[0033] 当R1为C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑时，所述的C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑为苯基‑(C1‑2烷基)‑；
[0034] n为0～300的整数；
[0035] 为具有包含‑(OCH2CH2)n‑的直链聚乙二醇；
[0036] 当R2为C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为C1‑4烷基；
[0037] 当R3为C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为C1‑4烷基。
[0038] 当L为氨基酸时，所述的氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、亮氨酸以及脯氨酸，优选丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或丝氨酸；
[0039] 当L为氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸，优选甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸或苯丙氨酸；
[0040] 当X和Y独立地选自氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的二‑六肽为甘氨酸‑甘氨酸‑、甘氨酸‑丙氨酸、丙氨酸‑丙氨酸、甘氨酸‑缬氨酸、甘氨酸‑丝氨酸或甘氨酸‑苯丙氨酸；
[0041] 当X和Y独立地选自氨基酸时，所述的氨基酸为丙氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸以及脯氨酸，优选丙氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸或丝氨酸；
[0042] 当X和Y独立地选自氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸或组氨酸，优选甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、丝氨酸或苯丙氨酸；
[0043] 当X和Y独立地选自氨基酸缩合形成的二‑六肽时，所述的二‑六肽为甘氨酸‑甘氨酸‑、甘氨酸‑丙氨酸、丙氨酸‑丙氨酸、甘氨酸‑缬氨酸、甘氨酸‑丝氨酸或甘氨酸‑苯丙氨酸；
[0044] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的R1‑1的个数为1个、2个或3个；
[0045] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为甲基、乙基、丙基或异丙基，优选甲基、乙基或丙基；
[0046] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为甲基、乙基、丙基或异丙基，优选甲基；
[0047] 当R1为未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、仲丁基、异丁基或异丙基；1 1‑1 1‑1
[0048] 当R为未取代或R 取代的C1‑6烷基时，所述的R 取代的C1‑6烷基为
[0049] 当R1为C3‑10环烷基时，所述的C3‑10环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
[0050] 当R1为C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑时，所述的C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑为苯基‑(C1‑2烷基)；
[0051] 当R1为C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑时，所述的C6‑12芳基‑(C1‑4烷基)‑为苄基或苯乙基；
[0052] n为0～200的整数；
[0053] 当R2为C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、仲丁基、异丙基或异丁基，优选甲基或乙基；
[0054] 当R3为C1‑6烷基时，所述的C1‑6烷基为甲基、乙基、丙基、丁基、仲丁基、异丙基或异丁基，优选甲基或乙基。
[0055] 在某一方案中，所述的式Ⅰ和Ⅱ所示化合物的某些基团的定义如下(未定义的基团如前任一方案所述)：
[0056] L为 氨基酸、或、氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0057] X为 氨基酸或氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0058] Y为 氨基酸或氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0059] t为1或2；
[0060] R1为氢、未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基、C6‑10芳基或C3‑10环烷基；
[0061] R1‑1为羟基；
[0062] n是0～200的整数；
[0063] 为具有包含‑(OCH2CH2)n‑的直链聚乙二醇；
[0064] R为‑O(R2)；
[0065] R2为氢或C1‑6烷基。
[0066] 在某一方案中，所述的式Ⅰ和Ⅱ所示化合物的某些基团的定义如下(未定义的基团如前任一方案所述)：
[0067] L为 氨基酸或氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0068] X为 氨基酸或氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0069] Y为 氨基酸或氨基酸缩合形成的二‑六肽；
[0070] t为1或2；
[0071] R1为氢、未取代或R1‑1取代的C1‑6烷基或C3‑10环烷基；
[0072] R1‑1为羟基；
[0073] n是0～100的整数；
[0074] 为具有包含‑(OCH2CH2)n‑的直链聚乙二醇；
[0075] R为‑O(R2)；
[0076] R2为氢或C1‑6烷基。
[0077] 在某一方案中，所述的式Ⅰ和Ⅱ所示化合物的某些基团的定义如下(未定义的基团如前任一方案所述)：
[0078] 在某一方案中，所述的式Ⅰ和Ⅱ所示化合物可为以下任一结构：
[0079]
[0080]
[0081]
[0082]
[0083]
[0084] 本发明还提供一种如式Ⅰ所示化合物的制备方法，其合成包括以下步骤：在溶剂中，在碱和缩合剂的作用下，将如式Ⅲ所示化合物与如式Ⅳ所示化合物进行如下所示的缩合反应，即可；
[0085]
[0086] 其中，L和R的定义如前所述。
[0087] 本发明还提供一种如式Ⅰ所示化合物的制备方法，如式Ⅱ所示化合物的制备方法，其合成包括以下步骤：在溶剂中，在碱和缩合剂的作用下，将如式Ⅴ所示化合物与如式Ⅲ所示化合物进行如下所示的缩合反应，即可；
[0088]
[0089] 其中，X和Y的定义前所述。
[0090] 本发明还提供了一种如式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐、其代谢前体、其代谢产物或其异构体在制备药物中的应用，所述的药物可用于预防和/或治疗糖尿病并发症以及肺纤维化。
[0091] 本发明还提供一种药物组合物，其包括如权利要求1‑7中任一项所述的如式Ⅰ和式Ⅱ所示化合物、其药学上可接受的盐、其药学上可接受的盐、其代谢前体、其代谢产物或其异构体，和药用辅料。
[0092] 在所述的药物组合物中，所述的如式Ⅰ所示化合物、其药学上可接受的盐、其代谢前体、其代谢产物或其异构体的用量可为治疗有效量。
[0093] 本发明还提供了上述药物组合物在制备药物中的应用，所述的药物可用于预防和/或治疗糖尿病并发症以及肺纤维化。
[0094] 所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体pH值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
[0095] 本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0096] 本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其他眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
[0097] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.,“Pharmaceutical Salts”,Journal of Pharmaceutical Science66:1‑19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
[0098] 本发明的“药学上可接受的盐”可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
[0099] 术语“代谢产物”是指式Ⅰ所示化合物或其盐通过体内代谢产生的药学活性产物。这种产物可以从例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯、葡糖醛酸化(glucoronidation)、酶促裂解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢产物，包括使本发明的化合物与哺乳动物接触足够得到其代谢产物的一段时间的方法而产生的化合物。
[0100] 代谢产物的鉴定典型地通过制备本发明化合物的放射性标记的(例如，14C或3H)同位素、将其以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)非肠道给予动物，例如大鼠、小鼠、豚鼠、猴、或人，允许充分的时间以发生代谢(典型地约30秒到30小时)和从尿、血液或其它生物样本分离其转化产物。这些产物容易分离，因为它们是被标记的(其它通过利用能够结合存在于代谢物中的抗原表位的抗体分离)。以常规的方式确定代谢物结构，例如，通过MS，LC/MS或NMR分析。通常，代谢物的分析是以与本领域技术人员公知的常规药物代谢研究相同的方法进行的。只要代谢物产物不是以其它方式在体内不能被发现，否则它们可用于本发明化合物的治疗剂量给药的检定测定法。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚3 125 14
(H)，碘‑125( I)或C‑14( C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
(H)，碘‑125( I)或C‑14( C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
[0101] 术语“异构体”是指分子组成相同、但结构和性质不同的两种或多种化合物。
[0102] 本领域技术人员可以理解，根据本领域中使用的惯例，本申请描述基团的结构式中所使用的“”是指，相应的基团通过该位点与式Ⅰ和Ⅱ所示化合物中的其它片段、基团进行连接。
[0103] 本发明中的“取代”可为一个或多个，当存在多个“取代”时，所述的“取代”可为相同或不同。
[0104] 术语“多个”是指2个、3个、4个或5个。
[0105] 术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0106] 术语“烷基”是指具有指定的碳原子数的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基及其类似烷基。
[0107] 术语“烷氧基”是指基团‑O‑RY，其中，RY为如上文所定义的烷基。
[0108] 术语“环烷基”是指饱和的单环或多环的烷基。所述的单环环烷基优选具有3～7个环碳原子、更优选3‑6个碳原子的单价饱和的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所述的多环环烷基的每个环均是饱和的，可为具有4～10个碳原子的二环或三环环烷基。
[0109] 术语“杂环烷基”是指具有杂原子的饱和的单环或多环基团。所述的单环优选含有1个、2个或3个独立地选自N、O和S的3～7元饱和的单环杂环烷基，其示例包括但不限于：吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、四氢吡啶基、四氢吡咯基、氮杂环丁烷基、噻唑烷基、唑烷基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基、二氧戊环基、二氧六环基等。所述的多环优选其中至少一个环上含有1个、2个或3个独立地选自N、O和S的8～10元饱和的多环杂环烷基，可为双环或三环，实例包括但不限于八氢吡咯并[1,2‑a]吡嗪基、(1R，5S)‑3,8‑二氮杂双环[3.2.1]辛基。
[0110] 术语“芳基”是指具有指定的碳原子数的芳香基团，优选单环、双环或者三环的芳香基团，当为双环或者三环时，每个环均满足休克尔规则。本发明的C6‑10的芳基指含有6～10个碳原子的芳香基团，例如苯基或萘基。
[0111] 术语“杂芳基”是指含有杂原子的芳香基团，优选含有1个、2个或3个独立选自氮、氧和硫的芳族5～6元单环或9～10元双环。所述的5～6元的单环包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、1,2,3‑三唑基、1,2,4‑三唑基、呋咱基、1,2,3‑噁二唑基、1,2,4‑噁二唑、1,2,5‑噁二唑、1,3,4‑噁二唑、噻二唑基、二噻唑基、四唑基、吡啶基、吡喃基、噻喃基、二嗪基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁嗪基、噻嗪基、二噁英基、二噻英基、1,2,3‑三嗪基、1,2,4‑三嗪基、1,3,5‑三嗪基或四嗪基。所述的9～10元双环包括但不限于苯并咪唑基、吲哚基、吲唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基、苯并异唑基、喹啉基、异喹啉基。
[0112] 在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0113] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0114] 本发明的积极进步效果在于：
[0115] (1)PEG修饰后的长春胺，其药物水溶性增强；
[0116] (2)PEG化长春胺前药对糖尿病并发症包括糖尿病周围神经病变以及糖尿病足均具有良好的治疗作用；
[0117] (3)PEG化长春胺前药对肺纤维化具有良好的治疗作用。
附图说明
[0118] 图1为长春胺衍生物Vin3能够明显促进1型糖尿病小鼠外周感觉神经元轴突生长的免疫荧光图及定量柱状图。
[0119] 图2为长春胺衍生物Vin3能够明显促进2型糖尿病小鼠外周感觉神经元轴突生长的免疫荧光图及定量柱状图。
[0120] 图3为长春胺衍生物Vin3能够明显促进糖尿病足大鼠足部溃疡伤口愈合的照片。
[0121] 图4为长春胺衍生物Vin3能够明显改善小鼠肺纤维化程度的CT图片。
具体实施方式
[0122] 下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。
[0123] 实施例1：化合物S1的合成
[0124]
[0125] 步骤一：长春胺脱甲酯产物的合成
[0126] 将长春胺1.0g(2.8mmol)在室温下溶于10mL的NaOH溶液(1mol/L)中，搅拌，溶液逐渐由浑浊变澄清，TLC点板检测反应进度。待长春胺反应完毕后，将反应液置于0℃下用稀盐酸调节pH值至3，然后将甲醇旋转蒸发除去，过滤，收集滤饼，真空干燥，得长春胺脱甲酯粗品0.919，直接投下一步。
[0127] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ11.69(s,1H),7.53–7.46(m,1H),7.17–7.06(m,3H),4.64(s,1H),3.92(s,1H),3.39–3.21(m,2H),3.07–2.92(m,1H),2.65–2.45(m,3H),
2.33–2.09(m,3H),1.78–1.62(m,2H),1.53–1.34(m,3H),0.91(t,J＝7.6Hz,3H)。
2.33–2.09(m,3H),1.78–1.62(m,2H),1.53–1.34(m,3H),0.91(t,J＝7.6Hz,3H)。
[0128] 步骤二：甘氨酸长春胺的合成
[0129] 将长春胺脱甲酯产物200mg(0.59mmol)，甘氨酸叔丁酯盐酸盐99mg(0.59mmol)，1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)192mg(1.00mmol)，1‑羟基苯并三唑(HOBt)103mg(0.76mmol)在室温下溶于8mL无水N,N‑二甲基甲酰胺(DMF)中，搅拌，加入三乙胺0.4mL(2.94mmol)，氮气保护，常温反应10小时。旋转蒸发除去DMF，二氯甲烷溶解，萃取(3×20mL),饱和食盐水洗涤(1×20mL)，无水硫酸镁干燥。溶液旋干硅胶柱层析分离(二氯甲烷:甲醇＝60:1)，得长春胺甘氨酸保护产物160mg。将长春胺甘氨酸保护产物160mg(0.35mmol)在0℃下溶于10mL三氟乙酸的二氯甲烷溶液中(50％v/v)，搅拌1小时，然后升温至室温，室温搅拌3小时。旋转蒸发除去二氯甲烷和三氟乙酸，加入乙醚20mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得长春胺甘氨酸粗品110mg，直接投下一步。
[0130] 1H NMR(300MHz,Methanol‑d4)δ7.58–7.45(m,2H),7.31–7.17(m,2H),5.79(s,1H),5.06(s,1H),4.15(q,J＝17.5Hz,2H),3.73(td,J＝12.4,5.5Hz,1H),3.64–3.56(m,
2H),3.26–2.91(m,3H),2.37(dd,J＝17.0,5.0Hz,1H),2.07–1.66(m,5H),1.29–1.14(m,
2H),1.09(t,J＝7.4Hz,3H)。
2H),3.26–2.91(m,3H),2.37(dd,J＝17.0,5.0Hz,1H),2.07–1.66(m,5H),1.29–1.14(m,
2H),1.09(t,J＝7.4Hz,3H)。
[0131] 步骤三：化合物S1的合成
[0132] 将甘氨酸长春胺200mg(0.50mmol)，二乙二醇单甲醚61mg(0.50mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)156mg(0.76mmol)，4‑二甲氨基吡啶(DMAP)11mg(0.05mmol，催化量)，在室温下溶于2mL二氯甲烷中，氮气保护，常温反应12小时。抽滤除去不溶物，滤液加水，二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(2mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，蒸干溶剂，制砂，柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝60:1～40:1)，得白色固体S1187 mg。
[0133] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(dd,J＝6.5,2.1Hz,1H),7.30(dd,J＝6.9,1.8Hz,1H),7.20–7.07(m,2H),5.73(s,1H),4.41–4.14(m,5H),3.82(s,1H),3.77–3.70(t,J＝4.7Hz,2H),3.67–3.61(m,2H),3.58–3.51(m,2H),3.37(s,3H),3.36–3.19(m,2H),3.09–
2.95(m,1H),2.68–2.60(m,2H),2.51(dd,J＝16.3,2.8Hz,1H),2.00–1.80(m,3H),1.80–
1.62(m,1H),1.56–1.38(m,2H),1.38–1.20(m,2H),1.00(t,J＝7.5Hz,3H)。
2.95(m,1H),2.68–2.60(m,2H),2.51(dd,J＝16.3,2.8Hz,1H),2.00–1.80(m,3H),1.80–
1.62(m,1H),1.56–1.38(m,2H),1.38–1.20(m,2H),1.00(t,J＝7.5Hz,3H)。
[0134] 以下实施例2～4中的化合物S2～S4均可按实施例1的合成方法获得，只需更换相应的原料即可。
[0135] 实施例2：化合物S2的合成
[0136]
[0137] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(dd,J＝6.4,2.1Hz,1H),7.30(dd,J＝6.9,1.8Hz,1H),7.22–7.07(m,2H),5.75(s,1H),4.45–4.17(m,5H),3.83(s,1H),3.78–3.70(t,J＝4.6Hz,2H),3.69–3.62(m,6H),3.59–3.48(m,2H),3.37(s,3H),3.36–3.20(m,2H),3.11–
2.96(m,1H),2.68–2.61(m,2H),2.52(dd,J＝16.2,2.8Hz,1H),2.03–1.79(m,3H),1.79–
1.61(m,1H),1.58–1.39(m,2H),1.39–1.21(m,2H),1.01(t,J＝7.4Hz,3H)。
2.96(m,1H),2.68–2.61(m,2H),2.52(dd,J＝16.2,2.8Hz,1H),2.03–1.79(m,3H),1.79–
1.61(m,1H),1.58–1.39(m,2H),1.39–1.21(m,2H),1.01(t,J＝7.4Hz,3H)。
[0138] 实施例3：化合物S3的合成
[0139]
[0140] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(dd,J＝6.5,2.1Hz,1H),7.30(dd,J＝6.8,1.8Hz,1H),7.20–7.07(m,2H),5.75(s,1H),4.42–4.14(m,5H),3.82(s,1H),3.78–3.69(t,J＝4.7Hz,2H),3.67–3.58(m,10H),3.56–3.45(m,2H),3.38(s,3H),3.37–3.20(m,2H),3.10–
2.95(m,1H),2.69–2.61(m,2H),2.51(dd,J＝16.2,2.8Hz,1H),2.02–1.81(m,3H),1.81–
1.62(m,1H),1.60–1.40(m,2H),1.40–1.19(m,2H),1.01(t,J＝7.5Hz,3H)。
2.95(m,1H),2.69–2.61(m,2H),2.51(dd,J＝16.2,2.8Hz,1H),2.02–1.81(m,3H),1.81–
1.62(m,1H),1.60–1.40(m,2H),1.40–1.19(m,2H),1.01(t,J＝7.5Hz,3H)。
[0141] 实施例4：化合物S4的合成
[0142]
[0143] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(dd,J＝6.5,2.1Hz,1H),7.31(dd,J＝6.9,1.8Hz,1H),7.20–7.05(m,2H),5.74(s,1H),4.40–4.15(m,5H),3.82(s,1H),3.76–3.70(t,J＝4.6Hz,2H),3.68–3.58(m,14H),3.57–3.42(m,2H),3.37(s,3H),3.36–3.20(m,2H),3.11–
2.96(m,1H),2.67–2.60(m,2H),2.51(dd,J＝16.3,2.8Hz,1H),2.00–1.80(m,3H),1.79–
1.62(m,1H),1.56–1.40(m,2H),1.39–1.21(m,2H),1.00(t,J＝7.5Hz,3H)。
2.96(m,1H),2.67–2.60(m,2H),2.51(dd,J＝16.3,2.8Hz,1H),2.00–1.80(m,3H),1.79–
1.62(m,1H),1.56–1.40(m,2H),1.39–1.21(m,2H),1.00(t,J＝7.5Hz,3H)。
[0144] 实施例5：化合物S5的合成
[0145]
[0146] 将甘氨酸长春胺200mg(0.50mmol，合成方法见实施例1)，单甲氧基羟基聚乙二醇(MPEG‑OH，平均分子量2000)1008mg(0.50mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)156mg(0.76mmol)，4‑二甲氨基吡啶(DMAP)11mg(0.05mmol，催化量)，在室温下溶于10mL二氯甲烷中，氮气保护，常温反应12小时。抽滤除去不溶物，滤液旋转蒸发掉二氯甲烷，加入乙醚
250mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品。粗品透析，得白色固体S5610 mg。
250mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品。粗品透析，得白色固体S5610 mg。
[0147] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.42–4.13(m,4H),3.90–3.81(m,3H),3.78–3.50(m),3.43–
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0148] 以下实施例6～22，27～30和39～42中的化合物S6～S22，S27～S30及S39～S42均可按实施例5的合成方法获得，只需更换为对应的氨基酸(羟丙酸)和不同分子量的单甲氧基羟基聚乙二醇即可。
[0149] 实施例6：化合物S6的合成
[0150]
[0151] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.12(m,2H),5.76(s,1H),4.41–4.13(m,4H),3.90–3.80(m,3H),3.80–3.49(m),3.43–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.78(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.78(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0152] 实施例7：化合物S7的合成
[0153]
[0154] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,1H),7.24–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.42–4.12(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.77–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0155] 实施例8：化合物S8的合成
[0156]
[0157] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.42–4.13(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.80–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0158] 实施例9：化合物S9的合成
[0159]
[0160] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.14(m,2H),5.76(s,1H),4.42–4.12(m,4H),3.90–3.82(m,3H),3.80–3.50(m),3.43–
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0161] 实施例10：化合物S10的合成
[0162]
[0163] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,1H),7.25–7.12(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.13(m,4H),3.90–3.80(m,3H),3.81–3.49(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0164] 实施例11：化合物S11的合成
[0165]
[0166] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.41–4.13(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.82–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0167] 实施例12：化合物S12的合成
[0168]
[0169] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.42–4.13(m,3H),3.90–3.82(m,3H),3.79–3.50(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0170] 实施例13：化合物S13的合成
[0171]
[0172] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.13(m,3H),3.90–3.83(m,3H),3.79–3.49(m),3.43–
3.32(m,6H),3.13–2.85(m,3H),2.41–1.75(m,8H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96(dd,J＝6.6,24.9Hz,6H)。
3.32(m,6H),3.13–2.85(m,3H),2.41–1.75(m,8H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96(dd,J＝6.6,24.9Hz,6H)。
[0173] 实施例14：化合物S14的合成
[0174]
[0175] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.28–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.42–4.14(m,3H),3.91–3.83(m,3H),3.79–3.51(m),3.44–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,5H),2.42–1.76(m,7H),1.71–1.54(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,5H),2.42–1.76(m,7H),1.71–1.54(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0176] 实施例15：化合物S15的合成
[0177]
[0178] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.42–7.34(m,2H),7.30–7.19(m,5H),7.16–7.10(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.14(m,3H),3.90–3.83(m,3H),3.79–3.52(m),3.43–3.33(m,6H),3.14–2.85(m,5H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0179] 实施例16：化合物S16的合成
[0180]
[0181] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.12(m,2H),5.76(s,1H),4.44–4.12(m,3H),3.91–3.83(m,3H),3.79–3.48(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.74(m,8H),1.71–1.52(m,4H),1.30–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96–0.83(m,6H)。
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.74(m,8H),1.71–1.52(m,4H),1.30–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96–0.83(m,6H)。
[0182] 实施例17：化合物S17的合成
[0183]
[0184] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.13(m,4H),3.90–3.81(m,3H),3.79–3.50(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.32–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.32–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0185] 实施例18：化合物S18的合成
[0186]
[0187] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.14(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.13(m,3H),3.91–3.82(m,3H),3.79–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.09(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.36(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.09(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0188] 实施例19：化合物S19的合成
[0189]
[0190] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.14(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.13(m,3H),3.91–3.82(m,3H),3.79–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.42–1.76(m,8H),1.71–1.54(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96(dd,J＝6.6,24.9Hz,6H)。
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.42–1.76(m,8H),1.71–1.54(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.96(dd,J＝6.6,24.9Hz,6H)。
[0191] 实施例20：化合物S20的合成
[0192]
[0193] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.41–4.15(m,3H),3.90–3.83(m,3H),3.79–3.50(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,5H),2.43–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,5H),2.43–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0194] 实施例21：化合物S21的合成
[0195]
[0196] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.43–7.34(m,2H),7.31–7.19(m,5H),7.16–7.10(m,2H),5.75(s,1H),4.44–4.14(m,3H),3.90–3.82(m,3H),3.79–3.51(m),3.43–3.32(m,6H),3.15–2.85(m,5H),2.41–1.75(m,7H),1.72–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0197] 实施例22：化合物S22的合成
[0198]
[0199] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.24–7.12(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.12(m,3H),3.90–3.83(m,3H),3.79–3.47(m),3.44–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.73(m,8H),1.71–1.51(m,4H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.95–0.83(m,6H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.73(m,8H),1.71–1.51(m,4H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H),0.95–0.83(m,6H)。
[0200] 实施例23：化合物S23的合成
[0201]
[0202] 将甘氨酸长春胺200mg(0.50mmol，合成方法见实施例1)，二羟基聚乙二醇(OH‑PEG‑OH，平均分子量2000)1008mg(0.50mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)156mg(0.76mmol)，4‑二甲氨基吡啶(DMAP)11mg(0.05mmol，催化量)，在室温下溶于10mL二氯甲烷中，氮气保护，常温反应12小时。抽滤除去不溶物，滤液旋转蒸发掉二氯甲烷，加入乙醚250mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品。粗品透析，得白色固体S23600 mg。
[0203] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.41–4.13(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.08(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.08(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0204] 以下实施例24～26中的化合物S24～S26均可按实施例23的合成方法获得，只需更换为相应的氨基酸和不同分子量的二羟基聚乙二醇即可。
[0205] 实施例24：化合物S24的合成
[0206]
[0207] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.42–4.14(m,3H),3.91–3.80(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0208] 实施例25：化合物S25的合成
[0209]
[0210] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.13(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.50(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.31–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.31–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0211] 实施例26：化合物S26的合成
[0212]
[0213] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.13(m,3H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.70–1.52(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.30–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0214] 实施例27：化合物S27的合成
[0215]
[0216] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.12(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.33(m,6H),3.21(s,3H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.31–
1.09(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.21(s,3H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.31–
1.09(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0217] 实施例28：化合物S28的合成
[0218]
[0219] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.12(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.32(m,8H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,4H),1.31–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H),0.88(t,J＝7.7Hz,3H)。
3.32(m,8H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,4H),1.31–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H),0.88(t,J＝7.7Hz,3H)。
[0220] 实施例29：化合物S29的合成
[0221]
[0222] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.11(m,4H),3.90–3.82(m,3H),3.79–3.50(m),3.43–
3.31(m,6H),3.26–3.24(m,1H),3.15–2.86(m,3H),2.43–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),
1.34–1.09(m,6H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.31(m,6H),3.26–3.24(m,1H),3.15–2.86(m,3H),2.43–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),
1.34–1.09(m,6H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0223] 实施例30：化合物S30的合成
[0224]
[0225] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),7.26–7.13(m,5H),5.76(s,1H),4.42–4.12(m,4H),3.91–3.80(m,3H),
3.78–3.50(m),3.44–3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.42–1.76(m,7H),1.72–1.53(m,2H),
1.31–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.78–3.50(m),3.44–3.33(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.42–1.76(m,7H),1.72–1.53(m,2H),
1.31–1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0226] 实施例31：化合物S31的合成
[0227]
[0228] 将Fmoc保护的甘氨酸(845mg，2.85mmol)溶于无水CH2Cl2(30mL)，于℃下依次加入L‑缬氨酸叔丁酯盐酸盐(659mg，1.42mmol)，HATU(2.16g，5.70mmol)，HOAt(1.38g，10.15mmol)，DIPEA(1.98mL，11.4mmol)后，升到室温反应7小时，TLC点板检测反应进度，待反应完全后，加入饱和NH4Cl溶液萃灭反应，有机相再依次用饱和NaHCO3、水、饱和食盐水洗后用无水Na2SO4干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到Fmoc保护的二肽白色固体。将得到的Fmoc保护的二肽(1.11g，2.45mmol)溶于MeCN(200mL)，于室温下加入哌啶(10mL)反应3小时后减压蒸除溶剂，柱层析纯化得到Fmoc脱除的二肽白色固体化合物(270mg，41％)将得到的Fmoc脱除的二肽按照实施例1当中步骤二和步骤三的方法分别和长春胺脱甲酯产物和单甲氧基羟基聚乙二醇反应即可得到化合物S31。
[0229] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.26–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.43–4.12(m,5H),3.91–3.81(m,3H),3.78–3.50(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,8H),1.70–1.52(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.06(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,8H),1.70–1.52(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.06(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0230] 以下实施例32～38中的化合物S32～S38均可按实施例31的合成方法获得，只需更换相应的氨基酸和不同分子量的单甲氧基羟基聚乙二醇即可。
[0231] 实施例32：化合物S32的合成
[0232]
[0233] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.30–7.13(m,7H),5.74(s,1H),4.80(m,1H),4.41–4.13(m,4H),3.91–3.81(m,3H),3.79–
3.50(m),3.43–3.33(m,6H),3.15–2.86(m,5H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–
1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.50(m),3.43–3.33(m,6H),3.15–2.86(m,5H),2.42–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–
1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0234] 实施例33：化合物S33的合成
[0235]
[0236] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.12(m,2H),5.76(s,1H),4.43–4.13(m,4H),3.91–3.82(m,3H),3.79–3.51(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H),1.30–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.41–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H),1.30–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0237] 实施例34：化合物S34的合成
[0238]
[0239] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.46–4.13(m,5H),3.91–3.80(m,5H),3.78–3.50(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0240] 实施例35：化合物S35的合成
[0241]
[0242] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.42–4.13(m,5H),3.90–3.81(m,3H),3.78–3.49(m),3.43–
3.32(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.76(m,8H),1.70–1.52(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.06(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.32(m,6H),3.15–2.86(m,3H),2.42–1.76(m,8H),1.70–1.52(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.06(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0243] 实施例36：化合物S36的合成
[0244]
[0245] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.30–7.14(m,7H),5.74(s,1H),4.80(m,1H),4.40–4.13(m,4H),3.92–3.81(m,3H),3.79–
3.50(m),3.43–3.34(m,6H),3.16–2.86(m,5H),2.43–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–
1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.50(m),3.43–3.34(m,6H),3.16–2.86(m,5H),2.43–1.77(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.30–
1.10(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0246] 实施例37：化合物S37的合成
[0247]
[0248] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.27–7.12(m,2H),5.76(s,1H),4.44–4.13(m,4H),3.91–3.82(m,3H),3.79–3.50(m),3.43–
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H),1.31–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33(m,6H),3.15–2.85(m,3H),2.41–1.76(m,7H),1.71–1.53(m,2H),1.37(d,J＝6.8Hz,
3H),1.35(d,J＝6.8Hz,3H),1.31–1.10(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0249] 实施例38：化合物S38的合成
[0250]
[0251] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.39(d,J＝8.3Hz,1H),7.25–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.44–4.13(m,5H),3.91–3.80(m,5H),3.78–3.49(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.86(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.54(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0252] 实施例39：化合物S39的合成
[0253]
[0254] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.24–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.55–4.12(m,6H),3.91–3.81(m,3H),3.79–3.50(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.77(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0255] 实施例40：化合物S40的合成
[0256]
[0257] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.24–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.54–4.12(m,6H),3.91–3.81(m,3H),3.80–3.50(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.30–1.09(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0258] 实施例41：化合物S41的合成
[0259]
[0260] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.24–7.13(m,2H),5.75(s,1H),4.55–4.12(m,6H),3.90–3.81(m,3H),3.80–3.50(m),3.44–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0261] 实施例42：化合物S42的合成
[0262]
[0263] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.38(d,J＝8.3Hz,1H),7.24–7.13(m,2H),5.76(s,1H),4.54–4.12(m,6H),3.91–3.81(m,3H),3.80–3.49(m),3.45–
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34(m,6H),3.14–2.85(m,3H),2.40–1.76(m,7H),1.70–1.53(m,2H),1.31–1.10(m,2H),
1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0264] 实施例43：化合物S43的合成
[0265]
[0266] 将甘氨酸长春胺440mg(1.10mmol，合成方法见实施例1)，二羟基聚乙二醇(OH‑PEG‑OH，平均分子量2000)1008mg(0.50mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)248mg(1.20mmol)，4‑二甲氨基吡啶(DMAP)11mg(0.05mmol，催化量)，在室温下溶于10mL二氯甲烷中，氮气保护，常温反应12小时。抽滤除去不溶物，滤液旋转蒸发掉二氯甲烷，加入乙醚250mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品。粗品透析，得白色固体S43730 mg。
[0267] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.43–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.22–7.08(m,2H),5.72(s,2H),4.40–4.14(m,8H),3.87–3.77(m,6H),3.74–3.45(m),3.40–3.29(m,12H),3.12–2.83(m,6H),2.38–1.73(m,14H),1.68–1.50(m,4H),1.28–1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0268] 以下实施例44～56中的化合物S44～S56均可按实施例43的合成方法获得，只需更换为相应的氨基酸和不同分子量的二羟基聚乙二醇即可。
[0269] 实施例44：化合物S44的合成
[0270]
[0271] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44–7.37(m,2H),7.36–7.27(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.14(m,6H),3.87–3.76(m,6H),3.75–3.45(m),3.40–3.28(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.37–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.33(d,J＝6.8Hz,6H),
1.29–1.06(m,4H),0.94(td,J＝1.0,7.2Hz,6H)。
1.29–1.06(m,4H),0.94(td,J＝1.0,7.2Hz,6H)。
[0272] 实施例45：化合物S45的合成
[0273]
[0274] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44–7.37(m,2H),7.37–7.28(m,4H),7.22–7.08(m,2H),5.73(s,2H),4.41–4.15(m,6H),3.86–3.76(m,6H),3.74–3.45(m),3.39–3.29(m,12H),3.13–2.83(m,6H),2.38–1.74(m,16H),1.68–1.49(m,4H),1.29–1.07(m,4H),1.01(m,
12H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
12H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0275] 实施例46：化合物S46的合成
[0276]
[0277] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.43–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.23–7.08(m,2H),5.73(s,2H),4.41–4.15(m,7H),3.86–3.77(m,6H),3.74–3.44(m),3.40–3.29(m,12H),3.13–2.83(m,6H),2.38–1.73(m,15H),1.68–1.50(m,4H),1.28–1.06(m,4H),1.02(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0278] 实施例47：化合物S47的合成
[0279]
[0280] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44–7.37(m,2H),7.37–7.28(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.73(s,2H),4.41–4.14(m,8H),3.87–3.76(m,6H),3.75–3.44(m),3.41–3.29(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.39–1.74(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.28–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0281] 实施例48：化合物S48的合成
[0282]
[0283] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.37–7.27(m,4H),7.22–7.10(m,2H),5.72(s,2H),4.42–4.14(m,6H),3.86–3.76(m,6H),3.76–3.44(m),3.40–3.28(m,12H),3.13–2.83(m,6H),2.38–1.74(m,14H),1.70–1.50(m,4H),1.34(d,J＝6.8Hz,6H),
1.29–1.06(m,4H),0.94(td,J＝1.0,7.2Hz,6H)。
1.29–1.06(m,4H),0.94(td,J＝1.0,7.2Hz,6H)。
[0284] 实施例49：化合物S49的合成
[0285]
[0286] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44–7.37(m,2H),7.36–7.29(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.14(m,8H),3.88–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.41–3.29(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.39–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.28–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0287] 实施例50：化合物S50的合成
[0288]
[0289] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.44–7.37(m,2H),7.37–7.28(m,4H),7.23–7.08(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.14(m,8H),3.88–3.77(m,6H),3.74–3.44(m),3.40–3.28(m,12H),3.12–2.83(m,6H),2.37–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.28–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0290] 实施例51：化合物S51的合成
[0291]
[0292] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.37–7.28(m,4H),7.22–7.10(m,2H),5.72(s,2H),4.42–4.15(m,8H),3.87–3.76(m,6H),3.75–3.44(m),3.40–3.27(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.38–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.30–1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0293] 实施例52：化合物S52的合成
[0294]
[0295] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.35–7.29(m,4H),7.21–7.09(m,2H),5.71(s,2H),4.40–4.14(m,7H),4.05–3.93(m,2H),3.88–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.41–3.29(m,12H),3.13–2.82(m,6H),2.39–1.74(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0296] 实施例53：化合物S53的合成
[0297]
[0298] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.15(m,7H),3.87–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.41–3.28(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.39–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H),
1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0299] 实施例54：化合物S54的合成
[0300]
[0301] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.36–7.29(m,4H),7.22–7.10(m,2H),5.72(s,2H),4.43–4.14(m,6H),3.89–3.77(m,6H),3.75–3.44(m),3.41–3.29(m,12H),3.13–2.82(m,6H),2.40–1.73(m,15H),1.69–1.49(m,4H),1.30(d,J＝6.7Hz,3H),
1.28–1.07(m,4H),1.02(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝
7.3Hz,3H)。
1.28–1.07(m,4H),1.02(dd,J＝6.7,25.0Hz,6H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝
7.3Hz,3H)。
[0302] 实施例55：化合物S55的合成
[0303]
[0304] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.35–7.29(m,4H),7.21–7.10(m,2H),5.71(s,2H),4.40–4.14(m,7H),4.05–3.93(m,2H),3.89–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.42–3.29(m,12H),3.13–2.82(m,6H),2.39–1.75(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0305] 实施例56：化合物S56的合成
[0306]
[0307] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.45–7.37(m,2H),7.35–7.29(m,4H),7.21–7.09(m,2H),5.71(s,2H),4.41–4.14(m,7H),4.05–3.93(m,2H),3.89–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.42–3.28(m,12H),3.13–2.82(m,6H),2.40–1.75(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.29–1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0308] 实施例57：化合物S57的合成
[0309]
[0310] 将甘氨酸‑丙氨酸连接的长春胺470mg(1.10mmol，合成方法见实施例31)，二羟基聚乙二醇(OH‑PEG‑OH，平均分子量2000)1008mg(0.50mmol)，二环己基碳二亚胺(DCC)248mg(1.20mmol)，4‑二甲氨基吡啶(DMAP)11mg(0.05mmol，催化量)，在室温下溶于10mL二氯甲烷中，氮气保护，常温反应12小时。抽滤除去不溶物，滤液旋转蒸发掉二氯甲烷，加入乙醚250mL，搅拌1小时，过滤，收集滤饼，真空干燥，得粗品。粗品透析，得白色固体S57740 mg。
[0311] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.47–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.42–4.15(m,10H),3.87–3.77(m,6H),3.74–3.45(m),3.41–3.27(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.40–1.72(m,14H),1.70–1.50(m,4H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H),
1.29–1.07(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.29–1.07(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0312] 以下实施例58～65中的化合物S58～S65均可按实施例57的合成方法获得，只需更换为相应的氨基酸和不同分子量的二羟基聚乙二醇即可。
[0313] 实施例58：化合物S58的合成
[0314]
[0315] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.15(m,10H),3.87–3.77(m,6H),3.75–3.45(m),3.41–3.27(m,12H),3.12–2.82(m,6H),2.39–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H),
1.29–1.07(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.29–1.07(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0316] 实施例59：化合物S59的合成
[0317]
[0318] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.46–7.37(m,2H),7.36–7.28(m,4H),7.22–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.42–4.15(m,10H),3.87–3.77(m,6H),3.75–3.44(m),3.40–3.27(m,12H),3.13–2.82(m,6H),2.39–1.74(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.37–1.34(m,6H),1.29–
1.08(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.08(m,4H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0319] 实施例60：化合物S60的合成
[0320]
[0321] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.48–7.37(m,2H),7.35–7.27(m,4H),7.23–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.41–4.15(m,9H),3.87–3.77(m,6H),3.76–3.45(m),3.41–3.27(m,12H),3.15–2.84(m,8H),2.40–1.73(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.36–1.33(m,6H),1.28–
1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0322] 实施例61：化合物S61的合成
[0323]
[0324] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.48–7.37(m,2H),7.36–7.27(m,4H),7.23–7.09(m,2H),5.72(s,2H),4.42–4.15(m,9H),3.87–3.76(m,6H),3.77–3.45(m),3.42–3.26(m,12H),3.14–2.84(m,8H),2.40–1.72(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.36–1.33(m,6H),1.29–
1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.06(m,4H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0325] 实施例62：化合物S62的合成
[0326]
[0327] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.51–7.38(m,2H),7.34–7.26(m,4H),7.24–7.10(m,2H),5.69(s,2H),4.55–4.32(m,4H),4.26–4.01(m,4H),3.89–3.78(m,6H),3.75–3.46(m),3.40–3.24(m,12H),3.20–2.79(m,6H),2.78–2.58(m,4H),2.38–1.75(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.30–1.09(m,4H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0328] 实施例63：化合物S63的合成
[0329]
[0330] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.52–7.38(m,2H),7.34–7.26(m,4H),7.24–7.11(m,2H),5.69(s,2H),4.56–4.32(m,4H),4.26–4.01(m,4H),3.89–3.79(m,6H),3.76–3.46(m),3.41–3.24(m,12H),3.20–2.79(m,6H),2.78–2.57(m,4H),2.39–1.76(m,14H),1.69–1.50(m,4H),1.31–1.09(m,4H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0331] 实施例64：化合物S64的合成
[0332]
[0333] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.51–7.38(m,2H),7.34–7.25(m,4H),7.24–7.10(m,2H),5.69(s,2H),4.55–4.32(m,4H),4.27–4.01(m,4H),3.89–3.78(m,6H),3.76–3.45(m),3.40–3.24(m,12H),3.21–2.79(m,6H),2.78–2.58(m,4H),2.39–1.74(m,14H),1.70–1.51(m,4H),1.31–1.09(m,4H),0.96(t,J＝7.3Hz,3H),0.92(t,J＝7.3Hz,3H)。
[0334] 实施例65：化合物S65的合成
[0335]
[0336] 1H NMR(300MHz,Chloroform‑d)δ7.49–7.35(m,2H),7.32–7.23(m,4H),7.21–7.07(m,2H),5.69(s,2H),4.29–4.06(m,4H),3.87–3.77(m,6H),3.75–3.46(m),3.39–3.21(m,12H),3.20–2.95(m,4H),2.92(s,6H),2.90–2.77(m,2H),2.62–2.55(m,4H),2.36–1.71(m,
14H),1.68–1.49(m,4H),1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H)。
14H),1.68–1.49(m,4H),1.29–1.07(m,4H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H)。
[0337] 效果实施例1：长春胺衍生物Vin3改善糖尿病周围神经病变模型小鼠的运动神经传导速度及感觉缺失
[0338] 本发明以PEG化长春胺系列衍生物Vin3为例，阐述其在体内的治疗效果，Vin3结构如下图所示。本发明在STZ诱导的1型糖尿病小鼠以及2型糖尿病db/db小鼠身上检测长春胺衍生物Vin3对糖尿病周围神经病变模型小鼠的运动神经传导速度以及痛觉响应的影响。实验结果表明Vin3可以明显改善糖尿病周围神经病变模型小鼠的运动神经传导速度以及感觉缺失现象。
[0339]
[0340] 1.实验原理
[0341] 糖尿病周围神经病变首先累及感觉神经元，主要病理变化是轴突萎缩变性甚至消失等。故认为可通过保护和促进感觉神经元突起生长以起到抗糖尿病周围神经病变的治疗效果。此外，糖尿病周围神经病变患者会出现神经传导速度减慢，感觉减退、乏力等症状。在糖尿病周围神经病变模型小鼠身上检测其运动神经传导速度、机械痛阈值以及热痛觉反应时间等行为学指标，可用来评估长春胺衍生物Vin3对糖尿病周围神经病变个体行为学水平上的改善作用；检测给药后小鼠外周神经元轴突生长情况，可以评价化合物Vin3对外周神经元轴突的保护作用。
[0342] 2.实验材料与方法
[0343] 1)动物分组给药情况
[0344] 1型糖尿病小鼠：雄性8周龄C57BL/6J小鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。适应性饲养一周后腹腔注射STZ(150mg/kg)，一周后尾静脉采血检测血糖，挑选随机血糖大于16mmol/L的小鼠。STZ注射6周后根据体重和血糖进行分组，分别为：对照组(非糖尿病鼠)、模型组(DPN鼠)、Vin3给药组(40mg/kg)，连续灌胃给药4周。
[0345] 2型糖尿病小鼠：雄性18周龄BKS db/db小鼠购自江苏集萃药康生物科技有限公司。适应性饲养一周后根据体重和血糖进行分组，分别为：对照组(db/m鼠)、模型组(db/db鼠)、Vin3给药组(40mg/kg)，连续灌胃给药4周。
[0346] 2)运动神经传导速度检测实验
[0347] 在给药前，给药2周和给药4周时，检测每组小鼠左右两侧的运动神经传导速度(Motor nerve conduction velocity，MNCV)，两侧速度求均值作为每只鼠的神经传导速度。具体实验方法：①电极放置：刺激电极置于神经干，记录电极置于肌腹，参考电极置于肌腱；地线置于刺激电极和记录电极之间。②运动神经传导速度的计算：超强刺激神经干远端和近端，在该神经支配的肌肉上可记录到2次复合肌肉动作电位，测定其不同的潜伏期，用远端和近端之间的距离除以两点间潜伏期差，即为神经的传导速度。计算公式为：神经传导速度(m/s)＝两点间距离(cm)×10/两点间潜伏期差(ms)。
[0348] 3)机械痛阈值检测实验
[0349] 本实验是基于啮齿类动物的爪受到机械刺激时会缩回反射的原理。Von frey触觉测量套件购于Ugo Basile公司，Von frey纤维丝可提供0.008g‑300g的刺激力，纤维丝的粗细决定提供刺激力的大小。具体实验方法：选定粗细得当的纤维丝，垂直地刺激皮肤，更换纤维丝调整刺激力大小，直到纤维丝弯曲。一只鼠测定6次以确定阈值，根据50％thresholdf＝(10^(x+kδ))/10000计算小鼠50％的机械痛阈值，分别于给药前及给药后每周检测。
[0350] 4)热痛觉潜伏期检测实验
[0351] 在给药前及给药后每周利用红外足底测痛仪(37370，购于Ugo Basile公司)检测动物对红外热刺激的反应来表征动物的热痛觉灵敏度。将小鼠提前放入机器配套单笼中适应20min后对小鼠足底进行热刺激，随着时间的延长温度会逐渐升高，当小鼠抬脚或移动离开热源时机器自动停止并记录下热刺激时间，即为热痛觉潜伏期。通过比较热刺激时间的长短来评价热痛觉灵敏度。
[0352] 5)背根节神经元细胞轴突生长实验
[0353] 给药结束后，取小鼠的新鲜背根节(Dorsal root ganglion，DRG)神经元消化成单细胞悬液后接种至培养板中贴壁培养过夜。利用免疫荧光染色法标记DRG神经元原代细胞的β‑tubulinⅢ(Sigma)蛋白。荧光显微镜(Leica)成像，然后用Image J软件中的Neuro J插件追踪单个DRG神经元细胞的轴突总长度。
[0354] 3.实验结果
[0355] 如表1‑3所示，长春胺衍生物Vin3能够明显改善1型糖尿病周围神经病变小鼠的运动神经传导速度以及感觉缺失症状。本工作所有实验数据均以Mean±SD.显示，所有的柱状图和曲线图都是采用GraphPad Prism 8软件进行作图和分析。两组数据间采用T test进行* ** *** # ## ###显著性分析。p<0.05，p<0.01， p<0.001代表模型组vs.对照组；p<0.05，p<0.01， p<
0.001代表给药组vs.模型组。
0.001代表给药组vs.模型组。
[0356] 表1运动神经传导速度(Mean±SD.，n＝6，m/s)
[0357]
[0358] 表2 50％机械痛阈值(Mean±SD.，n＝7，g)
[0359]
[0360] 表3热痛觉潜伏期(Mean±SD.，n＝7，s)
[0361]
[0362] 结果如表4‑6所示，长春胺衍生物Vin3能够明显改善2型糖尿病小鼠的运动神经传* ** ***导速度以及感觉缺失症状。两组数据间采用T test进行显著性分析。p<0.05，p<0.01， p# ## ###
<0.001代表db/dbvs.db/m；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表Vin3 treated vs.db/db。
<0.001代表db/dbvs.db/m；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表Vin3 treated vs.db/db。
[0363] 表4运动神经传导速度(Mean±SD.，n＝6，m/s)
[0364]
[0365] 表5 50％机械痛阈值(Mean±SD.，n＝7，g)
[0366]
[0367] 表6热痛觉潜伏期(Mean±SD.，n＝7，s)
[0368]
[0369] 结果如图1所示，长春胺衍生物Vin3能够明显改善1型糖尿病周围神经病变模型小* **鼠DRG神经元的轴突生长情况(荧光图和定量图)。统计采用T‑test检验，n＝5，p<0.05，p<***
0.01， p<0.001，分别与模型组比较。如图2所示，长春胺衍生物Vin3同样能够明显促进2型糖尿病周围神经病变模型小鼠DRG神经元的轴突生长(荧光图和定量图)。统计采用T‑test* ** ***
检验，n＝7，p<0.05，p<0.01， p<0.001，分别与模型组比较。表明长春胺衍生物Vin3对外周感觉神经元轴突具有保护作用。
0.01， p<0.001，分别与模型组比较。如图2所示，长春胺衍生物Vin3同样能够明显促进2型糖尿病周围神经病变模型小鼠DRG神经元的轴突生长(荧光图和定量图)。统计采用T‑test* ** ***
检验，n＝7，p<0.05，p<0.01， p<0.001，分别与模型组比较。表明长春胺衍生物Vin3对外周感觉神经元轴突具有保护作用。
[0370] 效果实施例2：长春胺衍生物Vin3促进糖尿病足模型大鼠的足部溃疡伤口愈合[0371] 本发明在STZ诱导的糖尿病大鼠身上检测长春胺衍生物Vin3对糖尿病足模型大鼠足部溃疡伤口愈合的影响。实验结果表明，在糖尿病大鼠足部溃疡后，给予化合物Vin3治疗可以明显促进足部溃疡伤口的愈合，减小损伤面积。
[0372] 1.实验原理
[0373] 糖尿病足溃疡(Diabetic foot ulcer，DFU)是糖尿病足常见的表现，也是造成糖尿病患者截肢的主要原因。本实验在糖尿病大鼠足背部一次性造成一定面积的伤口，形成糖尿病足溃疡模型，然后给予化合物Vin3治疗。通过对伤口进行拍照并定量其面积大小来评估长春胺衍生物Vin3对糖尿病足足部溃疡伤口愈合的影响。
[0374] 2.实验材料与方法
[0375] 1)糖尿病大鼠模型的建立
[0376] 雄性5周龄SPF级Sprague Dawley大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。适应性饲养一周后腹腔注射STZ(100mg/kg)，72h后尾静脉采血检测血糖，挑选随机血糖大于16.7mmol/L的小鼠。
[0377] 2)糖尿病足溃疡大鼠模型的建立
[0378] STZ注射4周后采用吸入式麻醉机，异氟烷吸入诱导麻醉，通过一次性5mm皮肤活检打孔器和Westcott剪刀在糖尿病大鼠的后脚背部造成一个完整的圆形皮肤伤口。糖尿病足溃疡大鼠模型建立后，根据血糖和体重指标分为对照组(非糖尿病鼠)、模型组(DFU鼠)和Vin3给药组(40mg/kg)，连续灌胃给药4周。3)糖尿病足大鼠溃疡面积观察
[0379] 分别在给药后的第0天、第3天、第7天、第14天、第21天和第28天观察每一只鼠的足部溃疡伤口面积的大小。用尺子测量每只大鼠足部的损伤面积，使用相机拍摄图像后，通过比例尺的换算，Image J软件定量伤口面积。
[0380] 3.实验结果
[0381] 如图3所示，长春胺衍生物Vin3能够明显促进糖尿病足溃疡伤口的愈合。伤口面积* ** ***定量结果如表7所示，两组数据间采用T test进行显著性分析。p<0.05，p<0.01， p<# ## ###
0.001代表模型组vs.对照组；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表给药组vs.模型组。
0.001代表模型组vs.对照组；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表给药组vs.模型组。
[0382] 表7足部溃疡伤口面积(Mean±SD.，n＝7，mm2)
[0383] 。
[0384] 实施例3：长春胺衍生物Vin3减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化程度
[0385] 本发明利用Micro CT在博来霉素诱导的肺纤维化模型小鼠身上检测长春胺衍生物Vin3对小鼠肺纤维化组织的保护作用。实验结果表明，给予化合物Vin3治疗可以明显减轻小鼠肺部纤维化程度。
[0386] 1.实验原理
[0387] 本实验通过对小鼠进行口腔气管滴注博来霉素溶液来造成肺纤维化模型，然后给予化合物Vin3治疗。通过对小鼠肺部CT拍照和三维重构，定量小鼠肺部正常组织的体积大小来评估长春胺衍生物Vin3对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化程度的影响。
[0388] 2.实验材料与方法
[0389] 雄性7周龄C57BL/6J小鼠购自北京维通利华，适应性饲养一周后用micro‑CT检查小鼠肺部发育情况。根据肺部正常组织体积大小将小鼠分为空白对照组(正常鼠)、模型组和Vin3给药组(100mg/kg)。然后采用吸入式麻醉机，异氟烷吸入诱导麻醉，将模型组及给药组小鼠经口腔气管滴注5mg/kg的博莱霉素溶液，建立肺纤维化模型，对照组滴注等体积的博来霉素溶剂。第二天开始给药，连续灌胃给药20天。在造模前，造模后第10天、第20天进行micro‑CT成像实验，观察小鼠肺部纤维化情况。
[0390] 3.实验结果
[0391] 如图4所示，长春胺衍生物Vin3能够明显减轻小鼠肺纤维化程度，对肺部组织具有一定的保护作用。给药20天后，给药组小鼠的肺部正常组织体积要明显大于模型组。小鼠肺*部正常组织体积的定量结果如表8所示，两组数据间采用T test进行显著性分析。p<** *** # ## ###
0.05，p<0.01， p<0.001代表模型组vs.对照组；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表给药组vs.模型组。
0.05，p<0.01， p<0.001代表模型组vs.对照组；p<0.05，p<0.01， p<0.001代表给药组vs.模型组。
[0392] 表8肺部正常组织体积(Mean±SD.，n＝5，mm3)
[0393] 。
[0394] 以上实施例仅为本发明的示例性实施例，不用于限制本发明，本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内，对本发明做出各种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。