地塞米松/姜黄素@PLGA-HA纳米复合物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物及其制备方法和应用，涉及纳米药物的技术领域。该地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备原料包括地塞米松、姜黄素、PLGA和HA，且质量比为(1～5)：(1～5)：(90～100)：(10～45)。该纳米复合物具有良好的抗菌抑炎的作用，在促进伤口愈合的同时能够减少疤痕的生成。

权利要求

1.地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备原料包括地塞米松、姜黄素、PLGA和HA，且质量比为（1 5）：（1 5）：（90~ ~ ~

100）：（10 45）。

~

2.根据权利要求1所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，姜黄素的负载量为0.5 1%；地塞米松的负载量为1.5 2%。

~ ~

3.根据权利要求2所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，姜黄素的负载量为0.7%。

4.根据权利要求2所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，地塞米松的负载量为1.7%。

5.根据权利要求1所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，姜黄素的包封率为15 20%，地塞米松的包封率为40 45%。

~ ~

6.根据权利要求5所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，姜黄素的包封率为17%。

7.根据权利要求5所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，地塞米松的包封率为43%。

8. 根据权利要求1所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的水合粒径为：330 350 nm。

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9.根据权利要求8所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的水合粒径为：340nm。

10. 根据权利要求1所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的Zata电势为：‑50 ‑40 eV。

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11. 根据权利要求10所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的Zata电势为：‑45 eV。

12.根据权利要求1所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，其特征在于，所述PLGA由75%乳酸和25%羟基乙酸组成，且重均分子量为2 4万。

~

13.权利要求1‑12任一项所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括：将姜黄素、地塞米松和PLGA溶于有机溶剂中得到第一混合液；然后将所述第一混合液加入超声状态下的第一HA‑HDA水溶液中，得到第二混合液，并超声处理；然后在超声状态下将所述第二混合液逐滴加入至第二HA‑HDA水溶液中，去除有机溶剂后收集样品，得到所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物；

其中，地塞米松、姜黄素和PLGA的质量比为（1 5）：（1 5）：（90 100）。

~ ~ ~

14. 根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液中溶质的浓度为

95 105 mg/mL。

~

15. 根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液中溶质的浓度为

100 mg/mL。

16.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯或丙酮。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自三氯甲烷。

18.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，将姜黄素、地塞米松和PLGA按照配比溶于有机溶剂中，超声助溶，得到所述第一混合液。

19.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液和所述第一HA‑HDA水溶液的体积比为1:（5 8）。

~

20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液和所述第一HA‑HDA水溶液的体积比为1:6。

21.据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述第一HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为1 3mg/mL。

~

22.据权利要求21所述的制备方法，其特征在于，所述第一HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为2mg/mL。

23. 据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述超声处理的时间为2 5min，超声~条件为使用超声探头50%，3S on/3S off超声。

24.据权利要求23所述的制备方法，其特征在于，超声时间为3min。

25.据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液和所述第二HA‑HDA水溶液的体积比为1：（10 20）。

~

26.据权利要求25所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液和所述第二HA‑HDA水溶液的体积比1:15。

27.据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述第二HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为0.5 1mg/mL。

~

28.据权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述第二HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为0.5mg/mL。

29.据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述去除有机溶剂包括避光搅拌、清洗，然后离心收集样品。

30.据权利要求29所述的制备方法，其特征在于，避光搅拌8 10h。

~

31.据权利要求30所述的制备方法，其特征在于，避光搅拌9h。

32.据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将收集得到的样品复溶后冷冻干燥。

33.据权利要求32所述的制备方法，其特征在于，使用乳糖水溶液复溶。

34.根据权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述HA‑HDA的制备方法包括：将溶液a、溶液b和溶液c混合得到第三混合液；将溶液d逐滴加入所述第三混合液，充分反应后透析，得到HA‑HDA；

所述溶液a为HA、水和DMSO的混合溶液，HA：水：DMSO为（200 400）：（10 30）：（10 30）mg/~ ~ ~mL/mL；

所述溶液b为EDCˑHCl的DMSO溶液，EDCˑHCl：DMSO为（25 35）：（1 2）mg/mL；

~ ~

所述溶液c为NHS的水溶液，NHS：水为（15 20）：（1 2）mg/mL；

~ ~

所述溶液d为HDA的DMSO溶液，HDA：DMSO为（15 20）：（2 5）mg/mL。

~ ~

35.根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述溶液a为HA、水和DMSO的混合溶液，HA：水：DMSO为300：20：20mg/mL/mL。

36.根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述溶液b为EDCˑHCl的DMSO溶液，EDCˑHCl：DMSO为30.6：1.5mg/mL。

37. 根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述溶液c为NHS的水溶液，NHS：水为18.4:1.5 mg/mL。

38. 根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述溶液d为HDA的DMSO溶液，HDA：DMSO为19.3:3 mg/mL。

39.根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述充分反应为室温反应20 30h。

~

40.根据权利要求39所述的制备方法，其特征在于，所述充分反应为室温反应24h。

41.根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述透析的透析膜分子量为

3.5Kda。

42.根据权利要求34所述的制备方法，其特征在于，所述HA‑HDA的制备方法还包括对透析得到的样品进行冷冻干燥。

43.权利要求1‑12任一项所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物在制备药物中的应用，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。

44.药物，其特征在于，包含权利要求1‑12任一项所述的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。

说明书

地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及纳米药物技术领域，尤其是涉及一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 细菌伤口感染是一个重要的临床问题，慢性伤口的日益流行，以及抗生素耐药率逐渐升高导致现有药物缺乏疗效。当伤口遭遇严重高浓度的致病菌时，宿主无法有效抵抗感染和自主愈合。细菌影响急性创面愈合的机制主要由于延长愈合的炎症期，诱导炎症细胞浸润以及成纤维细胞过度增生，导致伤口愈合缓慢并存在严重疤痕。开发安全有效的新型抗菌抑炎药物来促进伤口愈合，同时减少疤痕生成是该领域的难题以及发展趋势。

[0003] 有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

[0004] 本发明的第一目的在于提供一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物具有良好的抗菌抑炎，以及促进伤口愈合同时减少疤痕生成的作用。

[0005] 本发明的第二目的在于提供上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法，该制备方法能够制备得到符合上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物性能要求的纳米复合物。

[0006] 本发明的第三目的在于提供上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的应用及包含其的药物。

[0007] 为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

[0008] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备原料包括地塞米松、姜黄素、PLGA和HA，且质量比为(1～5)：(1～5)：(90～100)：(10～45)。

[0009] 优选地，姜黄素的负载量为0.5～1％；地塞米松的负载量为1.5～2％；

[0010] 优选地，姜黄素的负载量为0.7％；

[0011] 优选地，地塞米松的负载量为1.7％；

[0012] 优选地，姜黄素的包封率为15～20％，地塞米松的包封率为40～45％；

[0013] 优选地，姜黄素的包封率为17％；

[0014] 优选地，地塞米松的包封率为43％

[0015] 优选地，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的水合粒径为：330～350nm；优选为340nm；

[0016] 优选地，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的Zata电势为：‑50～‑40eV；优选为‑45eV。

[0017] 优选地，所述PLGA由75％乳酸和25％羟基乙酸组成，且重均分子量为2～4万。

[0018] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法，包括：将姜黄素、地塞米松和PLGA溶于有机溶剂中得到第一混合液；然后将所述第一混合液加入超声状态下的第一HA‑HDA水溶液中，得到第二混合液，并超声处理；然后在超声状态下将所述第二混合液逐滴加入至第二HA‑HDA水溶液中，去除有机溶剂后收集样品，得到所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物；

[0019] 其中，地塞米松、姜黄素和PLGA的质量比为(1～5)：(1～5)：(90～100)。

[0020] 优选地，所述第一混合液中溶质的浓度为95～105mg/mL，优选为100mg/mL；

[0021] 优选地，所述有机溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯或丙酮；

[0022] 优选地，所述有机溶剂选自三氯甲烷；

[0023] 优选地，将姜黄素、地塞米松和PLGA按照配比溶于有机溶剂中，超声助溶，得到所述第一混合液。

[0024] 优选地，所述第一混合液和所述第一HA‑HDA水溶液的体积比为1:(5～8)；优选为1:6；

[0025] 优选地，所述第一HA‑HDA的水溶液中HA‑HDA的浓度为1～3mg/mL，优选为2mg/mL；

[0026] 优选地，所述超声处理的时间为2～5min，超声条件为使用超声探头50％，3S on/3S off超声；超声时间优选为3min；

[0027] 优选地，所述第一混合液和所述第二HA‑HDA水溶液的体积比1：(10～20)；优选为1:15；

[0028] 优选地，所述第二HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为0.5～1mg/mL，优选为0.5mg/mL。

[0029] 优选地，所述去除有机溶剂包括避光搅拌、清洗，然后离心收集样品；

[0030] 优选地，避光搅拌8～10h，优选搅拌9h；

[0031] 优选地，所述制备方法还包括将收集得到的样品复溶后冷冻干燥；

[0032] 优选地，使用乳糖水溶液复溶。

[0033] 优选地，所述HA‑HDA的制备方法包括：将溶液a、溶液b和溶液c混合得到第三混合液；将溶液d逐滴加入所述第三混合液，充分反应后透析，得到HA‑HDA；

[0034] 所述溶液a为HA、水和DMSO的混合溶液，HA：水：DMSO为(200～400)：(10～30)：(10～30)mg/mL/mL；优选为300：20：20mg/mL/mL；

[0035] 所述溶液b为EDC·HCl的DMSO溶液，EDC·HCl：DMSO为(25～35)：(1～2)mg/mL；优选为30.6：1.5mg/mL；

[0036] 所述溶液c为NHS的水溶液，NHS：水为(15～20)：(1～2)mg/mL；优选为18.4:1.5；

[0037] 所述溶液d为HDA的DMSO溶液，HDA：DMSO为(15～20)：(2～5)mg/mL；优选为19.3:3；

[0038] 优选地，所述充分反应为室温反应20～30h，优选反应24h；

[0039] 优选地，所述透析的透析膜分子量为3.5Kda；

[0040] 优选地，所述HA‑HDA的制备方法还包括对透析得到的样品进行冷冻干燥。

[0041] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，或上述制备方法在制备药物中的应用，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。

[0042] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种药物，所述药物包含上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。

[0043] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

[0044] 本发明提供的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，以地塞米松和姜黄素作为有效药物成分。地塞米松是一种肾上腺皮质激素药，具有抗炎作用，姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，具有抑菌作用。将地塞米松和姜黄素协同使用，能够在抗菌的同时促进皮肤愈合，加快创口修复。本发明采用两亲性载体(PLGA‑HA)包覆地塞米松和姜黄素制备聚合物胶束，其双亲水外壳和聚酯环绕的疏水内核将地塞米松和姜黄素包覆其中，更有利于延长药物在循环系统中的循环时间。该地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物能有效的抑制创面细菌增殖，促进伤口愈合，减少疤痕产生。

[0045] 本发明提供的上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法能够制备得到符合上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物性能要求的纳米复合物。

附图说明

[0046] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

[0047] 图1为本发明对比例1制备得到的PLGA‑HA纳米颗粒的核磁氢谱图；

[0048] 图2为本发明实施例1制备得到的Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的水合粒径；

[0049] 图3为本发明实施例1制备得到的Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的Zeta电势；

[0050] 图4为本发明实施例1制备得到的Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的透射电镜图片；

[0051] 图5为地塞米松紫外吸收与浓度标准曲线；

[0052] 图6为姜黄素紫外吸收与浓度标准曲线；

[0053] 图7为Dex、Cur、PLGA‑HA(对比例3)和Dex/Cur@PLGA‑HA(实施例1)紫外光谱谱图；

[0054] 图8a～c为各浓度和时间地塞米松处理成纤维细胞后MTT检测结果；

[0055] 图8d～f为各浓度和时间姜黄素处理成纤维细胞后MTT检测结果；

[0056] 图8g～i为各浓度和时间Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物处理成纤维细胞后MTT检测结果；

[0057] 图9a～9b为Dex、Cur和Dex/Cur@PLGA‑HA的划痕实验结果；

[0058] 图10a～10b为Cur/Dex@PLGA‑HA抑菌圈检测结果；

[0059] 图11a为效果例4中对照组和给药组的动物模型试验的愈合状态；

[0060] 图11b为效果例4中对照组和给药组的动物模型在5、10和15d的愈合率；

[0061] 图11c为效果例4中对照组和给药组的动物模型试验的HE切片染色结果。

具体实施方式

[0062] 下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0063] 化合物缩写解释：Dex：地塞米松；Cur：姜黄素；PLGA：聚乳酸‑羟基乙酸共聚物；HA：透明质酸；HDA：十六烷基胺(n‑hexadecylamine)；DMSO：二甲基亚砜；EDC·HCl：1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐；NHS：N‑羟基丁二酰亚胺。

[0064] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备原料包括地塞米松、姜黄素、PLGA和HA，且质量比为(1～5)：(1～5)：(90～100)：(10～45)，例如可以为但不限于为1:5:90:45、5:1:100:10、1:1:100:10、1:1:90:45、5:5:90:45、5:5:100:10或2:2:96:16。

[0065] 在一些可选的实施方式中，姜黄素的负载量为0.5～1％，例如可以为但不限于为0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％，优选为0.7％；地塞米松的负载量为1.5～2％，例如可以为但不限于为1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％或2％，优选为1.7％。

[0066] 在一些可选的实施方式中，姜黄素的包封率为15～20％，例如可以为但不限于为15％、16％、17％、18％、19％或20％，优选为17％；地塞米松的包封率为40～45％，例如可以为但不限于为40％、41％、42％、43％、44％或45％，优选为43％。

[0067] 在一些优选的实施方式中，姜黄素的负载量为0.7％，地塞米松的负载量为1.7％；姜黄素的包封率为17％，地塞米松的包封率为43％。

[0068] 本发明提供的地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，以地塞米松和姜黄素作为有效药物成分。地塞米松是一种肾上腺皮质激素药，具有抗炎作用，姜黄素是一种从姜科植物姜黄等的根茎中提取得到的黄色色素，具有抑菌作用。将地塞米松和姜黄素协同使用，能够在抗菌的同时促进皮肤愈合，加快创口修复。本发明采用两亲性载体(PLGA‑HA)包覆地塞米松和姜黄素制备聚合物胶束，其双亲水外壳和聚酯环绕的疏水内核将地塞米松和姜黄素包覆其中，更有利于延长药物在循环系统中的循环时间。该地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物能有效的抑制创面细菌增殖，促进伤口愈合，减少疤痕产生。

[0069] 在一些可选的实施方式中，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的水合粒径为：330～350nm，例如可以为但不限于为330、335、340、345或350nm；优选为340nm。

[0070] 在一些可选的实施方式中，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的Zata电势为：‑50～‑40eV，例如可以为但不限于为‑50、‑45或‑40eV，优选为‑45eV。

[0071] 在一些可选的实施方式中，所述PLGA由75％乳酸和25％羟基乙酸组成，且重均分子量为2～4万。

[0072] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法，该制备方法包括将姜黄素、地塞米松和PLGA溶于有机溶剂中得到第一混合液；然后将所述第一混合液加入超声状态下的第一HA‑HDA水溶液中，得到第二混合液，并超声处理；然后在超声状态下将所述第二混合液逐滴加入至第二HA‑HDA水溶液中，去除有机溶剂后收集样品，得到所述纳米颗粒；其中地塞米松、姜黄素和PLGA的质量比为(1～5)：(1～5)：(90～100)，例如可以为但不限于为1:5:90、5:1:100、1:5:100、5:1:90或2:2:
96。

[0073] 在一些可选的实施方式中，所述第一混合液中溶质的浓度为95～105mg/mL，例如可以为但不限于为95、98、100、102或105mg/mL；所述溶质指的是地塞米松、姜黄素和PLGA的总和，优选为100mg/mL；其中有机溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯或丙酮，有机溶剂优选三氯甲烷，地塞米松、姜黄素和PLGA在三氯甲烷中的溶解性最优。第一混合液优选采用超声助溶的方式将姜黄素、地塞米松和PLGA混合。

[0074] 在一些可选的实施方式中，所述第一混合液和所述第一HA‑HDA水溶液的体积比为1:(5～8)，例如可以为但不限于为1:5、1:6、1:7或1:8；优选为1:6；其中所述第一HA‑HDA的水溶液中HA‑HDA的浓度优选为1～3mg/mL，例如可以为但不限于为1、2或3mg/mL，优选为
2mg/mL。

[0075] 在一些可选的实施方式中，所述超声处理的时间为2～5min，例如可以为但不限于为2、3、4或5min；优选超声条件为使用超声探头50％，3S on/3S off超声；超声时间优选为3min。

[0076] 在一些可选的实施方式中，所述第一混合液和所述第二HA‑HDA水溶液的体积比1：(10～20)，例如可以为但不限于为1:10、1:12、1:15、1:17或1:20；优选为1:15；其中，第二HA‑HDA水溶液中HA‑HDA的浓度为0.5～1mg/mL，例如可以为但不限于为0.5、0.8或1mg/mL，优选为0.5mg/mL。

[0077] 在一些可选的实施方式中，所述去除有机溶剂包括避光搅拌、清洗，然后离心收集样品；其中避光搅拌优选搅拌8～10h，例如可以为但不限于为8、8.5、9、9.5或10h，更优选搅拌9h。

[0078] 在一些可选的实施方式中，所述制备方法还包括将收集得到的样品复溶后冷冻干燥；然后优选使用乳糖水溶液复溶。

[0079] 在一些可选的实施方式中，所述制备方法中使用的HA‑HDA采用如下方法制备得到：所述HA‑HDA的制备方法包括：将溶液a、溶液b和溶液c混合得到第三混合液，优选将溶液a、溶液b和溶液c混合后搅拌1h；将溶液d逐滴加入所述第三混合液，充分反应后透析，得到HA‑HDA。

[0080] 所述溶液a为HA、水和DMSO的混合溶液，HA：水：DMSO为(200～400)：(10～30)：(10～30)mg/mL/mL，例如可以为但不限于为200:30:10、400:10:30、200:20:20、300:20:20或400:20:20mg/mL/mL；优选为300：20：20mg/mL/mL；溶液a制备方法优选先将HA溶解于水中，然后加入等体积的DMSO搅拌。

[0081] 所述溶液b为EDC·HCl的DMSO溶液，EDC·HCl：DMSO为(25～35)：(1～2)mg/mL，例如可以为但不限于为25:1、30:1、35:1、25:2、25:2、30:2、或35:2mg/mL；优选为30.6：1.5mg/mL。

[0082] 所述溶液c为NHS的水溶液，NHS：水为(15～20)：(1～2)mg/mL，例如可以为但不限于为15:1、20:1、15:2或20:2mg/mL；优选为18.4:1.5mg/mL。

[0083] 所述溶液d为HDA的DMSO溶液，HDA：DMSO为(15～20)：(2～5)mg/mL，例如可以为但不限于为15:2、20:2、15:5或20:5mg/mL；优选为19.3:3；将HDA溶于DMSO中优选采用超声助溶。

[0084] 在一些可选的实施方式中，所述充分反应为室温反应20～30h，例如可以为但不限于为20、22、24、25、28或30h，优选反应24h。

[0085] 在一些可选的实施方式中，所述透析的透析膜分子量为3.5Kda。

[0086] 在一些可选的实施方式中，所述HA‑HDA的制备方法还包括对透析得到的样品进行冷冻干燥。

[0087] 在一个优选的实施方式中，所述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的制备方法如下：

[0088] (A)HA‑HDA的合成：首先将HA(200～300mg)溶解于超纯水(10～30mL)中，随后，加入等体积的DMSO，搅拌10min之后，将EDC·HCl(25～35mg)溶于DMSO(1～2mL)中；NHS(15～20mg)溶于超纯水(1～2mL)中，加入HA的溶液中，室温搅拌1h。之后，将HDA(15～20mg)溶于DMSO(2～5mL)中，超声助溶后，逐滴滴加进上述反应液中。室温反应24h之后，用蒸馏水进行透析(透析膜分子量为3.5KDa)2天，每隔6h换一次透析液。待透析完毕，进行冷冻干燥。最后，收集样品置于‑20℃冰箱进行保存备用，利用核磁氢谱对其结构进行表征。

[0089] (B)首先将地塞米松(1～5mg)、姜黄素(1～5mg)和PLGA(90～100mg)溶于三氯甲烷(1.0mL)中超声3min助溶，得到第一混合液，然后将上述第一混合液加入超声状态下的HA‑HDA的水溶液中(2mg/mL，6mL，即第一HA‑HDA水溶液)，随后用超声探头(50％，3S on/3S off)超声3min(Sonics Vibra‑Cell VCX‑500Ultrasonic Processor)，得到第二混合液，之后，在超声状态下(KQ5200DA，超声清洗器)，将得到第二混合液继续逐滴加入HA‑HDA水溶液(0.5mg/mL，15mL，即第二HA‑HDA水溶液中)中，室温下避光搅拌9h除去里面的有机溶剂。用蒸馏水3次清洗、离心收集样品(12000rpm，5min)，并用5％的乳糖水溶液复溶并进行冷冻干燥，避光4℃保存备用。

[0090] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，或上述制备方法在制备药物中的应用，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。该应用基于本发明地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的发明构思，因此具有其全部有益效果，在此不再赘述。

[0091] 根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种药物，该药物包含上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，所述药物用于促进感染伤口愈合，减少疤痕生成。该药物以上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物作为全部或部分药物活性成分，具有上述地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物的全部技术效果，在此不再赘述。所述药物还可选地包括药学上可接受的任意辅料，例如可以为但不限于为溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、润滑剂、填充剂、稳定剂、成膜剂、抑菌剂、助悬剂、芳香剂、pH调节剂、增稠剂、保湿剂和基质中的一种或多种等。

[0092] 下面结合优选实施例进一步说明本发明的技术方案和有益效果。

[0093] 实施例1

[0094] 本实施例提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物的制备方法如下：

[0095] 1.HA‑HDA的合成

[0096] 首先将HA(300mg)溶解于超纯水(20mL)中，随后，加入等体积的DMSO，搅拌10min之后，将EDC·HCl(30.6mg)溶于1.50mL DMSO中，(18.4mg)溶于1.5mL超纯水中，加入HA的溶液中，室温搅拌1h。之后，将HDA(19.3mg)溶于3mL DMSO中，超声助溶后，逐滴滴加进上述反应液中。室温反应24h之后，用蒸馏水进行透析(透析膜分子量为3.5KDa)2天，每隔6h换一次透析液。待透析完毕，进行冷冻干燥。最后，收集样品置于‑20℃冰箱进行保存备用，利用核磁氢谱对其结构进行表征。

[0097] 2.Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的合成

[0098] 首先将2.0mg Cur(姜黄素)，2.0mg DEX(地塞米松)和96.0mgPLGA(75:25，2万～4万，)溶于1.0mL三氯甲烷中，超声3min助溶(KQ5200DA，超声清洗器)，然后将上述溶液加入超声状态下的HA‑HDA的水溶液中(2mg/mL，6mL)，随后，用超声探头(50％，3S on/3S off)超声3min(Sonics Vibra‑Cell VCX‑500Ultrasonic Processor)。之后，在超声状态下(KQ5200DA，超声清洗器)，将其继续逐滴加入HA‑HDA水溶液(0.5mg/mL，15mL)中，室温下避光搅拌9h除去里面的有机溶剂。用蒸馏水3次清洗、离心收集样品(12000rpm，5min)，并用5％的乳糖水溶液复溶并进行冷冻干燥，避光4℃保存备用。

[0099] 3.制备标准曲线

[0100] Dex标曲的制备：以DMSO为溶剂，分别配置浓度为100、80、60、40、20、10和0μg/mL的溶液，利用紫外法(N4，紫外分光光度计)在270nm处检测其吸光度值。地塞米松紫外吸收与浓度标曲如图5所示。

[0101] Cur标曲的制备：以DMSO为溶剂，分别配置浓度为25、20、15、10、5和0μg/mL的溶液，利用紫外法(N4，紫外分光光度计)在430nm处检测其吸光度值。姜黄素紫外吸收与浓度标曲如图6所示。

[0102] 4.NPs中药物包封率及负载量的测定

[0103] 取1mg冷冻干燥之后的样品，将其用DMSO稀释至标曲范围之内的浓度，然后利用紫外检测其吸光度值，根据预建立的Dex和Cur在DMSO的标准曲线，测定Dex和Cur在纳米粒中的含量。根据以下公式进行Dex和Cur的包封率及负载量的计算：负载量(％)＝[NPs中的药量]/[载体质量+药物质量]×100％；包封率(％)＝[NPs中药物质量]/[所加药物质量]×100％。实施例1提供的Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物中姜黄素的负载量为0.7％，地塞米松的负载量为1.7％；姜黄素的包封率为17％，地塞米松的包封率为43％。DLS水合粒径以及Zeta电势如图2和图3所示，DLS水合粒径为340nm，Zeta电势为‑45eV。制备得到的Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的透射电镜图片如图4所示。

[0104] 实施例2

[0105] 本实施例提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物的制备方法与实施例1的区别仅在于在HA‑HDA的合成步骤中，是将200mg的HA溶解于超纯水(30mL)中，随后，加入等体积的DMSO。在Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的合成的步骤中，姜黄素和地塞米松的用量分别是5mg和1mg。

[0106] 实施例3

[0107] 本实施例提供了一种地塞米松/姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物的制备方法与实施例1的区别仅在于在HA‑HDA的合成步骤中，是将400mg的HA溶解于超纯水(10mL)中，随后，加入等体积的DMSO。在Dex/Cur@PLGA‑HA纳米复合物的合成的步骤中，姜黄素和地塞米松的用量分别是1mg和5mg。

[0108] 对比例1

[0109] 本实施例提供了一种地塞米松@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物的制备方法与实施例1相同，只需将地塞米松的用量调整为2.8mg，且不添加姜黄素即可。

[0110] 对比例2

[0111] 本实施例提供了一种姜黄素@PLGA‑HA纳米复合物，该纳米复合物的制备方法与实施例1相同，只需将姜黄素的用量调整为4.5mg，且不添加地塞米松即可。

[0112] 对比例3

[0113] 本实施例提供的为PLGA‑HA纳米颗粒，该纳米颗粒的制备方法与实施例1相同，只需添加PLGA即可。PLGA‑HA纳米颗粒的核磁氢谱如图1所示。

[0114] 利用紫外对其Dex、Cur、PLGA‑HA(对比例3)和Dex/Cur@PLGA‑HA(实施例1)进行表征。图7所示。

[0115] 效果例1细胞MTT筛选药物作用浓度及时间

[0116] 1.实验分组：

[0117] (1)小鼠成纤维细胞+Dex(0、0.5、1、2、5μg/ml)；

[0118] (2)小鼠成纤维细胞+Cur(0、0.5、1、2、5μg/ml)；

[0119] (3)小鼠成纤维细胞+Cur/Dex@PLGA‑HA(0、20、40、80、200μg/ml)。

[0120] 2.实验内容：

[0121] 2.1.各组处理细胞24h，48h，72h后进行MTT检测，选取合适的药物浓度C1以及处理时间T1用于后续实验2.2实验步骤：将小鼠成纤维细胞重新悬浮在DMEM中并以每孔5.0×4
10个细胞的密度接种至96孔板中。按分组，(1)(2)组以浓度梯度(0、0.5、1、2、5μg/ml)处理细胞；(3)组以浓度梯度(0、20、40、80、200μg/ml)处理细胞24h，48h，72h后，将20μL MTT(5毫克/毫升)添加到每个孔中4小时。然后除去培养基，向每个孔中加入150μL DMSO，同时振荡
10分钟。晶体溶解，使用iMark微孔板吸光度读数仪(Bio‑RAD，美国)在490nm处测量光密度(OD)值。结果如图8a～8i所示，DEX以及Cur的浓度使用的5μg/ml；Cur/Dex@PLGA‑HA选用200μg/ml。

[0122] 效果例2细胞划痕检测

[0123] 1.实验分组：

[0124] (1)小鼠成纤维细胞对照组；

[0125] (2)小鼠成纤维细胞+Dex(5μg/ml)；

[0126] (3)小鼠成纤维细胞+Cur(5μg/ml)；

[0127] (4)小鼠成纤维细胞+Cur/Dex@PLGA‑HA(200μg/ml)

[0128] 2.实验内容：

[0129] 划痕实验检测细胞迁移能力

[0130] 在每孔中加入约5×105个细胞，过夜铺满。用枪头划痕，PBS洗细胞3次，弃去划下的细胞，加入无血清培养基，按分组处理细胞。放入37℃、5％CO2培养箱培养。在0h、24h取样，拍照，实验结果如图9a和9b所示所示。

[0131] 效果例3抗菌活性检测

[0132] 1.实验分组：

[0133] 以Cur/Dex@PLGA‑HA中Cur含量计，分为0、0.5、1、2和5μg/ml组；以及空白对照组和以DMSO替代Cur/Dex@PLGA‑HA组。

[0134] 2.抗菌活性检测抗菌环直径

[0135] 将两种常见病原菌金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)和大肠杆菌(OP50)作为划痕接种到琼脂平板上并进行如下处理药物处理。将药敏纸分别以0.25mg/mL的浓度渗入各组溶液中，用于制备抗菌片(直径＝5毫米)。最后，将无菌干燥的抗菌药片添加到每个板的中心，并在成像前在37℃下培养24小时。24小时后测量每个板中抗菌环的直径。

[0136] 实验结果如图10a～10b所示，抑菌圈结果显示：Cur/Dex@PLGA‑HA中Cur浓度低于1μg/ml无抑菌效果，2μg/ml浓度有抑菌效果，5μg/ml浓度有明显抑菌效果。

[0137] 效果例4大鼠创口愈合效果检测

[0138] 1.实验分组

[0139] (1)模型组(感染性溃疡Wistar大鼠、不用药)

[0140] (2)模型+药物治疗组(感染性溃疡大鼠、Cur/Dex@PLGA‑HA(4mg/ml))

[0141] 2.实验内容：

[0142] 2.1建模方案：

[0143] Wistar大鼠12只平均体重为250克的成年雄性被用于本研究。将大鼠随机分配到22
个试验组，使用高压灭菌的手术器械在背部中间制作2×2cm的全层皮肤切除伤口。用MRSA
8
(1.5×10CFU/mL)感染伤口。按照分组每日给药进行伤口处理。

[0144] 2.2药物处理方案

[0145] 按照分组每日给药进行伤口处理，配置溶液，经皮涂抹给药，为避免交叉感染，尽量独立饲养。

[0146] 2.3伤口愈合百分比测量

[0147] 分别在第5天、第10天和第15天评估包括表面渗出在内的伤口愈合过程，测量伤口直径并拍照，Image J计算伤口愈合效率。手术后伤口愈合的百分比计算如下：伤口愈合百分比＝((A0–At)/A0)×100％；A0为第0天伤口面积，At为测量时间点伤口面积。

[0148] 2.4HE切片染色

[0149] 第15天评估结束后处死大鼠，取伤口组织切片染色拍照，观察伤口处瘢痕状态修复效果，实验结果如图11a～11c所示。愈合结果显示：给药组愈合面积显著高于对照组。(*p<0.05，**p<0.01，与对照组进行比较)

[0150] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。