免疫磁珠的保存体系以及免疫磁珠体系

摘要

本发明公开了一种免疫磁珠的保存体系以及免疫磁珠体系，免疫磁珠的保存体系包括保存液和凝胶产生剂，保存液包括稳定剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。这种免疫磁珠的保存体系在使用时，将免疫磁珠与保存液混合，接着加入凝胶产生剂后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系，接着将凝胶体系转移至2℃～6℃的环境下保存，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的长期保存。结合实施例部分的数据，这种免疫磁珠的保存体系在长时间保存免疫磁珠后，免疫磁珠上的免疫配基依然具有足够的活性。

权利要求

1.一种免疫磁珠试剂组合，其特征在于，包括免疫磁珠以及免疫磁珠保存用试剂组合；

所述免疫磁珠保存用试剂组合包括保存液和凝胶产生剂，所述保存液包括稳定剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，所述缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液，所述保存液的pH为6.5 8.5；

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所述凝胶产生剂用于与所述保存液混合后，使得所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液转变成凝胶体系；

所述凝胶产生剂为硅酸钠溶液，所述凝胶体系中，硅酸钠的质量浓度为10% 30%；

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所述免疫磁珠保存用试剂组合还包括盐酸溶液或氯化铵溶液；

所述凝胶产生剂与所述保存液混合后，向所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液中加入所述盐酸溶液或所述氯化铵溶液，使得所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液转变成凝胶体系；

所述免疫磁珠保存用试剂组合还包括凝胶溶解剂，所述凝胶溶解剂用于与所述凝胶体系混合后，使得所述凝胶体系恢复流动性；

所述凝胶溶解剂为乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的溶质为质量浓度为20% 80%的乙醇~和摩尔浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的盐酸。

2.根据权利要求1所述的免疫磁珠试剂组合，其特征在于，所述盐酸溶液的浓度为

4mol/L 12mol/L，所述氯化铵溶液为饱和氯化铵溶液。

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3.根据权利要求1或2所述的免疫磁珠试剂组合，其特征在于，所述稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇，所述可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，所述糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，所述多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种；

所述凝胶体系中，所述可溶性蛋白的质量浓度为0.5% 3%，所述糖的质量浓度为0.2%~ ~

3%，所述多元醇的质量浓度为0.2% 3%；

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所述防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种；

所述凝胶体系中，所述防腐剂的质量浓度为0.1% 0.15%。

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说明书

免疫磁珠的保存体系以及免疫磁珠体系

技术领域

[0001] 本发明涉及化学发光检测技术领域，尤其是涉及一种免疫磁珠的保存体系以及包括该免疫磁珠的保存体系的免疫磁珠体系。

背景技术

[0002] 免疫磁珠(Impeti Cbead IMB)也称免疫磁性微球，是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心外层包裹一层高分子料，最外层是免疫配基。免疫配基通过生物高分子的功能基团结合到磁性载体微球上形成免疫磁珠。由于载体微球制备材料和方法不同，其表现出的物理性质也不同，从而可结合不同的免疫配基，如抗原、抗体、凝集素、DNA和RNA等。

[0003] 一般来说，免疫磁珠需要保存在保存体系中，以避免干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，并且由于免疫磁珠密度远大于水，在保存体系中往往易出现结块等现象。而上述现象的出现，容易导致免疫磁珠在保存体系中分散不均，从而可能会导致对后续的检测结果的准确性造成影响。

[0004] 传统的解决方案一般是在免疫磁珠使用前，对含有免疫磁珠的保存体系进行充分震荡混合，同时在保存体系中添加终浓度为0.01％～0.1％(v/v)的非离子型去垢剂(例如，NP‑20、Tween‑20或Tween X‑20)，从而将结块的免疫磁珠重新分散到保存体系中。

[0005] 然而，上述解决方案对于保存时间较长的含有免疫磁珠的保存体系中出现的免疫磁珠结块问题效果不佳，主要原因在于免疫磁珠结块时间过长后导致的免疫磁珠结合牢固，从而很难被震荡分散。

发明内容

[0006] 基于此，有必要提供一种可以解决上述问题的免疫磁珠的保存体系。

[0007] 此外，还有必要提供一种包括上述免疫磁珠的保存体系的免疫磁珠体系。

[0008] 一种免疫磁珠的保存体系，包括保存液和凝胶产生剂，所述保存液包括稳定剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，所述保存液的pH为6.5～8.5；

[0009] 所述凝胶产生剂用于与所述保存液混合后，使得所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0010] 在一个实施例中，所述凝胶产生剂为硅酸钠溶液，所述凝胶体系中，所述硅酸钠的质量浓度为10％～30％。

[0011] 在一个实施例中，所述硅酸钠溶液与所述保存液混合后，向所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液中通入二氧化碳气体，使得所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0012] 在一个实施例中，所述免疫磁珠的保存体系还包括盐酸溶液或氯化铵溶液；

[0013] 所述硅酸钠溶液与所述保存液混合后，向所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液中加入所述盐酸溶液或所述氯化铵溶液，使得所述凝胶产生剂和所述保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0014] 在一个实施例中，所述盐酸溶液的浓度为4mol/L～12mol/L，所述氯化铵溶液为饱和氯化铵溶液。

[0015] 在一个实施例中，所述缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液或浓度为10mmol/L～100mmol/L的PBS缓冲液。

[0016] 在一个实施例中，所述免疫磁珠的保存体系还包括凝胶溶解剂，所述凝胶溶解剂用于与所述凝胶体系混合后，使得所述凝胶体系恢复流动性。

[0017] 在一个实施例中，所述凝胶溶解剂为质量浓度为20％～80％的乙醇水溶液。

[0018] 在一个实施例中，所述稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇，所述可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，所述糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，所述多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种；

[0019] 所述凝胶体系中，所述可溶性蛋白的质量浓度为0.5％～3％，所述糖的质量浓度为0.2％～3％，所述多元醇的质量浓度为0.2％～3％；

[0020] 所述防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种；

[0021] 所述凝胶体系中，所述防腐剂的质量浓度为0.1％～0.15％。

[0022] 一种免疫磁珠体系，包括免疫磁珠以及上述的免疫磁珠的保存体系。

[0023] 这种免疫磁珠的保存体系在使用时，将免疫磁珠与保存液混合，接着加入凝胶产生剂后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系，接着将凝胶体系转移至2℃～6℃的环境(免疫磁珠的常规保存环境)下保存，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的长期保存。

[0024] 结合实施例部分的数据，这种免疫磁珠的保存体系在长时间保存免疫磁珠后，免疫磁珠上的免疫配基依然具有足够的活性。

具体实施方式

[0025] 下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0026] 本发明公开了一实施方式的免疫磁珠的保存体系，包括保存液和凝胶产生剂，保存液包括稳定剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的pH为6.5～8.5。

[0027] 凝胶产生剂用于与保存液混合后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0028] 这种免疫磁珠的保存体系在使用时，将免疫磁珠与保存液混合，接着加入凝胶产生剂后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系，接着将凝胶体系转移至2℃～6℃的环境(免疫磁珠的常规保存环境)下保存，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的长期保存。

[0029] 结合实施例部分的数据，这种免疫磁珠的保存体系在长时间保存免疫磁珠后，免疫磁珠上的免疫配基依然具有足够的活性。

[0030] 需要指出的是，这种免疫磁珠的保存体系在长时间保存免疫磁珠后，需要对免疫磁珠经过简单分离(可以在添加缓冲液或保存液后加热至38℃～42℃并搅拌，接着采用磁铁吸附免疫磁珠)，再重新用上述的保存液混合后，才可以使用。

[0031] 优选的，凝胶产生剂为硅酸钠溶液，凝胶体系中，硅酸钠的质量浓度为10％～30％。

[0032] 具体来说，凝胶产生剂与保存液混合后，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系，可以有多种选择。

[0033] 例如，硅酸钠溶液与保存液混合后，可以向凝胶产生剂和保存液的混合液中通入二氧化碳气体，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0034] 具体来说，将免疫磁珠、保存液和硅酸钠溶液混合后，搅拌状态下通入二氧化碳气体约5min～15min，可得到半透明或白色凝胶。

[0035] 又例如，免疫磁珠的保存体系还包括盐酸溶液或氯化铵溶液。硅酸钠溶液与保存液混合后，可以向凝胶产生剂和保存液的混合液中加入盐酸溶液或氯化铵溶液，使得凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系。

[0036] 优选的，盐酸溶液的浓度为4mol/L～12mol/L，氯化铵溶液为饱和氯化铵溶液。

[0037] 具体来说，将免疫磁珠、保存液和硅酸钠溶液混合后，搅拌状态下，缓慢加入6mol/L的盐酸，待出现白色浑浊后，再慢慢地滴加6mol/L的盐酸，直至得到半透明或白色凝胶。

[0038] 具体来说，将免疫磁珠、保存液和硅酸钠溶液混合后，搅拌状态下，缓慢加入饱和氯化铵溶液，得到半透明或白色凝胶。

[0039] 需要指出的是，凝胶产生剂和保存液的混合液转变成凝胶体系的过程中，需要保持震荡或搅拌状态，从而保证免疫磁珠的分散均匀。

[0040] 优选的，缓冲液为浓度为10mmol/L～200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液或浓度为10mmol/L～100mmol/L的PBS缓冲液。

[0041] 本实施方式中，优选采用Tris‑HCl缓冲液。这是因为，采用Tris‑HCl缓冲液可以避免盐酸加入后导致的pH变化和杂质引入。此外，后续可能使用的凝胶溶解剂中也会有少量盐酸。

[0042] 此外，免疫磁珠的保存体系一般用于免疫磁珠的长期保存，而凝胶体系在经过较长时间后，容易被破坏，一般只需要加热至38℃～42℃后加缓冲液或水搅拌稀释即可溶解。

[0043] 特别情况下，例如中短期保存或长期保存后凝胶体系依然保存较好时。免疫磁珠的保存体系还包括凝胶溶解剂，凝胶溶解剂用于与凝胶体系混合后，使得凝胶体系恢复流动性。

[0044] 具体来说，凝胶溶解剂为乙醇水溶液。

[0045] 更优选的，乙醇水溶液的溶质为质量浓度为20％～80％的乙醇和摩尔浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的盐酸。

[0046] 在实际使用中，凝胶溶解剂也可以自行配置。

[0047] 需要指出的是，本申请中所指出的中短期保存指保存时间在9个月内，长期保存保存时间超过9个月。

[0048] 优选的，稳定剂包括可溶性蛋白、糖和多元醇，可溶性蛋白选自BSA和明胶中的至少一种，糖选自蔗糖和海藻糖中的至少一种，多元醇选自甘油和甘露醇中的至少一种。

[0049] 优选的，凝胶体系中，可溶性蛋白的质量浓度为0.5％～3％，糖的质量浓度为0.2％～3％，多元醇的质量浓度为0.2％～3％。

[0050] 优选的，防腐剂选自Proclin200、Proclin 300、Proclin 950和叠氮钠中的至少一种。

[0051] 优选的，凝胶体系中，防腐剂的质量浓度为0.1％～0.15％。

[0052] 本发明还公开了一种免疫磁珠体系，包括免疫磁珠以及上述的免疫磁珠的保存体系。

[0053] 以下为具体实施例。

[0054] 实施例1

[0055] 配制保存液，并且将免疫磁珠(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)分散到保存液中。保存液包括3wt％的BSA、3wt％的海藻糖、3wt％的甘油、0.3wt％的Proclin200以及200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液，保存液的pH调节至7。

[0056] 配制质量浓度为25％的硅酸钠溶液。

[0057] 按照体积比为1：2，将分散有免疫磁珠的保存液加入到硅酸钠溶液中，接着在搅拌状态下通入二氧化碳气体，直至整个体系变成半透明凝胶，得到免疫磁珠体系。

[0058] 实施例2

[0059] 配制保存液，并且将免疫磁珠(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)分散到保存液中。保存液包括3wt％的BSA、3wt％的海藻糖、3wt％的甘油、0.3wt％的Proclin200以及200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液，保存液的pH调节至8。

[0060] 配制质量浓度为25％的硅酸钠溶液以及6mol/L的盐酸。

[0061] 按照体积比为1：2，将分散有免疫磁珠的保存液加入到硅酸钠溶液中，接着在搅拌状态下缓慢加入盐酸，待出现白色浑浊后，再慢慢地滴加盐酸，直至整个体系变成白色凝胶，得到免疫磁珠体系。

[0062] 实施例3

[0063] 配制保存液，并且将免疫磁珠(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)分散到保存液中。保存液包括3wt％的BSA、3wt％的海藻糖、3wt％的甘油、0.3wt％的Proclin200以及200mmol/L的Tris‑HCl缓冲液，保存液的pH调节至7.5。

[0064] 配制质量浓度为25％的硅酸钠溶液以及饱和氯化铵溶液。

[0065] 按照体积比为1：2，将分散有免疫磁珠的保存液加入到硅酸钠溶液中，接着在搅拌状态下缓慢加入饱和氯化铵溶液，得到半透明或白色凝胶，得到免疫磁珠体系。

[0066] 对比例1

[0067] 配制保存液，并且将免疫磁珠(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)分散到保存液中，得到分散有免疫磁珠的保存液。保存液包括1wt％的BSA、1wt％的海藻糖、1wt％的甘油、0.1wt％的Proclin200以及100mmol/L的Tris‑HCl缓冲液，保存液的pH调节至7。

[0068] 实施例4

[0069] 免疫磁珠体系的保存和分离。

[0070] 实施例1～3制得的免疫磁珠的保存体系以及对比例1制得的分散有免疫磁珠的保存液，各自分成四份，分别存储到4℃冰箱中，分别在1个月、6个月、12个月和18个月取出一份。

[0071] 实施例1～3制得的免疫磁珠的保存体系在取出后，需要将凝胶溶解后对免疫磁珠进行分离和再保存。

[0072] 将凝胶溶解后对免疫磁珠进行分离和再保存的操作大致如下：搅拌状态下，向凝胶中加入含有40wt％的乙醇和0.25mol/L的盐酸的乙醇水溶液，凝胶和乙醇水溶液的体积比为1：1，混合物加热至42℃并充分搅拌至混合物转变成混合液体后，用磁铁吸附容器侧壁后将容器内的混合液体吸出，再加入对比例1中的保存液。其中，磁铁吸附到再加入保存液的操作重复三次，从而得到再保存后的免疫磁珠试剂。

[0073] 同样对对比例1制得的分散有免疫磁珠的保存液进行磁铁吸附到再加入保存液的操作的操作，并且重复三次，得到再保存后的免疫磁珠试剂。

[0074] 对实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂进行观察，结果如下。

[0075] 表1：实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂的观察结果[0076]

[0077] 由表1可以看出，实施例1～3对应的免疫磁珠的保存体系均可以在12个月后依然保证没有结块出现，实施例2和3对应的免疫磁珠的保存体系在18个月后依然保证没有结块出现，实施例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂在18个月后出现少量结块。

[0078] 而对比例1对应的免疫磁珠的保存液在6个月的保存后就出现了少量结块。

[0079] 由此可以看出，实施例1～3的保存体系，可以在较长时间内保证免疫磁珠不出现免疫磁珠结块现象。

[0080] 实施例5

[0081] 再保存后的免疫磁珠的发光测试。

[0082] 在保存12个月时对实施例1～3和对比例1对应的再保存后的免疫磁珠试剂进行发光测试，具体测试流程如下。

[0083] 发光测试流程：依照血栓调节蛋白项目的试剂反应参数，设定化学发光仪参数，并装载上述配制好的吖啶试剂和试剂盒其他组分，上机测试。

[0084] 第一步，将样本、生物标记物试剂和免疫磁珠试剂(超顺磁珠标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20029)混合孵育：样本中的血栓调节蛋白和顺磁性微粒上包被的血栓调节蛋白抗体(君和公司自产，货号为A20029)及生物标记物试剂中的生物标记物(吖啶酯标记的血栓调节蛋白抗体，君和公司自产，货号为A20030)反应，形成夹心(抗体‑抗原‑抗体)复合物。

[0085] 第二步，清洗：在磁场作用下，磁微粒吸附到反应管壁，未结合的物质被清洗液洗去。

[0086] 第三步，激发和读数：在反应复合物中加入预激发液和激发液，通过相对发光强度测定化学发光反应。

[0087] 样本中的血栓调节蛋白的量和测定仪光学系统测定到的相对发光强度(RLU)呈正相关。

[0088] 上述测试结果如下表所示，测试结果与实施例1比较。

[0089] 表1：实施例1～3和对比例1对应的免疫磁珠试剂的发光测试结果[0090]  测试值1 测试值2 均值 偏差
实施例1 18652 18453 18552.5 /
实施例2 19802 19250 19526 5.25％
实施例3 19001 18853 18927 2.02％
对比例1 14364 13956 14160 ‑23.68％

[0091] 由表1可以看出，储存12个月后，实施例1、2和3对应的免疫磁珠试剂均可以保证发光值偏差在10％以内，而对比例1对应的免疫磁珠试剂的发光值出现较大幅度的下降，这与对比例1对应的免疫磁珠试剂在12个月的保存后出现了少量结块有着明显的关系。

[0092] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。