地美硝唑在制备抗β-内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用

摘要

本发明涉及生物医药领域，具体地属于动物源细菌性疾病的防治领域。本发明公开了地美硝唑在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用。本发明还提供了一种抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物组合物，包括地美硝唑和头孢菌素类抗生素如头孢噻肟。本发明地美硝唑和头孢噻肟联合应用具有协同增效的作用，可以调高抗生素的敏感性、减少抗生素用量，达到更好的协同抗菌的目的，同时也为兽医临床上β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌引起的疾病的治疗提供技术支持。

权利要求

1.地美硝唑和头孢噻肟的药物组合物在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为30 35μg/mL，头孢噻肟的浓度为125 130μg/mL。

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说明书

地美硝唑在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及生物医药领域，尤其涉及动物源细菌性疾病的防治领域。

背景技术

[0002] 大肠杆菌是引起尿路感染和血液感染的主要致病菌，大肠杆菌病发病后多采用药物治疗，但由于抗菌药物的使用不当或滥用，不仅使治疗成本提高，而且导致人和动物高度耐药，对公共卫生健康造成了严重的威胁。在过去10年中，β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌的检出率在全球范围类持续增加，β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌引起的感染往往死亡率更高，已经从鸡鸭猪牛等家畜、家禽以及废水，环境中分离到了β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌，而且耐药菌株能在环境和水体中长期存在，并且有可能增加人类感染的风险，β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌已经对全球公共卫生健康造成了严重的威胁。粘菌素是治疗革兰氏阴性菌的最后一道防线，但是近年来不断有粘菌素耐药的报道，目前对于β‑内酰胺类耐药性菌引起的感染的治疗已经到了无药可治的局面，因此急需开发新的有效药物或探索新的药物组合物来解决耐药性问题。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种地美硝唑在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用，本发明地美硝唑和头孢噻肟联合应用具有协同增效的作用，达到了更好的协同抗菌的目的。

[0004] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

[0005] 本发明提供了一种地美硝唑在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用。

[0006] 作为优选，所述地美硝唑的浓度为2～2000μg/mL。

[0007] 本发明还提供了一种抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物组合物，包括地美硝唑和头孢菌素类抗生素。

[0008] 作为优选，所述头孢菌素类抗生素包括头孢噻肟。

[0009] 作为优选，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为120～130μg/mL，头孢噻肟的浓度为60～70μg/mL。

[0010] 作为优选，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为60～65μg/mL，头孢噻肟的浓度为125～130μg/mL。

[0011] 作为优选，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为30～35μg/mL，头孢噻肟的浓度为125～130μg/mL。

[0012] 通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：

[0013] 本发明将地美硝唑和头孢噻肟联合使用，该组合可以调高抗生素的敏感性、减少抗生素用量，具有协同增效的作用。本发明将主要功效为驱虫的地美硝唑作为头孢菌素类抗生素的增效剂，其起到了协同增效的作用。本发明为兽医临床上β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌引起的疾病的治疗提供技术支持。

附图说明

[0014] 图1为地美硝唑和头孢噻肟的MIC测定结果；

[0015] 图2为地美硝唑和头孢噻肟两药联用的培养结果。

具体实施方式

[0016] 本发明提供了一种地美硝唑在制备抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物中的应用。

[0017] 在本发明中，所述地美硝唑溶液以TSA培养基为溶剂，地美硝唑为溶质；所述地美硝唑溶液浓度为2～2000μg/mL，进一步优选为3.9～2000μg/mL。

[0018] 本发明还提供了一种抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物组合物。

[0019] 在本发明中，所述药物组合物包括抗β‑内酰胺类耐药性大肠杆菌药物组合物。

[0020] 在本发明中，所述头孢菌素类抗生素包括头孢噻肟。

[0021] 在本发明的一个具体实施方式中，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为120～130μg/mL，头孢噻肟的浓度为60～70μg/mL，进一步优选为，地美硝唑的浓度为125μg/mL，头孢噻肟的浓度为64μg/mL。

[0022] 在本发明的另一个具体实施方式中，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为60～65μg/mL，头孢噻肟的浓度为125～130μg/mL，进一步优选为，地美硝唑的浓度为62.5μg/mL，头孢噻肟的浓度为128μg/mL。

[0023] 在本发明的另一个具体实施方式中，所述药物组合物中地美硝唑的浓度为30～35μg/mL，头孢噻肟的浓度为125～130μg/mL，进一步优选为，地美硝唑的浓度为31.25μg/mL，头孢噻肟的浓度为128μg/mL。

[0024] 下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

[0025] 实验材料说明

[0026] 实验菌株：大肠杆菌BNCC358242，购自北纳生物。

[0027] 1024μg/mL头孢噻肟溶液的配制：精确称取10.24mg的头孢噻肟加入到10mLTSB培养基中，振荡溶解即可。

[0028] 2000μg/mL地美硝唑溶液的配制：精确称取20.00mg的地美硝唑加入到5mLTSB培养基+5mLNaOH混合液中，超声4h，工作频率为40KHz。

[0029] 实施例1：分别测定头孢噻肟、地美硝唑最小抑菌浓度(MIC)

[0030] 1)取出‑80℃冻存的大肠杆菌耐药株，用一次性接种环蘸取菌液接种到TSA培养基中，37℃过夜培养，挑取单菌落接到TSB培养基中，37℃，200rpm振荡培养10～16h，用细菌浊8
度计调整至0.5麦氏浊度使细菌浓度保持在1×10CFU/mL。

[0031] 2)用微量肉汤稀释法分别测定头孢噻肟、地美硝唑的MIC，将上述得到的菌液稀释6
100倍，使其浓度为1×10CFU/mL。

[0032] 3)在96孔板中任选一行，第1～10个孔中依次加入按倍比稀释的100μL的头孢噻肟溶液和100μL的菌液，所述倍比稀释后的头孢噻肟溶液浓度分别为1024μg/mL、512μg/mL、256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL，第11个孔为阳性对照组，添加200μL的菌液，第12个孔为阴性对照组，添加200μL的TSB培养基。在37℃培养12～16h，观察结果，并测定OD600；

[0033] 在96孔板中再选一行，第1～10个孔中依次加入按倍比稀释的100μL的地美硝唑溶液和100μL的菌液，所述倍比稀释后的地美硝唑溶液浓度分别为2000μg/mL、1000μg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL、31.3μg/mL、15.6μg/mL、7.8μg/mL、3.9μg/mL，第11个孔为阳性对照组，添加200μL的菌液，第12个孔为阴性对照组，添加200μL的TSB培养基。在37℃培养12～16h，观察结果，并测定OD600。

[0034] 结果：

[0035] 所述不同浓度下头孢噻肟溶液测定的OD600如表1所示：

[0036] 表1不同浓度头孢噻肟溶液处理后菌液的OD600

[0037]

[0038] 所述不同浓度下地美硝唑溶液测定的OD600如表2所示：

[0039] 表2不同浓度地美硝唑溶液溶液处理后菌液的OD600

[0040]

[0041] 综合考虑两表，可得孢噻肟和地美硝唑的MIC值分别为：MIC头孢噻肟＝512μg/mL，MIC地美硝唑＝500μg/mL。

[0042] 实施例2：测定头孢噻肟和地美硝唑联用的最低抑菌浓度

[0043] 根据上述所测定的结果，在96孔板中用棋盘法测定联合用药的最低抑菌浓度值，各孔中加入50μL的头孢噻肟溶液，其药物的浓度依次为1MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC，再加入50μL的地美硝唑溶液，其药物的浓度依次为2MIC、1MIC、1/2MIC、1/
6
4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC，然后加入100μL的浓度为1×10CFU/mL的细菌稀释液，同时设置只含有200μL细菌稀释液的阳性对照和只含有200μL的TSB培养基的阴性对照。置于
37℃培养12～16h，观察结果，测定OD600，并计算FIC(抑菌浓度分数指数)，根据FIC指数来评价联合用药结果。

[0044] FIC指数计算方法如下：

[0045]

[0046] 若FIC≤0.5，则表现出协同作用；若0.5

[0047] 所述两药联用时测定的OD600如表3所示：

[0048] 表3两药联用时菌液的OD600

[0049]

[0050] (1～6依次为1MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC的头孢噻肟；A～G依次为2MIC、1MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC、1/32MIC的地美硝唑)

[0051] 由以上实施例可知，本发明提供了不用浓度的地美硝唑和头孢噻肟对所述耐药大肠杆菌的抑制效果，其中，发现MIC地美硝唑＝500μg/mL，MIC头孢噻肟＝512μg/mL。本发明还提供了地美硝唑和头孢噻肟两药联用时对所述耐药大肠杆菌的OD600，发现地美硝唑与头孢噻肟联用对多药耐药大肠杆菌分离株是有明显的协同抗菌作用。

[0052] 其中，在计算两药联用时的FIC指数时，发现有三种组合的FIC＜0.5：1/4MIC地美硝唑与1/8MIC头孢噻肟联用，其FIC指数为125/500+64/512＝0.375；1/8MIC地美硝唑与1/4MIC头孢噻肟联用，其FIC指数为62.5/500+128/512＝0.375；1/16MIC地美硝唑与1/4MIC头孢噻肟联用，其FIC指数为31.25/500+128/512＝0.3125。综合考虑最佳抗菌效果，选用1/
16MIC地美硝唑与1/4MIC头孢噻肟联用时的效果最佳。

[0053] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。