一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料

摘要

本发明涉及一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，其中含有发酵剂，所述发酵剂组分包括：枯草芽孢杆菌15％‑20％、布氏乳杆菌TZ‑LB‑01715％‑20％、屎肠球菌10％‑15％、酿酒酵母20％‑25％、酸性蛋白酶5％‑15%、木聚糖酶6％‑12%、果胶酶5％‑15%；各益生菌和酶制剂的活性为：枯草芽孢杆菌2×1010CFU/g、布氏乳杆菌TZ‑LB‑0172×1010CFU/g、屎肠球菌1×1010CFU/g、酿酒酵母2×109CFU/g、酸性蛋白酶5×104U/g、木聚糖酶1×104U/g、果胶酶3×103 U/g。该发酵剂对副溶血弧菌具有明显的抑菌效果，能促进对虾生长，显著减少虾苗早期死亡。

权利要求

1.一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，所述发酵饲料中含有发酵剂，其特征在于，所述发酵剂的组分包括：枯草芽孢杆菌15％‑20％、布氏乳杆菌TZ‑LB‑017 15％‑

20％、屎肠球菌10％‑15％、酿酒酵母20％‑25％、酸性蛋白酶5％‑15%、木聚糖酶6％‑12%、果

10

胶酶5％‑15%；其中，所述各益生菌和酶制剂的活性分别为：枯草芽孢杆菌2×10 CFU/g、布

10 10 9

氏乳杆菌TZ‑LB‑017 2×10 CFU/g、屎肠球菌1×10 CFU/g、酿酒酵母2×10 CFU/g、酸性蛋

4 4 3

白酶5×10U/g、木聚糖酶1×10U/g、果胶酶3×10 U/g；

其中所述布氏乳杆菌（Lactobacillus buchneri）TZ‑LB‑017，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年3月23日，保藏编号为CGMCC No.22054。

2.根据权利要求1所述提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，其特征在于，所述发酵饲料的制备方法为：0.05‑0.2Kg发酵剂、基础原料50‑200kg、红糖5‑50kg、水10‑50kg，混合后搅拌均匀，常温下密闭发酵三天。

3.根据权利要求2所述提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，其特征在于，所述基础原料包括：菜籽饼10％‑20％、豆粕45％‑55％、鱼粉16％‑26％、麸皮5％‑20％、玉米蛋白粉5％‑20％。

4.根据权利要求3所述提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，其特征在于，所述基础原料包括：菜籽饼15％、豆粕50％、鱼粉20％、麸皮8％、玉米蛋白粉7％。

说明书

一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料

技术领域

[0001] 本发明涉及饲料技术领域，具体涉及一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料。技术背景

[0002] 随着我国水产养殖规模化、集约化的发展，养殖水体环境遭到了严重的污染，水产养殖的病害发生率在不断提高，水产养殖的产品质量也在不断下降。虽然现在已经禁止在饲料中添加抗生素等药物，但是以前长期使用抗生素饲料会影响水产动物对病原菌及有害微生物产生抗性。那么在不能使用抗生素的情况下，如何解决水产动物疾病的问题是当前养殖行业面临的重大难题。

[0003] 南美白对虾是我国水产养殖中的绝对优势品种。南美白对虾原产于南太平洋沿岸水域，为热带经济虾类，经科研人员不断探索、研究和试验，南美白对虾的虾苗经过逐渐淡化后，能在淡水中进行大量养殖。然而，由于近些年的抗生素滥用和水质的污染，南美白对虾在养殖过程中的疾病有很多种，给养殖户带来巨大的经济损失。已有研究表明，其常见疾病包括：白斑综合症、对虾红体病、肌肉坏死（白浊）病、红腿病、黄鳃病、烂鳃病等。值得注意的是，最常见的对虾早期死亡综合症的爆发与副溶血弧菌有关，具有发病范围广、发病速度快、发病季节不明显的特点；症状上早期为红腿红尾、肝胰脏发红、红须断须、肠胃发红等，后期则一般表现为空肠、空胃、肝胰脏萎缩、红体、偷死等。

[0004] 副溶血弧菌又称嗜盐菌，适宜的生长条件温度为37℃，酸碱度为pH7.4‑pH8。副溶血弧菌分布极广，主要生活在海水和鱼虾、贝壳甲壳动物中，通常引起胃肠感染，也可以引起肠道外感染。近几年来，南美白对虾早期死亡综合症的病原菌主要是副溶血弧菌。在对虾养殖中，患病对虾体色呈白浊微红，多数肝胰脏肿大，质地松软，颜色呈淡白或淡黄色，部分患病对虾的肝胰脏明显萎缩。通常随池塘水在缓慢流动或趴伏于池塘边坡上，失去食欲，空肠空胃，该病病情发展十分迅速，死亡率和排塘率极高，从少量发病到排塘，时间最短仅2—3天。

[0005] 副溶血弧菌的致病机理为副溶血弧菌产生溶血毒素使对虾多种细胞发生溶血；副溶血弧菌有肠毒素作用，导致对虾消化道组织损伤，回肠糜烂，胃粘膜炎，甚至肝胰脏、消化功能紊乱；副溶血弧菌产生脲酶，使对虾肠液积聚产生肠道积水，严重者可能出现拉白便现象；副溶血弧菌的胞外产物可使对虾免疫力明显下降，生长速度慢，以致易引发其他多种疾病。

[0006] 生物发酵饲料是一种可替代添加抗生素的饲料。这种饲料添加有活菌制剂、植物提取物、有机酸、抗菌肽等，其产品的健康性远远高于添加抗生素的饲料。饲料中的微生物具有代谢作用，可通过降解多糖、蛋白质、脂肪等产生有机酸、可溶性多糖等小分子物质，既能促进吸收，又含有丰富的营养物质，同时适口性好，对改善水产养殖水体污染的问题有着促进作用。但目前市场上还没有可用于防治南美白对虾副溶血弧菌的生物发酵饲料。

发明内容

[0007] 为了解决以上问题，本发明提出一种提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料。

[0008] 本发明提供的提高对虾养殖存活率和生长速度的发酵饲料，所述发酵饲料中含有发酵剂，所述发酵剂的组分包括：枯草芽孢杆菌15%‑20％、布氏乳杆菌TZ‑LB‑017 15%‑20％、屎肠球菌10%‑15％、酿酒酵母20%‑25％、酸性蛋白酶5%‑15%、木聚糖酶6%‑12%、果胶酶
10
5%‑15%；其中，所述各益生菌和酶制剂的活性分别为：枯草芽孢杆菌2×10 CFU/g、布氏乳杆
10 10 9
菌TZ‑LB‑017 2×10 CFU/g、屎肠球菌1×10 CFU/g、酿酒酵母2×10CFU/g、酸性蛋白酶5×
4 4 3
10U/g、木聚糖酶1×10U/g、果胶酶3×10 U/g。

[0009] 其中所述布氏乳杆菌TZ‑LB‑017，分类命名为布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2021年3月23日，保藏编号为CGMCC No.22054。

[0010] 进一步，所述发酵饲料的制备方法为：0.05‑0.2Kg发酵剂、基础原料50‑200kg、红糖5‑50kg、水10‑50kg，混合后搅拌均匀，常温下密闭发酵三天。

[0011] 进一步，所述基础原料包括：菜籽饼10%‑20％、豆粕45%‑55％、鱼粉16%‑26％、麸皮5%‑20％、玉米蛋白粉5%‑20％。

[0012] 优选地，所述基础原料包括：菜籽饼15％、豆粕50％、鱼粉20％、麸皮8％、玉米蛋白粉7％。

[0013] 本发明的有益效果如下：

[0014] 1、本发明的发酵剂中采用了本发明人从养殖场猪粪便中筛选得到的布氏乳杆菌TZ‑LB‑017，该布氏乳杆菌与常规乳酸菌或市售布氏乳杆菌相比，在发酵过程中能够产生具有较高浓度的苯乳酸，在产酸、抑制有害菌及与其它益生菌的协同作用方面有显著优势。本发明发现将布氏乳杆菌TZ‑LB‑017与其他菌和酶复配获得的发酵剂对副溶血弧菌具有明显的抑菌效果：实施例1的平板点种法证明本发明的发酵剂与常用发酵剂相比对副溶血弧菌具有抑菌作用。

[0015] 2、采用本发明的发酵剂制备的发酵饲料，对南美白对虾的存活率、生长速度、采食活跃度、饵料效率都有显著提高作用，说明本发明的发酵剂制备的发酵饲料能显著提高对虾肠道定植的优势菌群种类和数量，提高对虾免疫力，对副溶血弧菌的抗病力显著提高，显著减少虾苗早期死亡的情况，改善对虾健康状态，在生产中能实现饲料中不用抗生素而提高对虾养殖的经济效益。

附图说明

[0016] 图1为实施例1的平板点种法验证本发明的发酵剂对副溶血弧菌具有抑菌作用；

[0017] 图2为实施例3的大群养殖试验中45天的南美白对虾对比。

具体实施方式

[0018] 以下结合实施例对本发明作进一步说明。

[0019] 实施例1：发酵剂的抑菌试验

[0020] 1.1培养基和发酵剂的配制

[0021] 液体培养基：每 100 ml 过滤后的海水中加入0.5g 蛋白胨（Typtone）、0.1 g 酵母膏（Yeast Extract）、0.001 g 四水合磷酸铁（Fe PO4•4H2O）、调节 pH 至 7.6‑7.8，经高压蒸汽灭菌器高温高压（121 ℃，20 min）灭菌后，保存于 4 ℃层析柜备用。

[0022] 固体培养基：每 100 ml 过滤后的海水中加入 0.5g 蛋白胨（Typtone），0.1 g 酵母膏（Yeast Extract），0.001 g 四水合磷酸铁（Fe PO4•4H2O），2 g 琼脂（Agar Powder），经高压蒸汽灭菌器高温高压（121℃，20 min）灭菌后，待培养基温度降至约 50℃时，在无菌超净工作台中倒板，每个平板约 15 ml，待其晾干后保存于 4 ℃层析柜备用。

[0023] 发酵剂：所述发酵剂的组分包括：枯草芽孢杆菌15%‑20％、布氏乳杆菌TZ‑LB‑017 15％‑20％、屎肠球菌10％‑15％、酿酒酵母20％‑25％、酸性蛋白酶5％‑15%、木聚糖酶6％‑
12%、果胶酶5％‑15%；其中，所述各益生菌和酶制剂的活性分别为：枯草芽孢杆菌2×
10 10 10
10 CFU/g、布氏乳杆菌TZ‑LB‑017 2×10 CFU/g、屎肠球菌1×10 CFU/g、酿酒酵母2×
9 4 4 3
10CFU/g、酸性蛋白酶5×10U/g、木聚糖酶1×10U/g、果胶酶3×10 U/g。

[0024] 其中所述布氏乳杆菌TZ‑LB‑017，分类命名为布氏乳杆菌Lactobacillus buchneri，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2021年3月23日，保藏编号为CGMCC No.22054。

[0025] 1.2试验方法

[0026] 常规发酵剂：枯草芽孢杆菌10％，植物乳杆菌9％，酿酒酵母30％，粪肠球菌10%，纤维素酶30%，木聚糖酶11%。

[0027] 分别取2g本发明中的发酵剂和常规发酵剂加入少量过滤后的海水活化后，分别转接到装有200 ml液体培养基的锥形瓶中，于 28 ℃恒温培养箱中培养12 h，备用。

[0028] 取实验室保存的一株副溶血弧菌 III‑1 作为指示菌，活化后转接于装有 100 ml 的液体培养基的锥形瓶中培养过夜。

[0029] 取 100 μl 的 III‑1 菌液涂布于固体培养基上，然后用无菌镊子夹取 4片的 r= 6 mm 的无菌滤纸片在涂布指示菌的平板上等距离放置，分别取 8 μl 发酵剂滴于其中两片滤纸片上（P1/P2），E1和E2为常规发酵剂，24 h 后取平板观察滤纸片周围是否有出现抑菌圈。

[0030] 1.3 试验结果

[0031] 如图1所示，平板点种法实验结果表明，与常用发酵剂相比，本发明的发酵剂对副溶血弧菌具有拮抗作用。

[0032] 实施例2 对虾的实验室内养殖试验

[0033] 配制发酵饲料： 0.1Kg发酵剂、基础原料150kg、红糖25kg、水25kg，混合后搅拌均匀，常温下密闭发酵三天。所述基础原料包括：菜籽饼15％、豆粕50％、鱼粉20％、麸皮8％、玉米蛋白粉7％。

[0034] 随机取南美白对虾虾苗840尾分到6 个水体为 0.4 m3的室内圆形水泥池中，每个池子 140 尾。在正式分组饲喂开始之前暂养 15 天，并在暂养期间取样检测其可能携带的病原。 试验设空白对照组、试验组，每组 3 个平行。试验对虾虾苗每天投喂 3 次（8点、下午2点 和 晚上8点），投喂量为对虾虾苗体重的 3% 5%（随养殖时间而增加）。其中空白对照~组投喂普通饲料；试验组以 60 d 为周期，前 30 d 投喂发酵饲料，后 30 d投喂普通饲料。
水体的温度为 24‑27℃，水体的盐度为 15（±1），pH 8.1（±0.1），连续充气，每天检查对虾虾苗摄食及存活情况，及时取出死亡对虾。

[0035] 测量各组对虾虾苗初始体重和试验结束时的体重，计算各组对虾虾苗的特定生长率；在试验结束时，计算对虾存活率；

[0036] 存活率(%)=成活尾数/总尾数×100%；

[0037] 结果显示：养殖 60 d 时各组对虾存活率，其中对照组的存活率仅为(25.5±1.8)%，而投喂发酵饲料组对虾存活率达(79.3±7.6)%，有极显著差异(P<0.01)。

[0038] 实施例3 水产大群养殖试验

[0039] 发酵饲料制作同实施例2。

[0040] 本试验在江苏省苏州市进行，试验池塘为 4个对虾大棚养殖池塘，池塘面积大小均为 5 亩，池塘的底质和水文条件完全相同。 1号、3号塘作为试验组，持续拌饵投喂生物发酵饲料（发酵饲料与普通饲料的投喂比例见表2）；2号、4 号池塘作为对照组，全程投喂普通饲料。整个试验过程中，4 个虾塘常规养殖操作相同，试验期间大棚中气温平均 23.8℃， 试验周期为  60d。试验选择规格大小健康状况相同的虾苗进行试验。

[0041] 测量指标：虾苗生长情况：在试验中每隔 15 天，分别从各个虾池中随机取 50 尾虾，观察虾体色、肠道和肝胰脏形状、颜色，并测量体长、体重，进行记录。 在试验结束时，对收获的试验虾测量体长、体重并记录。

[0042] 吃料时间：每个池塘在对角位置分别放置 1 个料台，料台中饲料量按照当餐投饵总量的1% 放置，每天观察记录料台中饲料吃净的时间。

[0043] 饵料效率：每天记录投饵量，试验结束时，计算总投喂量和收虾量。

[0044] 结果显示：养殖过程中观察到，试验组虾苗体色透明，头胸甲黑色斑点数量较少，肠道饱满，肝胰脏轮廓清晰，颜色红褐色，粪便长度正常，不易碎。 而对照组虾体颜色较深，部分体色微红，甲壳上黑色斑点较多，易产生应激反应而抽搐，肠道较细，肝胰脏轮廓清晰，体积偏大，颜色偏红，对虾粪便长度短而颜色深。

[0045] 3.1 生长速度：由表3和图2可以看出，投喂发酵饲料的试验组，对虾生长速度要明显高于对照组。

[0046]

[0047] 3.2饵料效率及成活率

[0048] 通过每天统计对虾摄食时间发现试验组对虾摄食时间缩短，说明对虾摄食行为活跃，同时证明发酵饲料的诱食效果明显。经过 60 天的养殖，试验组两口池塘（1 号、3 号塘）共收获对虾 3401Kg，饵料效率达到 1.14；而对照组两口池塘 （2 号、4 号塘）共收获对虾 2773 Kg，饵料效率为 1.03。根据对虾收获量和单体平均重计算各试验组对虾成活率，说明该发酵饲料可提高成活率3.1个百分点，提高饵料效率0.11。

[0049] 投喂生物发酵饲料的试验组虾苗成活率为 67.1%，经济效益为6134元/亩（见表4），而对照组虾苗成活率为 64.0%，经济效益为5351元/亩。

[0050] 以上试验证明，在南美白对虾养殖过程中投喂经过本发明的发酵剂发酵的饲料，能显著提高对虾肠道定植的优势菌群种类和数量，提高对虾免疫力，对副溶血弧菌的抗病力显著提高，显著减少虾苗早期死亡的情况，改善对虾健康状态，试验组虾苗体色透明，摄食时间缩短，能显著的促进幼虾的生长，提高虾苗成活率及饵料效率，显著提高养殖户的经济效益。

[0051] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

[0052] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。