本发明涉及一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，所述的烘烤方法使用的菌种为枯草芽孢杆菌和木霉菌。所述的烘烤方法包括将用枯草芽孢杆菌和木霉菌菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面。本发明首次将菌种用于不同成熟度烟叶烘烤过程中以降低不同成熟度烤烟中TSNAs含量，不同成熟度烤烟中总TSNAs含量下降13.71％～29.18％，其中NNK、NNN、NAT分别下降10.96％～27.72％、11.16～34.88％、12.50～26.67％。
1.一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括如下步骤：
A.采收、接种与编竿规范：烤烟打顶后采收不同成熟度：欠熟、适熟和过熟的烤烟鲜烟叶；使用的菌种为枯草芽孢杆菌和木霉菌；菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面，所述的均匀喷洒用量为烟叶重量的3～5％；接种菌种的同时按照成熟度进行分类后编竿；
B.装炉规范：将接种编杆后的鲜烟叶按照成熟度装入密集烤房；
C.烘烤控制：分为变黄期控制、定色期控制和干筋期控制，烘烤完成即可得到低TSNAs的烟叶；
所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1或2：1或1：2的重量比混合配制；
所述的烘烤方法中的不同成熟度烤烟设置为，适熟的鲜烟叶标准为主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的烤烟烟叶；
根据适熟的鲜烟叶来判断不同成熟度的烤烟采收时间，把适熟的鲜烟叶采收时间的前15天作为欠熟的鲜烟叶采收时间；把适熟的鲜烟叶采收时间的后15天作为过熟的鲜烟叶采收时间；
C12.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，4‑5小时将干球温度由室温升到35℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h；接着进入变黄中期，以1℃/2h的升温速率，6小时将干球温度升至38℃，湿球温度调整至34℃，稳定干、湿球温度烘烤28～32h至使用4台烤房中第三台烟叶变黄7～8成或使用3台烤房中间台烟叶变黄8成；随后进入变黄后期，以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球调整升至35℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至使用4台烤房中第二台烟叶勾尖卷边或使用3台烤房中间台烟叶出现勾尖卷边；然后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至44℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～22h至使用4台烤房第三台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶出现稍显小卷筒；接着以2℃/3小时的升温速率，将干球温度升至46℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至使用4台烤房中第二台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶小卷筒；
C22.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至烟叶主脉干三分之一以上；
C32.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1℃/h的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
2.根据权利要求1所述的一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括均匀喷洒的同时编竿后直接转炉烘烤。
3.一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括如下步骤：
A.采收、接种与编竿规范：烤烟打顶后采收不同成熟度：欠熟、适熟和过熟的烤烟鲜烟叶；使用的菌种为枯草芽孢杆菌和木霉菌；菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面，所述的均匀喷洒用量为烟叶重量的3～5％；接种菌种的同时按照成熟度进行分类后编竿；
B.装炉规范：将接种编杆后的鲜烟叶按照成熟度装入密集烤房；
C.烘烤控制：分为变黄期控制、定色期控制和干筋期控制，烘烤完成即可得到低TSNAs的烟叶；
所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1或2：1或1：2的重量比混合配制；
所述的烘烤方法中的不同成熟度烤烟设置为，适熟的鲜烟叶标准为主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的烤烟烟叶；
根据适熟的鲜烟叶来判断不同成熟度的烤烟采收时间，把适熟的鲜烟叶采收时间的前15天作为欠熟的鲜烟叶采收时间；把适熟的鲜烟叶采收时间的后15天作为过熟的鲜烟叶采收时间；
C11.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期和变黄后期，变黄前期是开烤点火后，5‑6小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤6～8h；接着进入变黄中期，以2℃/3小时的升温速率，6小时将干球升至38℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤30～35h至使用4台烤房中第三台烟叶变黄7～8成或使用3台烤房中间台烟叶变黄9成；随后进入变黄后期，以1℃/2.5小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～12h至使用4台烤房中第二台烟叶勾尖卷边或使用3台烤房中间台烟叶出现勾尖卷边；然后以1.5℃/3小时的升温速率，将干球温度升至
43℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤22～25h至使用4台烤房中第二台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶出现稍显小卷筒；接着以1℃/2～3小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤15～20h至使用4台烤房中第二台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶出现稍显小卷筒；
C21.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期和定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至47℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～23h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至55℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以0.5℃/1小时的升温速率，将干球温度升至65℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h至烟叶主脉干三分之一以上；
C31.干筋期控制：干筋期是在定色期结束后以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤至全炉主脉全部烤干。
4.根据权利要求3所述的一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括均匀喷洒的同时编竿后直接转炉烘烤。
5.一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括如下步骤：
A.采收、接种与编竿规范：烤烟打顶后采收不同成熟度：欠熟、适熟和过熟的烤烟鲜烟叶；使用的菌种为枯草芽孢杆菌和木霉菌；菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面，所述的均匀喷洒用量为烟叶重量的3～5％；接种菌种的同时按照成熟度进行分类后编竿；
B.装炉规范：将接种编杆后的鲜烟叶按照成熟度装入密集烤房；
C.烘烤控制：分为变黄期控制、定色期控制和干筋期控制，烘烤完成即可得到低TSNAs的烟叶；
所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1或2：1或1：2的重量比混合配制；
所述的烘烤方法中的不同成熟度烤烟设置为，适熟的鲜烟叶标准为主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的烤烟烟叶；
根据适熟的鲜烟叶来判断不同成熟度的烤烟采收时间，把适熟的鲜烟叶采收时间的前15天作为欠熟的鲜烟叶采收时间；把适熟的鲜烟叶采收时间的后15天作为过熟的鲜烟叶采收时间；
C13.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，6‑7小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度32℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h；接着进入变黄中期，以3℃/4h的升温速率，4小时将干球温度升至37℃，湿球温度调整至33℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至使用4台烤房中第三台烟叶变黄7～8成或使用3台烤房中间台烟叶变黄8成；随后进入变黄后期，以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至40℃，湿球调整升至34℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至使用4台烤房中第二台烟叶勾尖卷边或使用3台烤房中间台烟叶出现勾尖卷边；然后以1℃/2小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至使用4台烤房中第三台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶出现稍显小卷筒；接着以1℃/1.5小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至使用4台烤房中第二台烟叶小卷筒或使用3台烤房中间台烟叶小卷筒；
C23.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至37℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至烟叶主脉干三分之一以上；
C33.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至
67℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
6.根据权利要求5所述的一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，其特征在于，所述的烘烤方法包括均匀喷洒的同时编竿后直接转炉烘烤。
一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法
技术领域
[0001] 本发明属于烟草烘烤技术领域，涉及一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法。可为生物降解不同成熟度烤烟尼古丁和烟草特有亚硝胺的烘烤方法和新生物技术应用开辟道路。
背景技术
[0002] 尼古丁(Nicotine)具有高毒性，可透过生物膜，化学结构稳定不易降解的特性，并且是致癌物质烟草特有亚硝胺(TSNAs)的重要前体物。当尼古丁到达大脑时，会导致肾上腺素释放，因此会尼古丁上瘾。前人的研究表明，在植烟土壤中、烟草叶片中、烟草废弃物中都分离出来了能够降解尼古丁的菌株，如假单胞菌(Pseudomonas sp.Nic22)，曲霉属真菌(Aspergillus oryzae 112822)，节杆菌属(Arthrobacter sp.M2012083)。但是，这些菌株所处不同环境降解尼古丁时，所降解的尼古丁量也有所不同。因此，运用微生物降解尼古丁的条件还有待摸索。
[0003] 此外，烟草特有亚硝胺(TSNA)是影响人体健康的主要有害物质之一。大量研究表明，TSNA在鲜叶含量极低，甚至检测不到。为此多数假设认为，TSNA是在烟叶调制和储藏过程中，烟草中的硝酸盐被微生物还原为亚硝酸盐以及氮氧化物(NOX)，然后与烟草生物碱作用形成的。近40年来，如何降低烟草中的TSNA含量一直是烟草科研工作者的攻关项目，已成为全球各大烟草公司的重点研究课题，如何去降低及调节烟草中TSNAs含量对烟草生产和发展非常重要。当前还没有有效的自然降解方法。利用微生物对TSNAs进行生物降解，由于其高效和处理方法简单已引起越来越多的关注。
[0004] 近来，通过微生物处理降解烟碱的研究很多。例如，凸状假单胞菌(Pseudomonas putida)PC1，氧化节杆菌，烟碱节杆菌和无色杆菌都显示出能够降解尼古丁的能力。具推测烟草内生细菌群落已经适应使用尼古丁作为生长底物，利用生物化学反应来分解这种有机杂环化合物尼古丁。然而，利用菌种在烘烤过程中降低烟叶中TSNAs较为少见，针对不同成熟度烤烟降低TSNAs含量的方法鲜有报道。本发明提供一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，可为生物降解不同成熟度烤烟尼古丁和烟草特有亚硝胺的烘烤方法和新生物技术应用开辟道路，同时也为烟草实现降焦减害做出了巨大的贡献。
发明内容
[0005] 针对现有技术的不足，基于烟叶成熟度，提供一种能有效降低烤烟TSNAs含量以提高烟叶品质的利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法。
[0006] 一种利用菌种降低不同成熟度烤烟TSNAs的烘烤方法，本发明所述的烘烤方法使用的菌种为枯草芽孢杆菌和木霉菌。所述的枯草芽孢杆菌和木霉菌均为商业购买所得。
[0007] 本发明所述的烘烤方法中的不同成熟度烤烟设置为，欠熟、适熟和过熟烤烟的烟株上、中、下3个部位烟叶对应的鲜烟叶SPAD值分别为30～40、20～30和10～20。
[0008] 本发明所述的烘烤方法中的不同成熟度烤烟设置为，适熟的鲜烟叶标准为主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的烤烟烟叶；根据适熟烟叶来判断不同成熟度的烤烟采收时间，把适熟采收烤烟采收时间的前15天作为欠熟的烟叶采收时间。把适熟采收烤烟采收时间的后15天作为过熟烟叶采收时间。
[0009] 本发明所述的烘烤方法包括将用枯草芽孢杆菌和木霉菌菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面。
[0010] 本发明所述的均匀喷洒用量为烟叶重量的3～5％。
[0011] 本发明所述的烘烤方法包括均匀喷洒的同时编竿后直接转炉烘烤。
[0012] 本发明所述烘烤方法适于的烤烟品种包括云87、NC102、KRK26。
[0013] 本发明所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1的重量比混合配制。
[0014] 本发明所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按2：1的重量比混合配制。
[0015] 本发明所述菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：2的重量比混合配制。
[0016] 本发明实现技术方案包括不同成熟度鲜烟叶采收、接种与编竿规范、装炉规范、烘烤控制、TSNAs降解效率检测，具体的技术方案如下：
[0017] A.采收、接种与编竿规范：烤烟打顶后采收不同成熟度(欠熟、适熟和过熟)的烤烟鲜烟叶；用枯草芽孢杆菌和木霉菌菌种分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面，接种菌种的同时按照成熟度进行分类后编竿；
[0018] B.装炉规范：将接种编杆后的鲜烟叶按照成熟度装入密集烤房，上密下稀，逐步减少2～3竿烟，形成错位交叉；
[0019] C.烘烤控制：分为变黄期控制、定色期控制和干筋期控制，烘烤完成即可得到低TSNAs的烟叶。
[0020] 针对NC102品种的烘烤工艺：
[0021] C11.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期和变黄后期，变黄前期是开烤点火后，5‑6小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤6～8h；接着进入变黄中期，以2℃/3小时的升温速率，6小时将干球升至38℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤30～35h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄9成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2.5小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～12h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1.5℃/3小时的升温速率，将干球温度升至43℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤22～25h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/2～3小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤15～20h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)；
[0022] C21.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期和定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至47℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～23h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至55℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以0.5℃/1小时的升温速率，将干球温度升至65℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0023] C31.干筋期控制：干筋期是在定色期结束后以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤至全炉主脉全部烤干。
[0024] 针对云87的烘烤工艺：
[0025] C12.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，4‑5小时将干球温度由室温升到35℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h；接着进入变黄中期，以1℃/2h的升温速率，6小时将干球温度升至38℃，湿球温度调整至34℃，稳定干、湿球温度烘烤28～32h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球调整升至35℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至44℃，湿球温度调整至
36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～22h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以2℃/3小时的升温速率，将干球温度升至46℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；
[0026] C22.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0027] C32.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1℃/h的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0028] 针对KRK26的烘烤工艺：
[0029] C13.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，6‑7小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度32℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h；接着进入变黄中期，以3℃/4h的升温速率，4小时将干球温度升至37℃，湿球温度调整至33℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至40℃，湿球调整升至34℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/2小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至
35℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/1.5小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至
36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；
[0030] C23.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至37℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0031] C33.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至67℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0032] D.TSNAs降解效率检测：喷施该菌株后再进行烘烤调制的烟草，总TSNAs含量下降13.71％～29.18％，其中NNK、NNN、NAT分别下降10.96％～27.72％、11.16～34.88％、12.50～26.67％。认为该菌株具有降解TSNAs的功能。
[0033] 本发明的有益效果：
[0034] 1、本发明首次将菌种用于不同成熟度烟叶烘烤过程中以降低不同成熟度烤烟中TSNAs含量，不同成熟度烤烟中总TSNAs含量下降13.71％～29.18％，其中NNK、NNN、NAT分别下降10.96％～27.72％、11.16～34.88％、12.50～26.67％。
[0035] 2、本发明针对特定的烤烟品种：云87、NC102、KRK26，其中NC102和KRK26为云产高端卷烟特需烟叶原料，对保障并提高核心烟叶原料具有重要作用。
[0036] 3、针对不同成熟度烟叶，通过合理的枯草芽孢杆菌、木霉菌菌种合理的搭配使用提高了其TSNAs的降解率，从而显著提高烟叶品质和降低TSNAs对人体健康及生活环境带来的危害。
[0037] 下面结合具体实施方式本发明做进一步解释。
具体实施方式
[0038] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
[0039] 本发明实现技术方案包括不同成熟度鲜烟叶采收、接种与编竿规范、装炉规范、烘烤控制、TSNAs降解效率检测，具体的技术方案如下：
[0040] A.采收、接种与编竿规范：烤烟打顶后采收不同成熟度(欠熟、适熟和过熟)的烤烟鲜烟叶；用枯草芽孢杆菌和木霉菌菌种(所述的枯草芽孢杆菌和木霉菌均为商业购买所得。)分别单独配制OD600值为1的菌液，然后将菌液均匀喷洒接种于采收的鲜烟叶表面，接种菌种的同时按照成熟度进行分类后编竿；
[0041] B.装炉规范：将接种编杆后的鲜烟叶按照成熟度装入密集烤房，上密下稀，逐步减少2～3竿烟，形成错位交叉；
[0042] C.烘烤控制：分为变黄期控制、定色期控制和干筋期控制，烘烤完成即可得到低TSNAs的烟叶。
[0043] 针对NC102品种的烘烤工艺：
[0044] C11.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期和变黄后期，变黄前期是开烤点火后，5‑6小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤6～8h；接着进入变黄中期，以2℃/3小时的升温速率，6小时将干球升至38℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤30～35h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄9成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2.5小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～12h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1.5℃/3小时的升温速率，将干球温度升至43℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤22～25h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/2～3小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤15～20h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)；
[0045] C21.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期和定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至47℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～23h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至55℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以0.5℃/1小时的升温速率，将干球温度升至65℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0046] C31.干筋期控制：干筋期是在定色期结束后以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤至全炉主脉全部烤干。
[0047] 针对云87的烘烤工艺：
[0048] C12.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，4‑5小时将干球温度由室温升到35℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h；接着进入变黄中期，以1℃/2h的升温速率，6小时将干球温度升至38℃，湿球温度调整至34℃，稳定干、湿球温度烘烤28～32h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球调整升至35℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至44℃，湿球温度调整至
36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～22h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以2℃/3小时的升温速率，将干球温度升至46℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；
[0049] C22.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0050] C32.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1℃/h的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0051] 针对KRK26的烘烤工艺：
[0052] C13.变黄期控制：变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，6‑7小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度32℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h；接着进入变黄中期，以3℃/4h的升温速率，4小时将干球温度升至37℃，湿球温度调整至33℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至40℃，湿球调整升至34℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/2小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至
35℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/1.5小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至
36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；
[0053] C23.定色期控制：定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至37℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至烟叶主脉干三分之一以上；
[0054] C33.干筋期控制：干筋期是在定色后期结束后以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至67℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0055] D.TSNAs降解效率检测：喷施该菌株后再进行烘烤调制的烟草，总TSNAs含量下降13.71％～29.18％，其中NNK、NNN、NAT分别下降10.96％～27.72％、11.16～34.88％、12.50～26.67％。认为该菌株具有降解TSNAs的功能。
[0056] 所述A步骤中OD600值为1的菌种溶液均匀喷洒烟叶的用量为烟叶重量的3～5％。
[0057] 所述A步骤中烟叶表面均匀喷洒菌液后直接转炉烘烤。
[0058] 所述A步骤中欠熟、适熟和过熟烤烟的烟株下、中、上3个部位烟叶对应的鲜烟叶SPAD值分别为31.4～35.1、27.9～28.6和13.2～20.3，适宜成熟的鲜烟叶标准为主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的烤烟烟叶，根据适熟烟叶来判断不同成熟度的烤烟采收时间，把适熟采收烤烟采收时间的前15天作为欠熟的烟叶采收时间。把适熟采收烤烟采收时间的后15天作为过熟烟叶采收时间。
[0059] 所述A步骤中的烤烟品种包括云87、NC102、KRK26。
[0060] 所述A步骤中烟叶的编烟量为90～110片/竿；
[0061] 所述B步骤中密集烤房的装烟量为540～580竿/炉，装烟密度为40～45kg/m3，装烟至烤房容积的95％以上。
[0062] 所述C步骤中分步骤C11、C21、C31为不同成熟度NC102品种烟叶的变黄期控制、定色期控制、干筋期控制。
[0063] 所述C步骤中分步骤C12、C22、C32为不同成熟度KRK26品种烟叶的变黄期控制、定色期控制、干筋期控制。
[0064] 所述密集烤房为气流下降式密集烤房。
[0065] 实施例1本发明烘烤工艺对不同成熟度NC102烟叶中TSNAs含量的影响[0066] S100：采收云南省玉溪市江川区九溪镇不同成熟度的NC102烤烟鲜烟叶，成熟的鲜烟叶具有主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色，且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的特征。在成熟烟叶采烤前15天采烤的烟叶作为欠熟烟叶。在成熟烟叶采烤后15天采烤的烟叶作为过熟烟叶。
[0067] S200：将上述采收的鲜烟叶按90～110片/竿的编烟量进行分类编竿。
[0068] S300：按烟叶重量3～5％的量用OD600值为1的菌液均匀喷洒接种于已编杆的烟叶表面。
[0069] S400：将接种后的已编杆烟叶按540～580竿/炉的装烟量、40～45kg/m3的装烟密度，装入气流下降式密集烤房内至容积的95％以上。
[0070] S500：将转炉后的烟叶进行烘烤，经过变黄期间、定色期和干筋期，即可得到低TSNAs的烟叶。
[0071] S300中的菌液采用枯草芽孢杆菌、木霉菌菌种分别配制。其中：
[0072] T0为不接种前述菌种的清水空白对照液；
[0073] T1菌液采用枯草芽孢杆菌菌种配制；
[0074] T2菌液采用木霉菌菌种配制；
[0075] T3菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1的重量比混合配制；
[0076] T4采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按2：1的重量比混合配制；
[0077] T5采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：2的重量比混合配制。
[0078] S500中变黄期包括变黄前期、变黄中期和变黄后期，变黄前期是开烤点火后，5‑6小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤6～8h；接着进入变黄中期，以2℃/3小时的升温速率，6小时将干球升至38℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤30～35h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄9成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2.5小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～12h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1.5℃/3小时的升温速率，将干球温度升至43℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤22～25h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/2～3小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至
36℃，稳定干、湿球温度烘烤15～20h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)；定色期包括定色前期、定色中期和定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至47℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～23h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至55℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以0.5℃/1小时的升温速率，将干球温度升至65℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h至烟叶主脉干三分之一以上；干筋期是在定色期结束后以1.5℃/2小时的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤至全炉主脉全部烤干。
[0079] 表1不同成熟度NC102烤烟品种烤后烤烟TSNAs含量对比
[0080]
[0081] 由表1可知，施用菌液处理都能起到降低NC102不同成熟度烟叶的TSNAs含量。欠熟烟叶在接种菌种情况下降低了16.24～27.65％，其中T5处理组降低幅度最大；适熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在18.46～27.70％，其中在T4处理中降低幅度最大；过熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在15.63～29.11％，其中在T5处理中降低幅度最大；因此，接种菌种能够显著降低烤烟TSNAs含量，而在不同成熟度烤烟中其效果不同，两个菌种组合的效果更显著。
[0082] 实施例2本发明接种菌种对烘烤后NC102不同成熟度烟叶菌种活性的影响[0083] 根据实施例1，在烘烤变黄前期结束进入变黄后期时测定此时不同成熟度烟叶单‑位叶片的菌种活菌数以及NO2含量。
[0084] 表2单位面积烟叶有效活菌数和NO2‑含量对比
[0085]
[0086] 由表2可知，经过菌种处理后，不同成熟度烤烟烟叶其单位面积有效活菌数不同，‑其清除亚硝胺的前体物质NO2的能力也有差异，其中菌种的组合施用能够提高烟叶清除亚‑
硝胺的前体物质NO2的能力，且其菌种的成活率也较高。
[0087] 实施例3本发明烘烤工艺对不同成熟度云87烟叶中TSNAs含量的影响[0088] S100：云南省红河州弥勒市不同成熟度的云87烤烟鲜烟叶，成熟的鲜烟叶具有主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色，且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的特征。在成熟烟叶采烤前15天采烤的烟叶作为欠熟烟叶。在成熟烟叶采烤后15天采烤的烟叶作为过熟烟叶。
[0089] S200：将上述采收的鲜烟叶按90～110片/竿的编烟量进行分类编竿。
[0090] S300：按烟叶重量3～5％的量用OD600值为1的菌液均匀喷洒接种于已编杆的烟叶表面。
[0091] S400：将接种后的已编杆烟叶按540～580竿/炉的装烟量、40～45kg/m3的装烟密度，装入气流下降式密集烤房内至容积的95％以上。
[0092] S500：将转炉后的烟叶进行烘烤，经过变黄期间、定色期和干筋期，即可得到低TSNAs的烟叶。
[0093] S300中的菌液采用枯草芽孢杆菌、木霉菌菌种分别配制。其中：
[0094] T0为不接种前述菌种的清水空白对照液；
[0095] T1菌液采用枯草芽孢杆菌菌种配制；
[0096] T2菌液采用木霉菌菌种配制；
[0097] T3菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1的重量比混合配制；
[0098] T4采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按2：1的重量比混合配制；
[0099] T5采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：2的重量比混合配制；。
[0100] S500中变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，4‑5小时将干球温度由室温升到35℃、湿球温度33℃，稳定干、湿球温度烘烤10～12h；接着进入变黄中期，以1℃/2h的升温速率，6小时将干球温度升至38℃，湿球温度调整至34℃，稳定干、湿球温度烘烤28～32h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球调整升至35℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/3小时的升温速率，将干球温度升至44℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤20～22h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以2℃/3小时的升温速率，将干球温度升至46℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤12～15h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至39℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至烟叶主脉干三分之一以上；干筋期是在定色后期结束后以1℃/h的升温速率，将干球温度升至68℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0101] 不同成熟度实验各进行5个处理。
[0102] 表3不同成熟度云87烤烟品种烤后烤烟TSNAs含量对比
[0103]
[0104] 由表3可知，施用菌液处理都能起到降低云87不同成熟度烟叶的TSNAs含量。欠熟烟叶在接种菌种情况下降低了13.73～26.59％，其中T4处理组降低幅度最大；适熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在20.28～29.20％，其中在T5处理中降低幅度最大；过熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在15.00～28.37％，其中在T5处理中降低幅度最大；因此，接种菌种能够显著降低烤烟TSNAs含量，而在不同成熟度烤烟中其效果不同，两个菌种组合的效果更显著。
[0105] 实施例4本发明接种菌种对烘烤后云87不同成熟度烟叶菌种活性的影响[0106] 根据实施例3，在烘烤变黄前期结束进入变黄后期时测定此时不同成熟度烟叶单‑位叶片的菌种活菌数以及NO2含量。
[0107] 表4单位面积烟叶有效活菌数和NO2‑含量对比
[0108]
[0109] 由表4可知，经过菌种处理后，不同成熟度烤烟烟叶其单位面积有效活菌数不同，‑其清除亚硝胺的前体物质NO2的能力也有差异，其中菌种的组合施用能够提高烟叶清除亚‑
硝胺的前体物质NO2的能力，且其菌种的成活率也较高。
[0110] 实施例5本发明烘烤工艺对不同成熟度KRK26烟叶中TSNAs含量的影响[0111] S100：云南省大理州下关镇不同成熟度的KRK26烤烟鲜烟叶，成熟的鲜烟叶具有主脉变白发亮，支脉退青变白，叶片呈绿黄色、浅黄色，且茸毛大部分脱落，手触摸后有丰富烟油的特征。在成熟烟叶采烤前15天采烤的烟叶作为欠熟烟叶。在成熟烟叶采烤后15天采烤的烟叶作为过熟烟叶。
[0112] S200：将上述采收的鲜烟叶按90～110片/竿的编烟量进行分类编竿。
[0113] S300：按烟叶重量3～5％的量用OD600值为1的菌液均匀喷洒接种于已编杆的烟叶表面。
[0114] S400：将接种后的已编杆烟叶按540～580竿/炉的装烟量、40～45kg/m3的装烟密度，装入气流下降式密集烤房内至容积的95％以上。
[0115] S500：将转炉后的烟叶进行烘烤，经过变黄期间、定色期和干筋期，即可得到低TSNAs的烟叶。
[0116] S300中的菌液采用枯草芽孢杆菌、木霉菌菌种分别配制。其中：
[0117] T0为不接种前述菌种的清水空白对照液；
[0118] T1菌液采用枯草芽孢杆菌菌种配制；
[0119] T2菌液采用木霉菌菌种配制；
[0120] T3菌液采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：1的重量比混合配制；
[0121] T4采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按2：1的重量比混合配制；
[0122] T5采用枯草芽孢杆菌和木霉菌两种菌种按1：2的重量比混合配制；。
[0123] S500中变黄期包括变黄前期、变黄中期及变黄后期，变黄前期是开烤点火后，6‑7小时将干球温度由室温升到34℃、湿球温度32℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h；接着进入变黄中期，以3℃/4h的升温速率，4小时将干球温度升至37℃，湿球温度调整至33℃，稳定干、湿球温度烘烤16～18h至第三台烟叶变黄7～8成(4台烤房)、中间台烟叶变黄8成(3台烤房)；随后进入变黄后期，以2℃/3h的升温速率，将干球温度升至40℃，湿球调整升至34℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第二台烟叶勾尖卷边(4台烤房)、中间台烟叶出现勾尖卷边(3台烤房)。然后以1℃/2小时的升温速率，将干球温度升至42℃，湿球温度调整至35℃，稳定干、湿球温度烘烤12～16h至第三台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶出现稍显小卷筒(3台烤房)。接着以1℃/1.5小时的升温速率，将干球温度升至45℃，湿球温度调整至36℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至第二台烟叶小卷筒(4台烤房)、中间台烟叶小卷筒(3台烤房)；定色期包括定色前期、定色中期、定色后期，定色前期是在变黄后期结束后以1℃/2h的升温速率，将干球温度升至48℃，湿球温度调整至37℃，稳定干、湿球温度烘烤18～22h至底台烟叶小卷筒，烟叶支脉全黄；接着进入定色中期，以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至54℃，湿球温度调整至38℃，稳定干、湿球温度烘烤10～14h至全炉大卷筒；接着进入定色后期，以1℃/h的升温速率，将干球温度升至60℃，湿球温度升至39℃，稳定干、湿球温度烘烤8～10h至烟叶主脉干三分之一以上；干筋期是在定色后期结束后以1.5℃/h的升温速率，将干球温度升至67℃，湿球温度调整至40℃，稳定干、湿球温度烘烤全炉主脉全部烤干。
[0124] 不同成熟度实验各进行5个处理。
[0125] 表5不同成熟度KRK26烤烟品种烤后烤烟TSNAs含量对比
[0126]
[0127] 由表5可知，施用菌液处理都能起到降低KRK26不同成熟度烟叶的TSNAs含量。欠熟烟叶在接种菌种情况下降低了11.18～26.35％，其中T4处理组降低幅度最大；适熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在22.00～32.16％，其中在T5处理中降低幅度最大；过熟烟叶在接种菌种的情况下TSNAs降低范围在14.37～27.64％，其中在T5处理中降低幅度最大；因此，接种菌种能够显著降低烤烟TSNAs含量，而在不同成熟度烤烟中其效果不同，两个菌种组合的效果更显著。
[0128] 实施例6本发明接种菌种对烘烤后KRK26不同成熟度烟叶菌种活性的影响[0129] 根据实施例5，在烘烤变黄前期结束进入变黄后期时测定此时不同成熟度烟叶单‑位叶片的菌种活菌数以及NO2含量。
[0130] 表6单位面积烟叶有效活菌数和NO2‑含量对比
[0131]
[0132] 由表6可知，经过菌种处理后，不同成熟度烤烟烟叶其单位面积有效活菌数不同，‑其清除亚硝胺的前体物质NO2的能力也有差异，其中菌种的组合施用能够提高烟叶清除亚‑
硝胺的前体物质NO2的能力，且其菌种的成活率也较高。
[0133] 以上所述的仅是本发明的部分具体实施例(由于本发明的配方包含数值范围，故实施例不能穷举，本发明所记载的保护范围包含本发明的数值范围和其他技术要点范围)，方案中公知的具体内容或常识在此未作过多描述。应当指出，上述实施例不以任何方式限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡是采用等同替换或等效变换的方式获得的技术方案均落在本发明的保护范围内。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
