一种2-正丁基-4-氯-5-甲酰基有关物质的检验方法

摘要

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检验方法，为解决2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的有关物质，从而有效保障用药安全，便于2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的质量控制。

权利要求

1.一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检验方法，其特征在于，所述检验方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液；

（2）测定方法：采用液相色谱法测定2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质，待系统稳定后，分别进空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液，记录色谱图；色谱条件如下:色谱柱：Waters Xbridge Shield RP18 4.6×150mm3.5μm，进样量：15µl，柱温：25℃，流速：0.8ml/min，流动相以乙腈：水体系为流动相，采用梯度洗脱；

流动相梯度过程如下：

所述有关物质为N‑（1‑亚氨基戊基）‑甘氨酸和2‑丁基‑5‑氯‑1H‑咪唑。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述空白溶液为5%乙腈；所述系统适用性溶液：取适量2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基标准品，置于容量瓶中，先加适量的乙腈溶解，再移取适量的N‑（1‑亚氨基戊基）‑甘氨酸和2‑丁基‑5‑氯‑1H‑咪唑杂质溶液于该量瓶中，用纯化水稀释到刻度；所述测试溶液：取适量2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基样品，置于容量瓶中，先加适量的乙腈溶解，再用纯化水稀释到刻度，摇匀。

说明书

一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检验方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检验方法。

背景技术

[0002] 咪唑醛，中文名称：2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基，是沙坦类关键中间体，沙坦类药物即血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(angiotensinⅡreceptor blocker，ARB)类抗高血压药物，是继血管紧张素转化酶抑制剂之后的一类新型降压药。通过与血管紧张素Ⅱ受体中的AT1受体进行特异性结合，使血管紧张素Ⅱ不能和AT1受体结合，从而阻断动脉血管收缩，抑制交感神经兴奋，促进血压降低。该类药物问世20年来，因其降压作用明显，作用时间长，生物利用度高，耐受性好，不良反应发生率低，对靶器官的保护作用等优点，成为临床上普遍应用的抗高血压药物之一。

[0003] 为保证供应链安全，提高竞争力，很多大公司开始自给自足，自主研发沙坦类原料药，这就对其沙坦类原料药的中间体咪唑醛的质量提出了更高的要求，对此，根据其通用的咪唑醛合成工艺路线，需要对易产生的工艺杂质N‑（1‑亚氨基戊基）‑甘氨酸（MZQ‑3）和副产物杂质2‑丁基‑5‑氯‑1H‑咪唑（MZQ‑IM‑3）进行有效控制，从而有效保证咪唑醛的质量控制。

[0004] 目前公开的文献多为咪唑醛的检测方法，还没有任何文献公开咪唑醛中有关物质N‑（1‑亚氨基戊基）‑甘氨酸（MZQ‑3）和2‑丁基‑5‑氯‑1H‑咪唑（MZQ‑IM‑3）的检测方法，本发明首次公开了2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检测方法，为解决2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的含量，从而有效保障用药安全，便于2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的质量控制。

发明内容

[0005] 本发明提供一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检测方法，为解决2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质，从而有效保障用药安全，便于2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基的质量控制。

[0006] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0007] 一种2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质的检验方法，所述检测方法包括以下步骤：

[0008] （1）配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液。

[0009] （2）测定方法：采用液相色谱法测定2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基有关物质，待系统稳定后，分别进空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液，记录色谱图；

[0010] 色谱条件如下:色谱柱：Waters Xbridge Shield RP18 4.6×150mm3.5μm或效能相当的色谱柱，进样量：15µl，柱温：25℃，流速：0.8ml/min，流动相以乙腈：水体系为流动相，采用梯度洗脱。

[0011] 进一步的，所述空白溶液为5%乙腈，所述系统适用性溶液：取适量2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基标准品，置于容量瓶中，先加适量的乙腈溶解，再移取适量的N‑（1‑亚氨基戊基）‑甘氨酸和2‑丁基‑5‑氯‑1H‑咪唑杂质溶液于该量瓶中，用纯化水稀释到刻度，所述测试溶液：取适量2‑正丁基‑4‑氯‑5‑甲酰基样品，置于容量瓶中，先加适量的乙腈溶解，再用纯化水稀释到刻度，摇匀。

[0012] 进一步的，所述流动相梯度过程如下：

[0013]

[0014] 为了确保此方法的准确性，对此方法进行方法学验证：系统适用性、专属性（分离度和加样回收）、检测限和定量限、线性和范围、精密度和溶液稳定性，其方法学验证结果如下：

[0015]

[0016] 本次发明为解决沙坦类中间体咪唑醛的有关物质和纯度的检测问题，提供了一种便捷、高效、经济和准确的检测方法，该方法能有效检测咪唑醛的有关物质，从而有效保证咪唑醛的质量控制，本专利发明人通过大量实验筛选出流动相为纯化水和乙腈，便于操作、高效且经济，同时筛选出用可耐用100%纯水相的色谱柱（Waters Xbridge shield RP18 150*4.6mm 3.5μm），方可有效分离杂质和满足其检测限度要求，若选用其它填料如普通C18和HILIC色谱柱，则主峰或者杂质基本无保留，均不能有效控制其有关物质的检测。

附图说明

[0017] 图1为本发明空白溶液图谱

[0018] 图2为本发明系统适用性溶液图谱

[0019] 图3为本发明测试溶液图谱

[0020] 图4为本发明对比例1液相色谱图

[0021] 图5为本发明对比例2液相色谱图

[0022] 图6为本发明对比例3液相色谱图

[0023] 图7为本发明对比例4液相色谱图

[0024] 图8为本发明对比例5液相色谱图

具体实施方式

[0025] 以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

[0026] 实施例1：

[0027] （1）配制溶液：

[0028] 稀释液：5%乙腈

[0029] 空白溶液：稀释液

[0030] MZQ‑IM‑3储备液：称取MZQ‑IM‑3对照品约30mg，精密称定，置200mL量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：0.15mg/ml）

[0031] MZQ‑3储备液：称取MZQ‑3对照品约30mg，精密称定，置200mL量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑3浓度：0.15mg/ml）

[0032] 杂质储备液：分别量取MZQ‑IM‑3储备液，MZQ‑3储备液各5.0ml，置50ml量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：15μg/ml；MZQ‑3浓度：15μg/ml）[0033] 系统适用性溶液：称取MZQ对照品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5.0ml使溶解后，精密量取杂质储备液10.0ml置该量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ浓度：0.3mg/ml）；

[0034] MZQ定位溶液：称取MZQ对照品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.3mg/ml）

[0035] MZQ‑IM‑3定位溶液：精密量取MZQ‑IM‑3储备液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.5µg/ml）

[0036] MZQ‑3定位溶液：精密量取MZQ‑3储备液1.0ml置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：1.5µg/ml）

[0037] 杂质对照溶液：精密量取MZQ‑3储备液、MZQ‑IM‑3储备液各1.0ml置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ‑3浓度：1.5μg/ml）[0038] MZQ测试溶液：称取MZQ供试品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.3mg/ml）

[0039] 分离度溶液：称取MZQ供试品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，精密量取杂质储备液10.0ml置该量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ浓度：0.3mg/ml）；

[0040] LOQ测试溶液：精密量取MZQ储备液5.0ml，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；再精密量取该溶液1.0ml和杂质储备液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（MZQ‑IM‑3浓度：0.15μg/ml；MZQ‑3浓度：0.15μg/ml；MZQ浓度：0.15μg/ml）[0041] LOQ溶液：根据LOQ测试溶液所得的S/N值，调节稀释比例至各组分的S/N值≥10。从储备液到LOQ溶液，平行配置6份。

[0042] LOD溶液：精密量取LOQ溶液3.0ml，置10ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；

[0043] 线性混合储备液：分别量取MZQ‑IM‑3储备液10ml，MZQ‑3储备液10ml，MZQ储备液5ml置100mL量瓶中，用稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：15μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：
15μg/ml；MZQ‑3浓度：15μg/ml）；

[0044] 线性50%溶液：精密量取线性混合储备液1.0ml于20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.75μg/ml；MZQ‑3浓度：0.75μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：0.75μg/ml）[0045] 线性80%溶液：精密量取线性混合储备液2.0ml于25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：1.2μg/ml；MZQ‑3浓度：1.2μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：1.2μg/ml）[0046] 线性100%溶液：精密量取线性混合储备液2.0ml于20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：1.5μg/ml；MZQ‑3浓度：1.5μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：1.5μg/ml）[0047] 线性120%溶液：精密量取线性混合储备液3.0ml于25ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：1.8μg/ml；MZQ‑3浓度：1.8μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：1.8μg/ml）[0048] 线性150%溶液：精密量取线性混合储备液3.0ml于20ml量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：2.25μg/ml；MZQ‑3浓度：2.25μg/ml；MZQ‑IM‑3浓度：2.25μg/ml）；

[0049] MZQ线性80%溶液：称取MZQ对照品约24mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.24mg/ml）

[0050] MZQ线性90%溶液：称取MZQ对照品约27mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.27mg/ml）

[0051] MZQ线性100%溶液：称取MZQ对照品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.3mg/ml）

[0052] MZQ线性110%溶液：称取MZQ对照品约33mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.33mg/ml）

[0053] MZQ线性120%溶液：称取MZQ对照品约36mg，精密称定，置100mL量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.36mg/ml）

[0054] 重复性溶液：称取MZQ供试品约30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙腈5ml使溶解后，用纯化水稀释至刻度，摇匀。（MZQ浓度：0.3mg/ml）

[0055] 同法配制6份重复性溶液。

[0056] 色谱条件：

[0057] 色谱柱：Waters Xbridge Shield RP18 4.6×150mm3.5μm或效能相当的色谱柱[0058] 流动相A：纯化水

[0059] 流动相B：乙腈

[0060] 梯度洗脱程序：

[0061]

[0062]  检测波长：210nm 柱温：25℃

[0063] 进样体积：15μl 流速：0.8mL/min

[0064] （1）测定方法：

[0065] 待系统稳定后，进空白溶液至少2针，供试品溶液1针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0066] 计算：按面积归一化法计算。其中RRT≈1.37色谱峰为甲苯峰，不参与结果计算。

[0067] 结果判断：

[0068]   。

[0069] 实施例2：系统适用性

[0070] 系统适用性是通过测定6针系统适用性溶液中MZQ、MZQ‑3、MZQ‑IM‑3峰面积的RSD，各已知组分与相邻峰之间的分离度实现的，要求6针对照品溶液峰面积的RSD≤2.0%；MZQ‑3，MZQ‑IM‑3峰面积的RSD≤5.0%；各已知组分与相邻峰之间的分离度应不小于1.5,待系统稳定后，进空白溶液至少2针，系统适用性溶液6针，记录色谱图。

[0071]

[0072] 实施例3：专属性

[0073] 方法的专属性是通过测试空白溶液对检测有无干扰，分离度溶液中各组分与相邻峰之间的分离度，分离度溶液中MZQ的峰纯度，已知杂质回收率而实现,专属性要求空白溶液对检测无干扰，分离度溶液中各已知组分与相邻峰之间的分离度应不小于1.5；分离度溶液中MZQ峰纯度应不小于990，待系统稳定后，建立系统适用性，进空白溶液至少2针，定位溶液各1针，MZQ测试溶液1针，杂质对照溶液3针，分离度溶液3针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0074]

[0075]

[0076] 实施例4：检测限和定量限

[0077] 检测限是通过检测各组分响应信号与噪声之比≥3而得到，定量限是通过检测各组分响应信号与噪声之比≥10而得到的，待系统稳定后，建立系统适用性，进空白溶液至少2针，LOQ测试溶液1针，6份LOQ溶液各1针，LOD溶液1针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0078]

[0079]

[0080]

[0081]

[0082]

[0083]

[0084] 实施例5：线性

[0085] 杂质线性：在LOQ～150%指标浓度范围内6个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标画曲线，要求曲线的线性相关系数R2和截距偏差符合可接受标准，其中未知杂质用MZQ2
代替，要求各杂质在LOQ 150%指标浓度范围内呈线性，要求曲线的线性相关系数R≥0.99，~
Y轴截距绝对值相对100%浓度时响应值不得过25.0%，待系统稳定后，建立系统适用性，进空白溶液至少2针，各浓度线性测试溶液各3针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0086]

[0087]

[0088] 主成分线性：在80%‑120%指标浓度范围内5个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为2
纵坐标画曲线，要求主成份在80‑120%样品浓度范围内呈线性，要求曲线的线性相关系数R≥0.999，待系统稳定后，建立系统适用性，进空白溶液至少2针，各浓度线性测试溶液各3针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0089]

[0090] 实施例6：精密度

[0091] 重复性：重复性是通过测试6份重复性溶液MZQ纯度的RSD，杂质含量的RSD而实现，待系统稳定后，建立系统适用性，进空白溶液至少2针，6份重复性溶液各1针，序列最后进1针系统适用性溶液，记录色谱图。

[0092]

[0093] 重现性：重现性是考察不同实验室、不同时间、不同设备、不同检测人员对检测结果的影响。

[0094]

[0095]

[0096] 实施例7：溶液稳定性

[0097] 考察测试溶液在室温条件下放置0天、1天、2天、3天后进样，检测结果随时间变化的规律，为检测时测试溶液的放置时间提供依据。

[0098]

[0099] 对比例1：使用以下色谱条件测定咪唑醛中有关物质，从图4上看，杂质MZQ‑3和杂质MZQ‑IM‑3基本无保留，且MZQ‑IM‑3杂质峰不成峰型。

[0100]

[0101] 从对比例1中杂质无保留的情况来看，考虑从以下4个方面进行方法优化：1）用具有亲水作用的色谱柱HILIC来增强杂质的保留；2）用可耐100%水相的色谱柱来增强杂质的保留；3）用离子对试剂（辛烷磺酸钠）来增强杂质的保留；4）用离子对试剂（三乙胺）来增强杂质的保留。

[0102] 对比例2：用具有亲水作用的色谱柱HILIC来增强杂质的保留，使用以下色谱条件测定咪唑醛中有关物质，从图5上看，杂质MZQ‑3和杂质MZQ‑IM‑3的保留时间增强，但主峰的保留时间较弱。

[0103]

[0104] 对比例3：用可耐100%水相的色谱柱来增强杂质的保留，从图6上看，使用以下色谱条件测定咪唑醛中有关物质，杂质MZQ‑3的保留时间增强，但杂质峰分叉，出现了溶剂效应；流动相为纯化水和乙腈，便于操作、高效且经济。

[0105]

[0106] 对比例4：用离子对试剂（辛烷磺酸钠）来增强杂质的保留，使用以下色谱条件测定咪唑醛中有关物质，从图7上看，杂质MZQ‑3和杂质MZQ‑IM‑3的保留时间增强，但在梯度条件下空白会有较大的梯度峰，且离子对试剂辛烷磺酸钠经济成本较高。

[0107]

[0108] 对比例5：用离子对试剂（三乙胺）来增强杂质的保留，使用以下色谱条件测定咪唑醛中有关物质，从图8上看，杂质MZQ‑3基本无保留。

[0109]

[0110] 通过对比例1‑对比例5的对比，从杂质保留时间、经济和便捷高效的综合考虑下，对对比例3（用可耐100%水相的色谱柱来增强杂质的保留）进行进一步优化，确定最终的分析方法为本发明的检测方法。