一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用。所述含不同分子量裂褶多糖的组合物包括：分子量为10‑100kD的小分子裂褶多糖、分子量为100‑1000kD的中分子裂褶多糖和分子量为1000‑2000kD的大分子裂褶多糖。本发明所述的组合物由不同分子量的裂褶多糖组成，并通过优选配比，使得各分子的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，达到多维度的保湿、抗炎、抗氧化等多种功能。

权利要求

1.一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，其特征在于，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：分子量为2‑5 kD的低聚裂褶多糖           0.01‑1份分子量为10‑30 kD的小分子裂褶多糖       1‑5份分子量为100‑200 kD的中分子裂褶多糖     0.5‑3份分子量为1000‑1200 kD的大分子裂褶多糖   0.1‑2份。

2.一种根据权利要求1所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：（1）将低聚裂褶多糖、小分子裂褶多糖、中分子裂褶多糖和大分子裂褶多糖溶解，得到混合溶液；

（2）将步骤（1）得到的混合溶液进行沉淀后干燥，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述溶解采用的溶剂包括超纯水、注射用水、生理盐水或缓冲生理盐水中的任意一种或至少两种的组合；

步骤（1）中，所述溶解采用的溶剂的质量为不同分子量裂褶多糖的总质量的5‑30倍。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述溶解的温度为50‑90℃，所述溶解的时间为20‑50 min；

步骤（1）中，所述溶解的加料顺序依次为：低聚裂褶多糖、小分子裂褶多糖、中分子裂褶多糖和大分子裂褶多糖。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述沉淀采用80‑95 vol%的乙醇水溶液进行醇沉；

所述醇沉的次数为1‑5次；

所述醇沉用乙醇水溶液的总体积为混合液的体积的0.2‑2倍；

所述干燥的温度为40‑60℃，所述干燥的时间为1‑10 h。

6.一种根据权利要求1所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物在制备化妆品中的应用。

7.一种化妆品，其特征在于，所述化妆品包括权利要求1所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物。

8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物在所述化妆品中的添加量为1‑10 wt%。

说明书

一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明属于化妆品技术领域，涉及一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 皮肤是人体最大的器官，不仅是人体抵御外来压力的第一道防线，还是一个人健康貌美的标准，然而随着空气污染物，大气中的颗粒物附着于皮肤表面，导致皮肤颜色暗沉、无光泽、并导致皮肤老化。除此之外，不良的生活环境或者是皮肤疾病也会加快皮肤衰老，如空气污染、炎热、寒冷或紫外线辐射等，皮肤表层会变得更加干燥，诸如皮肤变薄、皮肤弹性下降、肤色暗沉、皱纹增多，严重的甚至会诱发皮肤湿疹甚至皮炎等问题。

[0003] CN108888529A公开了一种裂褶多糖改性的透明质酸钠微球凝胶及其制备方法以及在化妆品中的应用，包括以下步骤：将透明质酸钠干粉加入到透明质酸酶溶液中，酶解得到透明质酸钠小分子溶液；将透明质酸钠小分子溶液缓慢加入到混合油相，缓慢搅拌后，加入氯化钙和二乙烯基砜的混合交联剂，交联固化，得到透明质酸钠微球；将透明质酸钠微球和预处理的裂褶多糖加入含聚乙二醇碱性溶液，搅拌均匀后，调节体系的pH至中性，加入磷酸盐缓冲液，静置陈化，得到裂褶多糖改性的透明质酸钠微球凝胶。

[0004] CN106109265A公开了一种透明质酸保湿组合物及其制备方法和应用，所述质酸保湿组合物，各组分的重量百分数如下：分子量为1100kDa的透明质酸或其盐60‑62％，分子量为400kDa的透明质酸或其盐18‑20％，分子量为6kDa的水解透明质酸或其盐18‑20％。通过高、低和微分子透明质酸的合理组合，产品具有真皮层、表皮层、角质层、皮肤表面的皮肤全层次立体保湿作用。

[0005] CN110123705A公开了一种保湿抗皱组合物及护肤品。该发明的保湿抗皱组合物由寡聚透明质酸钠、低分子透明质酸钠和高分子透明质酸钠按一定比例组成的透明质酸钠与麦芽寡糖葡糖苷、密罗木提取物等七种组分复配，可使各组分产生显著的协调增效效应，含有该保湿抗皱组合物的护肤品通过其中的小分子保湿成分与皮肤水合到达保湿。

[0006] 上述产品基本包含了市售含透明质酸保湿产品的配方，然而其保湿效果有待提高，且抗炎效果有限可归究于：市售透明质酸的吸水膨胀特性会使小分子玻尿酸的实际粒径放大，进而阻碍小分子玻尿酸穿透皮肤角质层。而裂褶多糖(SPG)具有保湿、抗炎、抗衰老、促进上皮纤维成细胞增殖和美化肤色等多种功能，被化妆品原料市场所认可。然而，国内外已有相关产品上市，但主要是采用分子量未分级的SPG，且原料来源于国外，而不同分子量的SPG在保湿、抗氧化、美白等领域的活性差异。

[0007] 因此，开发出一种能够深层、持久保湿，且能抗炎抗过敏的SPG类护肤品是本领域的研究重点。

发明内容

[0008] 针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用。本发明所述的组合物由不同分子量的裂褶多糖组成，并通过优选配比，使得各分子的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，达到多维度的保湿、抗炎、抗过敏、抗氧化等功能。

[0009] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：

[0010] 第一方面，本发明提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物包括：分子量为10‑100kD的小分子裂褶多糖、分子量为100‑1000kD的中分子裂褶多糖和分子量为1000‑2000kD的大分子裂褶多糖。

[0011] 在本发明中，所述小分子裂褶多糖、中分子裂褶多糖和大分子裂褶多糖相互配合具有协同增效的作用，可以渗透到皮肤的不同深度，从而在特定的皮肤层发挥功效，达到多维度的保湿、抗炎、抗过敏、抗氧化等功能，从皮肤的表层至深层都起到长久护肤的功效。

[0012] 其中，分子量为10‑100kD(例如可以是10kD、20kD、30kD、40kD、50kD、60kD、70kD、80kD、90kD、99kD等，且不包括100kD，优选为10‑50kD)的小分子裂褶多糖，更容易透过皮肤角质层，进入真皮层上层，并在该组织内缓慢释放功效，从而改善皮肤微环境，对深层细胞起到深层保湿的作用；此外，还可以达到紧致表皮和真皮连接部分，让皮肤变得更加的柔软、光滑并富有弹性；还可以抑制组胺的释放，具有较强的抗炎和抗过敏作用。

[0013] 其中，分子量为100‑1000kD(例如可以是100kD、200kD、300kD、400kD、500kD、600kD、700kD、800kD、900kD、999kD等，且不包括1000kD，优选为100‑200kD)的中分子裂褶多糖具有独特的三螺旋结构，可以达到修复和润滑角质层的目的，并起到支撑作用，并使皮肤柔软丰满富有弹性，润滑角质层，促进皮肤新陈代谢，从强化皮肤屏障功能、提升角质层含水量以及修复炎症反应等多个方面达到保湿舒敏功效，特别地对干燥与敏感皮肤起到针对性调节作用。

[0014] 其中，分子量为1000‑2000kD(例如可以是1000kD、1100kD、1200kD、1300kD、1400kD、1500kD、1600kD、1700kD、1800kD、1900kD、2000kD等，优选为1000‑1200kD)的裂褶多糖同样具有独特的三螺旋结构，但由于其分子量较高，因而具有良好的成膜性，能在皮肤表面形成一层均匀透气的薄膜，从而达到减少皮肤表面水分蒸发的目的；也由于形成这一层均匀透气的薄膜，还能保护敏感脆弱的皮肤组织免受二次侵害，同时还能减少自由基对皮肤的损伤，有利于保持肌肤的表层的活力与弹性。

[0015] 优选地，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0016] 分子量为10‑100kD的小分子裂褶多糖          1‑5份

[0017] 分子量为100‑1000kD的中分子裂褶多糖        0.5‑3份

[0018] 分子量为1000‑2000kD的大分子裂褶多糖       0.1‑2份。

[0019] 其中，小分子裂褶多糖的含量为1‑5份，例如可以是1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份等。

[0020] 其中，中分子裂褶多糖的含量为0.5‑3份，例如可以是0.5份、0.6份、0.8份、1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份、2份、2.5份、3份等。

[0021] 其中，大分子裂褶多糖的含量为0.1‑2份，例如可以是0.1份、0.2份、0.4份、0.6份、0.8份、1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份、2份等。

[0022] 优选地，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物中还包括分子量为小于10kD(例如可以是9.9kD、9kD、8kD、7kD、6kD、5kD、4kD、3kD、2kD、1kD、0.5kD、0.1kD等)的低聚裂褶多糖，优选为1‑8kD。

[0023] 在本发明中，还可在所述含不同分子量裂褶多糖的组合物中添加分子量更小的小于10kD低聚裂褶多糖，该分子量范围的低聚裂褶多糖不仅停留在皮肤表层，还可深入真皮内层，促进营养吸收的效果，能够伸入肌肤真皮层进行补水；还可以促进真皮层中胶原蛋白和弹性蛋白合成，并有助于进一步提高缓解和舒缓炎症的能力。

[0024] 优选地，所述低聚裂褶多糖的重量份数为0.01‑2份，例如可以是0.01份、0.02份、0.05份、0.1份、0.5份、0.6份、0.8份、1份、1.2份、1.4份、1.6份、1.8份、2份等。

[0025] 优选地，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0026]

[0027] 第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

[0028] (1)将小分子裂褶多糖、中分子裂褶多糖和大分子裂褶多糖溶解，得到混合溶液；

[0029] (2)将步骤(1)得到的混合溶液进行沉淀后干燥，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0030] 在本发明中，由于不同分子量的裂褶多糖粘度和状态不同，导致直接混合较难，因此采用将原料溶解在水相中，再进行沉淀后干燥的方式，相对于直接将不同分子量能够使得各组分混合得更加均一。

[0031] 优选地，步骤(1)中，所述溶解采用的溶剂包括超纯水、注射用水、生理盐水或缓冲生理盐水中的任意一种或至少两种的组合。

[0032] 优选地，步骤(1)中，所述溶解采用的溶剂的质量为不同分子量裂褶多糖的总质量的5‑30倍，例如可以是5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、12倍、14倍、16倍、18倍、20倍、22倍、24倍、26倍、28倍、30倍等。

[0033] 优选地，步骤(1)中，所述溶解的温度为50‑90℃，例如可以是50℃、60℃、70℃、80℃、82℃、84℃、86℃、88℃、90℃等，所述溶解的时间为20‑50min，例如可以是20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min等。

[0034] 优选地，步骤(1)中，所述溶解的加料顺序依次为：任选的低聚裂褶多糖、小分子裂褶多糖、中分子裂褶多糖和大分子裂褶多糖。

[0035] 优选地，步骤(2)中，所述沉淀采用80‑95vol％(例如可以是80vol％、82vol％、84vol％、86vol％、88vol％、90vol％、92vol％、95vol％等)的乙醇水溶液进行醇沉。

[0036] 优选地，所述醇沉的次数为1‑5次，例如可以是1次、2次、3次、4次、5次等。

[0037] 优选地，所述醇沉用乙醇水溶液的总体积为混合液的体积的0.2‑2倍，例如可以是0.2倍、0.5倍、0.8倍、1倍、1.5倍、2倍等。

[0038] 优选地，所述干燥的温度为40‑60℃，例如可以是40℃、45℃、50℃、55℃、60℃等，所述干燥的时间为1‑10h，例如可以是1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h等。

[0039] 第三方面，本发明提供一种如如第一方面所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物在制备化妆品中的应用。

[0040] 第四方面，本发明提供一种化妆品，所述化妆品如如第一方面所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0041] 优选地，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物在所述化妆品中的添加量为0.01‑20wt％，例如可以是0.01wt％、0.05wt％、0.1wt％、0.2wt％、0.4wt％、0.6wt％、0.8wt％、
1wt％、2wt％、3wt％、4wt％、5wt％、6wt％、7wt％、8wt％、9wt％、10wt％、12wt％、14wt％、
16wt％、18wt％、20wt％等，优选为1‑10wt％。

[0042] 相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

[0043] (1)本发明所述组合物通过分子量为10‑100kD的小分子裂褶多糖透入活性表皮和真皮上层，分子量为100‑1000kD的中分子裂褶多糖修复和润滑角质层，分子量为1000‑2000kD的大分子裂褶多糖在皮肤表层形成一层均匀透气的薄膜，从皮肤的表层至深层都起到长久护肤的功效；

[0044] (2)本发明所述组合物通过分子量通过不同分子量的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，提升皮肤自主保湿力、减轻皮肤炎症、提高皮肤抗氧化能力、增加皮肤弹性等多个维度出发起到长久护肤的功效；

[0045] (3)本发明所述组合物还额外补充分子量更小的低聚裂褶多糖，深入真皮层，促进营养吸收的效果，能够伸入肌肤真皮层进行补水；还可以促进真皮层中胶原蛋白和弹性蛋白合成，并有助于进一步提高缓解和舒缓炎症的能力。

具体实施方式

[0046] 下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

[0047] 实施例和对比例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品或可通过现有技术进行制备得到。

[0048] 实施例1

[0049] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0050]

[0051]

[0052] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0053] (1)将100份的超纯水加入锅中，升温至85℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入小分子裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0054] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0055] 实施例2

[0056] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0057]名称 平均分子量 重量份数
低聚裂褶多糖 2kD 0.1份
小分子裂褶多糖 30kD 4份
中分子裂褶多糖 200kD 2份
大分子裂褶多糖 1000kD 0.9份

[0058] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0059] (1)将120份的超纯水加入锅中，升温至90℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入小分子裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌15min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0060] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入40份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入40份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0061] 实施例3

[0062] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0063] 名称 平均分子量 重量份数低聚裂褶多糖 5kD 0.5份
小分子裂褶多糖 10kD 3.5份
中分子裂褶多糖 120kD 2.5份
大分子裂褶多糖 1200kD 0.5份

[0064] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0065] (1)将100份的超纯水加入锅中，升温至82℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入小分子裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌15min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0066] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入36份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入32份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0067] 实施例4

[0068] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0069]名称 平均分子量 重量份数
低聚裂褶多糖 5kD 0.01份
小分子裂褶多糖 20kD 5份
中分子裂褶多糖 100kD 0.5份
大分子裂褶多糖 1200kD 2份

[0070] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0071] (1)将150份的超纯水加入锅中，升温至90℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入小分子裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0072] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0073] 实施例5

[0074] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0075] 名称 平均分子量 重量份数低聚裂褶多糖 5kD 0.5份
小分子裂褶多糖 20kD 0.5份
中分子裂褶多糖 100kD 1份
大分子裂褶多糖 1200kD 5份

[0076] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0077] (1)将200份的超纯水加入锅中，升温至90℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌5min，加入小分子裂褶多糖搅拌5min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0078] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入100份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入45份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入25份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并三次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0079] 实施例6

[0080] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0081]名称 平均分子量 重量份数
低聚裂褶多糖 5kD 0.01份
小分子裂褶多糖 20kD 7份
中分子裂褶多糖 100kD 0.1份
大分子裂褶多糖 1200kD 0.05份

[0082] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0083] (1)将80份的超纯水加入锅中，升温至80℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌5min，加入小分子裂褶多糖搅拌5min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌30min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0084] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入80份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入50份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入30份的85vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并三次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0085] 实施例7

[0086] 本实施例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0087] 名称 平均分子量 重量份数小分子裂褶多糖 20kD 5份
中分子裂褶多糖 100kD 1份
大分子裂褶多糖 1200kD 1份

[0088] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0089] (1)将120份的超纯水加入锅中，升温至85℃后保温，加入小分子裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0090] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入50份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0091] 对比例1

[0092] 本对比例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0093]

[0094]

[0095] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0096] (1)将150份的超纯水加入锅中，升温至90℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌10min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0097] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入50份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入50份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0098] 对比例2

[0099] 本对比例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0100]名称 平均分子量 重量份数
低聚裂褶多糖 5kD 0.2份
小分子裂褶多糖 20kD 5.5份
大分子裂褶多糖 1200kD 1.3份

[0101] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0102] (1)将120份的超纯水加入锅中，升温至85℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入小分子裂褶多糖搅拌5min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌20min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0103] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入50份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入40份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0104] 对比例3

[0105] 本对比例提供一种含不同分子量裂褶多糖的组合物，所述含不同分子量裂褶多糖的组合物按重量份数计包括如下组分：

[0106]名称 平均分子量 重量份数
低聚裂褶多糖 5kD 0.2份
小分子裂褶多糖 20kD 5.4份
中分子裂褶多糖 100kD 1.4份

[0107] 所述含不同分子量裂褶多糖的组合物的制备方法包括以下步骤：

[0108] (1)将150份的超纯水加入锅中，升温至90℃后保温，加入低聚裂褶多糖搅拌2min，加入中分子裂褶多糖搅拌20min，最后加入大分子裂褶多糖搅拌30min，得到裂褶多糖的混合溶液；

[0109] (2)向裂褶多糖的混合溶液加入60份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；再向混合溶液加入50份的90vol％的乙醇水溶液，搅拌后静置，待沉淀析出过滤，收集；合并两次沉淀物，得到所述含不同分子量裂褶多糖的组合物。

[0110] 试验例1

[0111] 刺激性测试机评估方法(皮肤封闭性斑贴试验)

[0112] 测试样品：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物；

[0113] 测试方法：1、接受试者入选标准选择参加试验人员100名，随机分为10组，每组10人。2、选用合格的斑试器，取实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物样品分别采用超纯水稀释1倍后，取15μL滴于斑试器内，并选取一组为空白对照，将斑试器用胶带贴敷受试者前臂曲侧，持续24h。3、分别于去除受试物斑试器后48h后观察皮肤反应，皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准如表1所示，具体测试结果如表2所示：

[0114] 表1

[0115]

[0116] 表2

[0117]

[0118]

[0119] 由表1测试结果可知，在皮肤封闭性斑贴试验中，贴试添加本发明所述含不同分子量裂褶多糖的组合物48h后，受试者均未表现任何反应无不良反应，如红斑、烧灼感或瘙痒等症状。通过封闭型斑贴测试表明，本发明所述含不同分子量裂褶多糖的组合物对皮肤无刺激性。

[0120] 试验例2

[0121] 体外称重法保湿性能测

[0122] 测试样品：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物；

[0123] 测试方法：分别将实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物采用超纯水稀释为0.1wt％的溶液进行体外称重法保湿性能测；称取每组待测样品的0.2g溶液，分别均匀涂敷在贴有微孔通气胶带的5cm×5cm的玻璃板上，并将玻璃板放入恒温恒湿的干燥器中，分别称量玻璃板放置4h和8h后的质量，计算其保湿率。保湿率计算公式为：

[0124] 保湿率/％＝(M2‑M0)/(M1‑M0)×100％。

[0125] 其中，M0为玻璃板板质量/g，M1为加样后玻璃板质量/g，M2为干燥器中放置若干小时后玻璃板质量/g。

[0126] 具体测试结果如表3所示：

[0127] 表3

[0128]

[0129]

[0130] 由表3测试结果可知，本发明所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物具有很好的保湿性能和长效保湿性能，4h的保湿率在94％以上，8h的保湿率在85％以上；尤其是实施例1‑3制备的组合物，4h的保湿率在96％以上，8h的保湿率在90％以上。

[0131] 而对比例1‑3制备的组合物其保湿率和保湿稳定性均不理想，说明本发明所述的组合物由不同分子量的裂褶多糖组成，并通过优选配比，使得各分子量的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，能够从根本上缓解皮肤干燥和水分流失问题，进而提升皮肤紧致弹性，更快促进皮肤红肿的修复。

[0132] 试验例3

[0133] 保湿功效测试验证

[0134] 测试样品：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物；

[0135] 测试原理：进行皮肤水分含量及皮肤水分流失(TEWL)试验，水分测试采用的是世界公认的 法——电容法，皮肤水分流失TEWL对评估皮肤水分保护层的功能是非常重要的参数，在国际上已经得到了非常广泛的认可；皮肤保护层越完好，水分的含量就会越高，皮肤水分流失TEWL的数值就越低。

[0136] 测试方法：

[0137] (1)选取皮肤健康且类型相同人群100名，年龄在18‑45岁，随机分成10组，每组10名，经专业人员培训后进行实验，受试者均无皮肤病史，受试部位正常，且受试期间不涂抹任何与实验无关的药物或者化妆品。测试环境温度控制在25±1℃，相对湿度为40±5％，测试前使用36℃左右的纯净水擦拭受试者双臂，让受试者在测试环境下静坐30min后进行测试；

[0138] (2)将实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物溶解在超纯水中，质量浓度为0.1％，并设定空白对照。在每个受试者手臂内侧距手掌基部5cm处标记受2
试区域，区域大小般为4×4cm ，在同一受试者手臂上标记多个区域，每个区域间隔1cm左右。每10个受试者一组测试一个实施例或对比例的样品。在同一个受试手臂的不同受试区域涂覆受试样品和空白对照，受试样品、空白对照涂抹时均随机分布。测定每个受试区的原始值后，每个受测区域涂抹受试液约500μL，涂抹6h后用仪器测量受试区域的皮肤水分散失量，以保湿相对值而评价裂褶多糖的组合物保湿性能。所有实验数据均在取得稳定数据后
2
读数，测量值为6次读数的平均值，并记录每组的使用前后TEWL值(g/hm)的平均再计算出TEWL值的变化值；

[0139] 变化值＝(使用前水分流失量平均值‑使用后水分流失量平均值)，此值越大，说明水分流失越小，试验样品皮肤保湿能力和屏障功能越强；

[0140] 具体测试结果如表4所示：

[0141] 表4

[0142]

[0143] 由表4测试结果可知，本发明所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物具有很好的保湿能力和修复皮肤屏障的功能，使用6h后TEWL的变化值在5以上；尤其是实施例1‑3制备的组合物，使用6h后TEWL的变化值在6以上。

[0144] 而对比例1‑3制备的组合物保湿能力和修复皮肤屏障的功能不理想。这充分本发明所述含不同分子量裂褶多糖的组合物针对皮肤表皮各层的保湿需求，科学定制复合保湿配方，分别对角质层、表皮和真皮上层不同层次定制科学的保湿方案，达到减少经皮失水率、增强内在细胞水循环、强化表层锁水屏障等度的全效保湿呵护。

[0145] 试验例4

[0146] 抗氧化性能测试

[0147] 测试样品：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物；

[0148] 测试方法：试验参照Larrauri JA中规定的方法，配制20mmol/L的DPPH溶液；受试样品溶液：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物溶解在超纯水中，得到质量浓度为0.3％的溶液。取受试样品溶液2.0mL及20mmol/L的DPPH溶液2.0mL于试管之中，混匀后反应30min，于517nm下测定吸光度值，无水乙醇为空白对照，根据吸光度值计算DPPH抑制率。

[0149] DPPH自由基抑制率(％)＝[1‑(A1‑A2)/A3]×100％；

[0150] 其中，A1为2.0mL的DPPH溶液与2.0mL受试样品溶液的吸光度，A2为2.0mL受试样品溶液与2.0mL无水乙醇的吸光度，A3为2.0mL的DPPH溶液与2.0mL无水乙醇的吸光度，平行测试三次取平均值；

[0151] 具体测试结果如表5所示：

[0152] 表5

[0153]

[0154] 由表5测试数据可知，本发明所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物具有很好的抗氧化和清除DPPH自由基的能力，DPPH自由基抑制率在70％以上；尤其是实施例1‑3制备的组合物，DPPH自由基抑制率在76％以上。

[0155] 而对比例1‑3制备的组合物其抗氧化均不理想，说明本发明所述的组合物由不同分子量的裂褶多糖组成，并通过优选配比，使得各分子量的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，进一步提高抗氧化和清除DPPH自由基的能力，从而达到延缓由于皮肤氧化而导致的衰老问题。

[0156] 试验例5

[0157] 抗炎抗过敏性能测试

[0158] 测试样品：实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物；

[0159] 测试原理：人外周血嗜碱性(KU812)细胞常被用作研究过敏反应的效应细胞，采用KU812细胞组胺释放模型，考查样品对KU812细胞组胺释放的影响；并采用KU812细胞组胺释放模型，考查样品对KU812细胞促炎细胞因子表达的影响。

[0160] 测试方法：

[0161] (1)受试样品配制及处理：以DMSO配制实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物溶液，质量浓度为10％，10％胎牛血清培养基稀释至裂褶多糖的组合物浓度为0.3％。

[0162] 细胞培养及模型建立：用含10％胎牛血清的IMDM培养基进行稀释细胞，将细胞密6
度调整为2.2×10个/mL，然后将得到的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种量为180μL。

[0163] 分为模型对照组、裂褶多糖的组合物实验组、空白对照组、每组设3个平行，37℃、5％CO2培养箱培养静置10min，裂褶多糖的组合物实验组分别加入受试样品20μL，空白对照组和模型对照组分别加入20μL培养液，置培养箱中预温孵，2h后除细胞空白对照组外，各组细胞加入刺激剂40nM巴豆醇‑12‑十四烷酸酯‑13‑乙酸酯(PMA)、1μm钙离子载体A23187，PMA和A23187使用DMSO配制。空白对照组加入同体积含等浓度DMSO培养基。

[0164] 指标检测：2h后离心分离细胞，收集细胞上清液，测定上清液中组胺含量，方法按组胺ELISA检测试剂盒说明书进行；组胺释放抑制率(％)＝(模型组组胺含量‑实验组组胺含量)/模型组组胺含量×100％。

[0165] (2)受试样品配制及处理：以DMSO配制实施例1‑7和对比例1‑3提供的含不同分子量裂褶多糖的组合物溶液，质量浓度为10％，10％胎牛血清培养基稀释至裂褶多糖的组合物浓度为0.3％。

[0166] 细胞培养及模型建立：用含10％胎牛血清的IMDM培养基进行稀释KU812细胞，将细6
胞密度调整为2.2×10个/mL，然后将得到的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种量为180μL。

[0167] 分为模型对照组、裂褶多糖的组合物实验组、空白对照组、每组设3个平行，37℃、5％CO2培养箱培养静置10min，裂褶多糖的组合物实验组分别加入受试样品20μL，空白对照组和模型对照组分别加入20μL培养液，空白对照组和模型对照组分别加入20μL培养液，置培养箱中预温孵，2h后除细胞空白对照组外，各组细胞加入刺激剂40nM PMA、1μmA23187，PMA和A23187使用DMSO配制。空白对照组加入同体积含等浓度DMSO培养基；

[0168] 指标检测：培养2h后离心分离细胞，收集细胞上清液，测定细胞上清液中TNF‑α的含量，具体方法按R&D ELISAKit说明书步骤进行；TNF‑α表达抑制率(％)＝(模型组TNF‑α含量‑实验组TNF‑α含量)/模型组TNF‑α含量×100％。

[0169] 具体测试结果如表6所示：

[0170] 表6

[0171]

[0172]

[0173] 由表6测试数据可知，本发明所述的含不同分子量裂褶多糖的组合物具有很好的抗炎和抗过敏的能力，组胺释放抑制率在70％以上，炎症因子TNF‑α表达抑制率在70％以上；尤其是实施例1‑3制备的组合物，组胺释放抑制率在77％以上，炎症因子TNF‑α表达抑制率在80％以上。

[0174] 而对比例1‑3制备的裂褶多糖的组合物其抗炎和抗过敏的能力均不理想，说明本发明所述的组合物由不同分子量的裂褶多糖组成，并通过优选配比，使得各分子量的裂褶多糖不仅各司其职，而且相互配合协同增效，进一步提高抑制组胺的能力，从而起到抑制毛细血管通透性提高及组胺释放导致的炎症及过敏现象的发生；同时能够在多个炎症细胞中抑制炎症因子表达；也能够抑制炎性介质的释放。

[0175] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的所述含不同分子量裂褶多糖的组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。