同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品

摘要

本发明提供了一种同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品及其制备方法和应用，所述质控品和/或校准品包括78种神经精神类药物、基质、抗氧化剂；所述抗氧化剂为抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的组合；所述抗氧化剂在质控品和/或校准品中的质量含量为0.2‑0.5％；所述78种神经精神类药物包括15种抗癫痫药物、23种抗精神病药物和40种抗抑郁药物。本发明通过添加特定组合的抗氧化剂制备的质控品和/或校准品具有高度的稳定性，有效消除了质谱检测血清样本的神经精神类药物过程中产生的基质效应，显著提高了质谱检测的准确性和室内精密度，为质谱检测精神治疗药物技术的产业化和广泛应用解决了技术瓶颈。

权利要求

1.一种抗氧化剂组合在制备同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品中的应用，其特征在于，所述抗氧化剂组合由抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸三种抗氧化剂组成，所述质控品和/或校准品包括78种神经精神类药物、基质、所述抗氧化剂组合；

所述基质为马血清；

所述抗氧化剂组合在质控品和/或校准品中的质量含量为0.2‑0.5%；

所述78种神经精神类药物包括15种抗癫痫药物、23种抗精神病药物和40种抗抑郁药物；

所述抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的质量比为2:1:1。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸在所述质控品和/或校准品中的终浓度分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述质控品和/或校准品中还包括防腐剂；

所述防腐剂选自硫柳汞、庆大霉素、proclin 300中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述防腐剂为硫柳汞。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述防腐剂在质控品和/或校准品中的质量含量为0.01‑0.03%。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述15种抗癫痫药物为卡马西平、环氧卡马西平、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、扑米酮、托吡酯、丙戊酸、10羟基卡马西平、氯硝西泮、拉考沙胺、吡仑帕奈、唑尼沙胺；

所述23种抗精神病药物为氨磺必利、氟奋乃静、阿立哌唑、氯丙嗪、氯普噻吨、氯氮平、脱氢阿立哌唑、氟哌噻吨、氟哌啶醇、洛沙平、鲁拉西酮、奥氮平、奋乃静、喹硫平、利培酮、舒必利、硫利达嗪、齐拉西酮、9‑羟利培酮、N‑去甲氯氮平、去甲喹硫平、还原氟哌啶醇、去甲奥氮平；

所述40种抗抑郁药物为阿戈美拉汀、阿米替林、安非他酮、西酞普兰、氯米帕明、多塞平、度洛西汀、艾司西酞普兰、氟西汀、氟伏沙明、羟基安非他酮、丙米嗪、马普替林、米安色林、米那普仑、米氮平、吗氯贝胺、去甲阿米替林、去甲西酞普兰、去甲氯米帕明、去甲多塞平、去甲氟西汀、去甲丙米嗪、帕罗西汀、瑞波西汀、舍曲林、噻奈普汀、曲唑酮、文拉法辛、伏硫西汀、O‑去甲文拉法辛、N‑去甲艾司西酞普兰、吗氯贝胺 N 氧化物、去甲马普替林、去甲米安色林、O‑去乙基瑞波西汀、去甲基舍曲林、N‑去甲米氮平、N‑去甲文拉法辛、间氯苯基哌嗪。

7.一种权利要求1‑6任一项中所述的同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将已知系列浓度的78种神经精神类药物与基质、抗氧化剂组合混合，所得混合溶液即为质控品和/或校准品；

所述抗氧化剂组合由抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸三种抗氧化剂组成；

所述抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的质量比为2:1:1。

8.一种根据权利要求1‑6任一项中所述的同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品在制备同时监测78种神经精神类药物的检测试剂或检测试剂盒中的应用。

9.根据权利要求7所述制备方法制备获得的同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品。

说明书

同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品

技术领域

[0001] 本发明涉及药物检测技术领域，具体涉及同时检测多种神经精神类药物的检测技术，特别是涉及一种同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 2017年9月，神经精神药理学与药物精神病协会(AGNP)更新发布的神经精神药理学治疗药物检测共识指南，把神经精神类药物分为以下几类：抗抑郁药物、抗精神病药物、抗癫痫药物、情感稳定剂、抗焦虑/催眠药物、抗痴呆药物、治疗药物依赖相关障碍的药物、抗帕金森病药物。

[0003] 抗抑郁药物(antidepressive drugs)是指一组主要用来治疗以情绪抑郁为突出症状的精神疾病的精神药物。与兴奋药不同之处为只能使抑郁病人的抑郁症状消除，而不能使正常人的情绪提高。根据作用特点可分为三环类(代表药为阿米替林、氯米帕明、多塞平)、四环类(代表药为马普替林)、选择性5‑羟色胺再摄取抑制剂(代表药为舍曲林、西酞普兰、艾司西酞普兰、帕罗西汀)、选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂(代表药为瑞波西汀)、5‑HT及去甲肾上腺素再摄取抑制剂(代表药为文拉法辛、度洛西汀)。

[0004] 抗精神病药物是指一类主要用于治疗精神分裂症、躁狂发作等其它严重精神障碍的药物，主要分为传统的抗精神病药物和新型的抗精神病药物。第一代抗精神病药物主要是通过阻断中枢神经系统多巴胺通路中的多巴胺受体的作用，代表药有氯丙嗪、奋乃静、氟哌啶醇。新型的抗精神病药物的作用特点是与多种神经受体有亲和力，代表药为利培酮、奥氮平、喹硫平、阿立哌唑、氯氮平、氨磺必利。

[0005] 癫痫(epilepsy)即俗称的“羊角风”或“羊癫风”，是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病。癫痫的治疗，选择合适的抗癫痫药物是关键，现介绍临床常用的一些抗癫痫药物种类。抗癫痫药物选择需在医生指导下服用，一旦用药，不可漏服，在行减药，避免难治性癫痫发生。根据作用机制进行分类包括巴比妥类、乙内酰脲类、双链脂肪酸类、琥珀酰亚胺类、苯二氮卓类、二苯并氮卓类、磺胺类、以及新型抗癫痫药物。巴比妥类代表药为苯巴比妥，乙内酰脲类代表药为苯妥英钠，双链脂肪酸类代表药为丙戊酸钠、丙戊酸镁，苯二氮卓类代表药为氯硝西泮，二苯并氮卓类代表药为卡马西平、奥卡西平，磺胺类代表药为唑尼沙胺，新型抗癫痫药物代表药为奥卡西平、拉莫三嗪、托吡酯、左乙拉西坦。抗癫痫药物有的可作为情绪稳定剂又称做心境稳定剂、情感稳定剂，抗躁狂的药物和抗癫痫的药物和部分非典型性抗精神病药都具有情感稳定的作用，对躁狂发作和双相障碍也有一定疗效。临床上常用的情感稳定剂主要包括丙戊酸、卡马西平、拉莫三嗪。

[0006] 虽然在癫痫、精神分裂、抑郁等疾病的临床治疗有合适药物，但精神科治疗药物存在患者个体差异大、治疗窗口窄等问题，许多患者的治疗效果未达到令人满意的程度。治疗药物监测(Therapeutic drug monitoring,TDM)是针对不同患者个体量体裁衣式地制定给药方案的一种很有效的方法。根据欧洲神经精神药理学与药物精神病学协会(AGNP)的TDM专家组于2017年更新发布了精神科治疗药物监测共识指南，药物种类扩展到了154种。为了指导和规范医疗机构和医疗咨询机构开展TDM工作，中国药理学会治疗药物监测研究专业委员会于2019年制定了《治疗药物监测工作规范专家共识》，并于2021年发布了《色谱技术用于治疗药物监测质量保证的专家共识》。由于色谱技术具备良好的特异性、灵敏度、准确性、较宽的线性范围和可以同时检测多个目标分析物等特点，其在TDM领域中的应用日益广泛。但目前色谱技术存在着自动化程度较低、仪器操作复杂、尚难标准化等问题。因此，对基于色谱技术开展TDM的检测环节进行全流程质量保证十分必要。采用液相色谱‑串联质谱技术同时测定不同类别的精神科治疗药物，特异性、准确定更高，是小分子药物定量检测的“金标准”。

[0007] 目前进行TDM工作，对患者样本进行检测定值需要采用校准品，同时需要质控品对测定系统进行质量控制。为了保证治疗药物检测的准确性，必须有质量可靠的配套质控品、校准品。

[0008] 然而，市场上缺乏同时覆盖50种以上的治疗药物、且与患者样本基质互换性好的校准品、质控品，无法满足临床精准测定的需要。如专利文献CN109655568A中记载了一种高效液质联用同时测定35种精神药物的方法及试剂盒，专利文献CN111665305A中记载了一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中18种抗抑郁药物的试剂盒，专利文献CN11579681A中记载了一种同时检测血清中16种抗精神病药物的试剂盒等。因此，提供覆盖不同类别药物、数量齐全、同时与患者样本基质具有良好互换性的校准品和质控品，有效控制患者血清样本检测过程中的基质效应，提高检测的准确度，是目前色谱柱技术测定精神治疗药物的亟需解决的技术问题。

发明内容

[0009] 针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品及其制备方法和应用。

[0010] 本发明在前期的研究中发现，由于同时监测的78种神经精神类药物分别为15种抗癫痫药物、23种抗精神病药物、40种抗抑郁药物，其在制备质控品和/或标准品时需同时加入。其中存在多种不稳定的药物，如奥氮平、安非他酮及其代谢物羟基安非他酮、奥卡西平等，由此导致将78种神经精神类药物同时加入基质所制备的质控品和/或校准品稳定性不足的问题。本发明通过加入特定的抗氧化剂组合，即抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的组合，大大提高了质控品和/或校准品的稳定性。

[0011] 由于精神治疗药物的临床患者样本为血清基质，目前检测神经精神类药物的质控品、校准品中主要仍以人血来源的血清基质进行配制。然而采用人血来源的血清基质存在来源限制问题，人血的采集在国内是严格受控的，获取存在难度大、成本高等问题，因此极大限制了质控品和校准品的开发和生产。本发明在前期的研究中对比了不同动物来源的血清代替人血来源的血清，并最终发现采用牛血清、马血清、大鼠血清作为基质时，其基质效应小，且来源易获得，可实现低成本生产，方便临床的应用，其中马血清基质效应最小。

[0012] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

[0013] 本发明提供了一种同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品，包括78种神经精神类药物、基质、抗氧化剂；

[0014] 所述基质包括人血清、牛血清、马血清、大鼠血清中的任一种；

[0015] 所述抗氧化剂组合为抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的组合；所述抗氧化剂在质控品和/或校准品中的质量含量为0.2‑0.5％；在该质量含量范围内可达到较好的稳定性；最优抗氧化剂的质量含量为0.2％，稳定性最好。

[0016] 所述78种神经精神类药物包括15种抗癫痫药物、23种抗精神病药物和40种抗抑郁药物。

[0017] 优选地，所述基质为马血清。

[0018] 优选地，所述抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的质量比为2:1:1。

[0019] 优选地，所述抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸在所述质控品和/或校准品中的终浓度分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml。

[0020] 优选地，所述质控品和/或校准品中还包括防腐剂；

[0021] 所述防腐剂选自硫柳汞、庆大霉素、proclin 300中的至少一种。

[0022] 优选地，所述防腐剂为硫柳汞。

[0023] 优选地，所述防腐剂添在质控品和/或校准品中的质量含量为0.01‑0.03％。

[0024] 优选地，所述15种抗癫痫药物为卡马西平(Carbamazepine)、环氧卡马西平(Carbamazepine epoxide)、拉莫三嗪(lamotrigine)、左乙拉西坦(levetiracetam)、奥卡西平(oxcarbazepine)、苯巴比妥(phenobarbital)、苯妥英(phenytoin)、扑米酮(primidone)、托吡酯(topiramate)、丙戊酸(2‑Propylvaleric acid)、10羟基卡马西平(10‑Hydroxycarbamazepine)、氯硝西泮(Clonazepam)、拉考沙胺(Lacosamide)、吡仑帕奈(Perampanel)、唑尼沙胺(Zonisamide)；

[0025] 所述23种抗精神病药物为氨磺必利(amisulpride)、氟奋乃静(anatensol)、阿立哌唑(aripiprazole)、氯丙嗪(chlorpromazine)、氯普噻吨(chlorprothixene)、氯氮平(clozapine)、脱氢阿立哌唑(dehydro aripiprazole)、氟哌噻吨(flupentixol)、氟哌啶醇(haloperidol)、洛沙平(loxapine)、鲁拉西酮(lurasidone)、奥氮平(olanzapine)、奋乃静(perphenazine)、喹硫平(quetiapine)、利培酮(risperidone)、舒必利(sulpiride)、硫利达嗪(thioridazine)、齐拉西酮(ziprasidone)、9‑羟利培酮(9‑hydroxyrisperidone)、N‑去甲氯氮平(n‑demethylclozapine)、去甲喹硫平(norquetiapine)、还原氟哌啶醇(Reduced haloperidol)、去甲奥氮平(N‑demethylolanzapine)；

[0026] 所述40种抗抑郁药物为阿戈美拉汀(agomelatine)、阿米替林(amitriptyline)、安非他酮(bupropion)、西酞普兰(citalopram)、氯米帕明(clomipramine)、多塞平(doxepin)、度洛西汀(duloxetine)、艾司西酞普兰(escitalopram)、氟西汀(fluoxetine)、氟伏沙明(fluvoxamine)、羟基安非他酮(hydroxybupropion)、丙米嗪(imipramine)、马普替林(maprotiline)、米安色林(mianserin)、米那普仑(milnacipran)、米氮平(mirtazapine)、吗氯贝胺(moclobemide)、去甲阿米替林(noramitriptyline)、去甲西酞普兰(norcitalopram)、去甲氯米帕明(norclomipramine)、去甲多塞平(nordoxepin)、去甲氟西汀(norfluoxetine)、去甲丙米嗪(norimipramine)、帕罗西汀(paroxetine)、瑞波西汀(reboxetine)、舍曲林(sertraline)、噻奈普汀(tianeptine)、曲唑酮(trazodone)、文拉法辛(venlafaxine)、伏硫西汀(vortioxetine)、O‑去甲文拉法辛(O‑Desmethylvenlafaxine)、N‑去甲艾司西酞普兰(N‑desmethylescitalopram)、吗氯贝胺N氧化物(moclobemide‑N‑Oxide)、去甲马普替林(desmethylmaprotiline)、去甲米安色林(N‑desmethylmianserin)、O‑去乙基瑞波西汀(O‑desethylreboxetine)、去甲基舍曲林(N‑desmethylsertraline)、N‑去甲米氮平(N‑demethylmirtazapine)、N‑去甲文拉法辛(N‑desmethylvenlafaxine)、间氯苯基哌嗪(M‑Chlorophenylpiperazine)。

[0027] 所述的质控品为同时包含78种神经精神类药物的质控品；所述的校准品为同时包含78种神经精神类药物的校准品。

[0028] 本发明还提供了一种根据前述的同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品的制备方法，包括以下步骤：

[0029] 将已知系列浓度的78种神经精神类药物与基质、抗氧化剂混合，所得混合溶液即为质控品和/或校准品。

[0030] 优选地，所述方法还包括加入防腐剂的步骤，以及将所得混合溶液进行冻干，得到质控品和/或校准品的冻干制剂。

[0031] 本发明还提供了一种根据前述的质控品和/或校准品在制备同时监测78种神经精神类药物的检测试剂中的应用。

[0032] 本发明还提供了一种根据前述的制备方法制备获得的同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品。

[0033] 与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

[0034] 1、本发明基于同时监测78种神经精神类药物的需要，首次开发了包含78种神经精神类药物的质控品和/或校准品，通过采用动物来源的血清代替人血来源的血清作为基质，基质效应小，来源易获得，实现了低成本生产，方便临床的应用，特别是选择马血清基质效应最小；进一步通过添加特定的抗氧化剂组合，即抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸的组合可使制备的质控品和/或校准品具有高度的稳定性，有效消除了质谱检测血清样本的神经精神类药物过程中产生的基质效应，显著提高了质谱检测的准确性和室内精密度，为质谱检测精神治疗药物技术的产业化和广泛应用解决了技术瓶颈。

[0035] 2、本发明进一步通过在基质中加入特定防腐剂，如硫柳汞，并采用冻干工艺进行冻干，所制备的质控品和/或校准品的冻干制剂中分析成分稳定，在2‑8℃可保存2年，储存有效期长，极大方便了临床使用。

[0036] 3、本发明制备的可同时监测78种神经精神类药物的质控品和/或校准品可用于生化试剂、色谱法试剂的检测，适用不同方法学，使用范围广，同时提高了诊断的准确性。

[0037] 4、本发明由抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸特定组合的抗氧化剂制备的质控品和/或校准品，对78种神经精神类药物均具有较好的稳定效果，特别是针对本身在血清基质中相对不稳定的奥卡西平、奥氮平、安非他酮、羟基安非他酮神经精神类药物，具有更显著的稳定效果。

附图说明

[0038] 通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

[0039] 图1为中浓度质控品中1‑10种药物的检测图谱；

[0040] 图2为中浓度质控品中11‑20种药物的检测图谱；

[0041] 图3为中浓度质控品中21‑30种药物的检测图谱；

[0042] 图4为中浓度质控品中31‑40种药物的检测图谱；

[0043] 图5为中浓度质控品中41‑50种药物的检测图谱；

[0044] 图6为中浓度质控品中51‑63种药物的检测图谱；

[0045] 图7为中浓度质控品中64‑78种药物的检测图谱。

具体实施方式

[0046] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

[0047] 实施例1

[0048] 本实施例对比了不同血清基质制备的同时监测78种神经精神类药物的质控品和标准品，具体配制方法为：

[0049] 1)准确称取15种抗癫痫药物、23种抗精神病药物、40种抗抑郁药物，并采用甲醇溶解，得到表1所示浓度的各药物标准母液。

[0050] 2)移取表1中各药物标准母液体积与55μL 50％甲醇水溶液混合，得到包含全部药物的混合标准溶液1，其中各药物浓度如表1中所示。

[0051] 3)将20μL混合标准溶液1与980μL 50％甲醇水溶液混合，得混合标准溶液2，其中的各药物浓度如表1中所示。

[0052] 表1

[0053]

[0054]

[0055]

[0056] 3)将混合标准溶液1分别用50％甲醇水溶液稀释8倍、4倍和1.25倍，分别得到相应的低浓度质控混合标液、中浓度质控混合标液和高浓度质控混合标液。

[0057] 4)将上述的质控混合标液分别用人血清、牛血清、马血清、大鼠血清按照1:19的体积比例混合，分别得到相应的不同血清基质的低浓度质控品L、中浓度质控品M和高浓度质控品H。

[0058] 5)将混合标准溶液1、混合标准溶液2分别用人血清、牛血清、马血清、大鼠血清按照1:19体积比例混合，分别得到相应的不同血清基质的、不同水平的校准品Cal‑6、Cal‑1。校准品Cal‑6、Cal‑1分别按照1:19、1:3、1:1、3:1的体积比例混合配制得到不同血清基质的、其他不同水平的校准品Cal‑2、Cal‑3、Cal‑4、Cal‑5。

[0059] 配制的不同血清基质校准品的线性相关系数和浓度偏差的检测结果如表2所示，要求线性相关系数r值不小于0.9900，浓度偏差不大于15％。结果表明：不同血清基质配制的校准品的线性相关系数r以及浓度偏差均符合要求,其中马血清的偏差更小。

[0060] 表2

[0061]

[0062]

[0063]

[0064]

[0065] 配制的质控品的浓度偏差结果如表3所示，结果显示：不同基质配制的质控品的浓度偏差均不大于15％，均符合要求，其中马血清的浓度偏差更小。

[0066] 表3

[0067]

[0068]

[0069]

[0070]

[0071] 6)将人血清、牛血清、马血清、大鼠血清进行常规方法的前处理后，分别加入步骤3)得到的低浓度质控混合标液、中浓度质控混合标液和高浓度质控混合标液，混匀得到含血清基质的药物溶液。与未经任何处理且不含血清基质的低浓度质控混合标液、中浓度质控混合标液和高浓度质控混合标液同时进行测试，将含血清基质的药物检测峰面积与不含血清基质的质控标液的药物检测峰面积进行对比计算，评估基质效应，基质效应结果如表4所示，结果显示：不同血清的基质效应均符合要求，其中马血清的基质效应更小。

[0072] 表4

[0073]

[0074]

[0075]

[0076]

[0077] 实施例2

[0078] 本实施例提供了一种同时监测78种神经精神类药物的质控品，具体配制方法为：按照实施例1中的方法，将中浓度质控标液用马血清按照5％:90％体积比例混合，并按照
5％体积比例加入含抗氧化剂与防腐剂的混合溶液，其中采用的不同抗氧化剂组如表5所示，采用的防腐剂为浓度0.002g/ml的硫柳汞，混匀(总体积100ml)后冷冻干燥(冷冻干燥采用的具体条件为：预冻温度设置‑50℃，持续时间300min；一次干燥温度设置‑30℃，持续时间1200min，压力维持0.2mbar；解析干燥温度设置‑30℃，持续时间360min，压力维持
0.3mbar)，即得相应的采用不同抗氧化剂组的质控品组1‑7；同时还制备仅未添加抗氧化剂组的质控品组8。

[0079] 表5

[0080]

[0081]

[0082] 将所得质控品组分别放置于37℃恒温箱进行加速实验，经液相色谱‑串联质谱系统检测，考察质控品在37℃条件下保存1天、3天、5天、7天的稳定性情况。质控品的稳定性结果如表6所示，结果表明，质控品3(采用抗氧化剂组3制备)的检测值变化较小，稳定性良好，其中抗氧化剂组3的抗坏血酸、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸在质控品3中的终浓度分别为1mg/ml、0.5mg/ml、0.5mg/ml。如表6所示，针对本身在血清基质中相对不稳定的奥卡西平、奥氮平、安非他酮、羟基安非他酮神经精神类药物，抗氧化剂组3具有更显著的稳定效果。

[0083] 表6

[0084]

[0085]

[0086]

[0087]

[0088]

[0089] 实施例3

[0090] 本实施例提供了一种同时监测78种神经精神类药物的方法，包括以下步骤：

[0091] 1)采用实施例2相同的方法、以表5中的抗氧化剂组3作为抗氧化剂添加，分别制备得到低浓度质控品L(采用实施例1中的低浓度质控混合标液制备)、中浓度质控品M(采用实施例1中的中浓度质控混合标液制备)、高浓度质控品H(采用实施例1中的高浓度质控混合标液制备)。

[0092] 2)将实施例1制备的混合标准品溶液1、混合标准品溶液2分别与马血清按照5％:90％的体积比例混匀，并按照5％体积比例加入实施例2中的抗氧化剂组3与防腐剂(浓度
0.02g/ml的硫柳汞)的混合溶液进行混匀(总体积100ml)，得到不同水平的较准品Cal‑1、Cal‑6；然后按照实施例1中步骤5)的方法得到其他不同水平的较准品Cal‑2、Cal‑3、Cal‑4、Cal‑5。

[0093] 3)将步骤1)和2)制备的各质控品和校准品作为待测样本，取50μL至离心管中，加入300μL甲醇乙腈混合试剂(含0.1％抗坏血酸)，涡旋混匀，4℃16000g高速离心10min，取100μL上清至收集板，加入100μL 5％甲醇水溶液，混匀，备用；

[0094] 4)将步骤3)制得的各样本溶液置于进样器中，调出色谱分离的梯度洗脱参数文件、质谱参数文件，对各样本溶液进行检测。

[0095] 采用的具体液相分析条件为：采用ClassicShell C18色谱柱(2.1*50mm,2.5μm)(Kromasil)，采用的流动相A为含0.2％乙酸的乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，其中乙酸铵浓度为10mM。采用的流动相梯度条件为表7所示。

[0096] 表7

[0097]时间min 流速mL/min A％ B％
0.0 0.4 90 10
0.3 0.4 90 10
3 0.4 50 50
4 0.4 5 95
5 0.4 5 95
5.01 0.4 90 10
6 0.4 90 10

[0098] 采用的质谱分析条件如表8所示。

[0099] 表8

[0100]

[0101]

[0102]

[0103]

[0104]

[0105]

[0106]

[0107] 其中所得包含78种药物的中浓度质控品M的检测图谱如图1‑图7所示。

[0108] 5)均匀性检测

[0109] 分别随机抽取每个水平校准品各10支、每个水平质控品各10支进行测试，计算检测结果的均值和CV，均匀性应<15％，结果如表9所示。

[0110] 表9

[0111]

[0112]

[0113]

[0114] 6)准确度分析

[0115] 分别随机抽取每个水平校准品各3支、每个水平质控品各3支，对其进行浓度检测，各浓度水平的药物检测值与靶值的偏差均满足在15％范围内，准确度结果如表10所示。

[0116] 表10

[0117]

[0118]

[0119]

[0120]

[0121] 本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。