一种用于预防或治疗失眠的中药组合物及其制备方法和用途

摘要

本发明属于中药领域，具体涉及一种用于预防或治疗失眠的中药组合物及其制备方法和用途，所述中药组合物由黄精、灵芝、山药、芡实、酸枣仁和黑芝麻制成。本发明中药组合物具有益气养血、健脾补肾安神之功效，特别适用于预防或治疗由气血双虚型和/或脾肾两虚型等虚证导致的失眠。实验结果表明本发明中药组合物能改善失眠大鼠的精神状态、恢复正常体质量和昼夜节律，提高睡眠效率，减轻焦虑和紧张度。通过进一步检测大鼠脑部皮质、海马及下丘脑与睡眠相关的中枢神经递质及其受体和激素等物质的表达发现，本发明中药组合物能升高5‑HT和GABA这两类神经递质的含量，抑制下丘脑和脑干的促觉醒核团的扩散及传导，从而起到助眠作用。

权利要求

1.一种用于预防或治疗失眠的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精10‑25份、灵芝10‑25份、山药15‑35份、芡实10‑25份、酸枣仁10‑25份、黑芝麻10‑25份，所述中药组合物具有益气养血、健脾补肾的功效。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精20份、灵芝20份、山药30份、芡实20份、酸枣仁20份、黑芝麻20份。

3.权利要求1或权利要求2所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：将黄精、灵芝、山药、芡实、酸枣仁、黑芝麻粉碎，加水进行煎煮，混合滤液，经浓缩制得浓缩液。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，煎煮次数为两次，第一次煎煮1‑3小时后过滤得一次滤液，滤渣再加水煎煮1‑3小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：第一次煎煮和第二次煎煮的料液比均为1：4，第一次煎煮和第二次煎煮的煎煮时间均为1.5小时，第一次煎煮和第二次煎煮使用的水均为蒸馏水。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述浓缩为减压浓缩。

7.权利要求1或权利要求2所述的中药组合物或者采用权利要求3至6中任一项所述的制备方法制备得到的中药组合物在制备预防或治疗失眠的药物中的用途，其特征在于：所述药物具有益气养血、健脾补肾的功效。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述失眠是虚证型失眠。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述失眠是气血双虚型或脾肾两虚型。

10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述失眠是顽固性失眠、原发性失眠、更年期失眠或老年性失眠。

11.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述失眠是慢性失眠。

说明书

一种用于预防或治疗失眠的中药组合物及其制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种用于预防或治疗失眠的中药组合物及其制备方法和用途。

背景技术

[0002] 失眠症是指由于思虑过度、紧张恐怖、过度劳累、情境变迁或神经病理损害等引起的一种持续的睡眠质或量令人不满意的状况，临床表现为入睡困难，睡眠不深，易惊醒，早醒，多梦，醒后疲乏，或缺乏清醒感，白天思睡等。失眠症是最常见的夜间睡眠障碍，作为一种原发或继发状态，其既是一种症状也是一种疾病。失眠可导致患者日间功能缺陷，生活质量显著降低；长期失眠往往会导致机体免疫力、记忆力下降，产生恐惧、焦虑等不良情绪，同时还容易诱发高血压、神经衰弱，甚至造成猝死。随着经济社会的快速发展，生活节奏的不断加快，失眠症发病率不断升高，失眠症的治疗越来越受到人们的重视。

[0003] 西医治疗失眠症的药物主要包括第一代巴比妥类、第二代苯二氮卓类以及第三代非苯二氮卓类，其中苯二氮卓类药物是目前临床上使用最广泛的催眠药。但西药治疗失眠有很大的局限性，治标不治本，长期服用容易导致精神运动损害、记忆障碍、药物成瘾及停药后病情易反复等不良反应，副作用大，临床应用受限。

[0004] 失眠在中医学称为“不寐”，又称“目不瞑”、“不得眠”等，中医认为，失眠的病因病机包括思虑劳倦、内伤心脾、阳不交阴、心肾不交、阴虚火旺、肝阳扰动、心胆气虚及胃中不和等各种因素，这些均可影响心神，而致不寐。其病位总是与脾肝心肾相关，涉及阴血不足；其病理变化总属阳盛阴衰、阴阳失交，虚实均有，但以虚证为多。虚证属阴血不足、心脑失其所养，表现为体质瘦弱、面色无华、神疲懒言、心悸健忘，多因脾失化源、肝失藏血、肾失藏精、脑海空虚所致。实证为火盛扰心或瘀血阻滞，表现为心烦易怒、口苦咽干、便秘溲赤、胸闷且痛，多由心火亢盛、肝郁化火、痰火郁滞、气血阻滞所致。

[0005] 总体上看，多数失眠是由于饮食不节损伤脾胃，使脾的运化功能减弱，酿成痰浊，蕴久化火，痰火互结，内扰心神情志所伤，肝郁化火，痰热内扰，阴虚火旺，心脾两虚，心胆气虚等所致。中医认为，失眠与五脏都有关联，以心、脾、肾为主，也与肝、肺有关，治疗上多以平衡阴阳、益气养血、健脾补肾、安神定志为主要原则。中药作为传统治疗手法之一，其以整体调理，辨证施治，标本兼治，疗效好，不良反应少的特点，在治疗失眠的临床运用中具有独特的优势。

[0006] 尽管目前临床上有很多用于预防或治疗失眠的中药方剂，但是这些方剂鱼龙混杂，且很多方剂仅是中医师根据经验确定的，并没有经过公认的药效学研究模型的检验，因此经常会导致疗效不佳等问题。此外，中药汤剂味重量大，还有可能对胃肠道产生刺激，以及携带不方便，导致患者用药依从性较差，使得患者难以坚持长期使用。

[0007] 有鉴于此，本发明以现代化药理学研究方法，通过对中医治疗失眠的经典名方进行深入研究和筛选，开发出一种能够有效预防或治疗失眠的中药组合物。

发明内容

[0008] 为了克服现有技术中服用西药安眠药治疗失眠只能缓解症状而不能治本，以及临床上已有的治疗失眠的中药方剂疗效不足且起效缓慢的问题，本发明提供了一种配制简便、成本低廉、疗效显著、无毒副作用的用于预防或治疗失眠的中药组合物。

[0009] 具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：

[0010] 在第一个方面中，本发明提供了一种用于预防或治疗失眠的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精5‑30份、灵芝5‑30份、山药10‑40份、芡实5‑30份、酸枣仁5‑30份、黑芝麻5‑30份。

[0011] 作为可选的方式，在上述中药组合物中，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精10‑25份、灵芝10‑25份、山药15‑35份、芡实10‑25份、酸枣仁10‑25份、黑芝麻10‑25份。

[0012] 作为可选的方式，在上述中药组合物中，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精20份、灵芝20份、山药30份、芡实20份、酸枣仁20份、黑芝麻20份。

[0013] 在第二个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的中药组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将黄精、灵芝、山药、芡实、酸枣仁、黑芝麻粉碎，加水进行煎煮，混合滤液，经浓缩制得浓缩液。

[0014] 作为可选的方式，在上述制备方法中，煎煮次数为两次，第一次煎煮1‑3小时后过滤得一次滤液，滤渣再加水煎煮1‑3小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液。

[0015] 作为可选的方式，在上述制备方法中，第一次煎煮和第二次煎煮的料液比均为1：4，第一次煎煮和第二次煎煮的煎煮时间均为1.5小时，第一次煎煮和第二次煎煮使用的水均为蒸馏水；优选地，所述浓缩为减压浓缩。

[0016] 在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的中药组合物或者采用上述第二个方面所述的制备方法制备得到的中药组合物在制备预防或治疗失眠的药物中的用途。

[0017] 作为可选的方式，在上述用途中，所述药物具有益气养血、健脾补肾的功效。

[0018] 作为可选的方式，在上述用途中，所述失眠是虚证型失眠。

[0019] 优选地，所述失眠是气血双虚型和/或脾肾两虚型失眠。

[0020] 作为可选的方式，在上述用途中，所述失眠是慢性失眠、顽固性失眠、原发性失眠、更年期失眠或老年性失眠。

[0021] 作为可选的方式，在上述用途中，所述药物改善失眠患者的精神状态、提高睡眠效率、减轻焦虑和紧张度。

[0022] 作为可选的方式，在上述用途中，所述药物提高脑内5‑HT和GABA这两类神经递质的含量，抑制下丘脑和脑干的促觉醒核团的扩散和传导。

[0023] 优选地，所述提高睡眠效率包括缩短入睡潜伏期和延长睡眠持续时间

[0024] 在第四个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的中药组合物或者采用上述第二个方面所述的制备方法制备得到的中药组合物在制备5‑HT和/或GABA促进剂中的用途。

[0025] 优选地，本发明提供了上述第一个方面所述的中药组合物或者采用上述第二个方面所述的制备方法制备得到的中药组合物在制备提高脑内5‑HT和GABA神经递质的含量的药物中的用途。

[0026] 本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

[0027] (1)本发明中药组合物具有益气养血、健脾补肾安神之功效，特别适用于预防或治疗由气血亏虚、脾肾两虚等虚证导致的失眠。

[0028] (2)实验结果表明本发明中药组合物能改善失眠大鼠的精神状态、恢复正常体质量和昼夜节律，提高睡眠效率，减轻焦虑和紧张度。通过进一步检测大鼠脑部皮质、海马及下丘脑与睡眠相关的中枢神经递质及其受体和激素等物质的表达发现，本发明中药组合物能升高5‑HT和GABA这两类神经递质的含量，抑制下丘脑和脑干的促觉醒核团的扩散及传导，从而起到助眠作用。

附图说明

[0029] 图1：本发明中药组合物对大鼠皮质组织病理学的影响(放大倍数：200X)。

[0030] 图2：本发明中药组合物对大鼠海马组织病理学的影响(放大倍数：200X)。

[0031] 图3：本发明中药组合物对大鼠下丘脑组织病理学的影响(放大倍数：200X)。

具体实施方式

[0032] 本发明所述中药组合物的方解分析如下所示：黄精、灵芝健脾益气、补肾安神；山药益气养阴，助黄精、灵芝健脾补肾；芡实健脾祛湿、益肾固精，使诸药相伍滋而不腻；酸枣仁养心阴，益肝血而宁心安神；黑芝麻益精养血，与酸枣仁合用可助黄精、灵芝补肾益精、养血安神。诸药合用，共奏益气养血、健脾补肾安神之功。

[0033] 下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。

[0034] 实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。

[0035] 下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。

[0036] 制备实施例：

[0037] 实施例1

[0038] 一种用于预防或治疗失眠的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精20g、灵芝20g、山药30g、芡实20g、酸枣仁20g、黑芝麻20g。

[0039] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0040] 将黄精、灵芝、山药、芡实、酸枣仁、黑芝麻粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0041] 实施例2

[0042] 一种用于预防或治疗失眠的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精22g、灵芝22g、山药20g、芡实22g、酸枣仁22g、黑芝麻22g。

[0043] 所述中药组合物的制备方法同实施例1。

[0044] 实施例3

[0045] 一种用于预防或治疗失眠的中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精19g、灵芝19g、山药35g、芡实19g、酸枣仁19g、黑芝麻19g。

[0046] 所述中药组合物的制备方法同实施例1。

[0047] 对比例1(主要有效成分与北京同仁堂的酸枣仁丸相同)

[0048] 一种中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精20g、茯苓20g、百合30g、桑葚20g、酸枣仁20g、黑芝麻20g。

[0049] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0050] 将黄精、茯苓、百合、桑葚、酸枣仁、黑芝麻粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0051] 对比例2

[0052] 一种中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精20g、茯苓20g、山药30g、芡实20g、酸枣仁20g、黑芝麻20g。

[0053] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0054] 将黄精、茯苓、山药、芡实、酸枣仁、黑芝麻粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0055] 对比例3

[0056] 一种中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精30g、灵芝20g、芡实20g、酸枣仁30g、黑芝麻30g。

[0057] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0058] 将黄精、灵芝、芡实、酸枣仁、黑芝麻粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0059] 对比例4

[0060] 一种中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：黄精40g、酸枣仁50g、黑芝麻40g。

[0061] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0062] 将黄精、酸枣仁、黑芝麻粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0063] 对比例5

[0064] 一种中药组合物，所述中药组合物由以下重量份数的中药制成：灵芝40g、山药50g、芡实40g。

[0065] 所述中药组合物的制备方法包括以下步骤：

[0066] 将灵芝、山药、芡实粉碎成细粉，加蒸馏水520mL进行煎煮，第一次煎煮1.5小时后过滤得一次滤液，滤渣再加蒸馏水520mL煎煮1.5小时，过滤得二次滤液，合并一次滤液和二次滤液，经减压浓缩制得浓缩液100mL。

[0067] 效果实施例：

[0068] 1.实验目的

[0069] 通过动物实验研究，探究本发明中药组合物改善失眠的作用效果，并验证其作用机制。

[0070] 2.实验材料

[0071] 2.1实验动物

[0072] 健康SD大鼠，雄性，SPF级，体质量200‑220g，购自北京维通利华公司。

[0073] 2.2主要试剂与仪器

[0074] 效果实施例中使用的各种中药饮片均由中国中医科学院西苑医院中药房提供。艾司唑仑片由北京中新制药厂生产。旷场反应箱，摄像头，天平、冰箱、液氮罐、制冰机、石蜡包埋系统、无水乙醇，戊巴比妥钠，生理盐水，多聚甲醛，TBS、TTC裂解液，过硫酸铵，离心管，镊子，眼科剪，手术剪刀，移液器，总RNA提取试剂盒购于北京天根生化科技有限公司(DP419)，2×SYBR Green定量PCR试剂盒购自(A4004S)，RIPA裂解液(P0013K)、BCA试剂盒(P0012S)购自北京碧云天生物科技有限公司等。

[0075] 3.实验方法

[0076] 3.1实验动物分组及给药

[0077] 将90只SD大鼠按随机数字表法分为9组，每组10只。随机分为正常对照组、模型组、艾司唑仑组、实施例1组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组和对比例5组。实施例1以及对比例1至对比例5的制备方法如上述制备实施例部分所示。各给药组均灌胃给药，‑1灌胃1次/日，大鼠造模成功后，连续灌胃给药7天，实施例1组给药量按10g原药材·kg 换算，给药量为13g/kg。对比例1组至对比例5组给药量与实施例1组相同。正常对照组与模型组灌服等体积生理盐水，灌胃1次/日，大鼠造模成功后，连续灌胃给药7天。艾司唑仑片按成人用药量，根据大鼠给药剂量体表面积公式计算出大鼠给药剂量为0.18mg/kg。

[0078] 3.2模型的建立与鉴定

[0079] 3.2.1建立失眠大鼠模型

[0080] 腹腔注射PCPA的方法复制失眠模型：于上午8：00‑9：00腹腔注射PCPA混悬液，每日1次，连续注射2天。PCPA是色氨酸羟化酶(TDH)的抑制剂，通过阻断5‑HT合成，导致大鼠脑内
5‑HT含量降低，从而使昼夜节律消失。

[0081] 3.2.2模型鉴定

[0082] 若大鼠昼夜节律紊乱、白天活跃、对外界声、光等刺激敏感性增加，兴奋性、攻击性提升，同时饮食、二便增多，便色呈灰白色，较空白组有明显差异，则证明造模成功。

[0083] 3.3戊巴比妥钠阈上剂量的确定

[0084] 雄性SD大鼠60只，随机分为6组，分别注射戊巴比妥钠剂量为20、25、30、35、40、45mg/kg组，每组10只。药物采用腹腔注射，注射体积为3mL，以注射药物后大鼠翻正反射消失30s以上作为大鼠的入睡标准，记录15min内大鼠的入睡只数。戊巴比妥钠阈上剂量指的是腹腔注射药物15min内全部大鼠入睡的最小剂量。

[0085] 3.4阈上剂量戊巴比妥钠协同催眠时间

[0086] 实验中以动物翻正反射消失达1min为入睡指标，以30s内翻转3次为睡眠结束指标，记录每鼠自翻正反射消失至恢复的时间作为睡眠时间。于造模后、治疗干预结束后，用确定的戊巴比妥钠阈剂量进行协同催眠试验，以睡眠潜伏期、睡眠时间等参数来判断模型复制情况以及治疗干预对大鼠戊巴比妥钠阈剂量协同睡眠的作用，从而判断治疗干预是否有诱导睡眠作用。

[0087] 3.5宏观体征评价

[0088] 动态观察大鼠造模前后的精神状态、皮毛色泽、睡眠、饮食饮水等行为变化，且9组大鼠分别于造模前后及干预结束后称量体重，并记录。

[0089] 3.6旷场试验(Open field test,OFT)

[0090] 旷场反应箱高30‑40cm，底边长100cm，内壁涂黑，底面平均分为25个4cm×4cm的小方格，正上方2m处架一数码摄像头，其视野可覆盖整个旷场内部。实验开始时首先将大鼠放入旷场箱中适应5min，再记录5min内大鼠的活动情况，每一只大鼠记录结束后用酒精将箱内消毒，以免实验受到干扰。采集数据，判断各组大鼠自发活动情况。各组大鼠在造模前、造模后、干预后于当日08:00后进行测试。

[0091] 3.7HE染色观察大脑皮质、下丘脑及海马组织病理状态

[0092] 所有动物行为学检测结束后，采用10％水合氯醛溶液进行腹腔注射麻醉，注射剂量为3mL/kg，腹主动脉取血后，每组取3只大鼠(对比例1组至对比例5组未进行涉及改善失眠作用机制的研究，以下实验相同)，迅速打开胸腔暴露心脏，剪破右心耳，将输液器针尖插入搏动的心尖，生理盐水灌注后，再用4％多聚甲醛溶液灌注，观察大鼠四肢，僵硬后停止灌注，断头取脑，置于4％多聚甲醛溶液中进行固定，常温保存。取4％多聚甲醛固定好的大脑皮质、下丘脑和海马组织，进行常规石蜡包埋，4μm切片后进行脱蜡，采用梯度乙醇逐级水洗，苏木精‑伊红染色液染色后脱水，并用中性树胶封片，于光镜下观察下丘脑、海马细胞的形态学变化。

[0093] 3.8ELISA检测大脑皮质、海马和下丘脑部位5‑HT和GABA蛋白表达

[0094] 每组取3只冷冻保存的大鼠大脑皮质、下丘脑及海马，分别加入裂解液并匀浆，4℃、12000r/min离心15min。使用核酸蛋白浓度测定仪测定上清中蛋白浓度，随后严格按照ELISA试剂盒说明书步骤操作，检测大鼠皮质、海马和下丘脑部位5‑HT和GABA蛋白的含量，在450nm波长处测定各孔的光密度(OD)值。

[0095] 3.9统计分析方法

[0096] 采用SPSS 24.0统计软件，所有实验均重复3次。计量资料以 ,多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD‑t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

[0097] 4.实验结果

[0098] 4.1本发明中药组合物对戊巴比妥钠阈上剂量诱导大鼠催眠作用的影响

[0099] 结果见表1。根据腹腔注射戊巴比妥钠15min内全部大鼠入睡的最小剂量确定戊巴比妥钠阈上剂量为40mg/kg。

[0100] 与正常对照组相比，模型组大鼠的睡眠潜伏期显著延长(P＜0.01)，而睡眠时间较少(P＜0.01)。

[0101] 与模型组相比，实施例1组和艾司唑仑组大鼠的睡眠潜伏期显著缩短(P＜0.01)，实施例1组大鼠的睡眠潜伏期的缩短情况优于阳性对照药艾司唑仑组。

[0102] 对于各对比例组而言，其在睡眠潜伏期和睡眠时间这两个指标上均明显不及实施例1组和阳性对照组。特别是对比例4和对比例5中分别仅涉及黄精、酸枣仁、黑芝麻以及灵芝、山药、芡实三味药的小组方对照组，尽管上述两个组方药物的总量与实施例1是相同的，但是其针对这两个指标的作用效果均较差，甚至与模型组接近，几乎没有作用，而将上述六味药合并形成实施例1之后，显著缩短了实验动物的睡眠潜伏期并显著延长了睡眠时间，取得了预料不到的技术效果。从对比例1组的结果可以看出，本发明中药组合物的效果显著优于使用已商品化的酸枣仁丸药味的对比例1组。另外，从对比例2至对比例3组的结果还可以看出，本发明中药组合物中各药味的种类及其用量配比与其治疗失眠的作用均具有非常密切的关系，因此减去和替换部分药味后均可能会降低本发明中药组合物的疗效。

[0103] 表1：本发明中药组合物对戊巴比妥钠阈上剂量诱导大鼠催眠作用的影响[0104]

[0105] 注：与对照组相比，###P＜0.01；与模型组相比，**P＜0.05，***P＜0.01。

[0106] 4.2本发明中药组合物对大鼠宏观体征的影响

[0107] 对照组大鼠精神状态良好，反应敏捷，毛色有光泽，饮食饮水、体质量正常。睡眠节律明显，表现为昼伏夜动。与对照组相比，模型组大鼠在注射PCPA 1周内即开始出现精神欠佳，毛色欠光泽，叫声尖细，且时而狂躁易怒，有攻击性，直立对峙、撕咬次数增多，昼夜节律消失，进食减少，体质量明显降低(P＜0.01)。

[0108] 与模型组相比，实施例1组和阳性药组大鼠对峙、撕咬次数减少，清洁行为基本灵活，叫声柔和，毛发有光泽，饮食量增加，昼夜节律基本恢复，体质量持续升高(P＜0.05，P＜0.01)。上述结果表明，本发明中药组合物能有效调节失眠大鼠的精神状态和行为表现，提高其体质量。见表2。

[0109] 对于各对比例组而言，其在治疗后体重指标上均明显不及实施例1组。特别是对比例4和对比例5中分别仅涉及黄精、酸枣仁、黑芝麻以及灵芝、山药、芡实三味药的小组方对照组，尽管上述两个组方药物的总量与实施例1是相同的，但是其针对治疗后体重指标的作用效果均较差，甚至与模型组接近，几乎没有作用，而将上述六味药合并形成实施例1之后，显著增加了大鼠的治疗后体重，取得了预料不到的技术效果。从对比例1组的结果可以看出，本发明中药组合物的效果显著优于使用已商品化的酸枣仁丸药味的对比例1组。另外，从对比例2至对比例3组的结果还可以看出，本发明中药组合物中各药味的种类及其用量配比与其治疗失眠的作用均具有非常密切的关系，因此减去和替换部分药味后均可能会降低本发明中药组合物的疗效。

[0110] 表2：本发明中药组合物对大鼠体重的影响

[0111]

[0112] 注：与对照组相比，###P＜0.01；与模型组相比，**P＜0.05，***P＜0.01。

[0113] 4.3本发明中药组合物对大鼠旷场总活动距离、平均速度及中心区域停留时间的影响

[0114] 如表3所示，与对照组相比，模型组大鼠的总活动距离增加，平均速度和中心区域停留时间减少(P＜0.05)；与模型组相比，实施例1组和艾司唑仑组大鼠的总活动距离显著减少(P＜0.05)，实施例1组的中心区域停留时间显著延长(P＜0.05)，说明实施例1和艾司唑仑都能在一定程度上改善失眠大鼠的兴奋性和紧张度。

[0115] 对于各对比例组而言，对比例4和对比例5中分别仅涉及黄精、酸枣仁、黑芝麻以及灵芝、山药、芡实三味药的小组方对照组，尽管上述两个组方药物的总量与实施例1是相同的，但是其针对总活动距离、平均速度和中心区域停留时间指标的作用效果均较差，平均速度和中心区域停留时间指标甚至与模型组接近，几乎没有作用，而将上述六味药合并形成实施例1之后，显著减少了总活动距离、提高了平均速度并且显著增加了中心区域停留时间，取得了预料不到的技术效果。从对比例1组的结果可以看出，本发明中药组合物的效果显著优于使用已商品化的酸枣仁丸药味的对比例1组。另外，从对比例2至对比例3组的结果还可以看出，本发明中药组合物中各药味的种类及其用量配比与其治疗失眠的作用均具有非常密切的关系，因此减去和替换部分药味后均可能会降低本发明中药组合物的疗效。

[0116] 表3：本发明中药组合物对大鼠旷场总活动距离、平均速度及中心区域停留时间的影响

[0117]

[0118] 注：与对照组相比，##P＜0.05；与模型组相比，**P＜0.05。

[0119] 4.4本发明中药组合物对大鼠皮质、海马及下丘脑组织病理学的影响

[0120] 4.4.1对大鼠皮质组织病理学的影响

[0121] 图1HE染色显示对照组大鼠皮质神经元形态结构完整、排布紧密整齐，层次清晰，细胞核染色均匀、核膜完整、核仁清晰可见。与对照组相比，模型组的皮质神经元数量明显减少，部分细胞内有空泡变性，且细胞排列紊乱疏松，边界不清，核仁小，染色深，细胞分裂静止期核仁固缩。与模型组相比，实施例1组以及艾司唑仑组的皮质神经元形态、数量接近正常，大小均匀，胞浆内尼氏体着色均匀，细胞空泡变性和细胞核固缩变形现象减轻。

[0122] 4.4.2对大鼠海马组织病理学的影响

[0123] 如图2所示，对照组海马椎体神经元排列整齐，紧密有序、形态规整，细胞核明显。与对照组相比，模型组的海马神经元排列紊乱，稀松无序，胞体增大，存在神经元丢失和胞核皱缩、深染的现象。与模型组相比，实施例1和艾司唑仑组椎体神经元数量增加，排列紧密整齐，胞核较清晰、皱缩现象减轻。

[0124] 4.4.3对大鼠下丘脑组织病理学的影响

[0125] 如图3所示，对照组大鼠下丘脑神经元清晰完整、排列均匀，且胞浆丰富、淡染，无空泡样现象，细胞核居中、核仁明显。与对照组相比，模型组大鼠的下丘脑神经元变形严重，大量细胞呈空泡现象，排列紊乱疏松，细胞界限模糊，细胞核皱缩严重。与模型组相比，实施例1组和艾司唑仑组神经元形态结构基本恢复正常，细胞排列较整齐，细胞内空泡现象明显减少。

[0126] 4.5本发明中药组合物对大鼠皮质、海马和下丘脑部位5‑HT和GABA蛋白表达的影响

[0127] 通过ELISA检测发现，与对照组相比，模型组大鼠大脑皮质和下丘脑的5‑HT和GABA蛋白表达量显著降低(P＜0.01，P＜0.05)，海马组织的GABA蛋白表达量亦显著降低(P＜0.01)。

[0128] 与模型组相比，实施例1组大脑皮质GABA和下丘脑GABA、5‑HT的蛋白表达量均显著升高(P＜0.01)。艾司唑仑组大鼠大脑皮质和海马部位的GABA以及下丘脑的GABA和5‑HT蛋白表达量均显著升高(P＜0.01)，且艾司唑仑组海马的5‑HT表达量亦较模型组明显升高(P＜0.05)。结果见表4。

[0129] 表4：本发明中药组合物对大鼠皮质、海马和下丘脑5‑HT和GABA蛋白表达的影响[0130]

[0131] 注：与对照组相比，##P＜0.05，###P＜0.01；与模型组相比，**P＜0.05，***P＜0.01。

[0132] 5实验结论

[0133] 本研究结果表明本发明中药组合物能改善失眠大鼠的精神状态、恢复正常体质量和昼夜节律，提高睡眠效率(包括缩短入睡潜伏期和延长睡眠持续时间)，减轻焦虑和紧张度。

[0134] 此外，通过进一步检测大鼠脑部皮质、海马及下丘脑与睡眠相关的中枢神经递质及其受体和激素等物质的表达发现，本发明中药组合物能升高5‑HT和GABA这两类神经递质的含量，抑制下丘脑和脑干的促觉醒核团的扩散及传导，从而起到助眠作用。

[0135] 显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。