作为ERK抑制剂的螺环类化合物及其应用

摘要

一种作为ERK抑制剂的螺环类化合物，及其在制备治疗ERK相关疾病的药物中的应用。具体涉及式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐。

权利要求

1.式(Ⅲ)化合物或其药学上可接受的盐，其中，

n为0或1；

m为1或2；

环A为

T1、T2和T3分别独立地选自N和CH；

E1为O、S或NH；

R1选自H和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Ra取代；

R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、

2或3个Rb取代；

R4选自H；

R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rc取代；

Ra、Rb和Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2。

2.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R1选自H和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Ra取代。

3.根据权利要求2所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R1为CH3。

4.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rb取代。

5.根据权利要求4所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R2和R3分别独立地选自H和CH3。

6.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、CH3和‑CH2‑CH3，其中所述CH3和‑CH2‑CH3任选被1、2或3个Rc取代。

7.根据权利要求6所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2。

8.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，结构单元 为

9.根据权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，其中，环A为

10.根据权利要求1～7任意一项所述的化合物及其药学上可接受的盐，其选自其中，

m、n、E1、T1、T2和T3如权利要求1所定义；

R1如权利要求1～3任意一项所定义；

R2和R3如权利要求1、4或5所定义；

R4如权利要求1所定义；

R5、R6、R7、R8和R9如权利要求1、6或7所定义。

11.根据权利要求10所述的化合物及其药学上可接受的盐，其选自其中，

R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、E1、T1、T2和T3如权利要求10所定义。

12.根据权利要求10所述的化合物及其药学上可接受的盐，其选自其中，

R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、T1、T2和T3如权利要求10所定义。

13.根据权利要求12所述的化合物及其药学上可接受的盐，其选自其中，

R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如权利要求10所定义。

14.下列化合物及其药学上可接受的盐，

15.根据权利要求14所述的化合物及其药学上可接受的盐，其选自

16.根据权利要求1～15任意一项所述化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗ERK相关疾病的药物中的应用。

17.一种药物，其包含根据权利要求1～15任意一项所述化合物及其药学上可接受的盐。

说明书

作为ERK抑制剂的螺环类化合物及其应用

[0001] 本申请主张如下优先权：

[0002] 申请号：CN201911244788.X，申请日：2019年12月06日；

[0003] 申请号：CN201911257998.2，申请日：2019年12月10日；

[0004] 申请号：CN202010106897.1，申请日：2020年02月20日；

[0005] 申请号：CN202011068937.4，申请日：2020年09月30日；

[0006] 申请号：CN202011410488.7，申请日：2020年12月03日。

技术领域

[0007] 本发明涉及作为ERK抑制剂的螺环类化合物，及其在制备治疗ERK相关疾病的药物中的应用。具体涉及式(Ⅲ)所示化合物或其药学上可接受的盐。

背景技术

[0008] Ras/Raf/MEK/ERK通路是一条经典的有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号级联通路，参与各种生长因子、细胞因子、丝裂原以
及激素受体活化后的信号转导，是控制细胞生长、分化和存活最重要的信号转导途径之一。

[0009] 研究表明，突变或扩增引起的Ras/Raf/MEK/ERK通路异常活化是多种癌症发生的决定因素。在人类肿瘤中，RAS突变发生率约为22％，BRAF突变发生率约为7％，MEK突变发生
率约为1％，因此，该通路上的关键节点蛋白已成为癌症治疗的重要靶点(Cancer 
Discov.2019,9,329‑341)。目前，已有多个BRAF抑制剂和MEK1/2抑制剂，以及它们的联用方
案，被美国FDA批准用于黑色素瘤、BRAFV600E突变型非小细胞肺癌等癌症的治疗。然而，使
用这些上游节点的BRAF和MEK抑制剂后，由于突变或通路重新激活，会快速导致耐药性问
题，极大地限制了它们的临床应用。

[0010] 细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)，特别是ERK1和ERK2激酶，是Ras/Raf/MEK/ERK通路的主要参与者和下游关键节点，在许多人类的
癌症中都可发现它们的过度激活。ERK作为该通路的末端信号激酶，目前尚未发现有耐药突
变，因此，靶向ERK激酶的药物有望克服上游靶点抑制剂治疗后产生的耐药性问题，成为更
具潜力的治疗策略。但迄今为止，关于ERK抑制剂的研究仍处于临床阶段，还没有ERK抑制剂
作为药物批准上市。

[0011] 综上所述，迫切需要研发出安全、有效的ERK抑制剂药物满足肿瘤治疗的需要。

发明内容

[0012] 本发明提供了式(Ⅲ)化合物或其药学上可接受的盐，

[0013]

[0014] 其中，

[0015] n为0或1；

[0016] m为1或2；

[0017] 环A为

[0018] T1、T2和T3分别独立地选自N和CH；

[0019] E1为O、S或NH；

[0020] R1选自H和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Ra取代；

[0021] R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rb取代；

[0022] R4选自H；

[0023] R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rc取代；

[0024] Ra、Rb和Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2。

[0025] 本发明的一些方案中，上述R1选自H和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Ra取代，其他变量如本发明所定义。

[0026] 本发明的一些方案中，上述R1为CH3，其他变量如本发明所定义。

[0027] 本发明的一些方案中，上述R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rb取代，其他变量如本发明所定义。

[0028] 本发明的一些方案中，上述R2和R3分别独立地选自H和CH3，其他变量如本发明所定义。

[0029] 本发明的一些方案中，上述R2和R3分别独立地选自H，其他变量如本发明所定义。

[0030] 本发明的一些方案中，上述R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、CH3和‑CH2‑CH3，其中所述CH3和‑CH2‑CH3任选被1、2或3个Rc取代，其他变量如本发明所定义。

[0031] 本发明的一些方案中，上述R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2，其他变量如本发明所定义。

[0032] 本发明的一些方案中，上述结构单元 为 其他变量如本发明所定义。

[0033] 本发明的一些方案中，上述结构单元 为 其他变量如本发明所定义。

[0034] 本发明的一些方案中，上述环A为 其他变量如本发明所定义。

[0035] 本发明提供了式(Ⅰ)化合物或其药学上可接受的盐，

[0036]

[0037] 其中，

[0038] n为0或1；

[0039] T1、T2和T3分别独立地选自N和CH；

[0040] R1选自H和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Ra取代；

[0041] R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rb取代；

[0042] R4选自H；

[0043] R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和C1‑3烷基，其中所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rc取代；

[0044] Ra、Rb和Rc分别独立地选自F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2。

[0045] 本发明的一些方案中，上述R1选自H和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Ra取代，其他变量如本发明所定义。

[0046] 本发明的一些方案中，上述R1为CH3，其他变量如本发明所定义。

[0047] 本发明的一些方案中，上述R2和R3分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2和CH3，其中所述CH3任选被1、2或3个Rb取代，其他变量如本发明所定义。

[0048] 本发明的一些方案中，上述R2和R3分别独立地选自H，其他变量如本发明所定义。

[0049] 本发明的一些方案中，上述R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN、NH2、CH3和‑CH2‑CH3，其中所述CH3和‑CH2‑CH3任选被1、2或3个Rc取代，其他变量如本发明所定义。

[0050] 本发明的一些方案中，上述R5、R6、R7、R8和R9分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、CN和NH2，其他变量如本发明所定义。

[0051] 本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。

[0052] 本发明的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自

[0053]

[0054] 其中，

[0055] m、n、E1、T1、T2、T3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如本发明所定义。

[0056] 本发明的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自

[0057] 其中，

[0058] R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、E1、T1、T2和T3如本发明所定义。

[0059] 本发明的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自

[0060]

[0061] 其中，

[0062] T1、T2、T3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如本发明所定义。

[0063] 本发明的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自

[0064]

[0065] 其中，

[0066] R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9如本发明所定义。

[0067] 本发明还提供了下列化合物及其药学上可接受的盐，

[0068]

[0069] 本发明的一些方案中，上述化合物及其药学上可接受的盐，其选自

[0070]

[0071] 本发明还提供了上述化合物、其异构体及其药学上可接受的盐在制备治疗ERK相关疾病的药物中的应用。

[0072] 技术效果

[0073] 本发明化合物表现出较优的对ERK2酶和HT29细胞增殖抑制活性；同时还有优良的口服暴露量和生物利用度；并且，本发明化合物能显著抑制肿瘤生长，给药过程中动物的体
重未见明显下降，耐受性好。

[0074] 定义和说明

[0075] 除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的
含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。

[0076] 这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有
过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

[0077] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可
以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物接触的方式获得碱加
成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。当本发明的
化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的
酸与这类化合物接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸
盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以
及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而
可以被转换成任一碱或酸加成盐。

[0078] 本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游
离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。

[0079] 本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(‑)‑和(+)‑对映体、(R)‑和(S)‑对映体、非对映异构体、(D)‑异构体、(L)‑异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富
集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不
对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

[0080] 除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

[0081] 除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。

[0082] 除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。

[0083] 除非另有说明，“(+)”表示右旋，“(‑)”表示左旋，“(±)”表示外消旋。

[0084] 除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型，用波浪线 表
示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 和直形虚
线键

[0085] 除非另有说明，当化合物中存在双键结构，如碳碳双键、碳氮双键和氮氮双键，且双键上的各个原子均连接有两个不同的取代基时(包含氮原子的双键中，氮原子上的一对
孤对电子视为其连接的一个取代基)，如果该化合物中双键上的原子与其取代基之间用波
浪线 连接，则表示该化合物的(Z)型异构体、(E)型异构体或两种异构体的混合物。例
如下式(A)表示该化合物以式(A‑1)或式(A‑2)的单一异构体形式存在或以式(A‑1)和式(A‑
2)两种异构体的混合物形式存在；下式(B)表示该化合物以式(B‑1)或式(B‑2)的单一异构
体形式存在或以式(B‑1)和式(B‑2)两种异构体的混合物形式存在。下式(C)表示该化合物
以式(C‑1)或式(C‑2)的单一异构体形式存在或以式(C‑1)和式(C‑2)两种异构体的混合物
形式存在。

[0086]

[0087] 除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可
以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移
互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮‑烯醇异
构化和亚胺‑烯胺异构化。价键异构体(valence tautomer)包括一些成键电子的重组来进
行的相互转化。其中酮‑烯醇互变异构化的具体实例是戊烷‑2,4‑二酮与4‑羟基戊‑3‑烯‑2‑酮两个互变异构体之间的互变。

[0088] 除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等
于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或
者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或
者大于等于99.9％。

[0089] 除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映
体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。

[0090] 可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)‑和(S)‑异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成
或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂
开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如
羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常
规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构
体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍
生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。

[0091] 本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原3 125 14
子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(H)，碘‑125( I)或C‑14( C)。又
例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比
于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰
期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的
范围之内。

[0092] 术语“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

[0093] 术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代
基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取
代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可
以实现的基础上可以是任意的。

[0094] 当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0‑2个R所取代，则所述基团可以任选地
至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组
合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

[0095] 当一个连接基团的数量为0时，比如‑(CRR)0‑，表示该连接基团为单键。

[0096] 当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A‑L‑Z中L代表单键时表示该结构实际上是A‑Z。

[0097] 当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A‑X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上
时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任
意一个碳原子连接到被取代的基团上。

[0098] 当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团L为‑M‑W‑，此时‑M‑W‑既可以按与从左往右的读取顺序相同的
方向连接环A和环B构成 也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向
连接环A和环B构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这
样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

[0099] 除非另有规定，当某一基团具有一个或多个可连接位点时，该基团的任意一个或多个位点可以通过化学键与其他基团相连。所述位点与其他基团连接的化学键可以用直形
实线键 、直形虚线键 或波浪线 表示。例如‑OCH3中的直形实线键表示通
过该基团中的氧原子与其他基团相连； 中的直形虚线键表示通过该基团中的氮原子
的两端与其他基团相连； 中的波浪线表示通过该苯基基团中的1和2位碳原子与
其他基团相连。

[0100] 除非另有规定，术语“C1‑3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑3烷基包括C1‑2和C2‑3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n‑丙基和异丙基)等。

[0101] 除非另有规定，术语“C1‑3烷氧基”表示通过一个氧原子连接到分子的其余部分的那些包含1至3个碳原子的烷基基团。所述C1‑3烷氧基包括C1‑2、C2‑3、C3和C2烷氧基等。C1‑3烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(包括正丙氧基和异丙氧基)等。

[0102] 除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。

[0103] 除非另有规定，Cn‑n+m或Cn‑Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C1‑12包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、和C12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C1‑12包括C1‑3、C1‑6、C1‑9、C3‑6、C3‑9、C3‑12、C6‑9、C6‑12、和C9‑12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3‑12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3‑12元环包括3‑6元环、3‑9元环、5‑6元环、5‑7元环、6‑7元环、6‑8元环、和6‑10元环等。

[0104] 术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲核取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。

[0105] 术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰
基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9‑芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基
甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1‑二‑(4'‑甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基
副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例
如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9‑芴基甲基(Fm)和二
苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基
(TBS)等等。

[0106] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术
上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

[0107] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如
单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数
据，光源为CuKα辐射，扫描方式： 扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)
解析晶体结构，便可以确证绝对构型。

[0108] 本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水。

附图说明

[0109] 图1：人结直肠癌HCT116模型动物在分别给予溶剂和WX007后的肿瘤生长曲线；

[0110] 图2：人结直肠癌HCT116模型动物在给药过程中的体重变化率(％)。

具体实施方式

[0111] 下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而
言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将
是显而易见的。

[0112] 参考例1：片段A‑1

[0113]

[0114] 步骤1：化合物A‑1‑2的合成。

[0115] 在预先干燥过的单口瓶中加入乙酸钠(4.64g,56.60mmol,5eq)、单过硫酸氢钾(13.92g,22.64mmol,2eq)和水(47mL)的溶液，降温至0℃，滴加A‑1‑1(4.7g,11.32mmol,
1eq)、溶剂四氢呋喃(47mL)和甲醇(47mL)的溶液，并在0℃搅拌1小时。29℃油浴搅拌15小
时。反应结束后将该反应液倒入水(200mL)中，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×3)。合并有机
相，有机相依次用饱和食盐水洗涤(200mL)，无水硫酸钠干燥，过滤收集滤液，减压浓缩得到
1
残余物。残余物通过快速柱层析分离，纯化得到A‑1‑2。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.67(d,J＝4.9Hz,1H),7.64(d,J＝4.9Hz,1H),3.37(s,3H),1.63‑1.53(m,6H),1.39‑1.30(m,6H),
1.26‑1.12(m,6H),0.90(t,J＝7.3Hz,9H)。

[0116] 步骤2：化合物A‑1的合成。

[0117] 向反应瓶中加入A‑1‑2(3.9g,8.72mmol,1eq)、A‑1‑3(1.02g,10.46mmol,1.2eq)和四氢呋喃(117mL)，抽换氮气后‑35℃滴加入六甲基二硅基胺基锂(1M,18.31mL,2.1eq)，‑35
℃下混合液反应10分钟，反应结束后将反应液用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭，乙酸乙酯
(100mL×2)和二氯甲烷(100mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤旋干得粗品。粗品用
1
柱层析纯化得到A‑1。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.17(d,J＝4.85Hz,1H),7.46(d,J＝
1.76Hz,1H),6.91(d,J＝4.63Hz,1H),6.60(s,1H),6.32(d,J＝1.98Hz,1H),3.79(s,3H),
1.52‑1.61(m,6H),1.28‑1.40(m,6H),1.03‑1.20(m,6H),0.89(t,J＝7.28Hz,9H)。

[0118] 实施例1

[0119]

[0120] 合成路线

[0121]

[0122] 步骤1：WX001‑3的合成

[0123] 向反应瓶中加入WX001‑1(5g,24.03mmol,1eq)和四氢呋喃(200mL)，抽换氮气后降温至‑78℃，缓慢滴入二异丙基胺基锂(2mol/L,28.84mL,2.4eq)和四甲基乙二胺(4.19g,
36.05mmol,5.44mL,1.5eq)，‑78℃搅拌0.5小时，随后加入WX001‑2(3.10g,36.05mmol,
1.5eq)，‑78℃下混合液反应2小时。反应完毕后，反应液用饱和氯化铵水溶液(250mL)淬灭，
用2mol/L的盐酸调节pH至2～3，加入乙酸乙酯(100mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水
(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45℃用水泵减压浓缩得到WX001‑3。

[0124] 步骤2：WX001‑4的合成

[0125] 向反应瓶中加入WX001‑3(1g,3.40mmol,1eq)和乙腈(10mL)，抽换氮气后降温至0℃，缓慢滴加三氟化硼乙醚(579.06mg,4.08mmol,503.53μL,1.2eq)，20℃下混合液反应2小
时，升温至50℃，继续反应16小时，升温至60℃，继续反应8小时。反应完毕后，反应液用水
(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，
1
过滤，滤液在45℃用水泵减压浓缩至干。粗品用柱分离纯化得到WX001‑4。H NMR(400MHz,
DMSO‑d6):δ(ppm)4.18(d,J＝8.6Hz,1H),4.06‑4.13(m,2H),3.76(d,J＝8.6Hz,1H),2.76‑
2.87(m,1H),2.52(s,3H),2.16(dt,J＝12.9,7.5Hz,1H).

[0126] 步骤3：WX001‑5的合成

[0127] 向反应瓶中加入WX001‑4(250mg,788.25μmol,1eq)、盐酸(2mol/L,1.97mL,5eq)和乙醇(2mL)，70℃下混合液反应16小时。反应完毕后，反应液用水(2mL)稀释，乙酸乙酯(5mL*
3)萃取，有机相用饱和食盐水(2mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45℃用水泵减压浓
1
缩干。粗品通过薄层层析硅胶板纯化得到WX001‑5。H NMR(400MHz,DMSO‑d6):δ(ppm)9.23
(br s,1H),3.97‑4.14(m,2H),3.84‑3.95(m,1H),3.76(br d,J＝8.7Hz,1H),2.17‑2.33(m,
1H).

[0128] 步骤4：WX001‑7的合成

[0129] 向反应瓶中加入WX001‑5(150mg,545.21μmol,1eq)和N’N‑二甲基甲酰胺(2mL)，抽换氮气后降温至0℃，加入钠氢(26.17mg,654.25μmol,60％纯度,1.2eq)，搅拌0.5小时，随
后加入WX001‑6(134.44mg,654.25μmol,85.63μL,1.2eq)，缓慢升温至20℃下反应0.5小时。
反应完毕后，反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(10mL*3)萃取，有机相用饱和食盐水(10mL)
洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45℃用水泵减压浓缩干。粗品使用通过薄层层析硅胶
1
板纯化得到WX001‑7。H NMR(400MHz,DMSO‑d6):δ(ppm)7.30‑7.39(m,3H),7.23‑7.29(m,
1H),4.62‑4.79(m,2H),4.02‑4.11(m,1H),3.95(q,J＝8.4Hz,1H),3.72‑3.82(m,2H),2.30‑
2.38(m,2H).

[0130] 步骤5：WX001‑8的合成

[0131] 向反应瓶中加入WX001‑7(100mg,250.19μmol,1eq)、A‑1(127.76mg,275.21μmol,1.1eq)和甲苯(2mL)，抽换氮气后加入四三苯基膦钯(57.82mg,50.04μmol,0.2eq)，125℃下
混合液反应14小时。反应完毕后，反应液直接旋干。粗品用薄层层析硅胶板纯化纯化得到
WX001‑8。

[0132] 步骤6：WX001A或WX001B

[0133] 将WX001‑8通过超临界流体色谱手性拆分(分离条件色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OJ(250*30mm i.d.10μm)；流动相：A为CO2，B为乙醇(0.1％NH3H2O)，B％＝50％；流速：70mL/min)得到WX001A或WX001B，WX001A的保留时间为1.782分钟，WX001B的保留时间为1.969分
钟。

[0134] 实施例2

[0135]

[0136] 合成路线

[0137]

[0138] 步骤1：WX002‑2的合成

[0139] 氮气保护，向反应瓶中加入WX001‑1(5g,24.03mmol,1eq)的四氢呋喃(250mL)，‑78℃慢慢加入二异丙基胺基锂(2M,28.84mL,2.4eq)，四甲基乙二胺(4.19g,36.05mmol,
5.44mL,1.5eq)，‑78℃反应0.5小时，然后再加入WX002‑1(4.81g,48.07mmol,4.42mL,2eq)
的四氢呋喃(10mL)溶液，‑78℃反应2小时。反应完毕后，在0℃下将反应液缓慢倒入100mL饱
和氯化铵水溶液中，用盐酸(2M)调节pH至3‑4左右，用乙酸乙酯(200mL*3)萃取，合并有机
相，并用饱和食盐水(200mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵在45℃下减压浓缩
得到WX002‑2。

[0140] 步骤2：WX002‑3的合成

[0141] 向反应瓶中加入WX002‑2(1g,3.25mmol,1eq)和乙腈(20mL)，抽换氮气后加入三氟化硼乙醚(552.70mg,3.89mmol,480.61μL,1.2eq)，60℃下混合液反应16小时。反应完毕后，
向反应液中加入饱和碳酸氢钠(20mL)，用乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，用饱和食盐
水(30mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵在45℃下减压浓缩。粗品用乙酸乙酯
(10mL)打浆得到WX002‑3。

[0142] 步骤3：WX002‑4的合成

[0143] 向干燥的反应瓶中加入WX002‑3(260mg,785.06μmol,1eq)，盐酸(2M,4mL,10.19eq)和乙醇(6mL)，50℃反应16小时，然后升温至70℃反应4小时。反应完毕后，反应液
用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机相，并用饱和食盐水(50mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，
1
过滤，滤液用水泵在45℃下减压浓缩。粗品用乙酸乙酯(10mL)打浆得到WX002‑4。H NMR
(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)9.32(s,1H),3.73‑3.79(m,2H),3.56‑3.63(m,2H),2.27‑2.34
(m,1H),1.86‑1.91(m,2H),1.80‑1.82(m,1H)

[0144] 步骤4：WX002‑5的合成

[0145] 向干燥的反应瓶中加入WX002‑4(50mg,172.92μmol,1eq)和N’N‑二甲基甲酰胺(2mL)，抽换氮气，0℃加入钠氢(10.37mg,259.38μmol,60％纯度,1.5eq)，在0℃下反应0.5
小时，然后再加入WX001‑6(35.53mg,172.92μmol,22.63μL,1eq)，反应液慢慢升到25℃继续
反应1.5小时。反应完毕后，将反应液加入30mL水，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机相，
并用饱和食盐水(50mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵在45℃下减压浓缩。粗
1
产品通过薄层层析硅胶板纯化得到WX002‑5。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)7.42(s,1H),
7.29‑7.38(m,3H),4.77(s,2H),4.03(br dd,J＝12.3,4.1Hz,2H),3.45(br t,J＝12.0Hz,
2H),2.17‑2.25(m,4.8Hz,2H),1.38(br d,J＝13.0Hz,2H)。

[0146] 步骤5：WX002的合成

[0147] 向反应瓶中加入WX002‑5(50mg,120.86μmol,1eq)，A‑1(65.66mg,120.86μmol,1eq)，甲苯(1mL)，抽换氮气，加热到125℃,然后慢慢加入四三苯基膦钯(27.93mg,24.17μ
mol,0.2eq)。125℃反应48小时。反应完毕后，反应液用水泵在45℃下减压浓缩。粗产品通过
高效液相色谱法(色谱柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流动相：[水(10mM碳
酸氢铵)‑乙腈]；乙腈：28％‑58％,8min)纯化得到WX002。

[0148] 实施例3

[0149]

[0150] 合成路线

[0151]

[0152] 步骤1：WX003‑1的合成

[0153] 在预先干燥的反应瓶中加入WX002‑5(100mg,241.71μmol,1eq)，A‑1‑2(108.10mg,241.71μmol,1eq)和甲苯(2mL)，置换氮气，125℃加入四三苯基膦钯(55.86mg,48.34μmol,
0.2eq)，搅拌反应48小时。反应完毕，反应液用水泵在45℃下减压浓缩。粗产品通过薄层层
1
析硅胶板纯化得到WX003‑1。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)9.29(d,J＝5.1Hz,1H),8.48
(d,J＝5.1Hz,1H),7.45(s,1H),7.31‑7.39(m,3H),4.83(s,2H),4.07(m,J＝12.3,4.4Hz,
2H),3.64(m,J＝12.0Hz,2H),3.54(s,3H),2.24‑2.31(m,2H),1.43(m,J＝12.9Hz,2H)

[0154] 步骤2：WX003的合成

[0155] 在预先干燥的反应瓶中加入WX003‑1(50mg,101.84μmol,1eq)，四氢吡喃‑4‑胺(10.30mg,101.84μmol,1eq)和二甲基亚砜(1mL)，100℃搅拌反应16小时。反应完毕后。反应
液用高效液相色谱(色谱柱：Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10μm；流动相：[水(10mM
碳酸氢铵)‑乙腈]；乙腈：32％‑62％,8min)纯化得到WX003。

[0156] 实施例4

[0157]

[0158] 合成路线

[0159]

[0160] 步骤1：WX004‑1的合成

[0161] 向反应瓶中加入WX001‑1(10g,48.07mmol,1eq)和四氢呋喃(200mL)，置换氮气后，在氮气流保护下缓慢滴加硼烷四氢呋喃络合物溶液(1M,144.21mL,3eq)，25℃反应5小时。
反应完毕后，在氮气流下向反应液中缓慢滴加甲醇(100mL)，25℃搅拌16小时后，在40℃旋
1
干得到粗品。粗品通过柱层析纯化得到WX004‑1。H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.47(s,
1H),4.52(d,J＝1.0Hz,2H).

[0162] 步骤2：WX004‑3的合成

[0163] 向反应瓶中加入WX004‑1(7.86g,40.51mmol,1eq)和四氢呋喃(78.6mL)置换氮气，降温至‑78℃、缓慢加入二异丙基胺基锂(2M,48.61mL,2.4eq)，然后加入四甲基乙二胺
(7.06g,60.76mmol,9.17mL,1.5eq)，‑78℃反应0.5小时，加入WX004‑2(10.65g,60.76mmol,
1.5eq)和四氢呋喃(10mL)的混合溶液，‑78℃反应1小时。反应完毕后，反应液用饱和氯化铵
(100mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45℃旋干。粗品通过
1
柱层析纯化得到WX004‑3。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)6.39(s,1H),5.42(t,J＝5.6Hz,
1H),4.84‑5.03(m,4H),4.38(d,J＝5.6Hz,2H),1.12(s,9H).

[0164] 步骤3：WX004‑4的合成

[0165] 向反应瓶中加入四氢呋喃(56mL)、WX004‑3(5.6g,11.07mmol,73％纯度,1eq)和三丁基膦(4.48g,22.14mmol,5.46mL,2eq)，溶解完全后，置换氮气，降温至0℃缓慢加入偶氮
二羧酸二异丙基酯(4.48g,22.14mmol,4.30mL,2eq)，逐渐升温至20℃反应2小时。反应完毕
后，向反应液中加入水(60mL)后，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45
1
℃旋干。粗品通过柱层析纯化得到WX004‑4。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)5.30(d,J＝
7.6Hz,1H),4.75‑4.87(m,3H),4.61(d,J＝12.8Hz,1H),4.22(d,J＝12.8Hz,1H),1.27(s,
9H).

[0166] 步骤4：WX004‑5的合成

[0167] 向反应瓶中加入WX004‑4(500mg,1.42mmol,1eq)、四氢呋喃(8.3mL)、水(1.6mL)和碘(72.25mg,284.67umol,57.34uL,0.2eq)，置换氮气，30℃反应16小时。反应完毕后，得到
WX004‑5反应液直接用于下一步。

[0168] 步骤5：WX004‑6的合成

[0169] 向步骤4中得到的WX004‑5反应液中依次加入四氢呋喃(8.3mL)、水(1.6mL)、二碳酸二叔丁酯(465.00mg,2.13mmol,489.47μL,1.5eq)和碳酸钠(301.10mg,2.84mmol,2eq)，
25℃反应4小时。反应完毕后，反应液用水(10mL)淬灭，乙酸乙酯(5mL*3)萃取，有机相用无
1
水硫酸钠干燥，过滤，滤液在45℃旋干。粗品通过柱层析纯化得到WX004‑6。H NMR(DMSO‑d6,
400MHz):δ(ppm)5.46(br d,J＝5.8Hz,1H),5.32(br d,J＝6.3Hz,1H),4.64(br d,J＝
6.3Hz,1H),4.55(br d,J＝5.8Hz,1H),4.49(br d,J＝9.5Hz,2H),1.47‑1.57(m,9H).

[0170] 步骤6：WX004‑7的合成

[0171] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑6(150mg,431.99μmol,1eq)，三氧化铬(86.39mg,863.99μmol,32.00μL,2eq)，乙酸(3mL)，25℃反应12小时。反应完毕后，反应液用水(3mL)稀释，用二氯甲烷(5mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(5mL)洗涤有机相，有机相用无水
硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵减压浓缩。粗品通过柱层析纯化得到WX004‑7。

[0172] 步骤7：WX004‑8的合成

[0173] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑7(70mg,193.79μmol,1eq)，二氯甲烷(1mL)，三氟乙酸(287.47mg,2.52mmol,186.67μL,13.01eq)，25℃反应1小时。反应完毕后，将反应液直接
1
浓缩，粗产品通过薄层层析硅胶板纯化得到WX004‑8。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)9.59
(br,s,1H),4.89(s,4H).

[0174] 步骤8：WX004‑10的合成

[0175] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑8(45mg,172.35μmol,1eq)，N’N‑二甲基甲酰胺(2mL)，碳酸铯(84.23mg,258.53μmol,1.5eq)，WX004‑9(39.09mg,206.82μmol,25.39μL,
1.2eq)。抽换氮气，25℃反应12小时。反应完毕后，反应液用水(2mL)稀释，用二氯甲烷(2mL)
萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，
滤液用水泵减压浓缩，粗产品通过薄层层析硅胶板纯化得到WX004‑10.

[0176] 步骤9：WX004‑10的合成

[0177] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑10(45mg,121.88μmol,1eq)，A‑1(62.24mg,134.07μmol,1.1eq)，甲苯(1mL)，抽换氮气，然后加入四三苯基膦钯(28.17mg,24.38μmol,0.2eq)，
加热到125℃反应16小时。反应完毕后，反应液直接浓缩。粗产品通过薄层层析硅胶板纯化，
再通过用高效液相色谱(色谱柱:Waters Xbridge BEH C18100*30mm*10μm；流动相:[H2O
(10mM碳酸氢铵)‑乙腈]；乙腈％:25％‑45％,8min)纯化得到WX004。

[0178] 实施例5

[0179]

[0180] 合成路线

[0181]

[0182] 步骤1：WX005‑1的合成

[0183] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑8(300mg,1.15mmol,1eq)，N’N‑二甲基甲酰胺(6mL)，碳酸铯(561.55mg,1.72mmol,1.5eq)，WX001‑6(283.32mg,1.38mmol,180.46μL,
1.2eq)，抽换氮气，25℃反应16小时。反应完毕后，反应液用水(10mL)稀释，用乙酸乙酯
(20mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL*5)洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干
1
燥，过滤，滤液用水泵减压浓缩。粗产品通过柱层析纯化得到WX005‑1。H NMR(DMSO‑d6,
400MHz):δ(ppm)7.42(s,1H),7.32‑7.40(m,2H),7.26‑7.32(m,1H),4.98(s,2H),4.79‑4.89
(m,4H)

[0184] 步骤2：WX005的合成

[0185] 向干燥的反应瓶中加入WX005‑1(30mg,77.79μmol,1eq)，A‑1(39.72mg,85.57μmol,1.1eq)，甲苯(1mL)，抽换氮气，然后加入四三苯基膦钯(17.98mg,15.56μmol,0.2eq)，
加热到125℃反应16小时。补加四三苯基膦钯(8.99mg,7.78μmol,0.1eq)，125℃反应3小时。
反应完毕后，反应液直接浓缩。粗产品通过薄层层析硅胶板纯化，再经高效液相色谱(色谱
柱:Waters Xbridge BEH C18 100*30mm*10um；流动相:[水(10mM碳酸氢铵)‑乙腈]；乙
腈％:25％‑55％,8min)分离纯化得到WX005。

[0186] 实施例6

[0187]

[0188] 合成路线

[0189]

[0190] 步骤1：WX006‑2的合成

[0191] 向干燥的反应瓶中加入WX004‑10(105mg,284.39μmol,1eq)，四氢呋喃(1mL)，氯化锌(0.7M,406.27μL,1eq)，抽换氮气，‑30℃加入正丁基锂(2.5M,170.64μL,1.5eq)，25℃搅
拌1小时，然后将反应温度降到‑30℃，加入B‑1(75.68mg,284.39μmol,1eq)和四三苯基膦钯
(16.43mg,14.22μmol,0.05eq)的四氢呋喃(0.5mL)溶液，将温度升到60℃，继续反应16小
时。反应完毕后，向反应液中加入2mL的饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(5mL*3)萃取，合并
有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵减
1
压浓缩。粗品用2mL的甲基叔丁基醚打浆纯化得到WX006‑2。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ
(ppm)8.77(s,1H),7.37‑7.42(m,1H),7.20(br d,J＝8.6Hz,3H),5.04(s,2H),4.94(d,J＝
7.5Hz,2H),4.86(d,J＝7.2Hz,2H),2.64(s,3H),2.62(s,3H)。

[0192] 步骤2：WX006‑3的合成

[0193] 向干燥的反应瓶中加入WX006‑2(20mg,46.67μmol,1eq)，二氯甲烷(1mL)，抽换氮气，0℃加入间氯过氧苯甲酸(30.20mg,140.02μmol,80％纯度,3eq)，将温度缓慢升到25℃，
反应3小时。反应完毕后，向反应液中加入饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)至淀粉碘化钾试纸不
显蓝色，加入二氯甲烷(10mL)稀释，分液要有机相，有机相分别用饱和碳酸氢钠10mL，用饱
和食盐水10mL洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。粗产品通过薄层层析硅胶板纯化
1
得到WX006‑3。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)9.20(s,1H),7.37‑7.45(m,1H),7.21(br d,
J＝8.0Hz,2H),7.09‑7.15(m,1H),5.05(s,2H),4.93‑4.96(m,2H),4.89‑4.91(m,2H),3.51
(s,3H),2.82(s,3H).

[0194] 步骤3：WX006的合成

[0195] 向干燥的反应瓶中加入WX006‑3(28mg,60.80μmol,1eq)，A‑1‑3(11.81mg,121.61μmol,2eq)，二氯甲烷(1mL)，四氢呋喃(1mL)，抽换氮气，‑30℃加六甲基二硅基胺基锂(1M,
127.69μL,2.1eq)，25℃反应1小时。反应完毕后，向反应液中加入1mL的水，旋出体系中的有
机溶剂，有固体产生，过滤，收集固体得到粗品。粗品用高效液相色谱(色谱柱:Waters 
XbridgeBEH C18 100*25mm*5μm；流动相:[H2O(10mM碳酸氢铵)‑乙腈]；乙腈％:25％‑60％,
10min)纯化得到WX006。

[0196] 实施例7

[0197]

[0198] 合成路线

[0199]

[0200] 步骤1：WX007‑1的合成

[0201] 向干燥的反应瓶中加入WX005‑1(100mg,259.29μmol,1eq)，氯化锌(0.7M,370.42μL,1eq)，四氢呋喃(1.5mL)，抽换氮气降温至‑30℃，加入正丁基锂(2.5M,155.58μL,1.5eq)，
20℃反应1小时。然后降温到‑30℃，缓慢滴入加入四三苯基膦钯(14.98mg,12.96μmol,
0.05eq)，B‑1(69.00mg,259.29μmol,1eq)的四氢呋喃(0.5mL)溶液，60℃反应15小时。反应
完毕后，反应液用5mL饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯(10mL)萃取3次，合并有机相，用饱
和食盐水(10mL)洗涤有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液用水泵减压浓缩。粗产
1
品通过薄层层析硅胶板纯化得到WX007‑1。H NMR(DMSO‑d6,400MHz):δ(ppm)8.78(s,1H),
7.45(s,1H),7.30‑7.42(m,3H),5.03(s,2H),4.91‑4.96(m,2H),4.83‑4.89(m,2H),2.59‑
2.71(m,6H)。

[0202] 步骤2：WX007‑2的合成

[0203] 向干燥的反应瓶中加入WX007‑1(40mg,89.90μmol,1eq)，二氯甲烷(1mL)，抽换氮气，0℃加入间氯过氧苯甲酸(58.18mg,269.69μmol,80％纯度,3eq)，将温度缓慢升到25℃，
反应3小时。反应完毕后，向反应液中加入饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)至淀粉KI试纸不显蓝
色，加入二氯甲烷(10mL)稀释，分液要有机相，有机相分别用饱和碳酸氢钠10mL，用饱和食
盐水10mL洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干。粗产品通过薄层层析硅胶板纯化得到
WX007‑2。

[0204] 步骤3：WX007的合成

[0205] 向干燥的反应瓶中加入WX007‑2(35mg,73.38μmol,1eq)，A‑1‑3(14.97mg,154.10μmol,2.1eq)，二氯甲烷(0.5mL)，四氢呋喃(0.5mL)，抽换氮气，将反应降温至0℃滴加六甲基
二硅基胺基锂(1M,146.76μL,2eq)，0℃反应0.5小时，25℃反应1小时。反应完毕后，加入
10mL水淬灭，加入20mL二氯甲烷萃取，分液后收集有机相，水相用二氯甲烷萃取(3*20mL)。
合并有机相，依次用饱和食盐水洗涤(3*20mL)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到残余物。粗
品经用高效液相色谱(色谱柱:Phenomenex Gemini‑NX C1875*30mm*3μm；流动相:[H2O
(10mM碳酸氢铵)‑乙腈]；乙腈％:35％‑55％,8min)纯化得到WX007。

[0206] 各实施例的氢谱和质谱数据如表1所示。

[0207] 表1

[0208]

[0209]

[0210] 实验例一、体外酶活性测试：

[0211] 1.实验目的：

[0212] 测量化合物抑制ERK2激酶活性的能力。

[0213] 2.实验缓冲液：

[0214] 20mM Hepes(pH 7.5)，10mM MgCl2，1mM乙二醇双(2‑氨基乙基醚)四乙酸(EGTA)，0.02％Brij35，0.02mg/mL牛血清白蛋白(BSA)，0.1mM Na3VO4，2mM二硫苏糖醇(DTT)，1％
DMSO。

[0215] 3.化合物处理：

[0216] 将测试化合物溶于100％DMSO中，配制成特定浓度的母液。利用Integra Viaflo Assist智能移液器将化合物连续稀释在DMSO溶液中。

[0217] 4.实验方法

[0218] 1)在新制备的反应缓冲液中配置底物MBP；

[0219] 2)将ERK2激酶加入到上述MBP溶液中并轻轻混合；

[0220] 3)运用超声技术(Echo550；纳升范围)将溶于100％DMSO中的化合物加入到激酶反应体系中，在室温下孵育20分钟；

[0221] 4)将33P‑ATP(特定浓度10μCi/μL)加入到反应体系中，此时开始发生反应；

[0222] 5)在室温下孵育2小时；

[0223] 6)通过过滤‑‑结合方法检测放射性的量；

[0224] 7)ERK2激酶活性计算方式为测试样品中剩余激酶活性占对照组(二甲基亚砜处理)激酶活性的比值。使用Prism(GraphPad软件)进行曲线拟合并计算IC50值。

[0225] 5.实验结果见表2：

[0226] 表2体外酶活性测试结果

[0227]

[0228] 结论：本发明化合物表现出较优的对ERK2酶抑制活性。

[0229] 实验例二、体外细胞增殖抑制实验：

[0230] 1.实验目的：

[0231] 测量化合物抑制HT29肿瘤细胞增值的能力。

[0232] 2.化合物处理：

[0233] 将测试化合物溶于100％DMSO中，配制成10mM的母液。

[0234] 3.实验步骤与方法：

[0235] 1)开启生物安全柜紫外灯，倒计时30分钟；

[0236] 2)37℃水浴锅中，预热RPMI1640培养基和胰酶；

[0237] 3)紫外照射完毕，开启生物安全柜，将预热培养基，胰酶，磷酸缓冲盐溶液(PBS)等用酒精擦拭并放入生物安全柜中；

[0238] 4)将HT29细胞从培养箱中取出，在生物安全柜中去除旧培养基，加入10毫升PBS，轻轻摇晃，并去除PBS；

[0239] 5)加入预热0.25％胰酶1.5毫升，水平晃动培养瓶，使其均匀覆盖到底部的细胞，置培养箱中2分钟；

[0240] 6)用完全培养基终止细胞消化，并吹打至均匀的细胞悬液计数；

[0241] 7)根据细胞计数结果，调整细胞悬液密度为1500细胞每孔，50微升每孔进行种板；

[0242] 8)将化合物母液连续稀释在DMSO溶液中，并使用Tecan将化合物加入细胞板中；

[0243] 9)将加过化合物的细胞板和CellTiterGlo放到室温平衡，后加CellTiterGlo 25微升至每孔，震荡1‑2分钟，静置10分钟后检测信号值，并用XL‑Fit分析数据，计算各化合物的IC50。

[0244] 4.实验结果见表3：

[0245] 表3体外细胞活性测试结果

[0246]

[0247] 结论：本发明化合物表现出较优的对HT29细胞增殖抑制活性。

[0248] 实验例三、体内DMPK研究：

[0249] 小鼠体内DMPK研究

[0250] 1.实验目的：

[0251] 以雌性BALB/c小鼠为受试动物，单次给药后测定化合物血药浓度并评估药代动力学行为。

[0252] 2.实验操作：

[0253] 选择健康成年雌性BALB/c小鼠8只，4只为静注组，4只为口服组。静注组溶媒为5％DMSO+95％(20％HP‑β‑CD)，待测化合物与适量静注溶媒混合，涡旋并超声，制备得到0.5mg/mL澄清溶液，微孔滤膜过滤后备用；口服组溶媒为5％DMSO+95％(20％HP‑β‑CD)，待测化合
物与溶媒混合后，涡旋并超声，制备得到0.3mg/mL溶液。小鼠1mg/kg静脉给药或3mg/kg口服
给药后，收集一定时间的全血，制备得到血浆，以LC‑MS/MS方法分析药物浓度，并用Phoenix WinNonlin软件(美国Pharsight公司)计算药代参数。注DMSO：二甲基亚砜；HP‑β‑CD：羟丙
基‑β‑环糊精。

[0254] 3.实验结果见表4：

[0255] 表4化合物PK测试结果

[0256]

[0257] 备注:Cmax为最大浓度；F％为口服生物利用度；DNAUC＝AUCPO/Dose，AUCPO为口服暴露量，Dose为药物剂量；Vdss为分布容积；Cl为清除率；T1/2为半衰期。

[0258] 结论：本发明化合物展现了优良的口服暴露量和生物利用度。

[0259] 实施例四：人结肠癌HCT116细胞皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型的体内药效学研究

[0260] 1.实验目的：

[0261] 使用人结肠癌HCT‑116细胞皮下异种移植肿瘤裸小鼠模型，评价WX007的抗肿瘤作用。

[0262] 2.实验动物：

[0263] 种属：小鼠

[0264] 品系：BALB/c裸小鼠

[0265] 周龄：6‑8周龄

[0266] 性别：雌性

[0267] 体重：17‑23克

[0268] 供应商：上海市计划生育科学研究所实验动物经营部

[0269] 动物合格证号：20180006020214

[0270] 3.实验内容：

[0271] 1)实验细胞及培养：人结肠癌HCT‑116细胞体外单层培养，培养条件为McCoy's 5a培养基中加10％胎牛血清，37℃的5％CO2孵箱培养。一周三次用胰酶‑乙二胺四乙酸进行常
规消化处理传代。当细胞饱和度为80％‑90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种；

[0272] 2)肿瘤组织接种及分组：0.2mL(5×106个)HCT‑116细胞皮下接种于每只小鼠的右3
侧腋下，肿瘤平均体积达到149mm时，将动物随机分为两组，开始给药。实验分组和给药方
案见表5：

[0273] 表5实验动物分组及给药方案

[0274]

[0275] 3)实验动物日常观察：本实验方案的拟定及任何修改均通过了实验动物管理与使用委员会(IACUC)的评估核准。实验动物的使用及福利遵照国际实验动物评估和认可委员
会(AAALAC)的规定执行。每天监测动物的健康状况及死亡情况，例行检查包括观察肿瘤生
长和药物治疗对动物日常行为表现的影响如行为活动，摄食摄水量(仅目测)，体重变化(每
周测量两次体重)，外观体征或其它不正常情况。基于各组动物数量记录了组内动物死亡数
和副作用。

[0276] 4)受试物的配制

[0277] a)溶媒组：玉米油。

[0278] b)待测化合物组：称量定量的受试化合物于配药瓶内，加入相应体积的玉米油后涡旋，得到澄清溶液。化合物一周配制一次。

[0279] 5)肿瘤测量和实验指标：

[0280] a)每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径；

[0281] b)化合物的抑瘤疗效用TGI(％)评价。TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)的计算：TGI(％)＝{[1‑(某处理组给药结束时平均瘤体积－该处理组开始给药时平均瘤体
积)]/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积－溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)}×
100％。

[0282] 4.实验结果：

[0283] 1)如表6和图1所示，在人结肠癌HCT‑116细胞皮下异种移植肿瘤裸小鼠模型上，口服给药至第18天，WX007 15mg/kg给药组具有明显的抑制肿瘤生长作用，TGI为62％。

[0284] 2)实验动物的体重作为间接测定药物毒性的参考指标。如图2所示，给药至第18天时，溶剂对照组和WX007 15mg/kg给药组所有动物的体重均未有明显下降，无发病或死亡现
象。

[0285] 表6小鼠HCT116模型体内药效实验结果

[0286] 组别 药物 TGI2 WX007(15mg/kg,PO,QD) 62％

[0287] 结论：本发明化合物能显著抑制肿瘤生长，给药过程中动物的体重未见明显下降，耐受性好。