一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法

摘要

本发明公开了一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法，雷贝拉唑氯化物是制备雷贝拉唑钠的重要中间体，作为中间体的同时还是基因毒性杂质，国家药典对雷贝拉唑钠制剂中雷贝拉唑氯化物的控制非常严格，为了检测本司中雷贝拉唑钠制剂中雷贝拉唑氯化物的含量，本发明公开了一种快速检测雷贝拉唑氯化物的方法，该方法由高效液相色谱方法实现的，为验证该方法的有效性和可行性，根据ICH‑Q2指导原则对该方法进行验证。该方法在专属性、精密度、准确度、线性和范围和耐用性都符合标准，且该方法操作简单，耗时少，并且得到的数据准确有效，具有较高的系统适用性。

权利要求

1.一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检验方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、参比溶液、灵敏度溶液和测试溶液；所述空白溶液为稀释液；所述雷贝拉唑氯化物储备液包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；参比溶液中包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；所述灵敏度溶液中包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；供试品溶液中包括雷贝拉唑钠和稀释溶液；

（2）测定方法：分别将空白溶液、灵敏度溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃；进样器温度：5℃；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；进样量：50μl；梯度表如下：所述流动相A为乙腈，所述流动相B为pH7.0的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检验方法，其特征在于，所述空白溶液的配制步骤为：将稀释液作为空白溶液；

所述雷贝拉唑氯化物储备液的配制步骤为：取雷贝拉唑氯化物对照品，精密称定，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得雷贝拉唑氯化物储备液；

所述参比溶液的配制步骤为：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得参比溶液；

所述灵敏度溶液的配制步骤为：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得灵敏度溶液；

所述测试溶液的配制步骤为：取雷贝拉唑钠样品，精密称定，置于容量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得测试溶液；

所述稀释液为乙腈：pH7.0的磷酸盐缓冲液的体积比V/V 为45:55；

所述磷酸盐缓冲液采用磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和氢氧化钾配制；

所述磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和氢氧化钾为AR级以上；

所述乙腈和超纯水为HPLC级；

所述雷贝拉唑氯化物对照品为自制或者外购；

所述色谱柱为Agilent Eclipse XDB‑C18 4.6×250mm,5μm。

说明书

一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及医药制剂中技术分析领域，具体涉及一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法。

背景技术

[0002] 雷贝拉唑钠（Rabeprazole Sodium）对基础胃酸和由刺激引起的胃酸分泌均有抑制作用。具体作用包括：胃酸分泌抑制作用；抗幽门螺杆菌作用：体外试验显示本品比奥美拉唑和兰索拉唑有更强的抗幽门螺杆菌活性，其可在几个位点直接攻击抗幽门螺杆菌，并可非竞争性、不可逆地抑制抗幽门螺杆菌的脲酶，本品对胆碱受体和组胺H2受体无拮抗作用。雷贝拉唑钠能够产生持续性的抑制胃酸分泌的作用。由于雷贝拉唑钠使酸度下降，因此，与那些吸收与胃pH值有关的药物有相互作用。例如会使酮康唑的生物利用度减少大约30%；会使地高辛的AUC和Cmax值分别增加19%和29%。

[0003] 雷贝拉唑钠制备过程中，雷贝拉唑氯化物是合成过程中使用的物料，其反应可能不完全而残留在雷贝拉唑钠制剂中，因此需要对雷贝拉唑钠中可能残留的雷贝拉唑氯化物进行研究。本发明首次提出了一种雷贝拉唑中雷贝拉唑氯化物的检测方法，该检测方法是由高效液相色谱方法实现的，为验证该方法的有效性和可行性，根据ICH‑Q2指导原则对该方法进行验证。

发明内容

[0004] 本发明首次提出了一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法，该检测方法是由高效液相色谱方法实现的，该方法操作简单，耗时少，并且得到的数据准确有效，具有较高的系统适用性，具体如下：

[0005] 一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检验方法，包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、参比溶液、灵敏度溶液和测试溶液；所述空白溶液为稀释液；所述雷贝拉唑氯化物储备液包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；参比溶液中包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；所述灵敏度溶液中包括雷贝拉唑氯化物和稀释液；所述供试品溶液中包括雷贝拉唑钠和稀释溶液；

[0006] （2）测定方法：分别将空白溶液、灵敏度溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃；进样器温度：5℃；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；进样量：50μl；

[0007] 梯度表如下：

[0008]

[0009] 所述流动相A为乙腈，所述流动相B为pH7.0的磷酸盐缓冲液。

[0010] 进一步地，所述空白溶液的配制步骤为：将稀释液作为空白溶液；

[0011] 所述雷贝拉唑氯化物储备液的配制步骤为：取雷贝拉唑氯化物对照品，精密称定，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得雷贝拉唑氯化物储备液；

[0012] 所述参比溶液的配制步骤为：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得参比溶液；

[0013] 所述灵敏度溶液的配制步骤为：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液，置容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得灵敏度溶液；

[0014] 所述测试溶液的配制步骤为：取雷贝拉唑钠样品，精密称定，置于容量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得测试溶液；

[0015] 所述稀释液为乙腈：磷酸盐缓冲液（pH7.0）=45:55（V/V，体积比）；所述磷酸盐缓冲液采用磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和氢氧化钾配制；所述磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和氢氧化钾为AR及以上；所述乙腈和超纯水为HPLC；所述雷贝拉唑氯化物对照品为自制或者外购；所述色谱柱可为Agilent Eclipse XDB‑C18 4.6×250mm,5μm或效能相当的色谱柱。

[0016] 所述雷贝拉唑氯化物含量的测定方法还包括在检测之前的方法验证，该方法验证为按照正式检测的色谱条件，测定结果为：

[0017]

[0018] 有益效果

[0019] 本发明首次提出了一种雷贝拉唑钠中雷贝拉唑氯化物的检测方法，该检测方法是由高效液相色谱方法实现的，为验证该方法的有效性和可行性，根据ICH‑Q2指导原则对该方法进行验证该方法在专属性、精密度、准确度、线性和范围和耐用性都符合标准，且该方法操作简单，耗时少，并且得到的数据准确有效，具有较高的系统适用性。

附图说明

[0020] 图1为实施例2、3、4、5中空白溶液的液相色谱图；

[0021] 图2为实施例2、5中灵敏度溶液的液相色谱图；

[0022] 图3为实施例2、3、4中对照品溶液的液相色谱图；

[0023] 图4为实施例3中供试品溶液的液相色谱图；

[0024] 图5为实施例3中选择性溶液的液相色谱图；

[0025] 图6为实施例4中供试品溶液（加标）的液相色谱图；

[0026] 图7为实施例5中LOQ溶液的液相色谱图；

[0027] 图8为实施例5中LOD溶液的液相色谱图；

[0028] 图9为雷贝拉唑氯化物线性关系。具体实施例

[0029] 实施例1

[0030] (1)实验材料与仪器条件

[0031] 实验材料：磷酸二氢钾，生产厂家：天津市大茂化学试剂厂；磷酸氢二钾，生产厂家：天津市大茂化学试剂厂；氢氧化钾，生产厂家：天津市大茂化学试剂厂；乙腈，生产厂家：Merck；雷贝拉唑氯化物对照品，生产厂家：fluorochem；雷贝拉唑钠样品，生产厂家：珠海润都制药股份有限公司；超纯水，生产厂家：珠海润都制药股份有限公司。

[0032] 仪器：高效液相色谱仪：安捷伦科技1260；pH计:梅特勒‑托利多SevenExcellence；电子分析天平：梅特勒‑托利多XSE205DU、AND GR‑200；色谱柱：Eclipse XDB‑C18 4.6×
250mm，5μm。

[0033] 分别将空白溶液、灵敏度溶液、参比溶液和测试溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃；进样器温度：5℃；流速：1.0ml/min；检测波长：210nm；进样量：50μl；

[0034] 梯度表如下：

[0035]

[0036] 所述流动相A为乙腈，所述流动相B为pH7.0的磷酸盐缓冲液。

[0037] （2）实验步骤

[0038] ①空白溶液的制备：稀释液作为空白溶液；稀释液为乙腈：磷酸盐缓冲液（pH7.0）=45:55（V/V，体积比）；

[0039] ②所述雷贝拉唑氯化物储备液的配制步骤为：取雷贝拉唑氯化物对照品约25mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液3.0ml，置100ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得雷贝拉唑氯化物储备液（雷贝拉唑氯化物的浓度为：7.5μg/ml）；

[0040] ③所述参比溶液（雷贝拉唑氯化物定位溶液）的配制步骤为：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得参比溶液（雷贝拉唑氯化物的浓度为：0.75μg/ml）；

[0041] ④所述灵敏度溶液的配制步骤为：精密量取参比溶液3.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得灵敏度溶液（雷贝拉唑氯化物的浓度为：0.22μg/ml）；

[0042] ⑤所述测试溶液的配制步骤为：取雷贝拉唑钠样品约100mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得测试溶液（雷贝拉唑钠样品的浓度为：10mg/ml）；

[0043] ⑥选择性溶液的制备：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液1.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释，摇匀；称取雷贝拉唑钠样品约100mg置于上述容量瓶，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得选择性溶液(雷贝拉唑钠样品浓度为：9.8711mg/ml，雷贝拉唑氯化物浓度为：0.7460μg/ml)；

[0044] ⑦重复性溶液的制备：精密量取雷贝拉唑氯化物储备液1.0ml，置10ml容量瓶中，加稀释液稀释，摇匀；称取雷贝拉唑钠样品约100mg置于50上述容量瓶中，加入稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀即得重复性溶液(雷贝拉唑氯化物的浓度为：0.7460μg/ml，雷贝拉唑钠样品的浓度为：9.9195mg/ml)，同法配制6份该溶液；

[0045] ⑧LOQ溶液的制备：根据灵敏度溶液所得的雷贝拉唑氯化物的S/N值，调节稀释比例至雷贝拉唑氯化物的S/N不小于10，摇匀，作为LOQ溶液。同法配制6份；

[0046] ⑨LOD溶液的制备：精密量取LOQ溶液3.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀即得LOD溶液。

[0047] 待系统稳定后，待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，参比溶液5针，测试溶液1针，记录色谱图。

[0048] 实施例2本发明所述检测方法系统适用性试验

[0049] 系统适用性是通过测定灵敏度溶液中雷贝拉唑氯化物的S/N值和5针参比溶液中雷贝拉唑氯化物峰面积的RSD而实现的，要求灵敏度溶液中雷贝拉唑氯化物的S/N值应≥10，5针参比溶液中雷贝拉唑氯化物峰面积的RSD应≤2.0%。

[0050] 如实施例1所述配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、参比溶液和灵敏度溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针、灵敏度溶液1针，参比溶液6针，得到色谱图，如图1、图2和图3，根据公式换算结果如下表所示：

[0051]

[0052] 备注：为确认序列运行过程中系统稳定性，待参比溶液完成进样后，每隔约8小时或序列的最后，进参比溶液1针，要求后连续5针参比溶液中雷贝拉唑氯化物峰面积的RSD应≤2.0%。

[0053] 实施例3 本发明所述检测方法专属性试验

[0054] 专属性是通过测定空白溶液对雷贝拉唑氯化物检测有无干扰，选择性溶液中，雷贝拉唑氯化物与相邻组分峰之间的分离度以及加样前后，雷贝拉唑氯化物的回收率而实现的；要求空白溶液对雷贝拉唑氯化物检测应无干扰，选择性溶液中，雷贝拉唑氯化物与相邻组分峰之间的分离度应≥1.5，加样前后，雷贝拉唑氯化物的回收率应在80.0% 120.0%之~间。

[0055] 如实施例1所述配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、参比溶液、测试溶液和选择性溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针、参比溶液1针、测试溶液1针、选择性溶液1针，得到色谱图，如图1、图3、图4和图5，根据公式换算结果如下表所示：

[0056]

[0057] 备注：雷贝拉唑氯化物定位溶液引用系统适用性项下参比溶液第1针，选择性溶液引用专属性项下选择性溶液第1针。

[0058] 实施例4 本发明所述检测方法的重复性（精密度）试验

[0059] 重复性是通过测定6份测试溶液中雷贝拉唑氯化物测定结果的RSD而实现的，要求6 份测试溶液中，雷贝拉唑氯化物测定结果的RSD应≤10.0%。

[0060] 如实施例1所述配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、参比溶液、重复性溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针、参比溶液6针、6份重复性溶液各1针，记录色谱图，如图1、图3和图6，得出重复性检测结果如下：

[0061]

[0062] 实施例5 本发明所述检测方法的定量限和检测限

[0063]

[0064] 如实施例1所述配制空白溶液、雷贝拉唑氯化物储备液、灵敏度溶液、LOQ溶液和LOD溶液，在实施例1所述色谱条件下，进空白溶液1针、灵敏度溶液1针，6份LOQ溶液各1针、LOD溶液1针，记录色谱图，如图1、图2、图7和图8。得到结果如下表所示：

[0065]

[0066]

[0067] 实施例6 本发明所述检测方法的准确度

[0068] 准确度是通过测定被测组分实测浓度和理论浓度之间的回收率和回收率的总RSD（n=9）而实现的，要求雷贝拉唑氯化物在各浓度的回收率应在80.0% 120.0%之间，回收率的~总RSD（n=9）应≤10.0%。

[0069]

[0070] 备注：（1）测试溶液引用专属性项下测试溶液，参比溶液引用系统适用性项下参比溶液第1针；（2）带入峰面积=测试溶液峰面积×准确度溶液中样品浓度÷测试溶液中样品浓度。

[0071] 实施例7 本发明所述检测方法的溶液稳定性

[0072] 考察参比溶液在室温下放置3天内进样，测试溶液和选择性溶液在室温和冷处放置3天内进样，检测结果随时间变化规律，为检测时参比溶液和测试溶液的放置时间提供依据，要求与0天相比较，参比溶液在室温下放置3天内，雷贝拉唑氯化物的回收率应在90.0%~110.0%之间，则参比溶液在考察期间内稳定；与0天相比较，测试溶液在室温和冷处放置3天内，雷贝拉唑氯化物测定结果的变化值应在限度的20%以内，则测试溶液在考察期间内稳定；选择性溶液在室温和冷处放置3天内，雷贝拉唑氯化物的回收率应在80.0% 120.0%之~
间，则选择性溶液在考察期间内稳定。

[0073]

[0074] 备注：（1）参比溶液0天引用系统适用性项下参比溶液第1针，测试溶液0天引用专属性项下测试溶液，选择性溶液0天引用专属性项下选择性溶液第1针。（2）带入峰面积=测试溶液峰面积×选择性溶液中样品浓度÷测试溶液中样品浓度。

[0075]

[0076] 备注：（1）参比溶液0天引用系统适用性项下参比溶液第1针，测试溶液0天引用专属性项下测试溶液，选择性溶液0天引用专属性项下选择性溶液第1针。（2）带入峰面积=测试溶液峰面积×选择性溶液中样品浓度÷测试溶液中样品浓度。