一种三唑并哒嗪类化合物及其应用转让专利
申请号 : CN202210505202.6
文献号 : CN114591352B
文献日 : 2022-09-09
发明人 : 王非 , 孙勇 , 吴金华 , 陈南阳
申请人 : 上海赛默罗生物科技有限公司 , 上海赛默罗德生物科技有限公司
摘要 :
本发明公开了一种三唑并哒嗪类化合物及其应用。本发明提供了一种物质X或其药学上可接受的盐；所述的物质X为三唑并哒嗪类化合物I或其立体异构体。该类化合物对α5‑GABAA受体具有良好的选择性反向调节活性和生物利用度等特质。
权利要求 :
1.一种物质X或其药学上可接受的盐；所述的物质X为三唑并哒嗪类化合物I；
1 1‑2
R为被R 取代的5 6元杂芳基；所述的5 6元杂芳基中，杂原子的数量为1个、2个、3个或~ ~
4个，杂原子选自N、O和S中的一种或多种；
1‑2
R 独立地为C1~C6烷基；
2 3 X 1
R为氢，R 为C1~C6烷基；R为 ，m和n独立地为1或2，且m+n=2或3，Z为‑
4‑1 4‑1
N(R )‑，R 独立地为4元杂环烷基；所述的4元杂环烷基中，杂原子的数量为1个，杂原子为O或S。
2.如权利要求1所述的物质X或其药学上可接受的盐，其满足下述条件中的一个或多个：1
a)R中，所述的5 6元杂芳基里的杂原子的数量为2个或3个；
~
1
b)R中，所述的5 6元杂芳基里的杂原子选自N和O中的一种或多种；
~
1‑2
c)R3 中，所述的C1~C6烷基为C1~C3烷基；
d)R中，所述的C1~C6烷基为C1~C4烷基；
4‑1
e)R 中，所述的4元杂环烷基里的杂原子为O；
f)所述的物质X或其药学上可接受的盐中的所有原子均为包含天然比例同位素的原子。
3.如权利要求2所述的物质X或其药学上可接受的盐，其满足下述条件中的一个或多个：
1‑2
g)R 中，所述的C1~C6烷基为甲基、乙基、正丙基或异丙基；
3
h)R中，所述的C1~C6烷基为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。
4.如权利要求3所述的物质X或其药学上可接受的盐，其满足下述条件中的一个或多个：1
i） R为 ；
3
j）R为 。
5.一种物质X或其药学上可接受的盐，所述的物质X为三唑并哒嗪类化合物I；所述的三唑并哒嗪类化合物I为如下任一结构：。
6.一种药物组合物，其包含物质Y和药用辅料；
所述的物质Y为如权利要求1 5中任一项所述的物质X或其药学上可接受的盐。
~
7.一种物质Y在制备α5‑GABAA受体反向调节剂中的应用；
所述的物质Y为如权利要求1 5中任一项所述的物质X或其药学上可接受的盐。
~
8.如权利要求7所述的应用，其满足下述条件中的一个或多个：k）所述的α5‑GABAA受体反向调节剂为在体内或体外使用的α5‑GABAA受体反向调节剂；
l）相对于α1和/或α2，所述的α5‑GABAA受体反向调节剂具有选择性。
9.一种物质Y在制备药物中的应用；
所述的物质Y为如权利要求1 5中任一项所述的物质X或其药学上可接受的盐；
~
所述的药物为预防或治疗由α5‑GABAA受体介导的疾病的药物。
10.如权利要求9所述的应用，其满足下述条件中的一个或多个：m）相对于α1和/或α2，所述的药物对α5‑GABAA受体具有选择性；
n）所述的由α5‑GABAA受体介导的疾病为抑郁症、疼痛、阿尔茨海默症、多发梗塞性痴呆、脑卒中、焦虑症、恐慌症、广场恐怖症、创伤后精神紧张性障碍、月经前期焦虑障碍、注意力不集中症、强迫观念和行为综合征、孤独症、自闭症、精神分裂症、肥胖、神经性食欲过盛或缺乏、图雷特综合症、血管舒缩性潮红、性功能障碍、边界人格障碍、慢性疲劳综合症、雷诺综合征、帕金森氏症或癫痫和头部损伤后的情绪障碍。
11.如权利要求10所述的应用，其满足下述条件中的一个或多个：o）相对于α2，所述的药物对α5‑GABAA受体具有选择性；
p）所述的抑郁症为双相抑郁、产后抑郁、精神抑郁症、非典型抑郁症、精神忧郁症、难治性抑郁症、亨廷顿氏病有关的抑郁症、多发性硬化症有关的抑郁症或焦虑症有关的抑郁症；
q）所述的抑郁症为轻度抑郁、中度抑郁或重度抑郁；
r）所述的焦虑症为泛化焦虑症或社交焦虑症；
s）所述的疼痛为纤维肌痛。
12.一种物质Y在制备药物中的应用；
所述的物质Y为如权利要求1 5中任一项所述的物质X或其药学上可接受的盐；
~
所述的药物为预防或治疗下述任一疾病的药物：抑郁症、疼痛、阿尔茨海默症、多发梗塞性痴呆、脑卒中、焦虑症、恐慌症、广场恐怖症、创伤后精神紧张性障碍、月经前期焦虑障碍、注意力不集中症、强迫观念和行为综合征、孤独症、自闭症、精神分裂症、肥胖、神经性食欲过盛或缺乏、图雷特综合症、血管舒缩性潮红、性功能障碍、边界人格障碍、慢性疲劳综合症、雷诺综合征、帕金森氏症和癫痫和头部损伤后的情绪障碍。
13.如权利要求12所述的应用，其满足下述条件中的一个或多个：t）所述的抑郁症为双相抑郁、产后抑郁、精神抑郁症、非典型抑郁症、精神忧郁症、难治性抑郁症、亨廷顿氏病有关的抑郁症、多发性硬化症有关的抑郁症或焦虑症有关的抑郁症；
u）所述的抑郁症为轻度抑郁、中度抑郁或重度抑郁；
v）所述的焦虑症为泛化焦虑症或社交焦虑症；
w）所述的疼痛为纤维肌痛。
说明书 :
一种三唑并哒嗪类化合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种三唑并哒嗪类化合物及其应用。
背景技术
[0002] γ‑氨基丁酸(GABA) 是哺乳动物中枢神经系统中重要的抑制性神经递质，有两类GABA 受体存在于自然界中，一类是GABAA受体，该类受体为配体门控离子通道超家族的成
员，另一类是GABAB受体，该类受体是为G蛋白偶联受体超家族的成员。哺乳动物中的GABAA受体亚基被发现的有α1‑6、β1‑4、γ1‑3、δ、ε、θ和ρ1‑3 等亚基，其中α亚基、β亚基和γ亚基对形成一个完整的功能型GABAA受体是必不可少的，而α亚基对苯二氮䓬与GABAA受体的结合是至关重要的。
员，另一类是GABAB受体，该类受体是为G蛋白偶联受体超家族的成员。哺乳动物中的GABAA受体亚基被发现的有α1‑6、β1‑4、γ1‑3、δ、ε、θ和ρ1‑3 等亚基，其中α亚基、β亚基和γ亚基对形成一个完整的功能型GABAA受体是必不可少的，而α亚基对苯二氮䓬与GABAA受体的结合是至关重要的。
[0003] 含α5 的GABAA受体（α5‑GABAA受体）在哺乳动物大脑的GABAA受体中所占的比例小于5%，在大脑皮层中表达水平非常低，但在大脑海马组织中的GABAA受体中所占比例大于20%，其他大脑区域几乎不表达。考虑到α5‑GABAA受体的在大脑海马组织中特异性分布和功能研究，包括Roche、Merck等在内的许多制药公司从事于α5‑GABAA受体配体的研究，陆续有大量的化合物合成出来，特别是针对大脑海马组织的α5‑GABAA受体的反向调节剂，其中α
5IA和MRK‑016在动物疾病模型中显示出良好的改善认知效果。普遍认为α5‑GABAA受体反向调节剂可以用来治疗认知类疾病，特别是治疗阿尔茨海默氏病（Wallace, T.L.等，
Pharmacology Biochemistry and Behavior, 2011. 99(2): 130‑145.）和脑卒中
（Clarkson, A.N.等，Nature, 2010. 468: 305‑309.）。专利申请US20110224278披露了α5‑GABAA受体的反向调节剂可用于治疗多梗塞性痴呆和脑卒中相关疾病。
5IA和MRK‑016在动物疾病模型中显示出良好的改善认知效果。普遍认为α5‑GABAA受体反向调节剂可以用来治疗认知类疾病，特别是治疗阿尔茨海默氏病（Wallace, T.L.等，
Pharmacology Biochemistry and Behavior, 2011. 99(2): 130‑145.）和脑卒中
（Clarkson, A.N.等，Nature, 2010. 468: 305‑309.）。专利申请US20110224278披露了α5‑GABAA受体的反向调节剂可用于治疗多梗塞性痴呆和脑卒中相关疾病。
[0004] 抑郁症是一个可能危及生命（如自杀）的严重的精神疾病。目前抗抑郁治疗的标准疗法为选择性5‑羟色胺再摄取抑制剂（SSRI），但是该类药物一般在服药6‑8周后才能达到最大药效，不仅如此，其有效率也很有限，仅在将近一半的病人上有治疗效果。其他已上市的和临床在研的抗抑郁药物也都有不同程度的副作用，限制了抗抑郁药物的使用。因此，临床上迫切需要一款能快速起效并且副作用更低的抗抑郁药物，来缓解抑郁病人和社会的负担。Fishell等人报道了α5‑GABAA受体反向调节剂的抗抑郁效果（J. Fischell等，
Neuropsychopharmacology, 2015, 40(11), 2499‑2509）,认为选择性的α5‑GABAA受体反向调节剂可以快速起效，与传统抗抑郁药的缓慢起效不同，并且其安全性优于现有的有同
样快速起效能力的氯胺酮疗法。因此选择性的α5‑GABAA受体反向调节剂有可能成为一款全新机制的有快速起效能力的抗抑郁疗法，满足现有临床抑郁症治疗上面的严重未满足的需
求。
Neuropsychopharmacology, 2015, 40(11), 2499‑2509）,认为选择性的α5‑GABAA受体反向调节剂可以快速起效，与传统抗抑郁药的缓慢起效不同，并且其安全性优于现有的有同
样快速起效能力的氯胺酮疗法。因此选择性的α5‑GABAA受体反向调节剂有可能成为一款全新机制的有快速起效能力的抗抑郁疗法，满足现有临床抑郁症治疗上面的严重未满足的需
求。
[0005] 检测一个化合物是否是针对包含α5亚基的GABAA受体的反向调节剂或者拮抗剂，这方面的研究工作已经做了很多，例如在国际申请专利 WO 1992022652和WO1994013799
中，用GABAA受体的α5、β3和γ2组合来检测某一个化合物是否与该受体相结合；在进行药物筛选的过程中，通常用Goeders等(Goeders, N. E. and Kuhar, M. J. Life Sci.1985,
37(4), 345‑355)所述的方法。检测一个能与GABAA受体α5亚基结合的配体是拮抗剂、激动剂还是反向调节剂，在这一方面的研究也很多，可以参照Wafford 等(Wafford, K. A.，
Whiting, P. J. and Kemp, J. A. Mol. Pharmacol. 1993, 43, 240‑244)所述的方法。
中，用GABAA受体的α5、β3和γ2组合来检测某一个化合物是否与该受体相结合；在进行药物筛选的过程中，通常用Goeders等(Goeders, N. E. and Kuhar, M. J. Life Sci.1985,
37(4), 345‑355)所述的方法。检测一个能与GABAA受体α5亚基结合的配体是拮抗剂、激动剂还是反向调节剂，在这一方面的研究也很多，可以参照Wafford 等(Wafford, K. A.，
Whiting, P. J. and Kemp, J. A. Mol. Pharmacol. 1993, 43, 240‑244)所述的方法。
[0006] 近期的研究结果表明，GABAA受体介导了至少2种抑制模式，时相型抑制(phasic inhibition)和紧张型抑制(tonic inhibition)。突触内的GABAA受体，由于动作电位引起
突触内含有GABA的囊泡同步释放，使得突触间隙出现毫摩尔级的GABA浓度急剧增加，从而
引起突触后GABAA受体的同步激活并迅速去敏化，形成时相型抑制。而位于突触外的GABAA受体，通常处在持续存在的几十纳摩尔至几微摩尔的低浓度GABAA环境中，对GABA高亲和力的GABAA受体被持续非同步激活，形成紧张型抑制。时相型抑制和紧张型抑制共同调节神经兴奋性和信号传递。(Farrant, M. et al., Nat Rev Neurosci, 2005, 6, 215‑229)。Yeung JY et al披露低浓度的GABA更易激活α5‑GABAA受体(Yeung JY et al. Mol Pharmacol,
2003, 63, 2‑8)。K. Y. Lee报道在培养24小时的分离的DRG细胞上检测到了低浓度GABA激活的持续的高亲和力的GABA电流。(Lee, K. Y. et al, Neuroscience2012, 208, 133‑
142)。 2013年I. Lecker等披露α5‑GABAA受体反向调节剂L‑655,708剂量依赖性的抑制低浓度GABA(5, 50 和500 nM)引起的电流，当GABA浓度增至1 μM时，最高浓度的 L‑655,708仅能抑制15%的电流，当GABA浓度继续增加时，L‑655,708对GABA引起的电流没有抑制作用。
(Lecker, I. et al, British Journal of Anaesthesia, 2013, 110 (S1), i73‑i81)。
突触内含有GABA的囊泡同步释放，使得突触间隙出现毫摩尔级的GABA浓度急剧增加，从而
引起突触后GABAA受体的同步激活并迅速去敏化，形成时相型抑制。而位于突触外的GABAA受体，通常处在持续存在的几十纳摩尔至几微摩尔的低浓度GABAA环境中，对GABA高亲和力的GABAA受体被持续非同步激活，形成紧张型抑制。时相型抑制和紧张型抑制共同调节神经兴奋性和信号传递。(Farrant, M. et al., Nat Rev Neurosci, 2005, 6, 215‑229)。Yeung JY et al披露低浓度的GABA更易激活α5‑GABAA受体(Yeung JY et al. Mol Pharmacol,
2003, 63, 2‑8)。K. Y. Lee报道在培养24小时的分离的DRG细胞上检测到了低浓度GABA激活的持续的高亲和力的GABA电流。(Lee, K. Y. et al, Neuroscience2012, 208, 133‑
142)。 2013年I. Lecker等披露α5‑GABAA受体反向调节剂L‑655,708剂量依赖性的抑制低浓度GABA(5, 50 和500 nM)引起的电流，当GABA浓度增至1 μM时，最高浓度的 L‑655,708仅能抑制15%的电流，当GABA浓度继续增加时，L‑655,708对GABA引起的电流没有抑制作用。
(Lecker, I. et al, British Journal of Anaesthesia, 2013, 110 (S1), i73‑i81)。
发明内容
[0007] 本发明所要解决的技术问题是现有对α5‑GABAA受体具有选择性反向调节活性的化合物的结构较为单一，为此，本发明提供了一种三唑并哒嗪类化合物及其应用。该类化合物对α5‑GABAA受体具有良好的选择性反向调节活性和生物利用度等特质。
[0008] 本发明提供了一种物质X或其药学上可接受的盐；所述的物质X为三唑并哒嗪类化合物I或其立体异构体；
[0009]
[0010] 其中，R1为被R1‑2取代的5 6元杂芳基；所述的5 6元杂芳基中，杂原子的数量为1~ ~个、2个、3个或4个，杂原子选自N、O和S中的一种或多种；
[0011] R1‑2独立地为C1~C6烷基；
[0012] R2为氢，R3为C1~C6烷基；RX为 ，m和n独立地为1或2，且m+n=2或3，1 4‑1 4‑1
Z为‑N(R )‑，R 独立地为4元杂环烷基；所述的4元杂环烷基中，杂原子的数量为1个，杂原子选自N、O、S和‑S(=O)2‑中的一种或多种；
2 3 X
Z为‑N(R )‑，R 独立地为4元杂环烷基；所述的4元杂环烷基中，杂原子的数量为1个，杂原子选自N、O、S和‑S(=O)2‑中的一种或多种；
2 3 X
[0013] 或者，R、R与它们所连接的碳原子一起形成苯环，R 为 ，环A为6元杂芳基；所述的6元杂芳基中，杂原子的数量为1个或2个，杂原子为N。
[0014] 在某一方案中，所述的物质X或其药学上可接受的盐里，所述的三唑并哒嗪类化合物I中某些基团的定义如下所述，其余基团的定义如其他任一方案所述（以下简称“在某一方案中”）：
[0015] R1中，所述的5 6元杂芳基里的杂原子的数量可为2个或3个。~
[0016] 在某一方案中，R1中，所述的5 6元杂芳基里的杂原子可选自N和O中的一种或多~
种。
种。
[0017] 在某一方案中，R1‑2中，所述的C1~C6烷基可为C1~C3烷基，又可为甲基、乙基、正丙基或异丙基。1
[0018] 在某一方案中，R可为 。
[0019] 在某一方案中，R3中，所述的C1~C6烷基可为C1~C4烷基，又可为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基或叔丁基。2 3 2 3
[0020] 在某一方案中，R 可为氢，R 可为 ；或者，R 、R与它们所连接的碳原子一起形成苯环。
[0021] 在某一方案中，环A中，所述的6元杂芳基里的杂原子的数量可为1个。
[0022] 在某一方案中，环A中，所述的6元杂芳基里的杂原子可为N。
[0023] 在某一方案中，环A中，所述的6元杂芳基可为吡啶基。
[0024] 在某一方案中，所述的物质X或其药学上可接受的盐中的所有原子均为包含天然比例同位素的原子。
[0025] 本发明还提供了一种物质X或其药学上可接受的盐；所述的物质X为三唑并哒嗪类化合物I或其立体异构体；所述的三唑并哒嗪类化合物I为如下任一结构：
[0026] 。
[0027] 本发明还提供了一种药物组合物，其包含物质Y和药用辅料；
[0028] 所述的物质Y为上述的物质X或其药学上可接受的盐。
[0029] 本发明还提供了一种物质Y在制备α5‑GABAA受体反向调节剂中的应用；
[0030] 所述的物质Y为上述的物质X或其药学上可接受的盐。
[0031] 在所述的应用中，所述的α5‑GABAA受体反向调节剂可为在体内或体外使用的α5‑GABAA受体反向调节剂。
[0032] 在所述的应用中，相对于α1和/或α2，所述的α5‑GABAA受体反向调节剂可具有选择性。
[0033] 在所述的应用中，相对于α2，所述的α5‑GABAA受体反向调节剂可具有选择性。
[0034] 本发明还提供了一种物质Y在制备药物中的应用；
[0035] 所述的物质Y为上述的物质X或其药学上可接受的盐；
[0036] 所述的药物为预防或治疗由α5‑GABAA受体介导的疾病的药物。
[0037] 在所述的应用中，相对于α1和/或α2，所述的药物可对α5‑GABAA受体具有选择性。
[0038] 在所述的应用中，相对于α2，所述的药物可具有选择性。
[0039] 在所述的应用中，所述的由α5‑GABAA受体介导的疾病可为抑郁症、疼痛、阿尔茨海默症、多发梗塞性痴呆、脑卒中、焦虑症、恐慌症、广场恐怖症、创伤后精神紧张性障碍、月经前期焦虑障碍、注意力不集中症、强迫观念和行为综合征、孤独症、自闭症、精神分裂症、肥胖、神经性食欲过盛或缺乏、图雷特综合症、血管舒缩性潮红、性功能障碍、边界人格障碍、慢性疲劳综合症、雷诺综合征、帕金森氏症、或、癫痫和头部损伤后的情绪障碍。
[0040] 在所述的应用中，所述的由α5‑GABAA受体介导的疾病可为抑郁症。
[0041] 在所述的应用中，所述的抑郁症可为双相抑郁、产后抑郁、严重的抑郁症、精神抑郁症、非典型抑郁症、精神忧郁症、难治性抑郁症、亨廷顿氏病有关的抑郁症、多发性硬化症有关的抑郁症或焦虑症有关的抑郁症。
[0042] 在所述的应用中，所述的抑郁症可为轻度抑郁、中度抑郁或重度抑郁。
[0043] 在所述的应用中，所述的焦虑症可为泛化焦虑症或社交焦虑症。
[0044] 在所述的应用中，所述的疼痛可为纤维肌痛。
[0045] 本发明还提供了一种物质Y在制备药物中的应用；
[0046] 所述的物质Y为上述的物质X或其药学上可接受的盐；
[0047] 所述的药物为预防或治疗下述任一疾病的药物：
[0048] 抑郁症、疼痛、阿尔茨海默症、多发梗塞性痴呆、脑卒中、焦虑症、恐慌症、广场恐怖症、创伤后精神紧张性障碍、月经前期焦虑障碍、注意力不集中症、强迫观念和行为综合征、孤独症、自闭症、精神分裂症、肥胖、神经性食欲过盛或缺乏、图雷特综合症、血管舒缩性潮红、性功能障碍、边界人格障碍、慢性疲劳综合症、雷诺综合征、帕金森氏症、和、癫痫和头部损伤后的情绪障碍。
[0049] 在所述的应用中，所述的药物为预防或治疗抑郁症的药物。
[0050] 在所述的应用中，所述的抑郁症可为双相抑郁、产后抑郁、严重的抑郁症、精神抑郁症、非典型抑郁症、精神忧郁症、难治性抑郁症、亨廷顿氏病有关的抑郁症、多发性硬化症有关的抑郁症或焦虑症有关的抑郁症。
[0051] 在所述的应用中，所述的抑郁症可为轻度抑郁、中度抑郁或重度抑郁。
[0052] 在所述的应用中，所述的焦虑症可为泛化焦虑症或社交焦虑症。
[0053] 在所述的应用中，所述的疼痛可为纤维肌痛。
[0054] 定义
[0055] 除非另有说明，本发明所用的下列术语旨在具有下列定义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。
[0056] 术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0057] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物中的游离形式接触的
方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中
用足够量的酸与这类化合物中的游离形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的酸加
成盐包括的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等，以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含
有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换为任一碱或酸加成盐。
方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中
用足够量的酸与这类化合物中的游离形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的酸加
成盐包括的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等，以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含
有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换为任一碱或酸加成盐。
[0058] 本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规的化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0059] “ ”是指基团通过该位点与化合物其他部分连接。
[0060] 术语“立体异构体”包括顺式和反式异构体、(‑)‑和(+)‑对映体、(R)‑和(S)‑对映体、非对映异构体、(D)‑异构体、(L)‑异构体。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。
[0061] 本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素，所述同位素具有相同的原子数，但是其原子质量或质量数不同于在自然界中占
2
优势地存在的原子质量或质量数。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘( H)、氚
3 125 14
(H)、碘‑125 ( I)或C‑14 ( C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。通过本领域技术人员众所周知的常规技术，或者通过与在本发明的路线和实施例中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素富集的试剂和/或
中间体，无需过多实验，可以制备在通式(I)内的同位素富集的化合物。
2
优势地存在的原子质量或质量数。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘( H)、氚
3 125 14
(H)、碘‑125 ( I)或C‑14 ( C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。通过本领域技术人员众所周知的常规技术，或者通过与在本发明的路线和实施例中所述的那些类似的方法，使用适当的同位素富集的试剂和/或
中间体，无需过多实验，可以制备在通式(I)内的同位素富集的化合物。
[0062] 本发明中使用的命名规则是基于ChemDraw软件产生的IUPAC 系统命名。在本发明中给出的结构中的碳、氧、硫或氮原子上出现的任何开放价键表明存在氢原子。
[0063] 术语“被……取代的”是指特定的原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定的原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。取代基的数目为1个、2个或3个。
[0064] 当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0‑2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0065] 当一个连接基团的数量为0时，比如‑(CRR)0‑，表示该连接基团为单键。当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A‑L‑Z中L代表单键时表示其该结构实际上是A‑Z。
[0066] 当所列举的连接基团没有指明其连接方向时，其连接方向时任意的，例如，中连接基团L为 ，此时 既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向
连接苯环和环戊基构成 ，也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接
苯基和环戊基构成 。所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的
组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
连接苯环和环戊基构成 ，也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接
苯基和环戊基构成 。所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的
组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0067] 环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“3‑7元环”是指环绕排列3‑7个原子的“环”。
[0068] 术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
[0069] 术语“C1‑C6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑C6烷基包括C1‑5、C1‑4、C1‑3、C1‑2、C2‑6、C2‑4、C6和C5烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑C6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括正丙基和异丙基)、丁基(包括n‑丁基，异丁基，s‑丁基和t‑丁基)、戊基(包括n‑戊基，异戊基和新戊基)、己基等。
[0070] 术语“C1‑C3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑C3烷基包括C1‑C2和C2‑C3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑C3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括正丙基和异丙基)等。
[0071] 术语“C1‑C6烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其他部分的那些包含1至6个碳原子的烷基基团。所述C1‑C6烷基包括C1‑C4、C1‑3、C1‑2、C2‑6、C2‑4、C6、C5、C4和C3烷氧基等；C1‑C6烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(包括n‑丁氧基，异丁氧基，s‑丁氧基和t‑丁氧基)、戊氧基(包括n‑戊氧基，异戊氧基和新戊氧基)、己氧基等。
[0072] 术语“C1‑C3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其他部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C1‑C6烷基包括C1‑C2和C2‑C3烷氧基等；C1‑C3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。
[0073] 术语“C3‑C6环烷基”或“3~6元环烷基”表示由3至6个碳原子组成的饱和环状碳氢基团，其为单环体系，所述C3‑6环烷基包括C3‑5、C4‑5和C5‑6环烷基等；其可以是一价、二价或者多价。C3‑6环烷基的实例包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
[0074] 术语“3‑6元杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示由3至6个环原子组成的饱和单环基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。此外，就该“3‑6元杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。所述3‑6元杂环烷基包括4‑6元、5‑6元、4元、5元和6元杂环烷基等，3‑6元杂环烷基实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基(包括四氢呋喃‑2‑基)、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基等。
[0075] 术语“6‑10芳基”表示含有6‑10 碳原子且每一个环为芳香环的单价芳族碳环环系。芳基的实例但不限于苯基、萘基等。
[0076] 术语“5‑6元杂芳基”表示由5至6个环原子组成的具有共轭π电子体系的环状基团，其1、2、3或4个环原子为独立选自O、S和N的杂原子，其余为碳原子。5‑6元杂芳基可通过杂原子或碳原子连接到分子的其余部分，所述5‑6元杂芳基包括5元和6元杂芳基等。所述5‑6元杂芳基的实例包括但不限于吡咯基(包括N‑吡咯基、2‑吡咯基和3‑吡咯基等)、吡唑基(包括2‑吡唑基和3‑吡唑基等)、咪唑基(包括N‑咪唑基、2‑咪唑基、4‑咪唑基和5‑咪唑基等)、噁唑基(包括2‑噁唑基、4‑噁唑基和5‑噁唑基等)、三唑基(1H‑1, 2, 3‑三唑基、2H‑1, 2, 3‑三唑基、1H‑1, 2, 4‑三唑基和4H‑1, 2, 4‑三唑基)、四唑基、异噁唑基(包括3‑异噁唑基、4‑异噁唑基和5‑异噁唑基等)、噻唑基(包括2‑噻唑基、4‑噻唑基和5‑噻唑基等)、呋喃基(包括
2‑呋喃基和3‑呋喃基等)、噻吩基(包括2‑噻吩基和3‑噻吩基等)、吡啶基(包括2‑吡啶基、3‑吡啶基和4吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2‑嘧啶基和4‑嘧啶基等)等。
2‑呋喃基和3‑呋喃基等)、噻吩基(包括2‑噻吩基和3‑噻吩基等)、吡啶基(包括2‑吡啶基、3‑吡啶基和4吡啶基等)、吡嗪基、嘧啶基(包括2‑嘧啶基和4‑嘧啶基等)等。
[0077] 除非另有规定，Cn‑n+m或Cn‑Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C1‑C7包括C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C1‑7包括C1‑3、C1‑6、C3‑6、C4‑7和C5‑7等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3‑7元环包括3元、4元、5元、6元和7元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3‑7元环包括3‑6元环、4‑7元环、5‑7元环和6‑7元环等。
[0078] 术语“治疗”指给患有疾病或者具有所述疾病的症状的个体施用一种或多种药物物质、特别是本发明所述的式(I)化合物和或其药学上可接受的盐，用以治愈、缓解、减轻、改变、医治、改善、改进或影响所述疾病或者所述疾病的症状。
[0079] 术语“预防”指给具有易患所述疾病的体质的个体施用一种或多种药物物质、特别是本发明所述的式(I)化合物和或其药学上可接受的盐，用以防止个体患该疾病。
[0080] 当涉及化学反应时，术语“处理”、“接触”和“反应”指在适当的条件下加入或混合两种或更多种试剂，以产生所示的和或所需的产物应当理解的是，产生所示的和/或所需的产物的反应可能不一定直接来自最初加入的两种试剂的组合，即，在混合物中可能存在生成的一个或多个中间体，这些中间体最终导致了所示的和或所需的产物的形成。
[0081] 如本发明所用，“患者”定义为任何温血动物，例如不限于小鼠、豚鼠、狗、马或人，所述患者最好是人。
[0082] 本发明所用的术语“有效量”指通常足以对个体产生有益效果的量。可以通过常规方法(例如建模、剂量递增研究或临床试验)结合常规影响因素(例如给药方式、化合物的药代动力学、疾病的严重程度和病程、个体的病史、个体的健康状况、个体对药物的响应程度等)来确定本发明的化合物的有效量。
[0083] 本发明所用的未具体定义的技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。
[0084] 本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：Ac代表乙酰基、ACN代表乙腈、B2pin2代表双联频哪醇硼酸酯、CbzCl代表氯甲酸苄酯、DAST代表二乙胺基三氟化硫、DCDMH代表二氯海因、DCM代表二氯甲烷、DEAD代表偶氮二甲酸二乙酯、DIBAL‑H代表二异丁基氢化铝、DIEA代表二异丙基乙胺、DMAP代表4‑二甲氨基吡啶、DMF代表N, N‑二甲基甲酰胺、DMSO代表二甲亚砜、EDCI代表1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、HATU代表2‑(7‑氮杂苯并三氮唑)‑N, N, N', N'‑四甲基脲六氟磷酸酯、HOBt代表1‑羟基苯并三唑、HPLC代表高效液相色谱、KHMDS代表双(三甲基硅烷基)氨基钾、LAH代表四氢锂铝、MsCl代表甲磺酰氯、NCS代表氯代丁二酰亚胺、Pd(dppf)Cl2代表1, 1'‑双二苯基膦二茂铁二氯化钯、Pd2(dba)3代表三二亚苄基丙酮二钯、PhNTf2代表N‑苯基双(三氟甲烷磺酸亚胺)、
PMBCl代表对甲氧基氯化苄、pyr.代表吡啶、Ruphos代表2‑二环己基磷‑2', 6'‑二异丙氧基‑1, 1'‑联苯、Ruphos‑Pd‑G3代表甲磺酸(2‑二环己基膦基‑2', 6'‑二异丙氧基‑1, 1'‑联苯基)(2‑氨基‑1, 1'‑联苯‑2‑基)钯(II)、TBAF代表四丁基氟化铵、TBSCl代表叔丁基二甲基氯硅烷、THF代表四氢呋喃、TEA代表三乙胺、TEAF代表三乙胺三氟化氢、Tf代表三氟甲磺酰基、TFA代表三氟乙酸、TFAA代表三氟乙酸酐、TLC代表薄层色谱法、TMS代表三甲基硅基、Tol.代表甲苯、Ts代表对甲苯磺酰基、Xantphos代表4, 5‑双(二苯基膦基)‑9, 9‑二甲基氧杂蒽、LCMS代表液相色谱‑质谱联用、h代表小时、min代表分钟。
PMBCl代表对甲氧基氯化苄、pyr.代表吡啶、Ruphos代表2‑二环己基磷‑2', 6'‑二异丙氧基‑1, 1'‑联苯、Ruphos‑Pd‑G3代表甲磺酸(2‑二环己基膦基‑2', 6'‑二异丙氧基‑1, 1'‑联苯基)(2‑氨基‑1, 1'‑联苯‑2‑基)钯(II)、TBAF代表四丁基氟化铵、TBSCl代表叔丁基二甲基氯硅烷、THF代表四氢呋喃、TEA代表三乙胺、TEAF代表三乙胺三氟化氢、Tf代表三氟甲磺酰基、TFA代表三氟乙酸、TFAA代表三氟乙酸酐、TLC代表薄层色谱法、TMS代表三甲基硅基、Tol.代表甲苯、Ts代表对甲苯磺酰基、Xantphos代表4, 5‑双(二苯基膦基)‑9, 9‑二甲基氧杂蒽、LCMS代表液相色谱‑质谱联用、h代表小时、min代表分钟。
[0085] 在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0086] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0087] 本发明的积极进步效果在于：该类化合物对α5‑GABAA受体具有良好的选择性反向调节活性和生物利用度等特质。
具体实施方式
[0088] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0089] 中间体2
[0090] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑[0091]
[0092] 4‑(叔丁基)‑3,6‑二氯哒嗪 (3g，14.6mmol，WO9967245A1)和5‑甲基异噁唑‑3‑碳o酰肼 (2.1g，14.6mmol)加到正丁醇 (30mL)中，反应混合物120C搅拌16小时。反应液冷却
1
到室温，沉淀物过滤收集，真空干燥得到白色固体标题化合物 (1.4g，收率33%)。H NMR
(400MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1 H), 6.86 (s, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.57 (s, 9 H)；
+
LC‑MS: m/z [M‑55] =292.
1
到室温，沉淀物过滤收集，真空干燥得到白色固体标题化合物 (1.4g，收率33%)。H NMR
(400MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1 H), 6.86 (s, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.57 (s, 9 H)；
+
LC‑MS: m/z [M‑55] =292.
[0093] 中间体4
[0094] 3‑(6‑氯‑[1,2,4]三唑并[3,4‑a]酞嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0095]
[0096] 中间体4参照专利WO2005041971A1中所述的方法合成。
[0097] 中间体38
[0098] 2‑((((7‑(叔丁基)‑3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基))‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑6‑基)氧基)甲基)‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑6(7H)‑羧酸叔丁酯
[0099]
[0100] 将2‑(羟甲基)‑5,7‑二氢‑6H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑6‑羧酸叔丁酯 (386mg, 1.55mmol, WO2021121294A1)溶解在无水四氢呋喃 (5mL)中，加入60%氢化钠 (74mg, 3.1
mmol)，混合物室温搅拌10分钟。然后加入3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (300mg, 1.03mmol)，反应混合物室温搅拌2小时。向反应液中滴加适量的1M氢氧化钠水溶液淬灭反应，混合液浓缩，制备薄层色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇=
+
30/1)得到标题化合物 (500mg, 收率96%)。LC‑MS: m/z [M+H] =506.
mmol)，混合物室温搅拌10分钟。然后加入3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (300mg, 1.03mmol)，反应混合物室温搅拌2小时。向反应液中滴加适量的1M氢氧化钠水溶液淬灭反应，混合液浓缩，制备薄层色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇=
+
30/1)得到标题化合物 (500mg, 收率96%)。LC‑MS: m/z [M+H] =506.
[0101] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑(((6,7‑二氢‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0102]
[0103] 将2‑((((7‑(叔丁基)‑3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基))‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑6‑基)氧基)甲基)‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑6(7H)‑羧酸叔丁酯 (500mg, 0.99mmol)加到混合溶剂二氯甲烷/甲醇 (5mL/2mL)中，然后加入三氟乙酸 (4mL)，混合物室温搅拌过夜。反应液直接浓缩，残渣用甲醇 (5mL)溶解，然后加入大孔树脂 (2g)并搅拌20分钟。混合物过滤，+滤液浓缩得到标题化合物(300mg, 收率75%)。LC‑MS: m/z [M+H] =406.
[0104] 参考下表，除了采用“原料”一栏所述原料替代相应的原料以外，参照中间体38的制备方法制备以下中间体34a和37a。
[0105]
[0106] 中间体46
[0107] 2‑((((7‑(叔丁基)‑3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基))‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑6‑基)氧基)甲基)‑7,8‑二氢‑1,6‑萘啶‑6(5H)‑羧酸叔丁酯
[0108]
[0109] 2‑(羟甲基)‑7,8‑二氢‑1,6‑萘啶‑6(5H)‑羧酸叔丁酯 (408mg, 1.55mmol, WO2016014463A1)溶解在四氢呋喃 (5mL) 中，加入60%氢化钠 (74mg, 3.1 mmol)，混合物
室温搅拌10分钟。然后加入3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (中间体2，300mg, 1.03mmol)，反应混合物室温搅拌2小时。向反应液中滴加适量
1M氢氧化钠水溶液淬灭反应，反应液直接浓缩，制备薄层色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇=30/1)+
得到标题化合物 (320mg, 收率60%)。LC‑MS: m/z [M+H] =520.
室温搅拌10分钟。然后加入3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (中间体2，300mg, 1.03mmol)，反应混合物室温搅拌2小时。向反应液中滴加适量
1M氢氧化钠水溶液淬灭反应，反应液直接浓缩，制备薄层色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇=30/1)+
得到标题化合物 (320mg, 收率60%)。LC‑MS: m/z [M+H] =520.
[0110] 中间体48
[0111] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑(((5,6,7,8‑四氢‑1,6‑萘啶‑2‑基)甲氧基))‑[1,2,4]三唑[4,3 ‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0112]
[0113] 2‑((((7‑(叔丁基)‑3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基))‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑6‑基)氧基)甲基)‑7,8‑二氢‑1,6‑萘啶‑6(5H)‑羧酸叔丁酯 (中间体46，320mg, 0.616mmol)溶解在甲醇 (5mL) 中，然后加入三氟乙酸 (2mL)，混合物室温搅拌过夜。反应液直接浓缩，残渣用甲醇 (5mL)溶解，然后加入大孔树脂 (2g)并搅拌二十分钟，过滤，滤液浓缩得到标+ 题化合物 (300mg)。LC‑MS: m/z [M+H] =420.
[0114] 中间体55
[0115] 6‑乙基‑2‑(羟甲基)‑7,8‑二氢‑1,6‑萘啶‑5(6H)‑酮
[0116]
[0117] 将(6‑乙基‑5,6,7,8‑四氢‑1,6‑萘啶‑2‑基)甲醇 (200mg，1.02mmol)溶于混合溶剂四氢呋喃/水 (2.5/1，40mL)中，依次加入碳酸氢钠 (900mg，10.2mmol)和碘 (2g， 7.5mmol)，混合物室温搅拌过夜。用硫代硫酸钠中和至颜色褪去，二氯甲烷萃取多次，有机相合并，浓缩，柱层析分离得到无色油状物目标化合物 (60mg，收率29%)。LC‑MS: m/z [M++
H] =207.
H] =207.
[0118] 中间体63
[0119] (6‑乙基‑6,7‑二氢‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲醇
[0120]
[0121] 中间体63参照专利WO2021121294A1中所述的方法合成。
[0122] 中间体64
[0123] 4‑(6‑((((3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基)‑[1,2,4]三唑[3,4‑a]酞嗪‑6‑基)氧基]甲基)‑1,3‑二氢‑2H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑2‑基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯
[0124]
[0125] 将3‑(6‑((2,3‑二氢‑1H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑6‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[3,4‑a]酞嗪‑3 ‑基)‑5‑甲基异噁唑 (中间体37a，50mg, 0.125mmol)加入到混合溶剂二氯甲烷 (2mL)和甲醇 (1mL)中，分批加入氰基硼氢化钠 (24mg, 0.375mmol)和4‑氧代哌啶‑1‑羧酸叔丁酯 (74mg, 0.375mmol)，混合物室温搅拌半小时。向反应液加入1M氢氧化钠水溶
液淬灭反应，二氯甲烷 (20mL)萃取三次，有机相合并，水 (10mL)洗三次，无水硫酸钠干燥，+
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (73mg, 收率100%)。LC‑MS: m/z [M+H] =583.
液淬灭反应，二氯甲烷 (20mL)萃取三次，有机相合并，水 (10mL)洗三次，无水硫酸钠干燥，+
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (73mg, 收率100%)。LC‑MS: m/z [M+H] =583.
[0126] 5‑甲基‑3‑(6‑((2‑(哌啶‑4‑基)‑2,3‑二氢‑1H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑6‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[3,4‑a]酞嗪‑3‑基)异噁唑
[0127]
[0128] 将4‑(6‑((((3‑(5‑甲基异噁唑‑3‑基)‑[1,2,4]三唑[3,4‑a]酞嗪‑6‑基)氧基]甲基)‑1,3‑二氢‑2H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑2‑基)哌啶‑1‑羧酸叔丁酯 (73mg, 0.125mmol)溶解在混合溶剂二氯甲烷 (5mL)和甲醇 (1mL)中，加入氯化氢乙酸乙酯溶液 (1mL)，混合物室温搅拌1小时。反应液直接浓缩，残余物用甲醇 (5mL)溶解，加入大孔树脂后搅拌16小时，+
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (60mg, 收率99%)。LC‑MS: m/z [M+H] =483.
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (60mg, 收率99%)。LC‑MS: m/z [M+H] =483.
[0129] 实施例1
[0130] 方法A
[0131] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑((6‑甲基‑6,7‑二氢‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0132]
[0133] 将3‑(7‑(叔丁基)‑6‑(((6,7‑二氢‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (100mg, 0.25mmol, 中间体38)溶解在甲醇 (1.5mL)中，加入氰基硼氢化钠 (46mg, 0.75mmol)，混合物室温搅拌10分钟，然后加入37%甲醛水溶液 (1mL)，反应混合物室温下搅拌3小时。向反应液中加入适量的1M氢氧化钠水溶液淬灭反应，二氯甲烷 (20mL)萃取三次，有机相合并，水 (10mL)洗三次，无水硫酸钠干燥，
1
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (50mg, 收率48%)。HNMR (400MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1 H), 7.57 ‑ 7.52 (m, 1 H), 7.52 ‑ 7.47 (m, 1 H), 6.84 (s, 1 H), 5.65 (s, 2 H),
3.98 (d, J = 6.8 Hz, 4 H), 2.63 (s, 3 H), 2.58 (s, 3 H), 1.45 (s, 9 H)；LC‑MS: +
m/z [M+H] =420.
1
过滤，滤液浓缩得到标题化合物 (50mg, 收率48%)。HNMR (400MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1 H), 7.57 ‑ 7.52 (m, 1 H), 7.52 ‑ 7.47 (m, 1 H), 6.84 (s, 1 H), 5.65 (s, 2 H),
3.98 (d, J = 6.8 Hz, 4 H), 2.63 (s, 3 H), 2.58 (s, 3 H), 1.45 (s, 9 H)；LC‑MS: +
m/z [M+H] =420.
[0134] 实施例6
[0135] 方法B
[0136] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑((6‑(1‑乙基吡咯烷‑3‑基)吡啶‑2‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b] 哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0137]
[0138] 将3‑(7‑(叔丁基)‑6‑氯‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑(100mg，0.34mmol)、(6‑(1‑乙基吡咯烷‑3‑基)吡啶‑2‑基)甲醇 (60mg，0.34mmol)和碳酸铯 (225mg，0.7mmol)依次加入到乙腈 (5mL)中，混合物50℃反应过夜。将反应液加入到水 (20mL)，二氯甲烷 (20mL)萃取三次，干燥浓缩，制备薄层色谱纯化 (二氯甲烷/甲醇=10/1)
1
得到白色固体标题化合物 (5mg，收率4%)。HNMR (400MHz, DMSO‑d6) δ 8.15 (s, 1 H),
7.86 (t, J=7.58 Hz, 1 H), 7.55 (d, J=7.83 Hz, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 1 H),
6.97 (s, 1 H), 5.61 (s, 2 H), 3.68 ‑ 3.78 (m, 1 H), 3.59 (br. s., 2 H), 3.15
‑ 3.24 (m, 2 H), 3.06 (d, J=5.87 Hz, 2 H), 2.56 (s, 3 H), 2.37 (dd, J=12.72,
5.87 Hz, 1 H), 2.03 ‑ 2.13 (m, 1 H), 1.35 ‑1.53 (m, 9 H), 1.20 (t, J=7.09 Hz, +
3 H)；LC‑MS: m/z [M+H] =462.
1
得到白色固体标题化合物 (5mg，收率4%)。HNMR (400MHz, DMSO‑d6) δ 8.15 (s, 1 H),
7.86 (t, J=7.58 Hz, 1 H), 7.55 (d, J=7.83 Hz, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 1 H),
6.97 (s, 1 H), 5.61 (s, 2 H), 3.68 ‑ 3.78 (m, 1 H), 3.59 (br. s., 2 H), 3.15
‑ 3.24 (m, 2 H), 3.06 (d, J=5.87 Hz, 2 H), 2.56 (s, 3 H), 2.37 (dd, J=12.72,
5.87 Hz, 1 H), 2.03 ‑ 2.13 (m, 1 H), 1.35 ‑1.53 (m, 9 H), 1.20 (t, J=7.09 Hz, +
3 H)；LC‑MS: m/z [M+H] =462.
[0139] 实施例23
[0140] 方法E
[0141] 3‑(7‑(叔丁基)‑6‑(((2‑甲基‑2,3‑二氢‑1H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑6‑基)甲氧基)‑[1,2,4 ]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑盐酸盐
[0142]
[0143] 将3‑(7‑(叔丁基)‑6‑((2,3‑二氢‑1H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑6‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[4,3‑b]哒嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (60mg, 0.15mmol)溶解在混合溶剂二氯甲烷和 甲醇 (1mL/1mL)中，分批加入氰基硼氢化钠 (30mg, 0.45mmol)和37%甲醛溶液(40mg,
0.45mmol)，混合物室温搅拌半小时。向反应液中加入1M氢氧化钠水溶液淬灭，用适量的二氯甲烷萃取三次，合并有机相，加入4M氯化氢乙酸乙酯溶液 (0.2mL)，析出的固体过滤收
1
集，干燥得到标题化合物 (24mg, 收率32%)。HNMR (400MHz, DMSO‑d6) δ 8.48 (br. s.,
1 H), 8.12 (br. s., 1 H), 7.53 (br. s., 1 H), 6.97 (br. s., 1 H), 5.57 (br.
s., 2 H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 5 H), 2.55 (br. s., 4 H), 1.39 (br. s., 10 H)；
+
LC‑MS: m/z [M+H] =420.
0.45mmol)，混合物室温搅拌半小时。向反应液中加入1M氢氧化钠水溶液淬灭，用适量的二氯甲烷萃取三次，合并有机相，加入4M氯化氢乙酸乙酯溶液 (0.2mL)，析出的固体过滤收
1
集，干燥得到标题化合物 (24mg, 收率32%)。HNMR (400MHz, DMSO‑d6) δ 8.48 (br. s.,
1 H), 8.12 (br. s., 1 H), 7.53 (br. s., 1 H), 6.97 (br. s., 1 H), 5.57 (br.
s., 2 H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 5 H), 2.55 (br. s., 4 H), 1.39 (br. s., 10 H)；
+
LC‑MS: m/z [M+H] =420.
[0144] 实施例46
[0145] 方法H
[0146] 3‑(6‑((6‑乙基‑6,7‑二氢‑5H‑吡咯并[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲氧基)‑[1,2,4]三唑并[3,4‑a]酞嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑
[0147]
[0148] 将(6‑乙基‑6,7‑二氢‑5H‑吡咯[3,4‑b]吡啶‑2‑基)甲醇 (中间体63，38mg, o0.21mmol)溶于无水四氢呋喃 (1mL)中，0 C条件下滴加双(三甲基硅基)氨基锂 (1M,
o
0.21mL, 0.21 mmol)，保持0 C条件下搅拌30分钟。然后加入3‑(6‑氯‑[1,2,4]三唑[3,4‑a]酞嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (中间体4，61mg, 0.21mmol)，混合物室温下搅拌过夜。加水稀释，用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析
1
(二氯甲烷:甲醇=100:1 20:1)分离得到淡黄色固体标题化合物 (14mg, 收率15%)。HNMR
~
(400MHz, DMSO‑d6) δ 8.59‑8.57 (m, 1H), 8.32‑8.30 (m, 1H), 8.14‑8.10 (m, 1H),
7.99‑7.97 (m, 1H), 7.74‑7.73 (m, 1H), 7.59‑7.57 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.67 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.88 (s, 2H), 2.76‑2.70 (m, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.13‑
+
1.10 (m, 3H)；LC‑MS: m/z [M+H] =428.
o
0.21mL, 0.21 mmol)，保持0 C条件下搅拌30分钟。然后加入3‑(6‑氯‑[1,2,4]三唑[3,4‑a]酞嗪‑3‑基)‑5‑甲基异噁唑 (中间体4，61mg, 0.21mmol)，混合物室温下搅拌过夜。加水稀释，用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析
1
(二氯甲烷:甲醇=100:1 20:1)分离得到淡黄色固体标题化合物 (14mg, 收率15%)。HNMR
~
(400MHz, DMSO‑d6) δ 8.59‑8.57 (m, 1H), 8.32‑8.30 (m, 1H), 8.14‑8.10 (m, 1H),
7.99‑7.97 (m, 1H), 7.74‑7.73 (m, 1H), 7.59‑7.57 (m, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.67 (s, 2H), 3.90 (s, 2H), 3.88 (s, 2H), 2.76‑2.70 (m, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.13‑
+
1.10 (m, 3H)；LC‑MS: m/z [M+H] =428.
[0149] 下表所列的实施例通过类似于上述实施例所述的方法制备，起始于相应的中间体：
[0150]
[0151]
[0152]
[0153] 生物学实验方法：
[0154] 细胞系构建和传代培养
[0155] α亚基、β亚基和γ亚基对形成一个完整的功能型GABAA受体是必不可少的。在该实施例中，本发明通过脂质体转染法（Felgner, P.L., et al. Proceedings of theNational Academy of Sciences, 1987, 84: 7413‑7417）构建并分别筛选出稳定表达人
源α5‑GABAA受体（包含α5β3γ2亚基）、α1‑GABAA受体（包含α1β3γ2亚基）和α2‑GABAA受体（包含α2β3γ2亚基）的HEK293细胞株。具体亚基蛋白序列如下：α5亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000810.3)；α1亚基（蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000806.5)；α2亚基 (蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000807.4)；β3亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000814.5)；
γ2亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000816.3)。
源α5‑GABAA受体（包含α5β3γ2亚基）、α1‑GABAA受体（包含α1β3γ2亚基）和α2‑GABAA受体（包含α2β3γ2亚基）的HEK293细胞株。具体亚基蛋白序列如下：α5亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000810.3)；α1亚基（蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000806.5)；α2亚基 (蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000807.4)；β3亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000814.5)；
γ2亚基(蛋白序列见GenBank 登录号：NM_000816.3)。
[0156] 将以上细胞系进行传代培养。扩增α5β3γ2‑HEK293细胞用于化合物对GABAA受体的苯二氮卓位点（BZD）亲和力测试。α5β3γ2‑HEK293、α1β3γ2‑HEK293细胞和α2β3γ2‑HEK293细胞在传代过程中部分悬浮细胞铺在用Poly‑D‑Lysine预处理的玻片上用于电生理测试（方法参照专利CN 107344936 A 第0586条）。
[0157] 效果实施例1 本发明化合物对α5‑GABAA受体的亲和活性
[0158] Flunitrazepam（氟硝西泮）是一种非特异高效结合BZD位点的试剂。通过化合物3
与H‑flunitrazepam竞争结合人源α5β3γ2受体可测定化合物对α5‑GABAA受体的亲和力。
与H‑flunitrazepam竞争结合人源α5β3γ2受体可测定化合物对α5‑GABAA受体的亲和力。
[0159] 收集稳定表达人源α5β3γ2受体的HEK293细胞，提取细胞膜，用于竞争结合试验。细胞悬浮于50 mM Tris‑HCl缓冲液(pH=7.4，Sigma™)中，在冰上经匀浆机匀浆20秒10次，
4°C ,1000g离心10 min。取上清, 重复以上步骤。 将上清在4°C (33800g; Thermo,
rotor: A27‑8x50)离心60 min, 取沉淀重悬于Tris缓冲液(50 mM Tris‑HCl, 10 mM
MgCl2, 0.5 mM EDTA, 10% glycerol) 中，此沉淀即为细胞膜。使用BCA（Bicinchoninic Acid）法（Pierce BCA Protein Assay Kit，Thermo™）测定蛋白质含量。将细胞膜制备1 ml等分物, ‑80 °C保存。
4°C ,1000g离心10 min。取上清, 重复以上步骤。 将上清在4°C (33800g; Thermo,
rotor: A27‑8x50)离心60 min, 取沉淀重悬于Tris缓冲液(50 mM Tris‑HCl, 10 mM
MgCl2, 0.5 mM EDTA, 10% glycerol) 中，此沉淀即为细胞膜。使用BCA（Bicinchoninic Acid）法（Pierce BCA Protein Assay Kit，Thermo™）测定蛋白质含量。将细胞膜制备1 ml等分物, ‑80 °C保存。
[0160] 放射性配体竞争结合试验在200 μL体系中(96 孔板，Agilent™)进行，其中有装3
有100 μL细胞膜。H‑flunitrazepam (PerkinElmer™，cat# NET567250UC )的浓度为1
‑5 ‑6
nM，待测化合物的浓度在1 x 10 ‑10 M范围内。以flumazenil（Tocris™，cat#1318）为对照。低信号对照孔(Low control，LC)加入1 μL 2 mM flumazenil (终浓度10 μM)，高信号对照孔(High control，HC)加入1 μL DMSO (Sigma™，cat#472301)。最终靶点膜蛋白的浓度为5 μg/孔。所有待测化合物样品溶解在DMSO中，储存液浓度均为10 mM。样品工作浓度为将所有样品用DMSO稀释至0.2 mM，然后进行4倍连续梯度稀释，共8个浓度梯度。用封板膜
(PerkinElmer™，cat#6050185)将96孔板密封，然后置于室温摇床孵育1小时。同时用浸板缓冲液(0.3% PEI，Sigma™，cat# P3143，4 ℃保存)浸泡GF/C过滤板，至少0.5小时。结合孵育完毕用细胞收集器收集到GF/C过滤板上，用洗板缓冲液(50 mM Tris‑HCl, pH 7.4, 4
℃保存)洗4次。50℃烘箱干燥1小时后把干燥好的GF/C过滤板底部封膜，用液体闪烁计数法检测滤膜残留放射性，每孔加入50 μL闪烁液，并密封，使用Microbeta2 (Perkin Elemer)
3
读数。计算待测样品对H‑flunitrazepam与GABAA受体膜蛋白结合的抑制活性，通过量效曲线拟合(GraphPad Prism 5软件)计算各待测样品的IC50，并通过IC50计算样品的Ki，从而评估样品与α5‑GABAA受体的结合能力。
有100 μL细胞膜。H‑flunitrazepam (PerkinElmer™，cat# NET567250UC )的浓度为1
‑5 ‑6
nM，待测化合物的浓度在1 x 10 ‑10 M范围内。以flumazenil（Tocris™，cat#1318）为对照。低信号对照孔(Low control，LC)加入1 μL 2 mM flumazenil (终浓度10 μM)，高信号对照孔(High control，HC)加入1 μL DMSO (Sigma™，cat#472301)。最终靶点膜蛋白的浓度为5 μg/孔。所有待测化合物样品溶解在DMSO中，储存液浓度均为10 mM。样品工作浓度为将所有样品用DMSO稀释至0.2 mM，然后进行4倍连续梯度稀释，共8个浓度梯度。用封板膜
(PerkinElmer™，cat#6050185)将96孔板密封，然后置于室温摇床孵育1小时。同时用浸板缓冲液(0.3% PEI，Sigma™，cat# P3143，4 ℃保存)浸泡GF/C过滤板，至少0.5小时。结合孵育完毕用细胞收集器收集到GF/C过滤板上，用洗板缓冲液(50 mM Tris‑HCl, pH 7.4, 4
℃保存)洗4次。50℃烘箱干燥1小时后把干燥好的GF/C过滤板底部封膜，用液体闪烁计数法检测滤膜残留放射性，每孔加入50 μL闪烁液，并密封，使用Microbeta2 (Perkin Elemer)
3
读数。计算待测样品对H‑flunitrazepam与GABAA受体膜蛋白结合的抑制活性，通过量效曲线拟合(GraphPad Prism 5软件)计算各待测样品的IC50，并通过IC50计算样品的Ki，从而评估样品与α5‑GABAA受体的结合能力。
[0161] 通过上述测定化合物与表达人源GABAA受体的HEK293细胞结合亲和力的方法获得的代表性检测结果如表1所示，实施例1、6、13、18、23、46、47、48、58、62、75、81的产物中未在表1记载的化合物对α5‑GABAA受体也均有亲和活性。
[0162] 表1 实施例产物对α5‑GABAA受体的亲和活性
[0163]
[0164] 效果实施例2 本发明化合物对α5/1/2‑GABAA受体的反向调节活性
[0165] 本发明人通过电生理的方法检测待测化合物对α5/1/2‑GABAA受体的功能活性。本方法优先测试化合物对α5‑GABAA受体的反向调节效率，挑选其中活性强的化合物再测试对α1/2‑GABAA受体的功能活性。具体方法如下所示：
[0166] 化合物浓度设定：药物筛选使用的药物终浓度均为100 nM。GABA浓度根据不同的细胞系特性采用不同浓度：对于表达α5‑GABAA受体的细胞系，GABA浓度为0.05~0.06 μM（约EC7~8）；对于表达α1‑GABAA受体的细胞系，GABA浓度为0.05~0.07 μM（约EC2~4）；对于表达α2‑GABAA受体的细胞系，GABA浓度为0.10~0.11 μM（约EC7~8）。
[0167] 电生理试验采用全细胞膜片钳技术，该方法可参照文献(I. Lecker, Y. Yin, D. S. Wang and B. A. Orser, British Journal of Anaesthesia, 2013, 110 (S1), i73‑
i81)报道的方法。电生理用细胞外液（ECS）成分如下：150 mM NaCl，5 mM KCl，2.5 mM CaCl2，1 mM MgCl2，10 mM HEPES和10 mM glucose (pH 7.4)；电生理用电极内液（ICS）配方如下：140 mM CsCl，11 mM EGTA，10 mM HEPES，2 mM CaCl2，1 mM MgCl2，4 mM MgATP，2 mM TEA (pH 7.3)。将GABA（Sigma™，cat# A5835）粉末用纯水配制成母液，在稀释于ECS中；化合物先用DMSO（Sigma™，cat#34869）配制成为4 mM的母液，再逐步稀释相应浓度的GABA‑ECS中。溶液均在电生理测试前新鲜配制。
i81)报道的方法。电生理用细胞外液（ECS）成分如下：150 mM NaCl，5 mM KCl，2.5 mM CaCl2，1 mM MgCl2，10 mM HEPES和10 mM glucose (pH 7.4)；电生理用电极内液（ICS）配方如下：140 mM CsCl，11 mM EGTA，10 mM HEPES，2 mM CaCl2，1 mM MgCl2，4 mM MgATP，2 mM TEA (pH 7.3)。将GABA（Sigma™，cat# A5835）粉末用纯水配制成母液，在稀释于ECS中；化合物先用DMSO（Sigma™，cat#34869）配制成为4 mM的母液，再逐步稀释相应浓度的GABA‑ECS中。溶液均在电生理测试前新鲜配制。
[0168] 信号采集使用EPC 10放大器及PatchMaster软件(HEKA)或Axon 700B 放大器及Clampex软件(AXON)。记录电极使用硼硅酸盐(borosilicate)玻璃拉制，电极电阻为4～6 MΩ。胞外给药采用ALA‑VC‑8PG™系统。记录时，选取单个独立生长的细胞。玻璃电极与细胞形成良好封接后破膜，形成全细胞模式。将细胞膜电位被钳制在‑60 mV，Gap‑free模式下记录。试验时，先在胞外施加约10 20秒的细胞外液。待基线稳定后，将胞外液切换至GABA溶~
液。此时，可以检测到GABA引起的电流。大约20～40秒，待电流稳定后，将胞外液切换至相应的药物溶液，检测化合物的效果。最后，将溶液切换至细胞外液，待基线回复到给药前水平终止试验。只有加入GABA溶液后电流大于50 pA且一段时间内电流相对稳定的细胞才可用
于化合物的测定。
液。此时，可以检测到GABA引起的电流。大约20～40秒，待电流稳定后，将胞外液切换至相应的药物溶液，检测化合物的效果。最后，将溶液切换至细胞外液，待基线回复到给药前水平终止试验。只有加入GABA溶液后电流大于50 pA且一段时间内电流相对稳定的细胞才可用
于化合物的测定。
[0169] 实验结果分析采用PatchMaster v2x90.1或PatchMaster v2x90.3软件(EPC 10放大器)和Clampex10.6软件（Axon700B 放大器）。各阶段的电流值按相应条件下稳定后电流的平均值计算。分析时，分别测量漏电流(Ileak)、加药前GABA电流(Ipre)和加药后GABA电流(Ipost)，化合物功能活性由以下公式计算得到：反向调节效率(%)=100‑100*(Ipost‑ Ileak)/(Ipre ‑ Ileak)。具体如表2所示。
[0170] 表2 实施例产物对α5/α1/2‑GABAA受体的反向调节活性
[0171]
[0172] 表3部分实施例的产物和对比化合物针对α5/1/2‑GABAA受体的反向调节活性
[0173]
[0174] 从电生理活性来看，本申请实施例1、6、13、18、23、46、47、48、58、62、75、81的产物针对α5‑GABAA受体的选择性更优，可能达到更好的药效的同时产生更少的副作用。
[0175] 效果实施例3 本发明化合物和现有化合物的药代性质对比
[0176] （1）化合物溶解度在模拟肠液（FaSSIF）中的溶解度
[0177] 实验材料和设备：
[0178] 50mM磷酸盐缓冲液pH=7.4：称取0.39g NaH2PO4•2H2O，1.4025 g Na2HPO4，置于锥形瓶中，加水240 ml，溶解并混匀，用10 M NaOH溶液调整pH到7.4，转移到250ml的容量瓶中，用水稀释到刻度。
[0179] 模拟肠液FaSSIF:称取54.76 mg FaSSIF‑V2（Biorelevant, batch. V2FAS‑0619‑A, lot. V2FAS01）加至15 ml缓冲液中，溶解后补足溶液至30 ml，室温下放置1小时后使用。
[0180] Waters e2695 HPLC高效液相色谱，Mettler XSE105分析天平。
[0181] 实验方法：
[0182] 先用DMSO配置10 mM储备液，用稀释剂（ACN：PB buffer50:50）稀释成1 μM～200 μM标曲溶液。
[0183] 模拟肠液中的热力学溶解度（TS in FaSSIF）。各称取样品约0.3 mg加入FaSSIF溶液1.5 mL，平行两份,1000 rpm在37℃振摇4小时,过滤，弃掉初滤液1 mL, 取续滤液400µL，滤液用高效液相色谱仪（UV）检测。本发明化合物测试结果如下表4所示。
[0184] （2）化合物在SD大鼠口服吸收后的血药浓度
[0185] 通过大鼠药代动力学实验里的最大血药浓度（Cmax），来评价化合物在大鼠体内的吸收情况。将试验化合物溶解后口服(po)灌胃给予雄性SD大鼠，每组3只，给药前禁食过夜。给予受试化合物后，在0.25、0.5、1、2、4和8小时经颈静脉穿刺采血，每个样品采集约
0.25ml。采用LC‑MS/MS法测定血浆药物浓度，使用Phoenix WinNonlin7.0计算药代动力学参数。给药剂量均为3mg/kg，溶媒为5%CMC‑Na水溶液。本发明化合物测试结果如下表4所示。
0.25ml。采用LC‑MS/MS法测定血浆药物浓度，使用Phoenix WinNonlin7.0计算药代动力学参数。给药剂量均为3mg/kg，溶媒为5%CMC‑Na水溶液。本发明化合物测试结果如下表4所示。
[0186] 表4 部分实施例的产物和对比化合物的溶解度和在SD大鼠中的药代参数
[0187]
[0188] 对比化合物的模拟肠液溶解度差，SD大鼠口服吸收的暴露量（血浆最大药物浓度Cmax）低，增加了制剂开发难度，限制了潜在的临床应用。本专利实施例化合物13和46的模拟肠液溶解度较好，化合物口服吸收好，成药性更佳。