一种氨基脂质及其制备方法和应用转让专利
申请号 : CN202210812013.3
文献号 : CN114874107B
文献日 : 2022-11-29
发明人 : 查高峰 , 王静 , 潘逸航
申请人 : 中山大学附属第七医院(深圳)
摘要 :
本发明属医药化学技术领域，特别涉及一种氨基脂质及其制备方法和应用，本发明公开的式（I）所示的可离子化氨基脂质或其药物可用的盐，在构建氨基脂质的过程中反应条件温和，不需要保护和脱保护，原子经济性高。在体外、体内的递送研究中，显示了优良的递送核酸至细胞中的能力。上述氨基脂质化合物具备多个可降解基团，该基团的引入不仅提高了核酸包载能力，同时又显著增强了核酸在内涵体/溶酶体的逃逸能力，在大幅度降低细胞毒性的同时，还能有助于目的药物或基因等递送目标的释放，进而提高递送效率。所述氨基脂质化合物的制备方法具有原料易得、反应条件温和、反应选择性好、反应产率高、仪器设备要求低和操作简单的优点。
权利要求 :
1.一种氨基脂质，其特征在于，其结构如式（I）所示：其中，
2 3
L 和L为取代或未取代的C1‑C16亚烷基、C1‑C16亚烯基、C1‑C16亚炔基、C3‑C16亚环烷基、C3‑C16亚环烯基，所述C1‑C16亚烷基、C1‑C16亚烯基、C1‑C16亚炔基、C3‑C16亚环烷基、C3‑C16亚环烯基的取代基为C1‑C6烃基；
1 2 1 2
G和G彼此相同或不同，G选自‑O‑C(=O)‑，‑CH2‑；G选自‑O‑C(=O)‑;
3 4
R 和R 彼此相同或不同，并且各自独立地选自H，取代或未取代的C1‑C18烷基、C1‑C18烯基、C1‑C18炔基、C1‑C18环烷基、C1‑C18环烯基、C1‑C18环炔基，所述C1‑C18烷基、C1‑C18烯基、C1‑C18炔基、C1‑C18环烷基、C1‑C18环烯基、C1‑C18环炔基的取代基选自C1‑C6烃基；
1 2 1
所述R、R、L形成R1R2‑N‑L1‑O‑的含胺的结构为 ，并且该结构选自，O1、O2、O3、O4、O5、O6、O7、O8、O9、O10、O11、O12、O13中的一种：。
2 3
2.根据权利要求1所述氨基脂质，其特征在于，L 和L 为取代或未取代的C3‑C16亚烷基、C3‑C16亚烯基，所述C3‑C16亚烷基、C3‑C16亚烯基取代基为C1‑C6烃基；
3 4
R 和R 彼此相同或不同，并且各自独立地选自H，取代或未取代的C1‑C18烷基、C1‑C18烯基，所述C1‑C18烷基、C1‑C18烯基的取代基选自C1‑C6烃基。
3.权利要求1或2所述氨基脂质及其药物可接受的盐在制备用于基因疫苗接种、反义治疗或通过干扰RNA药物的治疗的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，在制备用于癌症或遗传疾病的治疗药物中的应用。
5.根据权利要求3所述应用，其特征在于，在制备用于治疗肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、淋巴癌、血癌、前列腺癌、过敏的药物中的应用。
6.根据权利要求4所述应用，其特征在于，在制备用于治疗血友病，地中海贫血或高雪氏病的药物中的应用。
说明书 :
一种氨基脂质及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属医药化学技术领域，特别涉及一种氨基脂质及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 目前，核酸药物极为广阔的应用前景，除了能够用于癌症和传染性疾病，同样核酸药物在遗传性疾病和心血管疾病等许多基因相关的疾病中具有开发潜力。然而，由于RNA、
DNA和siRNA等体内极易被降解，直接通过口服或静脉注射给药，生物利用度极低，因此需要
载体的递送。
DNA和siRNA等体内极易被降解，直接通过口服或静脉注射给药，生物利用度极低，因此需要
载体的递送。
[0003] 目前，mRNA疫苗递送载体主要包括病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体主要有逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、牛痘病毒等。虽然该类病毒载体具有较高的转染效率
(95%)，不易在体内降解等优点，但它同时也具有诸多缺陷，如制备过程复杂、所携带pDNA大
小受限制、缺乏靶向性、可随意整合到宿主细胞中，因而容易引起免疫原性反应，存在较大
致病和致癌隐患，在临床应用上受到很大限制。相反，非病毒载体具有较高的生物安全性、
毒性较小、免疫原性也较低、外源基因整合几率低、成本低、制备过程简单、使用方便、重现
性好、无传染性、易于保存和检验等优点，因此逐渐成为研究热点。
(95%)，不易在体内降解等优点，但它同时也具有诸多缺陷，如制备过程复杂、所携带pDNA大
小受限制、缺乏靶向性、可随意整合到宿主细胞中，因而容易引起免疫原性反应，存在较大
致病和致癌隐患，在临床应用上受到很大限制。相反，非病毒载体具有较高的生物安全性、
毒性较小、免疫原性也较低、外源基因整合几率低、成本低、制备过程简单、使用方便、重现
性好、无传染性、易于保存和检验等优点，因此逐渐成为研究热点。
[0004] 其中脂质纳米颗粒（Lipid Nanoparticles, LNP）是其中研究较多，较成熟的一种递送系统，mRNA处于LNP的核心位置，不易被核酸酶降解，且LNP的亲脂性使其易与宿主细胞
膜融合,进而以内吞的方式将mRNA传递至细胞内。因此LNP有两大职责：一是能够有效的包
裹和保护mRNA，在到达靶点前维持稳定，二是要在mRNA到达溶酶体前将其释放进入细胞质
中
膜融合,进而以内吞的方式将mRNA传递至细胞内。因此LNP有两大职责：一是能够有效的包
裹和保护mRNA，在到达靶点前维持稳定，二是要在mRNA到达溶酶体前将其释放进入细胞质
中
[0005] LNP通常包括四种组分，由可离子化的阳离子脂质、磷脂、胆固醇和聚乙二醇化的脂质组成，结构上为具有自组装性能的两亲性分子。LNP具有各成分结构确定，重现性好，利
于质量监管，同时具有较长的体内循环时间、良好的生物相容性等优点。纳米颗粒在进入细
胞后，需逃出内涵体/溶酶体，才能在细胞质中释放RNA，使其得以表达生成目的蛋白。但目
前LNP的内涵体/溶酶体逃逸率普遍较低，尽管DLin‑MC3‑DMA作为目前最高效的氨基脂质，
也仅有1% ‑ 4%的RNA逃出内涵体/溶酶体，因此内涵体/溶酶体逃逸已成为影响核酸递送的
关键步骤，设计具有良好包载核酸能力，同时又具有较高的内涵体/溶酶体逃逸能力的氨基
脂质对于解决核酸递送的问题，具有重大的研究意义和现实需求。
于质量监管，同时具有较长的体内循环时间、良好的生物相容性等优点。纳米颗粒在进入细
胞后，需逃出内涵体/溶酶体，才能在细胞质中释放RNA，使其得以表达生成目的蛋白。但目
前LNP的内涵体/溶酶体逃逸率普遍较低，尽管DLin‑MC3‑DMA作为目前最高效的氨基脂质，
也仅有1% ‑ 4%的RNA逃出内涵体/溶酶体，因此内涵体/溶酶体逃逸已成为影响核酸递送的
关键步骤，设计具有良好包载核酸能力，同时又具有较高的内涵体/溶酶体逃逸能力的氨基
脂质对于解决核酸递送的问题，具有重大的研究意义和现实需求。
发明内容
[0006] 针对现有技术中阳离子脂质体的转染的效率低、正电荷所导致的细胞毒性等技术问题，本发明提供了一种氨基脂质及其制备方法和应用。
[0007] 本发明的目的通过以下技术方案予以实现：
[0008] 一种氨基脂质，其结构如式（I）所示：
[0009]
[0010] 其中，R1和R2彼此相同或不同，并且各自独立地选自H，取代或未取代的C1‑C10烷1 2
基、C2‑C10烯基、C2‑C10炔基；或R和R相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，所述杂原子选自氮、硫或氧；
基、C2‑C10烯基、C2‑C10炔基；或R和R相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，所述杂原子选自氮、硫或氧；
[0011] L1、L2和L3为取代或未取代的C1‑C12亚烷基、C1‑C12亚烯基、C1‑C12亚炔基、C3‑C12亚环烷基、C3‑C12亚环烯基，所述C1‑C12亚烷基、C1‑C12亚烯基、C1‑C12亚炔基、C3‑C12亚环烷基、C3‑C12亚环烯基的取代基为C1‑C6烃基；
[0012] X1、X2和X3彼此相同或不同，并且各自独立地选自C、N、O、S、S＝O、S(＝O)2和S‑S中的一种，m、n、p选自0、1或2；
[0013] 当X1、X2和X3中选择为C时，m、n、p对应为2；X1、X2和X3连接的两个取代基之间相同或不同；
[0014] 所述X1、X2和X3连接的取代基R7、R8、R9彼此相同或不同，并各自独立选自H或C1‑C12烷基；
[0015] G1和G2彼此相同或不同，G1选自‑O‑C(=O)‑，‑O‑C(=NH)‑，‑C(=O)‑O‑，‑C(=NH)‑，‑2
CH2‑； G选自‑O‑C(=O)‑，‑O‑C(=NH)‑，‑C(=O)‑O‑，‑C(=NH)‑；
CH2‑； G选自‑O‑C(=O)‑，‑O‑C(=NH)‑，‑C(=O)‑O‑，‑C(=NH)‑；
[0016] R3 和R4 彼此相同或不同，并且各自独立地选自H，取代或未取代的C1‑C18烷基、C1‑C18烯基、C1‑C18炔基、C1‑C18环烷基、C1‑C18环烯基、C1‑C18环炔基，所述C1‑C18烷基、C1‑C18烯基、C1‑C18炔基、C1‑C18环烷基、C1‑C18环烯基、C1‑C18环炔基的取代基选自C1‑C6烃基。
[0017] 上述X1、X2和X3彼此相同或不同，并且各自独立地选自C、N、O、S、S＝O、S(＝O)2和S‑S中的一种，m、n、p选自0、1或2。
[0018] 所述m、n、p的取值根据C、N、O、S、S＝O、S(＝O)2和S‑S的成键方式决定。当为C时，m、n、p取值为2；当N时，m、n、p取值为1；当为S、S＝O、S(＝O)2和S‑S时，m、n、p取值为0。
[0019] 优选地，所述氨基脂质的结构如式（II）或式（III）所示：
[0020]
[0021] 优选地，L2和L3为取代或未取代的C3‑C12亚烷基、C3‑C12亚烯基，所述C3‑C12亚烷基、C3‑C12亚烯基取代基为C1‑C6烃基；
[0022] R3 和R4 彼此相同或不同，并且各自独立地选自H，取代或未取代的C1‑C18烷基、C1‑C18烯基，所述C1‑C18烷基、C1‑C18烯基的取代基选自C1‑C6烃基。
[0023] 优选地，所述X1为N，所述R1、R2、L1、X1形成R1R2‑N‑L1‑X1的含胺的结构为1 2
；所述R 、R可相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，
所述杂原子选自氮、硫或氧；并且该结构选自：D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9、D10、D11、D12、D13、D14、D15、D16、D17、D18、D19、D20中的一种：
；所述R 、R可相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，
所述杂原子选自氮、硫或氧；并且该结构选自：D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9、D10、D11、D12、D13、D14、D15、D16、D17、D18、D19、D20中的一种：
[0024]。
[0025] 优选地，所述X1为O，所述R1、R2、L1、X1形成R1R2‑N‑L1‑X1的含胺的结构为1 2
；所述R、R可相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，所述杂原子选自
氮、硫或氧，并且该结构选自，O1、O2、O3、O4、O5、O6、O7、O8、O9、O10、O11、O12、O13、O14、O15、O16中的一种：
；所述R、R可相连接形成4～10元杂环，其中，多元杂环包含1～6个杂原子，所述杂原子选自
氮、硫或氧，并且该结构选自，O1、O2、O3、O4、O5、O6、O7、O8、O9、O10、O11、O12、O13、O14、O15、O16中的一种：
[0026]。
[0027] 更优选地，所述氨基脂质可分为多个系列，每个系列典型代表化合物的结构式为：
[0028]
。
。
[0029] 所述式（I）氨基脂质的制备方法，包括以下步骤：
[0030] S1. 化合物SH‑L2‑OH或SH‑L2‑CH3与三聚氯氰在碱的催化下，于‑25~‑10℃搅拌反应；
[0031] S2. 在步骤S1反应体系中加入SH ‑ L3‑OH，加入作为催化剂的碱，搅拌反应；
[0032] S3. 在步骤S2反应体系中加入R3‑COOH或R4‑COOH，并在缩合剂的作用下，加入催化量的DMAP搅拌反应；
[0033] S4. 在步骤S3反应体系中加入R1R2‑N‑L1‑X1H，搅拌反应即得。
[0034] 具体反应过程为：
[0035] （1）‑20摄氏度下，化合物SH‑L2‑OH或SH‑L2‑CH3与三聚氯氰在催化剂DIPEA的催化下进行第一步反应，得到第一中间体；
[0036] （2）不分离第一中间体，直接室温下在步骤S1反应体系中加入SH ‑ L3‑OH和催化剂DIPEA进行第二步反应，得到第二中间体；
[0037] （3）分离第二中间体，加入R3‑COOH或R4‑COOH和缩合剂EDC•HCl、DIPEA及催化量的DMAP在常温下进行第三步反应，得到第三中间体；
[0038] （4）分离第三中间体，在常温下加入R1R2‑N‑L1‑X1H，进行第四步反应，得到所述式I的氨基脂质化合物。
[0039] 当G1为‑CH2‑时，反应式为：
[0040]
[0041] 当G1和G2为‑O‑C(=O)‑时，反应式为：
[0042] 。
[0043] 所述氨基脂质及其药物可接受的盐、前药或立体异构体在制备用于基因治疗、基因疫苗接种、反义治疗或通过干扰RNA药物的治疗的药物中的应用。
[0044] 优选地，在制备用于癌症或遗传疾病的治疗药物中的应用。
[0045] 优选地，在制备用于治疗肺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、淋巴癌、血癌、前列腺癌、过敏、毒性的药物中的应用。
[0046] 优选地，在制备治疗血友病，地中海贫血或高雪氏病的药物中的应用。
[0047] 与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
[0048] 本发明公开的一种氨基脂质为式(Ⅰ)所示的可离子化氨基脂质或其药物可用的盐，在构建氨基脂质的过程中反应条件温和，不需要保护和脱保护，原子经济性高。在体外、
体内的递送研究中，显示了优良的递送核酸至细胞中的能力。上述氨基脂质化合物具备多
个可降解基团，该基团的引入不仅提高了核酸包载能力，同时又显著增强了核酸在内涵体/
溶酶体的逃逸能力，在大幅度降低细胞毒性的同时，还能有助于目的药物或基因等递送目
标的释放，进而提高递送效率。所述氨基脂质化合物的制备方法具有原料易得、反应条件温
和、反应选择性好、反应产率高、仪器设备要求低和操作简单的优点。
体内的递送研究中，显示了优良的递送核酸至细胞中的能力。上述氨基脂质化合物具备多
个可降解基团，该基团的引入不仅提高了核酸包载能力，同时又显著增强了核酸在内涵体/
溶酶体的逃逸能力，在大幅度降低细胞毒性的同时，还能有助于目的药物或基因等递送目
标的释放，进而提高递送效率。所述氨基脂质化合物的制备方法具有原料易得、反应条件温
和、反应选择性好、反应产率高、仪器设备要求低和操作简单的优点。
附图说明
[0049] 图1为实施例4的1H‑NMR图谱；
[0050] 图2为实施例4的13C‑NMR图谱；
[0051] 图3为实施例7的1H‑NMR图谱；
[0052] 图4为实施例8和实施例21中肌肉注射OVA mRNA疫苗后的荷瘤小鼠的肿瘤生长曲线图；
[0053] 图5为实施例8和实施例21中肌肉注射OVA mRNA疫苗后的荷瘤小鼠生存曲线图；
[0054] 图6为实施例35中部分LNP细胞毒性测试所画的细胞存活率图。
具体实施方式
[0055] 下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明
各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0056] 下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
[0057] 本发明所用的术语“任选地取代的”意指与原子或基团连接的一个或多个氢原子独立地未被取代，或被一个或多个例如一、二、三或四个取代基取代。当一个原子或基团被
多个取代基取代时，所述多个取代基可以相同或不同。
多个取代基取代时，所述多个取代基可以相同或不同。
[0058] 文中的缩写：
[0059] RNA 核糖核酸
[0060] DSPC 二硬脂酰磷脂酰胆碱
[0061] DOPE 二油酰基磷脂酰乙醇胺
[0062] DOPC 二油酰磷脂酰胆碱
[0063] DSPE 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺
[0064] PEG2000‑DMG (1‑ (单甲氧基聚乙二醇) ‑2, 3 二肉豆寇酰基甘油
[0065] kD 千道尔顿
[0066] PBS 磷酸盐缓冲溶液。
[0067] 以下实施例中如无特别说明，氨基脂质结构通式如式(Ⅰ)所示
[0068]
[0069] 编号指代的氨基脂质结构中，O1～O16，D1～D21为上述定义的 基团；如实施例4的结构式为 。
[0070] 实施例1 当G1和G2相同的选自‑O‑C(=O)‑时， Ox系列之一氨基脂质化合物库的平行合成与表征
[0071]
[0072] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（184mg，1 mmol）和10mL的THF、‑20℃时加入3‑巯基‑1‑丙醇（173μL，2mmol）、DIPEA（442μL, 2.4mmol），室温下搅拌反应过夜，得 Step I溶液（1mmol/10ml），加入月桂酸（481mg, 2.4mmol）、EDC.HCl（460mg, 2.4mmol）、DMAP（6mg,
0.05mmol）和DIPEA（442μL, 2.4mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
0.05mmol）和DIPEA（442μL, 2.4mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
[0073] 用移液枪将Step II溶液分别转移至1.5 mL的96孔板中（每个0.1 mL，0.01mmol），每孔中各加入带三级胺的醇的THF溶液（0.1 mL，0.02 mmol，0.2M）常温搅拌6h，TLC检测无
Step II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到16个氨基脂质化合物。进行质
谱检测，结果见下面的表1。
Step II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到16个氨基脂质化合物。进行质
谱检测，结果见下面的表1。
[0074] 表1： Ox系列之一氨基脂质化合物库的MW/z值
[0075]
[0076] 表1中，编号1～16的化合物结构通式为 ，编号1～16化合物的R基团分别如上述的O1～O16。
[0077] 实施例2当G1和G2彼此不同的选自‑CH2‑和‑O‑C(=O)‑时，Ox系列之一氨基脂质化合物库的平行合成与表征
[0078]
[0079] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（184mg，1 mmol）和10mL的THF、‑20℃时加入十六烷基硫醇（308μL，1mmol）、DIPEA（221μL, 1.2mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（87μL，1mmol）和DIPEA（221μL, 1.2mmol），室温搅拌过夜，得 0.1M的Step I溶液，加入壬酸（210μL, 2.4mmol）EDC.HCl（230mg, 1.2mmol）、DMAP（3mg, 0.025mmol）和
DIPEA（221μL, 1.2mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
DIPEA（221μL, 1.2mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
[0080] 用移液枪将Step II溶液分别转移至1.5 mL的96孔板中（每个0.1 mL，0.01mmol），每孔中各加入带三级胺的醇的THF溶液（0.1 mL，0.02 mmol，0.2M）常温搅拌6h，TLC检测无
Step II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到16个氨基脂质化合物。进行质
谱检测，结果见下面的表2。
Step II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到16个氨基脂质化合物。进行质
谱检测，结果见下面的表2。
[0081] 表2： Ox系列之一氨基脂质化合物库的MW/z值
[0082]
[0083] 表2中，编号1～16的化合物结构通式为 ，编号1～16化合物的R基团分别如上述的O1～O16。
[0084] 实施例3：当G1和G2相同的选自‑O‑C(=O)‑时，Dx系列之一氨基脂质化合物库的平行合成与表征
[0085]
[0086] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（184mg，1 mmol）和10mL的THF、‑20℃时加入6‑巯基‑1‑己醇（274μL，2mmol）、DIPEA（442μL, 2.4mmol），室温下搅拌反应过夜，得 Step I溶液（1mmol/10ml），加入癸酸（463μL, 2.4mmol）、EDC.HCl（460mg, 2.4mmol）、DMAP（6mg,
0.05mmol）和DIPEA（442μL, 2.4mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
0.05mmol）和DIPEA（442μL, 2.4mmol），常温搅拌6h，得0.1 M的Step II溶液（1mmol/10ml）。
[0087] 用移液枪将Step II溶液分别转移至1.5 mL的96孔板中（每个0.1 mL，0.01mmol），每孔中各加入带三级胺的THF溶液（0.1 mL，0.02 mmol，0.2M）常温搅拌6h，TLC检测无Step
II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到20个氨基脂质化合物。进行质谱检
测，结果见下面的表3。
II 原料。反应结束后，常温挥发至基本无溶剂，即得到20个氨基脂质化合物。进行质谱检
测，结果见下面的表3。
[0088] 表3： Dx系列之一氨基脂质化合物库的MW/z值
[0089]
[0090] 表3中，编号1～20化合物的结构通式为 ，编号1～20化合物的R基团分别如上述的D1～D20。
[0091] 实施例4：代表性氨基脂质化合物的合成和表征
[0092]
[0093] 在10 mL的反应管中依次加入3‑二甲氨基‑1‑丙醇（71μL，0.6 mmol），（（6‑氯‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（丙烷‑3,1‑二基）双十二烷酸酯（330mg，0.5mmol），4 mL THF。室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物（（6‑（3‑（二甲氨基）丙
1
氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（丙烷‑3,1‑二基）二癸酸酯（235 mg，85%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.62（m，4H），1.96（m，2H），2.07
13
（m，4H），2.27（s，6H），2.32（m，6H），3.17（t，4H），4.19（t，4H），4.42（t，2H）(图1)。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ13.61，22.18，24.46，26.04，26.46，27.92，28.68，28.78，28.83，18.97，
29.1，31.4，33.78，44.65，55.43， 62.1，65.97，167.27，173.27，181.74(图2)。ESI‑MS + +
calculated for C38H70S2N4O5 [M+H] 726.5, found727.6。
1
氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（丙烷‑3,1‑二基）二癸酸酯（235 mg，85%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.62（m，4H），1.96（m，2H），2.07
13
（m，4H），2.27（s，6H），2.32（m，6H），3.17（t，4H），4.19（t，4H），4.42（t，2H）(图1)。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ13.61，22.18，24.46，26.04，26.46，27.92，28.68，28.78，28.83，18.97，
29.1，31.4，33.78，44.65，55.43， 62.1，65.97，167.27，173.27，181.74(图2)。ESI‑MS + +
calculated for C38H70S2N4O5 [M+H] 726.5, found727.6。
[0094] 实施例5：（（6‑氯‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑二基）双十四烷酸酯
[0095]
[0096] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（1.84g，10 mmol）和20mL的THF、‑20℃时加入6‑巯基‑1‑己醇（2.74mL，20mmol）、DIPEA（4.42mL, 24mmol），室温下搅拌反应过夜，使用柱层析纯化（hexane：EA=3:1至1:2）得6,6'‑（（6‑氯‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二酰基）双（磺酰胺基））双（己烷‑1‑醇）（3.0 g，79%）。然后与依次加入十四酸（1.81g，7.9mmol）、EDC.HCl（1.51g, 7.9mmol）、DMAP（48mg, 0.395mmol）和DIPEA（1.45mL,7.9mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得（（6‑氯‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑
1
二基）双十四烷酸酯（4.74 g，75%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.42（m，8H），1.60（m，4H），1.64（m，4H），1.66（m，4H），2.32（t，4H），3.15（t，4H），
13
4.13（t，4H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.9，29.0，29.3，
29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，183.5。ESI‑MS calculated for
+ +
C43H78ClS2N3O4 [M+H] 800.5, found 800.7。
1
二基）双十四烷酸酯（4.74 g，75%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.42（m，8H），1.60（m，4H），1.64（m，4H），1.66（m，4H），2.32（t，4H），3.15（t，4H），
13
4.13（t，4H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.9，29.0，29.3，
29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，183.5。ESI‑MS calculated for
+ +
C43H78ClS2N3O4 [M+H] 800.5, found 800.7。
[0097] 实施例6：（（6‑（2‑（吡咯烷‑1‑基）乙氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑二基）双十四烷酸酯
[0098]
[0099] 在25 mL的反应管中依次加入N‑(2‑羟乙基)‑吡咯烷（690μL，5.9 mmol），（（6‑氯‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑二基）双十四烷酸酯（4.74 g，5.9 mmol），
5 mL THF。室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物（（6‑（2‑（吡咯烷‑1‑基）乙氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑二基）双十四烷酸酯
1
（4.1g，79%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.42（m，8H），
1.60（m，4H），1.64（m，4H），1.66（m，4H），1.68（m，4H），2.32（t，4H），2.51（t，4H），2.66（t，2H），
13
3.15（t，4H），4.11（t，2H），4.13（t，4H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ14.1，22.7，23.6，25.0，
25.1，28.2，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，56.5，56.9，65.2，66.8，173.1，+ +
172.8，181.0。ESI‑MS calculated for C49H90S2N4O5 [M+H] 879.6, found880.7。
5 mL THF。室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物（（6‑（2‑（吡咯烷‑1‑基）乙氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2,4‑二基）双（磺胺基）双（己烷‑6,1‑二基）双十四烷酸酯
1
（4.1g，79%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.42（m，8H），
1.60（m，4H），1.64（m，4H），1.66（m，4H），1.68（m，4H），2.32（t，4H），2.51（t，4H），2.66（t，2H），
13
3.15（t，4H），4.11（t，2H），4.13（t，4H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ14.1，22.7，23.6，25.0，
25.1，28.2，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，56.5，56.9，65.2，66.8，173.1，+ +
172.8，181.0。ESI‑MS calculated for C49H90S2N4O5 [M+H] 879.6, found880.7。
[0100] 实施例7： 3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯[0101]
[0102] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十五烷基硫醇（1443μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入辛酸（951μL, 6mmol）EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸
1
丙酯（1.95g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.64（m，
13
2H），1.71（m，2H），2.01（m，2H），2.32（t，2H），3.12（t，2H），3.19（t，2H），4.19（t，2H）(图3)。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C29H52ClS2N3O2 [M+H] 575.3, found 575.5。
1
丙酯（1.95g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.64（m，
13
2H），1.71（m，2H），2.01（m，2H），2.32（t，2H），3.12（t，2H），3.19（t，2H），4.19（t，2H）(图3)。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C29H52ClS2N3O2 [M+H] 575.3, found 575.5。
[0103] 实施例8：3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0104]
[0105] 在50mL的反应瓶中依次加入1‑(3‑羟丙基)‑4‑甲基哌嗪（545μL，3.4mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.95g，3.4mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.42g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H+
] 696.5, found697.6。
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.42g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，32H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H+
] 696.5, found697.6。
[0106] 实施例9： 3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯[0107]
[0108] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十五烷基硫醇（1443μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入壬酸（1048μL 6mmol）EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸
1
丙酯（1.99g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.19（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C30H54ClS2N3O2 [M+H] 589.3, found 590.5。
1
丙酯（1.99g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.19（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C30H54ClS2N3O2 [M+H] 589.3, found 590.5。
[0109] 实施例10：3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯
[0110]
[0111] 在50mL的反应瓶中依次加入3‑二甲氨基‑1‑丙醇（402μL，3.4mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.99g，3.4mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑1
（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.35g，61%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15
13
（t，6H），2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.9，32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS + +
calculated for C35H66S2N4O3 [M+H] 655.5, found656.6。
（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.35g，61%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15
13
（t，6H），2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.9，32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS + +
calculated for C35H66S2N4O3 [M+H] 655.5, found656.6。
[0112] 实施例11： 3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸丙酯[0113]
[0114] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十五烷基硫醇（1443μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入辛酸（951μL, 6mmol）EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸
1
丙酯（2.0g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.19（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.3, found 603.5。
1
丙酯（2.0g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.19（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，
31.9，32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.3, found 603.5。
[0115] 实施例12：3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸丙酯
[0116]
[0117] 在50mL的反应瓶中依次加入1‑(3‑羟丙基)‑4‑甲基哌嗪（545μL，3.4mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸丙酯（2.0g，3.4mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸丙酯（1.42g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H+
] 724.5, found725.6。
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）癸酸丙酯（1.42g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H+
] 724.5, found725.6。
[0118] 实施例13：3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯[0119]
[0120] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十六硫醇（1539μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入壬酸（1048μL, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸
1
丙酯（2.36g，78%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.3, found 603.5。
1
丙酯（2.36g，78%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.3, found 603.5。
[0121] 实施例14：3‑（（4‑（（3‑（二甲氨基）丙基）氨基）‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯
[0122]
[0123] 在50mL的反应瓶中依次加入N,N‑二甲基‑1,3‑二氨基丙烷（492μL，3.91 mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（2.36g，3.91mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（（3‑（二甲氨
1
基）丙基）氨基）‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.7g，65%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.72（m，
2H），1.97（m，2H），2.15（s，6H），2.32（t，2H），2.38（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.35（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，26.5，
28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，40.0，47.0，55.5，64.1，161.1，+ +
173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C36H69S2N5O2 [M+H] 668.5, found669.6。
1
基）丙基）氨基）‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.7g，65%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，36H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.72（m，
2H），1.97（m，2H），2.15（s，6H），2.32（t，2H），2.38（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.35（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，26.5，
28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，40.0，47.0，55.5，64.1，161.1，+ +
173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C36H69S2N5O2 [M+H] 668.5, found669.6。
[0124] 实施例15：3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯[0125]
[0126] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十六硫醇（1539μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入辛酸（951μL, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸
1
丙酯（2.36g，80%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 588.3, found 589.5。
1
丙酯（2.36g，80%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C31H56ClS2N3O2 [M+H] 588.3, found 589.5。
[0127] 实施例16：3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0128]
[0129] 在50mL的反应瓶中依次加入3‑二甲氨基‑1‑丙醇（473μL，3.4mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（2.36g，4.0mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑1
（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.8g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：
δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15（t，6H），
13
2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated + +
for C35H66S2N4O3 [M+H] 655.5, found656.6。
（十六烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.8g，68%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：
δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，34H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15（t，6H），
13
2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated + +
for C35H66S2N4O3 [M+H] 655.5, found656.6。
[0130] 实施例17：4‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯[0131]
[0132] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十八硫醇（1.43mg，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入4‑巯基‑1‑丁醇（516μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得4‑（（4‑氯‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丁醇反应液，加入辛酸（951μL, 6mmol）EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得4‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯
1
（2.42g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.6‑1.66（m，
13
8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，
26.4，27.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，33.9，36.4，36.7，64.5，167.6，+ +
173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C33H60ClS2N3O2 [M+H] 630.4, found
631.5。
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得4‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯
1
（2.42g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.6‑1.66（m，
13
8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，
26.4，27.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，33.9，36.4，36.7，64.5，167.6，+ +
173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C33H60ClS2N3O2 [M+H] 630.4, found
631.5。
[0133] 实施例18：4‑（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯
[0134]
[0135] 在50mL的反应瓶中依次加入3‑二乙氨基‑1‑丙醇（570μL，3.84 mmol）和4‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯（2.42g，3.84mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物4‑（4‑（3‑（二乙氨基）丙氧基）‑
1
6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯（1.76g，63%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.15（t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.6‑1.66（m，8H），1.82（m，2H），
13
2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.01（m，4H），3.15（t，4H），4.13（t，2H），4.2（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 13.3，14.1，22.7，25.0，26.4，27.7，27.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，
30.2，31.8，31.9，33.9，36.4，36.7，49.9，58.2，64.5，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。
+ +
ESI‑MS calculated for C38H72S2N4O3 [M+H] 697.5, found698.6。
1
6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代辛酸丁酯（1.76g，63%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.15（t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.6‑1.66（m，8H），1.82（m，2H），
13
2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.01（m，4H），3.15（t，4H），4.13（t，2H），4.2（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 13.3，14.1，22.7，25.0，26.4，27.7，27.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，
30.2，31.8，31.9，33.9，36.4，36.7，49.9，58.2，64.5，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。
+ +
ESI‑MS calculated for C38H72S2N4O3 [M+H] 697.5, found698.6。
[0136] 实施例19：3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯[0137]
[0138] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十八硫醇（1.43mg，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入壬酸（1048μL, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸
1
丙酯（2.42g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C33H60ClS2N3O2 [M+H] 630.4, found 631.5。
1
丙酯（2.42g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C33H60ClS2N3O2 [M+H] 630.4, found 631.5。
[0139] 实施例20：3‑（（4‑（（2‑（1‑异丙基哌啶‑4‑基）乙基）氨基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯
[0140]
[0141] 在50mL的反应瓶中依次加入2‑(1‑异丙基‑哌啶‑4‑基)‑乙胺（654mg，3.84mmol）、3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（2.42g，3.84mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（（2‑（1‑异丙基哌啶‑4‑基）乙基）氨基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.55g，
1
53%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.00（d，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.4（m，
1H），1.5（m，2H），1.56（m，4H），1.6‑1.66（m，4H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），2.41‑2.51（m，
13
4H），2.69（m，1H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.35（t，2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，17.0，18.1，22.7，25.0，25.1，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，
29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，34.7，36.7，42.8，45.7，58.3，64.1，161.1，173.1，180.2，+ +
183.4。ESI‑MS calculated for C43H81S2N5O2 [M+H]764.6, found765.8。
1
53%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.00（d，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.4（m，
1H），1.5（m，2H），1.56（m，4H），1.6‑1.66（m，4H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），2.41‑2.51（m，
13
4H），2.69（m，1H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.35（t，2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，17.0，18.1，22.7，25.0，25.1，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，
29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，34.7，36.7，42.8，45.7，58.3，64.1，161.1，173.1，180.2，+ +
183.4。ESI‑MS calculated for C43H81S2N5O2 [M+H]764.6, found765.8。
[0142] 实施例21：3‑（（4‑（（2‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）乙基）氨基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯
[0143]
[0144] 在50mL的反应瓶中依次加入4‑甲基‑1‑哌嗪乙胺（550mg，3.84mmol）、3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（2.42g，3.84mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（（2‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）1
乙基）氨基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.66g，59%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.97（m，
2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.50（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.34（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，
28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，47.2，55.5，57.6，64.1，161.1，+ +
173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C40H76S2N6O2 [M+H]737.5, found738.7。
乙基）氨基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.66g，59%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.97（m，
2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.50（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），3.34（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，
28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，47.2，55.5，57.6，64.1，161.1，+ +
173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C40H76S2N6O2 [M+H]737.5, found738.7。
[0145] 实施例22：3‑（（4‑（十八烷基硫代）‑6‑（（2‑（吡咯烷‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯
[0146]
[0147] 在50mL的反应瓶中依次加入1‑(2‑氨乙基)吡咯烷（228mg，2mmol）、3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.26g，2mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（十八烷基硫代）‑6‑（（2‑（吡1
咯烷‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.08g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.68（m，4H），
1.97（m，2H），2.32（t，2H），2.50（t，2H），2.51（t，4H），3.08（t，2H），3.15（t，2H）3.34（t，2H），
13
4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，23.6，25.0，26.3，28.5，
28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，47.2，55.5，56.2，64.1，161.1，173.1，+ +
180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C39H73S2N5O2 [M+H]708.5, found709.7。
咯烷‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）壬酸丙酯（1.08g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，40H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.68（m，4H），
1.97（m，2H），2.32（t，2H），2.50（t，2H），2.51（t，4H），3.08（t，2H），3.15（t，2H）3.34（t，2H），
13
4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，23.6，25.0，26.3，28.5，
28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，32.9，33.9，36.7，47.2，55.5，56.2，64.1，161.1，173.1，+ +
180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C39H73S2N5O2 [M+H]708.5, found709.7。
[0148] 实施例23：3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯[0149]
[0150] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十八硫醇（1.43mg，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入3‑巯基‑1‑丙醇（435μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）丙烷‑1‑醇反应液，加入辛酸（951μL, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸
1
丙酯（2.42g，78%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C32H58ClS2N3O2 [M+H] 616.4, found 617.5。
1
丙酯（2.42g，78%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.64（m，
13
2H），1.66（m，2H），1.97（m，2H），2.32（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，
32.9，33.9，36.7，64.1，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C32H58ClS2N3O2 [M+H] 616.4, found 617.5。
[0151] 实施例24：3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0152]
[0153] 在25mL的反应管中依次加入3‑二甲氨基‑1‑丙醇（237μL，2.0 mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.21g，2.0mmol）、5mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（二甲氨基）丙氧基）‑6‑
1
（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（0.83g，61%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15
13
（t，6H），2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.9，32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS + +
calculated for C37H70S2N4O3 [M+H] 683.5, found684.6。
1
（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（0.83g，61%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.66（m，2H），1.80（m，2H），1.97（m，2H），2.15
13
（t，6H），2.32（t，2H），2.34（t，2H），3.08（t，2H），3.15（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，27.1，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.9，32.9，33.9，36.7，47.0，57.9，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS + +
calculated for C37H70S2N4O3 [M+H] 683.5, found684.6。
[0154] 实施例25：3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0155]
[0156] 在25mL的反应管中依次加入1‑(3‑羟丙基)‑4‑甲基哌嗪（321μL，3.4mmol）和3‑（（4‑氯‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（1.21g，2.0mmol）、5mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（0.88g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C40H75S2N5O3 [M+H+
] 738.5, found739.6。
1
嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十八烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯（0.88g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.64（m，2H），1.66（m，2H），1.82（m，2H），1.97（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.48（t，2H），3.08（t，2H），3.15
13
（t，2H），4.13（t，2H），4.20（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，26.3，
27.7，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，32.9，33.9，36.7，46.6，55.4，57.6，+
58.2，64.1，66.4，172.8，173.1，178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C40H75S2N5O3 [M+H+
] 738.5, found739.6。
[0157] 实施例26：3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0158]
[0159] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入庚硫醇（784μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入6‑巯基‑1‑己醇（684μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得6‑（（4‑氯‑6‑（庚硫醇）‑1,3,
5‑三嗪‑2‑基）硫代）己烷‑1‑醇反应液，加入十四酸（1.38g, 6mmol）EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得6‑（（4‑氯‑6‑（庚硫醇）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十四酸己酯（1.77g，
1
60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，26H），1.4‑1.45（m，6H），1.6
13
（m，2H），1.64（m，4H），1.66（m，2H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.6，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.8，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C30H54ClS2N3O2 [M+H] 588.3, found 589.5。
5‑三嗪‑2‑基）硫代）己烷‑1‑醇反应液，加入十四酸（1.38g, 6mmol）EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得6‑（（4‑氯‑6‑（庚硫醇）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十四酸己酯（1.77g，
1
60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，26H），1.4‑1.45（m，6H），1.6
13
（m，2H），1.64（m，4H），1.66（m，2H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.6，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，
31.8，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for
+ +
C30H54ClS2N3O2 [M+H] 588.3, found 589.5。
[0160] 实施例27：3‑（（4‑（3‑（4‑甲基哌嗪‑1‑基）丙氧基）‑6‑（十五烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛酸丙酯
[0161]
[0162] 在50mL的反应瓶中依次加入1‑(3‑羟丙基)‑4‑甲基哌嗪（481μL，3mmol）和6‑（（4‑氯‑6‑（庚硫醇）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十四酸己酯（1.77g，3mmol）、10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物6‑（（4‑（庚硫醇）‑6‑（2‑（4‑甲基哌1
嗪‑1‑基）乙氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十四酸己酯（1.46g，70%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，26H），1.4‑1.45（m，6H），1.6（m，2H），1.64（m，4H），
1.66（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.66（t，2H），3.15（t，4H），4.11（t，2H）
13
4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.6，29.0，
29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，33.9，36.7，46.6，56.9，57.6，57.9，65.2，66.8，172.8，173.1，+ +
178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H] 696.5, found697.6。
嗪‑1‑基）乙氧基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十四酸己酯（1.46g，70%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，26H），1.4‑1.45（m，6H），1.6（m，2H），1.64（m，4H），
1.66（m，2H），2.14（s，3H），2.29（s，8H），2.32（t，2H），2.66（t，2H），3.15（t，4H），4.11（t，2H）
13
4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.6，29.0，
29.3，29.6，30.2，31.8，31.9，33.9，36.7，46.6，56.9，57.6，57.9，65.2，66.8，172.8，173.1，+ +
178.9，183.2。ESI‑MS calculated for C37H69S2N5O3 [M+H] 696.5, found697.6。
[0163] 实施例28：8‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯
[0164]
[0165] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入癸硫醇（1058μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入8‑巯基‑1‑辛醇（873μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得8‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,
5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛烷‑1‑醇反应液，加入己酸（752μL, 6mmol）EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得8‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯（1.9g，69%）
1
。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，24H），1.43（m，2H），1.6‑1.66（m，
13
8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.4，22.7，
25.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.1，31.2，31.9， 33.9，36.7，65.2，167.6，+ +
173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C27H48ClS2N3O2 [M+H] 547.3, found
548.5。
5‑三嗪‑2‑基）硫代）辛烷‑1‑醇反应液，加入己酸（752μL, 6mmol）EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得8‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯（1.9g，69%）
1
。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，24H），1.43（m，2H），1.6‑1.66（m，
13
8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.4，22.7，
25.8，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.1，31.2，31.9， 33.9，36.7，65.2，167.6，+ +
173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C27H48ClS2N3O2 [M+H] 547.3, found
548.5。
[0166] 实施例29：8‑（（4‑（癸硫基）‑6‑（（2‑吗啉乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯
[0167]
[0168] 在50mL的反应瓶中依次加入N‑(2‑氨基乙基)吗啉（453μL，3.45 mmol）、8‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯（1.9g，3.45mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物8‑（（4‑（癸硫基）‑6‑（（2‑吗啉乙基）氨
1
基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯（1.66g，75%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，
6H），1.25‑1.45（m，26H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），2.40（t，4H），2.50（t，2H），3.15（t，
13
4H），3.34（t，2H），3.52（t，4H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
14.1，22.4，22.7，25.8，28.5，28.9，29.3，29.6，30.2，31.1，31.2，31.9，33.9，36.7， 47.2，+ +
55.8，65.2，66.7，161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C33H61S2N5O3 [M+H]
640.4, found641.6。
1
基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代己酸辛酯（1.66g，75%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，
6H），1.25‑1.45（m，26H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），2.40（t，4H），2.50（t，2H），3.15（t，
13
4H），3.34（t，2H），3.52（t，4H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
14.1，22.4，22.7，25.8，28.5，28.9，29.3，29.6，30.2，31.1，31.2，31.9，33.9，36.7， 47.2，+ +
55.8，65.2，66.7，161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C33H61S2N5O3 [M+H]
640.4, found641.6。
[0169] 实施例30：6‑（（4‑氯‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯[0170]
[0171] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入十四硫醇（1362μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入6‑巯基‑1‑己醇（684μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得6‑（（4‑氯‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）己烷‑1‑醇反应液，加入月桂酸（1.2g, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg, 6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得6‑（（4‑氯‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二
1
酸己酯（2.5g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.43（m，
13
4H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，+ +
167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C35H64ClS2N3O2 [M+H] 658.4,
found 659.7。
1
酸己酯（2.5g，76%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.43（m，
13
4H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
14.1，22.7，25.0，25.1，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，+ +
167.6，173.1，182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C35H64ClS2N3O2 [M+H] 658.4,
found 659.7。
[0172] 实施例31：6‑（（4‑（（2‑（哌啶‑1‑基）乙基）氨基）‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯
[0173]
[0174] 在50mL的反应瓶中依次加入1‑(2‑氨乙基)哌啶（542μL，3.8 mmol）、6‑（（4‑氯‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯（2.5g，3.8mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物6‑（（4‑（（2‑（哌啶‑1‑基）乙基）1
氨基）‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯（1.71g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.37（m，2H），1.42（m，2H），1.43（m，
2H），1.49（m，4H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），2.42（t，4H），2.50（t，2H），3.15（t，4H），
13
3.34（t，2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，24.5，
25.0，25.1，25.9，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，47.2，55.8，+ +
56.8，65.2，161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C42H79S2N5O2 [M+H]
750.5, found751.7。
氨基）‑6‑（十四烷基硫代）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯（1.71g，60%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，38H），1.37（m，2H），1.42（m，2H），1.43（m，
2H），1.49（m，4H），1.6‑1.66（m，8H），2.32（t，2H），2.42（t，4H），2.50（t，2H），3.15（t，4H），
13
3.34（t，2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，24.5，
25.0，25.1，25.9，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，47.2，55.8，+ +
56.8，65.2，161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C42H79S2N5O2 [M+H]
750.5, found751.7。
[0175] 实施例32：6‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯
[0176]
[0177] 在50mL的反应瓶中依次加入三聚氯氰（920mg，5 mmol）和15mL的THF、‑20℃时加入癸硫醇（1058μL，5mmol）、DIPEA（1105μL, 6mmol），‑20℃搅拌反应30min后加入6‑巯基‑1‑己醇（684μL，5mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），室温搅拌过夜，得6‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,
5‑三嗪‑2‑基）硫代）己烷‑1‑醇反应液，加入月桂酸（1.2g, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得6‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯（2.2g，
1
73%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，30H），1.43（m，4H），1.6‑1.66
13
（m，8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，
25.0，25.1，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，+ +
182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.4, found 603.6。
5‑三嗪‑2‑基）硫代）己烷‑1‑醇反应液，加入月桂酸（1.2g, 6mmol）、EDC.HCl（1150mg,
6mmol）、DMAP（30mg, 0.25mmol）和DIPEA（1105μL, 6mmol），常温搅拌6h，使用柱层析纯化（hexane：EA=10:1）得6‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯（2.2g，
1
73%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，30H），1.43（m，4H），1.6‑1.66
13
（m，8H），2.32（t，2H），3.15（t，4H），4.13（t，2H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，22.7，
25.0，25.1，28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2，31.9，33.9，36.7，65.2，167.6，173.1，+ +
182.2，184.9。ESI‑MS calculated for C31H56ClS2N3O2 [M+H] 602.4, found 603.6。
[0178] 实施例33：6‑（（4‑（癸硫基）‑6‑（（2‑（4‑甲基哌啶‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯
[0179]
[0180] 在50mL的反应瓶中依次加入2‑(4‑甲基‑1‑哌啶基)乙胺（520mg，3.65mmol）、6‑（（4‑氯‑6‑（癸硫基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己酯（2.2g，3.65mmol）和10mL的THF，室温下搅拌3 h后使用柱层析纯化（DCM：MeOH=10:1）得到化合物6‑（（4‑（癸硫基）‑6‑（（2‑
1
（4‑甲基哌啶‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯（1.71g，66%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.86（t，3H），0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，30H），1.42（m，2H），1.43（m，2H），1.56（m，4H），1.6‑1.66（m，9H），2.32（t，2H），2.4‑2.5（m，6H），3.15（t，4H），3.34（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，20.4，22.7，25.0，25.1，
28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2， 31.9，32.0，33.9，36.7，47.2，47.5，55.8，65.2，+ +
161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C39H73S2N5O2 [M+H] 708.5,
found709.7。
1
（4‑甲基哌啶‑1‑基）乙基）氨基）‑1,3,5‑三嗪‑2‑基）硫代）十二酸己基酯（1.71g，66%）。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 0.86（t，3H），0.88 （t，6H），1.25‑1.35（m，30H），1.42（m，2H），1.43（m，2H），1.56（m，4H），1.6‑1.66（m，9H），2.32（t，2H），2.4‑2.5（m，6H），3.15（t，4H），3.34（t，
13
2H），4.13（t，2H），7.01（s，1H）。C NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 14.1，20.4，22.7，25.0，25.1，
28.2，28.5，28.9，29.0，29.3，29.6，30.2， 31.9，32.0，33.9，36.7，47.2，47.5，55.8，65.2，+ +
161.1，173.1，180.2，183.4。ESI‑MS calculated for C39H73S2N5O2 [M+H] 708.5,
found709.7。
[0181] 实施例34：氨基脂质化合物制备的脂质纳米颗粒在BMDC原代细胞上的转染
[0182] 制剂方法：同实施例23。
[0183] 动物准备：选取6周龄的雌性C57BL/6小鼠，体重在20 g左右，饲养环境为SPF级的饲养室，动物试验严格按照国家健康机构的指南以及动物伦理要求进行。
[0184] 细胞获取：把C57BL/6小鼠进行脱颈臼处死，并置于75%酒精中浸泡5分钟进行消毒，解剖获取小鼠大腿及小腿胫骨，并把附着的肌肉剔除露出骨质，然后用1ml吸有PBS的注
射器把胫骨中的骨髓吹出，把所得骨髓吹散后通过50um滤网滤去杂质，向所得过滤物中加
入红细胞裂解液（3 4 mL）后放置5分钟后进行800g、5分钟的离心除去上清液，将所得细胞
~
置于1640培养基（含10%胎牛血清、20ng/ml GMCSF、10ng/ml IL4）中重悬，并接种于6孔板
中，接种密度为100000个细胞/毫升培养基，放置于37℃、5%CO2细胞培养箱中，每2天进行半
换液一次，于第七天收集悬浮细胞和松散贴壁的细胞，并接种到96孔全白酶标板接种密度
为每孔20000个细胞，培养基体积为100uL。
射器把胫骨中的骨髓吹出，把所得骨髓吹散后通过50um滤网滤去杂质，向所得过滤物中加
入红细胞裂解液（3 4 mL）后放置5分钟后进行800g、5分钟的离心除去上清液，将所得细胞
~
置于1640培养基（含10%胎牛血清、20ng/ml GMCSF、10ng/ml IL4）中重悬，并接种于6孔板
中，接种密度为100000个细胞/毫升培养基，放置于37℃、5%CO2细胞培养箱中，每2天进行半
换液一次，于第七天收集悬浮细胞和松散贴壁的细胞，并接种到96孔全白酶标板接种密度
为每孔20000个细胞，培养基体积为100uL。
[0185] 细胞转染：向铺有原代细胞的96孔全白酶标板中加入包裹萤光素酶mRNA的脂质纳米颗粒，控制每孔中的mRNA脂质纳米颗粒加入体积为10μl, 加入RNA含量为0.1μg/孔。随后
放置在37℃、5%CO2浓度的培养箱中16小时。
放置在37℃、5%CO2浓度的培养箱中16小时。
[0186] 转染效率检测：往96孔全白酶标板中每孔加入20 uL底物ONE‑GloTMLuciferase， 1min后用多功能酶标仪（Biorek SynergyH1）进行检测。代表性氨基脂质化合物在BMDC上转
染LucmRNA的表达强度见表4。DLin‑MC3作为对照,所述的氨基脂质多个与MC3表达强度相
似，并有多个显著优于阳性对照。
染LucmRNA的表达强度见表4。DLin‑MC3作为对照,所述的氨基脂质多个与MC3表达强度相
似，并有多个显著优于阳性对照。
[0187] 表4 部分氨基脂质化合物在BMDC上的转染的表达强度
[0188]
[0189] 表4中，化合物1的结构式为 ；化合物2～11的结构通式为 ；化合物12～18的结构通式为 ；
化合物19～476的结构通式为 ；化合物477～563的结构通式为
，上述通式中，R2和R3为饱和链烷基，表4中，R1的值指前文定义
的取代基O1～O16，D1～D20中对应取代基，R2和R3的值为碳链的碳原子数。
化合物19～476的结构通式为 ；化合物477～563的结构通式为
，上述通式中，R2和R3为饱和链烷基，表4中，R1的值指前文定义
的取代基O1～O16，D1～D20中对应取代基，R2和R3的值为碳链的碳原子数。
[0190] 实施例35：氨基脂质化合物制备的脂质纳米颗粒的萤光素酶mRNA体内递送性能评价
[0191] 1. 脂质纳米颗粒的制备
[0192] 将本发明的氨基脂质化合物与中性脂质（如：DSPC、DOPE、胆固醇）、聚乙二醇化脂质（如：PEG2000‑DMG、PEG2000‑DSPE）按优化后的摩尔比混合并溶解在无水乙醇中。使用微流控制备系统使所得的乙醇溶液和溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH =
5.0）或柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 4.0或pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合以
制得脂质纳米颗粒的粗溶液，然后将其用1 X PBS稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。
5.0）或柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 4.0或pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合以
制得脂质纳米颗粒的粗溶液，然后将其用1 X PBS稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。
[0193] 脂质纳米颗粒的表征：
[0194] 粒径的表征：所制备的脂质纳米颗粒的粒径和PDI通过Nano‑ZSZEN3600 (Malvern)测定。取LNP溶液60uL（RNA浓度为100μg/ml）进行粒径测量，循环三次，每次循环
30s。
30s。
[0195] 包封率测定：参照Quant‑iT RiboGreen RNA试剂盒标准规程进行测定。
[0196] 表5：使用代表性氨基脂质化合物制备的LNP的表征数据
[0197]
[0198] 注：上表中：
[0199] LNP‑1～LNP‑5氨基脂质的通式为 ；LNP‑6～LNP‑68氨基脂质的通式为 ；LNP‑69～LNP‑88氨基脂质的通式为
；上述通式中，R2和R3为饱和链烷基，表5中，R1的值指前文定
义的取代基O1～O16，D1～D20中对应取代基，R2和R3的值为碳链的碳原子数；
；上述通式中，R2和R3为饱和链烷基，表5中，R1的值指前文定
义的取代基O1～O16，D1～D20中对应取代基，R2和R3的值为碳链的碳原子数；
[0200] LNP‑1～LNP‑9，LNP‑89的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG= 50:10:38.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0201] LNP‑10～LNP‑18的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG= 50:10:38.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 4.0）；
[0202] LNP‑19～LNP‑27的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG= 50:10:38.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0203] LNP‑28～LNP‑36的脂质配方为：氨基脂质:DOPE:胆固醇:PEG2000‑DMG= 45:10:43:2；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0204] LNP‑37～LNP‑45的脂质配方为：氨基脂质:DOPC: 胆固醇:PEG2000‑DMG= 45:5:48.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0205] LNP‑46和LNP‑54的脂质配方为：氨基脂质:DSPC: 胆固醇:PEG2000‑DMG= 42:9:47.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0206] LNP‑55和LNP‑63的脂质配方为：氨基脂质:DSPC: 胆固醇:PEG2000‑DMG= 42:9:47.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 4.0）；
[0207] LNP‑64～LNP‑72的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG=42:9:47.5:1.5；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0208] LNP‑73～LNP‑81的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG=36:9:52:1；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0209] LNP‑82～LNP‑88的脂质配方为：氨基脂质:DSPC:胆固醇:PEG2000‑DMG=46:6:46.2:1.8；所用水相为溶解有Luc‑mRNA (TriLink)的醋酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）；
[0210] 2. 动物实验
[0211] 动物准备：选取体重约20 g的6周龄的雌性C57BL/6小鼠，于SPF级的饲养室中饲养。动物试验严格按照国家健康机构的指南以及动物伦理要求进行。
[0212] 体内递送：按照上表每组随机选取9只C57BL/6小鼠，按0.5 mg/kg mRNA的用量，分别使用皮下、肌肉和尾静脉注射三种给药方式注射脂质纳米颗粒溶液（每种给药方式3只小
鼠）。12小时后，往每只小鼠体内通过尾静脉注射200 μL 10 mg/mL的D‑萤光素钾盐，10分钟后，将小鼠放置于活体成像系统(IVIS‑200, Xenogen)下，观察每只小鼠总的萤光强度，并
拍照记录下来。代表性氨基脂质化合物通过3种给药方式递送的Fluc mRNA的表达强度见表
6‑8。DLin‑MC3作为对照。
鼠）。12小时后，往每只小鼠体内通过尾静脉注射200 μL 10 mg/mL的D‑萤光素钾盐，10分钟后，将小鼠放置于活体成像系统(IVIS‑200, Xenogen)下，观察每只小鼠总的萤光强度，并
拍照记录下来。代表性氨基脂质化合物通过3种给药方式递送的Fluc mRNA的表达强度见表
6‑8。DLin‑MC3作为对照。
[0213] 表6：代表性氨基脂质化合物LNP皮下给药递送的Luc mRNA的表达强度
[0214]
[0215] 表7：代表性氨基脂质化合物LNP肌注给药递送的Luc mRNA的表达强度
[0216]
[0217] 表8：代表性氨基脂质化合物LNP尾静脉给药递送的Luc mRNA的表达强度
[0218]
[0219] 实施例36：氨基脂质化合物制备的脂质纳米颗粒的体内免疫和肿瘤治疗效果评价
[0220] 制剂方法：将本发明中所述的氨基脂质化合物与DSPC，胆固醇，PEG2000‑DMG的摩尔比为50：10：38.5：1.5的比例混合溶解在无水乙醇中。卵清蛋白mRNA(OVA mRNA)溶解在柠
檬酸钠溶液（25 mM, pH = 5.0）中。使用微流控制备系统使所得的乙醇溶液和溶解有Luc‑
mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合制
得脂质纳米颗粒，然后将其用1 X PBS 稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。
檬酸钠溶液（25 mM, pH = 5.0）中。使用微流控制备系统使所得的乙醇溶液和溶解有Luc‑
mRNA (TriLink)的柠檬酸钠溶液（25mM, pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合制
得脂质纳米颗粒，然后将其用1 X PBS 稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。
[0221] 动物准备：选取5‑6周龄的雌性C57BL/6小鼠，体重在18‑20 g左右，饲养环境为SPF级的饲养室，动物试验严格按照国家健康机构的指南以及动物伦理要求进行。
[0222] 体内递送：将 B16‑OVA 黑色素瘤细胞 (1.5 × 105 ) 皮下注射到小鼠大腿外3
侧。当肿瘤大小等于 50 mm时（约在肿瘤接种后第 6 天或第 7 天）开始接种疫苗。通过肌
肉注射含有1 µg OVA‑mRNA 的LNP 制剂对动物进行两次免疫，第二针间隔7天。使用数显卡
3
尺每周测量肿瘤生长 3 次，计算公式为 0.5 × 长度 × 宽度。当肿瘤体积达到1500 mm
时对小鼠实施安乐死。LNP‑23和LNP‑61的肿瘤生长速度显著慢于MC3组（如图4所示），且分
别有40%（LNP‑23组）和70%（LNP‑61组）的小鼠达到了完全缓解，显著好于MC3组（如图5所
示）。
侧。当肿瘤大小等于 50 mm时（约在肿瘤接种后第 6 天或第 7 天）开始接种疫苗。通过肌
肉注射含有1 µg OVA‑mRNA 的LNP 制剂对动物进行两次免疫，第二针间隔7天。使用数显卡
3
尺每周测量肿瘤生长 3 次，计算公式为 0.5 × 长度 × 宽度。当肿瘤体积达到1500 mm
时对小鼠实施安乐死。LNP‑23和LNP‑61的肿瘤生长速度显著慢于MC3组（如图4所示），且分
别有40%（LNP‑23组）和70%（LNP‑61组）的小鼠达到了完全缓解，显著好于MC3组（如图5所
示）。
[0223] 实施例37：氨基脂质化合物制备的脂质纳米颗粒的细胞毒性评价
[0224] 细胞处理：将Hela细胞以每孔5000个种在96孔板中，重复六个复孔，并设置不加细胞的背景组和加PBS的空白对照组。24小时培养后使细胞完全贴壁。
[0225] 制剂方法：将本发明中所述的氨基脂质化合物与DSPC，胆固醇，PEG2000‑DMG的摩尔比为50：10：38.5：1.5的比例混合溶解在无水乙醇中。使用微流控制备系统使所得的乙醇
溶液和柠檬酸钠溶液（25 mM, pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合制得不含任
何RNA的脂质纳米颗粒，然后将其用1 X PBS 稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。超滤后用1 X PBS稀释成不同浓度加入到细胞中。随
后放置在37℃、5%CO2浓度的培养箱中培养16小时。
溶液和柠檬酸钠溶液（25 mM, pH = 5.0）以1:3的体积比在微流控芯片中混合制得不含任
何RNA的脂质纳米颗粒，然后将其用1 X PBS 稀释8倍以上，用15ml或50ml超滤离心管
（Millipore，100K）在控温4 ℃下1.5rcf转速超滤15min三次。氨基脂质化合物与萤光素酶
mRNA (Luc mRNA)的质量比约为5 : 1。超滤后用1 X PBS稀释成不同浓度加入到细胞中。随
后放置在37℃、5%CO2浓度的培养箱中培养16小时。
[0226] 毒性检测：在96孔板中每孔加入10 uL CCK‑8试剂，37℃、5%CO2浓度的培养箱中孵育30min‑1h后用多功能酶标仪（Biorek SynergyH1）检测450nm的吸光度，通过以下公式计
算细胞毒性:
算细胞毒性:
[0227] 细胞活力（%）=[A(加药)‑A(空白)]/[A(0加药)‑A(空白)] ×100
[0228] A（加药）：具有细胞、CCK‑8溶液和药物溶液的孔的OD值
[0229] A（0加药）：具有细胞、CCK‑8溶液而没有药物溶液的孔的OD值
[0230] A（空白）：没有细胞的孔的OD值
[0231] 部分结果如图6所示，同等条件下，与抗癌药顺铂比较，氨基脂质对于细胞的毒性趋近于0。
[0232] 以上所述仅为本发明专利的较佳实施例而已，并不用以限制本发明专利，凡在本发明专利的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明专利
的保护范围之内。
的保护范围之内。