一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法

摘要

本发明提供一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法。步骤S1、利用氯化胆碱和苯氧乙醇通过水浴锅恒温加热来配制低共熔溶剂；步骤S2、将干燥的鸡血藤粉末置于低共熔溶剂中，并加入复合糖苷酶，通过搅拌得到鸡血藤全粉匀浆并冷却到室温；步骤S3、对冷却到室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集离心处理后的上清液作为黄酮粗提液；步骤S4、静置黄酮粗提液，待粗提液析出黄酮沉淀后，对黄酮沉淀进行离心处理以获取黄酮沉淀的固相；步骤S5、将黄酮沉淀的固相以乙醇溶液进行洗涤，洗涤后进行离心处理以去除低共熔溶剂，得到总黄酮浸膏；步骤S6、对总黄酮浸膏进行灭菌和干燥处理，得到总黄酮精制物。

权利要求

1.一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，利用所述鸡血藤制备出的所述黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，所述方法包括：步骤S1、利用氯化胆碱和苯氧乙醇通过水浴锅恒温加热来配制低共熔溶剂，其中，所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇的质量比为1:0.7‑2.5；

步骤S2、将干燥的鸡血藤粉末置于所述低共熔溶剂中，并加入复合糖苷酶，通过搅拌得到鸡血藤全粉匀浆并冷却到室温，所述复合糖苷酶由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶组成；

步骤S3、对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集所述离心处理后的上清液作为黄酮粗提液；

步骤S4、静置所述黄酮粗提液，待所述粗提液析出黄酮沉淀后，对所述黄酮沉淀进行离心处理以获取所述黄酮沉淀的固相；

步骤S5、将所述黄酮沉淀的固相以乙醇溶液进行洗涤，洗涤后进行离心处理以去除所述低共熔溶剂，得到总黄酮浸膏；

步骤S6、对所述总黄酮浸膏进行灭菌和干燥处理，得到总黄酮精制物。

2.根据权利要求1所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S1中，称量并混合所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇，1克所述氯化胆碱配1.5克所述苯氧乙醇，将所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇的混合物置于所述水浴锅中进行恒温加热，所述水浴锅的温度为50‑80℃，所述水浴锅的恒温加热时间为45‑90分钟，从而制备出所述低共熔溶剂。

3.根据权利要求2所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S2中，将所述干燥的鸡血藤粉末过20‑60目筛后置于所述低共熔溶剂中，1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末配8‑20毫升所述低共熔溶剂，通过搅拌得到所述鸡血藤全粉匀浆，将所述鸡血藤全粉匀浆置于烧杯中并利用封口膜密封所述烧杯，对经密封的所述烧杯进行水浴超声处理，以将所述鸡血藤全粉匀冷却到所述室温，所述水浴超声处理的处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦。

4.根据权利要求3所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S3中，对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集经所述离心处理后的上清液和固体沉淀，在所述固体沉淀中再次加入所述低共熔溶剂以进行水浴超声处理，处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦，并再次执行离心处理、收集上清液处理、获取所述固体沉淀处理，重复2‑5次后，收集合并所有上清液。

5.根据权利要求4所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，所述步骤S3中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，每次在所述固体沉淀中加入的所述低共熔溶剂为在所述干燥的鸡血藤粉末中加入的所述低共熔溶剂的一半用量。

6.根据权利要求5所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S4中，静置所述黄酮粗提液的方式包括：将所述黄酮粗提液置于低温水浴中进行静置，所述低温水浴的温度为0‑20℃；或者将所述黄酮粗提液置于冰水混合物中进行静置；或者在所述黄酮粗提液中加入去离子水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述离子水；或者在所述黄酮粗提液中加入纯净水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述纯净水。

7.根据权利要求6所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S4中，对所述黄酮沉淀进行离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，以获取所述黄酮沉淀的固相和液相，收集所述固相。

8.根据权利要求7所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S5中，通过三次乙醇洗涤和离心处理，来去除所述黄酮沉淀的固相中的所述低共熔溶剂，以得到所述总黄酮浸膏；

其中所述乙醇溶液的浓度为10‑60%，1毫升所述黄酮沉淀的固相配3‑10毫升所述乙醇溶液；

其中所述步骤S5中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟；

其中所述总黄酮浸膏中黄酮苷水解度≥90%。

9.根据权利要求8所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，在所述步骤S6中，所述干燥处理包括冷冻干燥或者真空低温干燥，所述真空低温干燥的温度为40℃，所述总黄酮精制物的纯度≥85%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量的黄酮提取率为70%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末的黄酮提取率为7.5%。

10.根据权利要求1‑9任一项所述的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，其特征在于，所述总黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，口服用量为：4.8毫克所述总黄酮精制物对应于1千克人体体重；涂抹用量为：100微克所述总黄酮精制物对应于成人每天用量。

说明书

一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及黄酮制备领域，尤其是涉及一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法。

背景技术

[0002] 鸡血藤为《中国药典》收载的常用中药材，来源于豆科植物密花豆的干燥藤茎。鸡血藤味苦、甘，性温，多归于肝经和肾经。具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效。临床上用于风湿痹痛、月经不调等症。主要分布于广西、广东、云南和福建等地，药理研究表明鸡血藤具有抗突变、抗病毒、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种活性。其中，黄酮类化合物是鸡血藤主要成分，主要有黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、异黄酮类、黄烷类等。

[0003] 临床实验发现鸡血藤的毒性小、安全性高、范围广，适于广泛应用于临床。故医学家认为科学应用鸡血藤能很好地保健身体，可用于日常生活中。目前，鸡血藤服用方式主要为中药汤剂、泡酒、泡水茶饮、烹煮药膳等方式。目前，市场上的鸡血藤药材多来源于野生采摘，随着近些年用药需求量的增大，加之利益链的驱使，野生资源也快濒临枯竭。现我国广西、广东省份的野生资源已濒临枯竭，仅云南尚有一定野生资源，但蕴藏量已很低。

[0004] 然而，常规食用方式仅有5%的鸡血藤黄酮类化合物被释放出来，造成了严重的资源浪费、功能效果不明显等结果。其次，鸡血藤总黄酮提取方法多为碱溶酸沉法，存在有机试剂浓度高、用量大、提取温度高、分离纯化复杂、反应条件剧烈、得率低等缺点。

[0005] 鸡血藤中黄酮含量高达10%以上。因此，研究如何进一步提高鸡血藤中黄酮的利用率有一定实际意义，也是鸡血藤加工应用的新方向。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，以解决现有技术中存在的技术问题，该方法成本低、工艺简单、效率高、活性强，属于绿色环保的改善痤疮功能的鸡血藤黄酮精制物的生产工艺。

[0007] 本发明第一方面提供了一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法。利用所述鸡血藤制备出的所述黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，所述方法包括：

[0008] 步骤S1、利用氯化胆碱和苯氧乙醇通过水浴锅恒温加热来配制低共熔溶剂；

[0009] 步骤S2、将干燥的鸡血藤粉末置于所述低共熔溶剂中，并加入复合糖苷酶，通过搅拌得到鸡血藤全粉匀浆并冷却到室温，所述复合糖苷酶由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶组成；

[0010] 步骤S3、对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集所述离心处理后的上清液作为黄酮粗提液；

[0011] 步骤S4、静置所述黄酮粗提液，待所述粗提液析出黄酮沉淀后，对所述黄酮沉淀进行离心处理以获取所述黄酮沉淀的固相；

[0012] 步骤S5、将所述黄酮沉淀的固相以乙醇溶液进行洗涤，洗涤后进行离心处理以去除所述低共熔溶剂，得到总黄酮浸膏；

[0013] 步骤S6、对所述总黄酮浸膏进行灭菌和干燥处理，得到总黄酮精制物。

[0014] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S1中，称量并混合所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇，1克所述氯化胆碱配1.5克所述苯氧乙醇，将所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇的混合物置于所述水浴锅中进行恒温加热，所述水浴锅的温度为50‑80℃，所述水浴锅的恒温加热时间为45‑90分钟，从而制备出所述低共熔溶剂。

[0015] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S2中，将所述干燥的鸡血藤粉末过20‑60目筛后置于所述低共熔溶剂中，1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末配8‑20毫升所述低共熔溶剂，通过搅拌得到所述鸡血藤全粉匀浆，将所述鸡血藤全粉匀浆置于烧杯中并利用封口膜密封所述烧杯，对经密封的所述烧杯进行水浴超声处理，以将所述鸡血藤全粉匀冷却到所述室温，所述水浴超声处理的处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦。

[0016] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S3中，对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集经所述离心处理后的上清液和固体沉淀，在所述固体沉淀中再次加入所述低共熔溶剂以进行水浴超声处理，处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦，并再次执行离心处理、收集上清液处理、获取所述固体沉淀处理，重复2‑5次后，收集合并所有上清液。

[0017] 根据本发明第一方面提供的方法，所述步骤S3中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，每次在所述固体沉淀中加入的所述低共熔溶剂为在所述干燥的鸡血藤粉末中加入的所述低共熔溶剂的一半用量。

[0018] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S4中，静置所述黄酮粗提液的方式包括：

[0019] 将所述黄酮粗提液置于低温水浴中进行静置，所述低温水浴的温度为0‑20℃；或者

[0020] 将所述黄酮粗提液置于冰水混合物中进行静置；或者

[0021] 在所述黄酮粗提液中加入去离子水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述离子水；或者

[0022] 在所述黄酮粗提液中加入纯净水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述纯净水。

[0023] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S4中，对所述黄酮沉淀进行离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，以获取所述黄酮沉淀的固相和液相，收集所述固相。

[0024] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S5中，通过三次乙醇洗涤和离心处理，来去除所述黄酮沉淀的固相中的所述低共熔溶剂，以得到所述总黄酮浸膏；

[0025] 其中所述乙醇溶液的浓度为10‑60%，1毫升所述黄酮沉淀的固相配3‑10毫升所述乙醇溶液；

[0026] 其中所述步骤S5中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟；

[0027] 其中所述总黄酮浸膏中黄酮苷水解度≥90%。

[0028] 根据本发明第一方面提供的方法，在所述步骤S6中，所述干燥处理包括冷冻干燥或者真空低温干燥，所述真空低温干燥的温度为40℃，所述总黄酮精制物的纯度≥85%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量的黄酮提取率为70%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末的黄酮提取率为7.5%。

[0029] 根据本发明第一方面提供的方法，所述总黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，口服用量为：4.8毫克所述总黄酮精制物对应于1千克人体体重；涂抹用量为：100微克所述总黄酮精制物对应于成人每天用量。

[0030] 本发明第二方面提供了一种利用鸡血藤制备的黄酮精制物，所述黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，所述黄酮精制物基于本发明第一方面提供的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法来获取。

[0031] 综上，本发明提供的技术方案采用低共熔溶剂提取鸡血藤黄酮、水沉鸡血藤黄酮精制物，具有低成本、高效率、绿色环保的优势，适合产业化生产。此外，天然、高效的改善痤疮功能活性的鸡血藤黄酮精制物是当前市场上迫切需要的产品，这对于实现鸡血藤高值化利用具有十分重要的社会与经济效益。

附图说明

[0032] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

[0033] 图1为根据本发明实施例的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法的流程图。

具体实施方式

[0034] 下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0035] 本发明第一方面提供了一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法，利用所述鸡血藤制备出的所述黄酮精制物用于改善皮肤痤疮。图1为根据本发明实施例的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法的流程图；如图1所示，所述方法包括：

[0036] 步骤S1、利用氯化胆碱和苯氧乙醇通过水浴锅恒温加热来配制低共熔溶剂；

[0037] 步骤S2、将干燥的鸡血藤粉末置于所述低共熔溶剂中，并加入复合糖苷酶，通过搅拌得到鸡血藤全粉匀浆并冷却到室温，所述复合糖苷酶由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶组成；

[0038] 步骤S3、对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集所述离心处理后的上清液作为黄酮粗提液；

[0039] 步骤S4、静置所述黄酮粗提液，待所述粗提液析出黄酮沉淀后，对所述黄酮沉淀进行离心处理以获取所述黄酮沉淀的固相；

[0040] 步骤S5、将所述黄酮沉淀的固相以乙醇溶液进行洗涤，洗涤后进行离心处理以去除所述低共熔溶剂，得到总黄酮浸膏；

[0041] 步骤S6、对所述总黄酮浸膏进行灭菌和干燥处理，得到总黄酮精制物。

[0042] 在一些实施例中，在所述步骤S1中，称量并混合所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇，1克所述氯化胆碱配1.5克所述苯氧乙醇，将所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇的混合物置于所述水浴锅中进行恒温加热，所述水浴锅的温度为50‑80℃，所述水浴锅的恒温加热时间为45‑90分钟，从而制备出所述低共熔溶剂。

[0043] 具体地，所述氯化胆碱和所述苯氧乙醇的质量比的范围可以选取为1：（0.7‑2.5），更优的，氯化胆碱和所述苯氧乙醇的质量比的范围选取为1：（0.9‑2.0），更优的，氯化胆碱和所述苯氧乙醇的质量比的范围选取为1：（1‑1.5）。所述水浴锅的温度可选取的范围为50‑90℃，更优的，所述水浴锅的温度为70‑80℃,通过加热制备出所述低共熔溶剂。

[0044] 在一些实施例中，在所述步骤S2中，将所述干燥的鸡血藤粉末过20‑60目筛后置于所述低共熔溶剂中，1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末配8‑20毫升所述低共熔溶剂，通过搅拌得到所述鸡血藤全粉匀浆，将所述鸡血藤全粉匀浆置于烧杯中并利用封口膜密封所述烧杯，对经密封的所述烧杯进行水浴超声处理，以将所述鸡血藤全粉匀冷却到所述室温，所述水浴超声处理的处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦。

[0045] 具体地，所述复合糖苷酶由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶、β‑葡萄糖苷酶按质量比2：2：6组成，添加量占所述干燥的鸡血藤粉末的质量的1‑5%。1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末对应8‑40毫升所述低共熔溶剂，更优的，1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末对应10‑30毫升所述低共熔溶剂，更优的，1克过筛后的干燥的鸡血藤粉末对应15‑20毫升所述低共熔溶剂，通过搅拌得到所述鸡血藤全粉匀浆，或者通过震荡得到所述鸡血藤全粉匀浆，或者通过涡旋得到所述鸡血藤全粉匀浆，或者通过超声得到所述鸡血藤全粉匀浆，将所述鸡血藤全粉匀浆置进行超声提取，所述水浴超声处理的处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦。将处理后的鸡血藤全粉匀浆冷却到室温。

[0046] 在一些实施例中，在所述步骤S3中，对冷却到所述室温的鸡血藤全粉匀浆进行离心处理，收集经所述离心处理后的上清液和固体沉淀，在所述固体沉淀中再次加入所述低共熔溶剂以进行水浴超声处理，处理温度为30‑80℃，处理时间为30‑120分钟，处理功率为200‑600瓦，并再次执行离心处理、收集上清液处理、获取所述固体沉淀处理，重复2‑5次后，收集合并所有上清液。

[0047] 在一些实施例中，所述步骤S3中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，每次在所述固体沉淀中加入的所述低共熔溶剂为在所述干燥的鸡血藤粉末中加入的所述低共熔溶剂的一半用量。

[0048] 具体地，上述步骤S3中的离心处理即为除渣处理，通过挤压处理的方式或者膜分离的方式得到清液和固体残渣，随后所述固体残渣再次加入所述低共熔溶剂进行提取和除渣，更优地，提取和除渣的次数为1‑2次。再次加入的低共熔溶剂量为一次提取量的10%‑100%，更优地，再次加入的低共熔溶剂量为一次提取量的20%‑60%，更优地，再次加入的低共熔溶剂量为一次提取量的30%‑40%，合并所收集的清液作为所述黄酮粗提液

[0049] 在一些实施例中，在所述步骤S4中，静置所述黄酮粗提液的方式包括：

[0050] 将所述黄酮粗提液置于低温水浴中进行静置，所述低温水浴的温度为0‑20℃；或者

[0051] 将所述黄酮粗提液置于冰水混合物中进行静置；或者

[0052] 在所述黄酮粗提液中加入去离子水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述离子水；或者

[0053] 在所述黄酮粗提液中加入纯净水进行静置，1毫升所述黄酮粗提液配0.3‑0.6毫升所述纯净水。

[0054] 具体地，所述去离子水温度为0℃到室温，优选0℃；所述纯净水温度为0℃到室温，优选0℃。

[0055] 在一些实施例中，在所述步骤S4中，对所述黄酮沉淀进行离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟，以获取所述黄酮沉淀的固相和液相，收集所述固相。

[0056] 具体地，对所述黄酮沉淀进行离心处理的转速可以选取的范围为3000‑10000转/分钟，时间可以选取的范围为3‑15分钟。

[0057] 在一些实施例中，在所述步骤S5中，通过三次乙醇洗涤和离心处理，来去除所述黄酮沉淀的固相中的所述低共熔溶剂，以得到所述总黄酮浸膏；

[0058] 其中所述乙醇溶液的浓度为10‑60%，1毫升所述黄酮沉淀的固相配3‑10毫升所述乙醇溶液；

[0059] 其中所述步骤S5中的离心处理的转速为3000‑5000转/分钟，时间为5‑15分钟；

[0060] 其中所述总黄酮浸膏中黄酮苷水解度≥90%。

[0061] 具体地，通过三次乙醇洗涤和离心处理，来去除所述黄酮沉淀的固相中的吸附的低共熔溶剂。步骤5中的离心处理的转速可以选取的范围为3000‑10000转/分钟，时间可以选取的范围为3‑15分钟；

[0062] 在一些实施例中，在所述步骤S6中，所述干燥处理包括冷冻干燥或者真空低温干燥，所述真空低温干燥的温度为40℃，所述总黄酮精制物的纯度≥85%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量的黄酮提取率为70%，相比于所述干燥的鸡血藤粉末的黄酮提取率为7.5%。

[0063] 在一些实施例中，所述总黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，口服用量为：4.8毫克所述总黄酮精制物对应于1千克人体体重；涂抹用量为：100微克所述总黄酮精制物对应于成人每天用量。

[0064] 实施方式的具体示例一

[0065] S1、低共熔溶剂配置：精准称量氯化胆碱和苯氧乙醇，按质量比1：1.2混合后，置于65℃水浴锅恒温加热60分钟。

[0066] S2、将干燥的鸡血藤粉末过30目筛，按料液比1: 20（质量/体积）置于低共熔溶剂中，加入3%（质量占比）的由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶，按质量比2：2：6组成复合糖苷酶，搅拌后得到鸡血藤全粉匀浆，用封口膜将烧杯密封，60℃水浴、400W超声处理80分钟，冷却至室温。

[0067] S3、4000转/分钟，5分钟离心S2中的提取液，收集上清，固体加原始物料10倍的低共熔溶剂再次提取2次并离心，合并上清，获得黄酮粗提液。

[0068] S4、将黄酮粗提液置于4℃低温水浴中，静置，待溶液析出沉淀后，4000 转/分钟离心5分钟分离固体和液相，合并收集固相。

[0069] S5、将S4的固相按料液比1：4（体积/体积）加入浓度为30%乙醇搅拌洗涤，4000转/分钟离心5分钟，重复洗涤离心操作三次，得到去除低共熔溶剂的鸡血藤总黄酮浸膏。

[0070] S6、鸡血藤总黄酮浸膏灭菌后，冷冻干燥，得到鸡血藤总黄酮精制粉末。

[0071] 经测试分析，所得鸡血藤总黄酮精制粉末中的总黄酮含量为85.3质量百分比，提取率≥71.9质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量），提取率≥7.6质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末），黄酮苷水解度≥92.1%。

[0072] 实施方式的具体示例二

[0073] S1、低共熔溶剂配置：精准称量氯化胆碱和苯氧乙醇，按质量比1：1混合后，置于70℃水浴锅恒温加热90分钟。

[0074] S2、将干燥的鸡血藤粉末过50目筛，按料液比1:15（质量/体积）置于低共熔溶剂中，加入4%（质量占比）的由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶，按质量比2：2：6组成复合糖苷酶，搅拌后得到鸡血藤全粉匀浆，用封口膜将烧杯密封，50℃水浴、450W超声处理100分钟，冷却至室温。

[0075] S3、4500 转/分钟，10 分钟离心S2中的提取液，收集上清，固体加原始物料8倍的低共熔溶剂再次提取3次并离心，合并上清，获得黄酮粗提液。

[0076] S4、黄酮粗提液置于2℃低温水浴中，静置，待溶液析出沉淀后，4500 转/分钟离心10分钟分离固体和液相，合并收集固相。

[0077] S5、将S4的固相按料液比1：6（体积/体积）加入浓度为40%乙醇搅拌洗涤，4500转/分钟离心10分钟，重复洗涤离心操作三次，得到去除低共熔溶剂的鸡血藤总黄酮浸膏。

[0078] S6、鸡血藤总黄酮浸膏灭菌后，40℃真空干燥，得到鸡血藤总黄酮精制粉末。

[0079] 经测试分析，所得鸡血藤总黄酮精制粉末中的总黄酮含量为88.2质量百分比，提取率≥73.6质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量），提取率≥7.8质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末），黄酮苷水解度≥92.9%。

[0080] 实施方式的具体示例三

[0081] S1、低共熔溶剂配置：精准称量氯化胆碱和苯氧乙醇，按质量比1.2：1混合后，置于50℃水浴锅恒温加热55分钟。

[0082] S2、将干燥的鸡血藤粉末过40目筛，按料液比1: 10（质量/体积）置于低共熔溶剂中，加入2%（质量占比）的由鼠李糖苷酶、α‑葡萄糖苷酶和β‑葡萄糖苷酶，按质量比2：2：6组成复合糖苷酶，搅拌后得到鸡血藤全粉匀浆，用封口膜将烧杯密封，30℃水浴、500 W超声处理100分钟，冷却至室温。

[0083] S3、3000转/分钟，8分钟离心S2中的提取液，收集上清，固体加原始物料5倍的低共熔溶剂再次提取4次并离心，合并上清，获得黄酮粗提液。

[0084] S4、黄酮粗提液按料液比1：0.5（体积/体积）添加去离子水，静置，待溶液析出沉淀后，3000转/分钟离心8分钟分离固体和液相，合并收集固相。

[0085] S5、将S4的固相按料液比1：8（体积/体积）加入浓度为20%乙醇搅拌洗涤，3000转/分钟离心8分钟，重复洗涤离心操作三次，得到去除低共熔溶剂的鸡血藤总黄酮浸膏。

[0086] S6、鸡血藤总黄酮浸膏灭菌后，40℃真空干燥，得到鸡血藤总黄酮精制粉末。

[0087] 经测试分析，所得鸡血藤总黄酮精制粉末中的总黄酮含量为86.4质量百分比，提取率≥70.2质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末中的黄酮总量），提取率≥7.5质量百分比（相比于所述干燥的鸡血藤粉末），黄酮苷水解度≥90.3%。

[0088] 所述总黄酮精制物具有改善痤疮的功能活性，经口服和涂抹有效。本方法对其改善痤疮的功能活性进行验证。

[0089] 受试样品：实施方式的具体示例一至三的鸡血藤总黄酮精制粉末、鸡血藤粉末及丹参酮（阳性对照）。

[0090] 实验动物及饲养环境：SPF级雄性金黄地鼠，100±10g，6‑8周龄，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。基础饲料成分：碳水化合物64%，蛋白质21%，脂肪4%，纤维5%，水分6%。上述饲料购于北京维通利华实验动物技术有限公司。饲养环境通风良好，昼夜变化规律（8:00‑20:00），室温23±2 ℃，相对湿度55±5%。

[0091] 实验分组：SPF级雄性金黄地鼠适应性饲养一周，自由采食。一周后随机分成2组（口服组和涂抹组），分别包括正常组、阳性对照组（丹参酮/维生素A乳膏）、样品组（实施例13，并分低、高两个剂量组），每组5只试验动物，共计16组。灌胃剂量：低剂量为30 mg/kg，高~
剂量为60 mg/kg，丹参酮对照组的剂量为20 mg/kg。涂抹剂量：低剂量为10 mg/只，高剂量为20 mg/只，维生素A乳膏对照组的剂量为10 mg/只。实验周期为4周。

[0092] 皮脂腺斑组织TG含量测定：实验结束后，用剃毛器将金黄地鼠两侧皮脂腺斑上的毛发清理干净，测量0d和28d两侧皮脂腺斑面积，并将金黄地鼠腹部两侧的皮脂腺斑剪下。称取0.1 g左右的金黄地鼠皮脂腺斑，用剪刀将其破碎成小块，按1:9比例加入生理盐水，用玻璃匀浆器将其研磨成组织匀浆，整个过程在冰浴中进行，研磨后将组织匀浆3000 g离心
10 min，测定金黄地鼠皮脂腺斑上清液中TG含量和Caspase‑3含量。

[0093] 表1 鸡血藤黄酮精制物经口改善痤疮功能活性评价

[0094]

[0095] 表2 鸡血藤黄酮精制物涂抹改善痤疮功能活性评价

[0096]

[0097] 从表1的结果可知，采用本发明制备的鸡血藤黄酮精制物经口改善痤疮功能活性明显优于丹参酮。从TG含量来看，与正常组相比（0.83 mmol/g prot），丹参酮对照组降低到0.49 mmol/g prot，但均弱于实施例1 3的低剂量组（0.35 0.45 mmol/g prot），说明经本~ ~
发明制备的血藤黄酮精制物在抑制皮脂腺斑中甘油三酯的能力优于丹参酮对照组。从皮脂腺斑面积增长方面来看，服用丹参酮后，可以通过提高金黄地鼠皮脂腺斑中凋亡蛋白Caspase‑3的活性来促进皮脂腺斑细胞凋亡进而控制皮脂腺斑的增长。但是，当金黄地鼠食用了本发明制备的鸡血藤黄酮精制以后，其低、高剂量组的Caspase‑3的活性和皮脂腺斑的增长率均优于丹参酮对照组，皮脂腺斑面积与丹参酮对照组无显著性差异。

[0098] 从表2的结果可知，采用本发明制备的鸡血藤黄酮精制物涂抹改善痤疮功能活性明显优于丹参酮。从TG含量来看，与正常组相比（1.19 mmol/g prot），丹参酮对照组降低到0.68 mmol/g prot，但均弱于实施例1 3的高剂量组（0.56 0.68 mmol/g prot），说明经本~ ~
发明制备的血藤黄酮精制物在抑制皮脂腺斑中甘油三酯的能力优于丹参酮对照组。从皮脂腺斑面积增长方面来看，服用丹参酮后，可以通过提高金黄地鼠皮脂腺斑中凋亡蛋白Caspase‑3的活性来促进皮脂腺斑细胞凋亡进而控制皮脂腺斑的增长。但是，当金黄地鼠食用了本发明制备的鸡血藤黄酮精制以后，其高剂量组的Caspase‑3的活性和皮脂腺斑的增长率均优于丹参酮对照组。

[0099] 以上结果表明，经本发明制备的鸡血藤黄酮精制物经口服或涂抹后均有显著的改善痤疮功能活性的效果，充分说明了本发明技术的有效性和优越性。鉴于采用本发明的制备方法具有高效、低成本的优势，所得鸡血藤黄酮精制具有良好的改善痤疮的效果，因此，该技术可用于产业化开发改善痤疮功能活性的鸡血藤黄酮精制。

[0100] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

[0101] 本发明第二方面提供了一种利用鸡血藤制备的黄酮精制物，所述黄酮精制物用于改善皮肤痤疮，所述黄酮精制物基于本发明第一方面提供的一种利用鸡血藤制备黄酮精制物的方法来获取。

[0102] 综上，本发明提供的第一、第二方面的方案，具备以下有益效果：（1）本发明采用低共熔溶剂提取黄酮，选用适合该体系的低共熔溶剂，充分利用黄酮在低共熔溶剂中的高分配系数，二者间形成的稳定氢键作用，促进黄酮向溶剂相的转移，不仅大幅提高溶解度和提取率，减少了传统高温加热的时间及溶剂消耗量，作为安全绿色的离子液体可以回收重复利用，还充分确保了产品的安全性。（2）本发明采用的冷水促沉纯化技术，避免了高浓度有机试剂的添加、高温处理和溶剂去除步骤，使产品更加安全稳定，从而提高产品的改善痤疮的功能效果。（3）本发明采用的低共熔溶剂提取‑冷水促沉纯化‑冷冻干燥技术，不仅能够避免传统工艺带来的大量灰分组分，还能简化分离纯化步骤和缩短操作时间，大幅提高了产品的纯度（≥85质量%）。该技术分离效果好、安全性高、绿色环保、生产效率高，有效降低了生产成本，适合于产业化生产。

[0103] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。