一种杉木叶精油及其应用

摘要

本发明属于医药技术领域，具体公开了杉木叶精油在制备抑制癌细胞增殖的药物中的应用。细胞试验结果表明：杉木叶精油对人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞和人肝癌HepG2细胞均有良好的抑制作用，对人结肠癌HT‑29细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞48h的半数抑制浓度IC50分别为1.28μg/ml、1.28μg/ml；当杉木叶精油浓度大于等于25μg/ml时，对人肺癌A549细胞和人乳腺癌MCF‑7细胞的抑制率达到90%以上，能够用于制备抗癌药物。本发明的杉木叶精油还具有清除DPPH自由基和ABT自由基作用，可作抗氧化添加剂使用，用于化妆品、洗涤用品、食品等制备。

权利要求

1.杉木叶精油在制备抑制癌细胞增殖的药物中的应用，其特征在于，所述癌细胞为人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞或人肝癌HepG2细胞，所述杉木叶精油，由以下步骤制备得到：（1）选用杉科植物杉木的新鲜叶片，去除杂质，用清水冲洗2次，自然风干，粉碎，得到杉木叶粗粉；

（2）称取步骤（1）得到的杉木叶粗粉于玻璃反应釜内中，加水6倍量，加热提取4小时，用精油接收器接收馏出液；

（3）将馏出液装于分液漏斗中，静置4.0小时，回收上层淡黄色透明油状液体；

（4）将步骤（3）得到的淡黄色透明油状液体用无水硫酸钠干燥去除水分，即为杉木叶精油。

说明书

一种杉木叶精油及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，特别涉及一种杉木叶精油及其应用。

背景技术

[0002] 杉叶为杉科杉木属植物杉木的叶。杉木为常绿乔木，高达30cm，叶在主株上辐射伸展。侧枝之叶基部扭转成2列，叶片条状披针形，坚硬，长2 6cm，宽3 5cm，边缘有细齿，雌雄~ ~同株；雄球花簇生枝顶；雌球花单生或簇生枝顶，卵圆形，苞鳞与珠鳞结合而生，苞鳞大，珠鳞先端3裂，腹而具3胚珠。珠果卵圆形，长2.5 5cm，苞鳞革质，三角状卵形，先端尖，边缘有~
细齿，宿存；种鳞形小。生于苞鳞腹面下部；种子扁平，长6 8mm，褐色，两边有窄翅。花期4月，~
球果10月下旬成熟。我国杉木资源丰富，在我国南方分布极广，为我国南方重要经济树种，具有栽培广泛、生长快、材质好、用途广、产量高等特点。为我国南方林区重要的造林树种，木材产量约占全国商品木材的1/4 1/5。杉木既是我国用材林、水源涵养林的重要树种，又~
是特用经济树种，营造杉木林具有较高的社会、生态和经济效益。

[0003] 一方面杉木耐腐力强、防虫性好，被广泛应用于建筑、家具、桥梁、舟船等领域；另一方面杉木中含有丰富的精油，它是无色或微黄色、透明具有芳香气味的液体，具有强有力的龙涎香香气、麝香和木香，一般杉木树干含油量约为0.5%～1.0%和树桩含油量约为0.5%～2.9%，开发杉木资源在精油提取行业中的利用，即可以缓解我国天然植物精油需求量不断增加所带来的压力，部分取代广为应用的柏木油，又可以推动我国林区经济的发展。目前杉木精油主要提取于杉木树干或杉木根，主要成分为柏木脑、柏木醇、雪松醇、松油醇、乙酸杉油酯等，多用于香皂、洗涤剂、清洁卫生工业制品等。目前杉木树干、杉木根都得到较好的应用，而杉木叶主要用来当做燃料或者直接丢弃，利用率低，造成对资源的极大浪费。杉木叶具有祛风、化痰、活血、解毒等药理，杉木叶入药则始见于《本草纲目》，李时珍曰:杉木叶“主治风、虫牙痛。”。开发杉木叶在医药卫生等领域中的应用，对于减少资源浪费、提高其利用价值和经济效益具有重要意义。

[0004] 癌症是一类严重威胁人类健康的重大疾病，化学预防是癌症防治的热点，通过化学或生物物质阻止和减缓癌症的发展，降低癌症的发病率和死亡率。由于目前的抗癌药物毒性及耐药性高，且对某些类型的肿瘤无效，因此需要研发新的化疗药物。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于杉木叶精油在制备抑制癌细胞增殖的药物中的应用，能够有效地抑制癌细胞的增殖。

[0006] 为实现上述目的，本发明提供了杉木叶精油在制备抑制癌细胞增殖的药物中的应用。

[0007] 优选的，上述的应用中，所述癌细胞包括人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞或人肝癌HepG2细胞。

[0008] 优选的，上述的应用中，所述癌细胞为人肺癌A549细胞或人乳腺癌MCF‑7细胞。

[0009] 上述杉木叶精油在抗氧化添加剂中的应用，可用于化妆品、洗涤用品、食品等制备，使其具有抗氧化功效。

[0010] 优选的，上述的应用中，杉木叶精油具有清除DPPH自由基和ABT自由基作用。

[0011] 所述杉木叶精油由以下方法制备得到：

[0012] （1）选用杉科植物杉木的新鲜叶片，去除杂质，用清水冲洗1 2次，粉碎，备用；~

[0013] （2）称取步骤（1）得到的杉木叶粉末，加水5 8倍量，混水蒸馏4.0 6.0h小时，接收~ ~馏出液；

[0014] （3）将馏出液装于分液漏斗中，静置2.0 4.0小时，回收上层淡黄色透明油状液体；~

[0015] （4）用无水硫酸钠干燥去除水分，即为杉木叶精油。

[0016] 与现有的技术相比，本发明具有如下有益效果：

[0017] 1. 本发明的杉木叶精油能够有效抑制癌细胞，具有清除DPPH自由基和ABTS自由基作用，具有抗氧化活性。细胞试验结果表明：杉木叶精油对人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞和人肝癌HepG2细胞均有良好的抑制作用；当杉木叶精油浓度大于等于25μg/ml时，对人肺癌A549细胞和人乳腺癌MCF‑7细胞的抑制率达到90%以上，能够用于制备抗癌药物。本发明的杉木叶精油还具有清除DPPH自由基和ABT自由基作用，可作抗氧化添加剂使用，用于化妆品、洗涤用品、食品等制备。

[0018] 2. 本发明的杉木叶精油，原料易得，制备工艺简单，工艺设备价廉易得，无需添加任何有机溶剂，安全、绿色、环保，有利于杉木叶精油的应用。杉木叶精油中主要成分为β‑芹子烯（10.78%）、α‑芹子烯（7.74%）、α‑桉叶油醇（6.84%）、γ‑木罗烯（6.48%）、δ‑杜松烯（5.91%）等成分，与杉木木材、杉木根精油成分（主要为柏木脑、柏木醇等成分）有明显的差别，具有进一步开发应用的价值。

附图说明

[0019] 图1为本发明实施例1中的杉木叶精油气相色谱‑质谱测定图。

[0020] 图2为本发明应用例2中的杉木叶精油对DPPH自由基清除率。

[0021] 图3为本发明应用例2中的杉木叶精油对ABTS自由基清除率。

具体实施方式

[0022] 下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

[0023] 以下实施例中原料来源：杉叶采自广西贵港市平南县官成镇八宝村, 经广西中医药研究院卢文杰主任药师鉴定为杉科植物杉木Cunninghamia lanceolata (Lamb.) Hook.的叶；1‑二苯基‑2‑苦阱基自由基（DPPH），梯希爱（上海）化成工业发展有限公司，批号：ZZZQK‑EE，纯度:＞97%；2,2‑联氨‑双（3‑乙基苯井噻唑啉‑6‑磺酸）二胺盐（ABTS），麦克林公司，批号：C12819523，纯度：98%。人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞、人肝癌HepG2细胞均购于武汉普诺赛生命科技有限公司。

[0024] 实施例1

[0025] 一种杉木叶精油，由以下步骤制备得到：

[0026] （1）选用杉科植物杉木的新鲜叶片，去除杂质，用清水冲洗2次，自然风干，粉碎，得到杉木叶粗粉；

[0027] （2）称取步骤（1）得到的杉木叶粗粉于玻璃反应釜内中，加水6倍量，加热提取4小时，用精油接收器接收馏出液；

[0028] （3）将馏出液装于分液漏斗中，静置4.0小时，回收上层淡黄色透明油状液体；

[0029] （4）将步骤（3）得到的淡黄色透明油状液体用无水硫酸钠干燥去除水分，即为杉木叶精油。

[0030] 采用气相色谱‑质谱检测分析杉木叶精油成分，仪器为美国Agilent Technologies公司HP6890GC/5973MS气相色谱‑质谱联用仪。GC条件：HP‑5MS程序升温3℃/min至80℃石英毛细管柱(30mm*0.25mm*0.25mm)；柱温：起始温度40℃，程序升温3℃/min至
80℃，再程序升温5℃/min至280℃，保持20min；柱流量为1.0ml/min；进样口温度250℃；柱前压100kPa；进样量0.1ml；分流比10:1；载气为高纯氦气。MS条件：电离方式EI；电子能量
70；传输线温度250℃；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；质量范围35 500；采用
~
wiley7n.l标准谱库检索定性。图1为杉木叶精油气相色谱‑质谱测定图，共检测出51种物质成分，已知总含量达91%以上，主要包括β‑芹子烯（10.78%）、α‑芹子烯（7.74%）、α‑桉叶油醇（6.84%）、γ‑木罗烯（6.48%）、δ‑杜松烯（5.91%）、β‑桉叶油醇（3.38%）、β‑石竹烯（3.37%）等物质。

[0031] 应用例1 杉木叶精油对癌细胞增殖抑制作用

[0032] 试验方法：将待测细胞（人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞、人肝癌HepG2细胞）传至96孔板培养板中，每孔接种细胞约10000个。置于细胞培养箱中培养24h后，吸取上清培养液，加入不同杉木叶精油浓度的培养液（100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml）），每孔100μL，同一浓度设置6个复孔，继续置于细胞培养箱中培养48h，检测时将CCK‑8试剂与无血清的培养液按1:10比例配制工作液，每孔加入100μL工作液，放入二氧化碳培养箱中37℃恒温孵育1h，放入全波长酶标仪中，在450nm波长下检测吸光度，SPSS 22.0计算药物半数抑制浓度（IC50），计算不同浓度杉木叶精油处理的细胞生长抑制率。

[0033] 杉木叶精油对人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞及人肝癌HepG2细胞48h的半数抑制浓度IC50分别为1.28μg/ml、4.05μg/ml、1.28μg/ml及4.86μg/ml，表1为不同浓度杉木精油对不同癌细胞的抑制率。以上结果表明，杉木叶精油对人结肠癌HT‑29细胞、人肺癌A549细胞、人乳腺癌MCF‑7细胞及人肝癌HepG2细胞均有良好的抑制作用，随着剂量的增加，抑制作用逐渐增强，当杉木叶精油浓度大于等于25μg/ml时，对人肺癌A549细胞和人乳腺癌MCF‑7细胞的抑制率达到90%以上。

[0034] 表1 杉叶精油对不同癌细胞的抑制率（%）

[0035]

[0036] 应用例2 杉木叶精油抗氧性活性

[0037] （一）DPPH自由基清除能力

[0038] 试验方法：采用清除DPPH自由基的方法测定成分的抗氧化能力：精密称取DPPH 25.4mg，无水乙醇溶解并定容于100mL容量瓶，备用，使用时再用无水乙醇稀释10倍；杉木叶精油样品浓度设置为5个梯度（20，40，60，80，100mg/ml），将每种供试品溶液分别取20μL加样到96孔板中，再在每个孔中平行加入180μL DPPH溶液。同时设立对照组，空白组。充分混匀，将96孔板放置在避光环境反应30min。在波长515nm处测定。

[0039] 清除率=[1‑(Ai‑Aj)/A0]´100%

[0040] 其中：A0为加入180μL DPPH和的20μL试样溶剂混匀后测定的吸光度值；Ai为180μL DPPH和的20μL试样混匀后测定的吸光度值；Aj为180μL 试样溶剂和的20μL试样混匀后测定的吸光度值。以样品浓度为横坐标，清除率为纵坐标作图。

[0041] 图2为杉木叶精油DPPH自由基清除能力测定结果，随着杉木叶精油的浓度升高，其清除基DPPH自由基的能力逐渐升高，当杉木叶精油浓度大于等于100mg/ml，对DPPH自由基的清除率达到90%以上。

[0042] （一）ABTS+自由基清除能力

[0043] 试验方法：配制3ml的7mmol/L ABTS和3ml的2.45mmol/L过硫酸钾溶液混合，室避光过夜，得到ABTS+自由基储备液。使用前加70%乙醇调至吸光度为0.700±0.005，在96孔板中每孔加入40μL的样品，杉木叶精油样品设置5个浓度（20，40，60，80，100mg/mL），再加入160μLABTS+自由基工作液，以200μL70%乙醇为空白，混合10s，避光静置6min，在734nm波长下测定吸光度。

[0044] 清除率=[1‑(Ai‑Aj)/A0]´100%

[0045] 其中：A0为加入160μL ABTS+和的40μL试样溶剂混匀后测定的吸光度值；Ai为160μL +ABTS 和的40μL试样混匀后测定的吸光度值；Aj为160μL试样溶剂和的40μL试样混匀后测定的吸光度值。以样品浓度为横坐标，清除率为纵坐标作图。

[0046] 图3为杉木叶精油ABTS+自由基清除能力测定结果，随着杉木叶精油的浓度升高，其清除基ABTS+自由基的能力逐渐升高，当杉木叶精油浓度大于等于80mg/ml，对ABTS+自由基的清除率达到84%以上。

[0047] 综上所述，本发明制备得到的杉木叶精油对癌细胞增殖具有好的抑制作用，对于对人肺癌A549细胞和人乳腺癌MCF‑7细胞的抑制作用明显，对DPPH自由基和ABTS+自由基的清除能力强，抗氧化效果好，可用于制备抑制癌细胞增殖的抗癌药物，还可用做抗氧化添加剂用于化妆品、洗涤用品、食品等制备。

[0048] 前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。