一种荷叶碱的绿色制备方法

摘要

本发明提供了一种高纯度荷叶碱的绿色制备方法，包括以下步骤：1）取荷叶粉末，加氨水和D‑柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于固相萃取（SPE）柱上（内含介孔材料SBA‑15），加乙酸乙酯进行洗脱，合并成分相似的洗脱液，即得SPE提取物。2）取SPE提取物，加等体积的10 mM盐酸溶液调节pH值，涡旋、离心分取水层，加适量100 mM氢氧化钠溶液调节pH值，加乙酸乙酯进行液液萃取（LLE），萃取液减压浓缩至干，即得LLE提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得高纯度荷叶碱。本发明与其他方法相比，具有高效、低耗、环境友好等优点，适合于荷叶碱的绿色生产。

权利要求

1.一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：

1）取荷叶粉末，加氨水和D‑柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于内含介孔材料SBA‑15的固相萃取柱上，加乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得提取物；

2）取步骤1）提取物，加等体积的10 mM盐酸溶液调节pH值，涡旋、离心分取水层，加适量

100 mM氢氧化钠溶液调节pH值，加乙酸乙酯进行液液萃取，萃取液减压浓缩至干，即得提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得荷叶碱纯品。

2.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用氨水的浓度为5% 25%。

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3. 根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用氨水与荷叶粉末的体积与重量比例为2/1 5/1 ml/g。

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4. 根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用D‑柠檬烯与荷叶粉末的体积与重量比例为5/1 50/1 ml/g。

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5. 根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤1）所用涡旋辅助提取的时间为1 6 min，热回流辅助提取的时间为1 30 min。

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6. 根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用100 mM氢氧化钠溶液与步骤1）提取物的体积比为0.4/1 1/1。

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7.根据权利要求1所述的一种荷叶碱的绿色制备方法，其特征在于：所述的步骤2）所用乙酸乙酯与步骤1）提取物的体积比为1/1 3/1。

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说明书

一种荷叶碱的绿色制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物提取技术领域，具体是一种荷叶碱的绿色制备方法。

背景技术

[0002] 荷叶碱是来源于睡莲科植物莲干燥叶中的一种阿朴啡类生物碱，也是《中国药典》收载荷叶这味中药的质控成分。现代研究表明，荷叶碱具有降脂、降糖、抗肿瘤、抗脑缺血等多种药理作用，具有广阔的开发前景。但荷叶碱自身存在水溶性差、药物安全性数据缺失、生物利用度争议较大等成药性缺陷，需要深入研究，才有望被开发成新药。因此，需要大量的荷叶碱纯品用于各项研究。目前荷叶碱主要依赖于植物提取，已有几篇文献报道荷叶碱提取及分离方法，如，李杨等采用酸性水溶液提取、强酸性苯乙烯系阳离子树脂吸附和硅胶柱层析分离方法，制得纯度为94.2%的荷叶碱；林木仙等采用FD阳离子交换树脂吸附、石油醚萃取和结晶方法，制得纯度为95.4%的荷叶碱；卢照凯（申请号CN201510639598.3）采用乙醇提取和AB‑8大孔树脂纯化等方法，制得纯度大于98%的荷叶碱；Zheng Chengchao和陈波等分别采用pH区带逆流和制备高效液相色谱法从荷叶中分离荷叶碱。发明申请人（申请号CN202210172526.2）公开了一种高纯度荷叶碱的制备方法，即以石油醚为提取溶剂，以硅胶为固相萃取吸附剂，采用超声辅助提取结合固相萃取的方法，从荷叶中提取和初步纯化荷叶碱，然后采用pH依赖的液液萃取方法，进一步富集荷叶碱，最后采用结晶方法得到高纯度的荷叶碱。虽然该方法具有诸多优点，如能耗低、得率高等，但由于使用了石油醚（石油来源的溶剂），因此需要对其进行绿色化改造。

发明内容

[0003] 为了解决上述技术问题，本发明提供了一种荷叶碱的绿色制备方法。

[0004] 本发明的技术方案如下：

[0005] 一种荷叶碱的绿色制备方法，包括以下工艺步骤：

[0006] 1）取荷叶粉末，加氨水和D‑柠檬烯适量，涡旋或热回流辅助提取，离心取上清液，置于固相萃取（SPE）柱上（内含介孔材料SBA‑15），加乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得提取物；

[0007] 2）取步骤1）提取物，加等体积的10 mM盐酸溶液调节pH值，涡旋、离心分取水层，加适量100 mM氢氧化钠溶液调节pH值，加乙酸乙酯进行液液萃取（LLE），萃取液减压浓缩至干，即得提取物，加乙酸乙酯进行结晶，即得荷叶碱纯品。

[0008] 优选的，所述的步骤1）所用氨水的浓度为5% 25%。~

[0009] 优选的，所述的步骤1）所用氨水与荷叶粉末的比例为2/1 5/1（v/w）。~

[0010] 优选的，所述的步骤1）所用D‑柠檬烯与荷叶粉末的比例为5/1 50/1（v/w）。~

[0011] 优选的，所述的步骤1）所用涡旋辅助提取的时间为1 6 min，热回流辅助提取的时~间为1 30 min。
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[0012] 优选的，所述的步骤2）所用100 mM氢氧化钠溶液与步骤1）提取物的体积比为0.4/1 1/1。
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[0013] 优选的，所述的步骤2）所用乙酸乙酯与步骤1）提取物的体积比为1/1 3/1。~

[0014] 本发明的有益效果如下：本发明以绿色溶剂D‑柠檬烯和乙酸乙酯分别代替提取和液液萃取工艺中的石油醚，以SBA‑15代替硅胶，以适应提取溶剂替换带来的溶剂极性变化。与已有的制备方法相比，本方法具有更好的环保表现。

具体实施方式

[0015] 下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限如此。

[0016] 实施例1

[0017] 1）取荷叶粉末60 g，加5%氨水300 mL，加600 mL的D‑柠檬烯，热回流辅助提取4 min，4,400 rpm离心10 min，分取D‑柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有10 g SBA‑15，孔径6‑11 nm），加200 mL乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得SPE提取物；

[0018] 2）取上述SPE提取物，加入0.01 M盐酸溶液200 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mM氢氧化钠溶液100 mL和乙酸乙酯400 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 MPa，40 ℃），即得LLE提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 MPa，40 ℃），即得荷叶碱纯品（纯度95.9%，得率58.1%）。

[0019] 实施例2

[0020] 1）取荷叶粉末30 g，加10%氨水150 mL，加300 mL的D‑柠檬烯，涡旋辅助提取两次，每次4 min，4,400 rpm离心10 min，分取并合并D‑柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有5 g SBA‑15），加100 mL乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得SPE提取物；

[0021] 2）取上述SPE提取物，加入0.01 M盐酸溶液100 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mM氢氧化钠溶液100 mL和乙酸乙酯200 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 MPa，40 ℃），即得LLE提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 MPa，40 ℃），即得荷叶碱纯品（纯度95.7%，得率57.1%）。

[0022] 实施例3

[0023] 1）取荷叶粉末75 g，加25%氨水225 mL，加750 mL的D‑柠檬烯，热回流辅助提取15 min，4,400 rpm离心10 min，分取D‑柠檬烯层，置于固相萃取柱上（装有15 g SBA‑15），加300 mL乙酸乙酯进行洗脱，合并洗脱液，即得SPE提取物；

[0024] 2）取上述SPE提取物，加入0.01 M盐酸溶液300 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取水层，加100 mM氢氧化钠溶液300 mL和乙酸乙酯900 mL，涡旋（2,000 rpm）1 min，离心（4,400 rpm）10 min，分取乙酸乙酯层，减压浓缩至干（10.1 MPa，40 ℃），即得LLE提取物，加乙酸乙酯适量，加热使溶解，放置至室温进行结晶，所得晶体，减压干燥（10.1 MPa，40 ℃），即得高纯度荷叶碱（纯度96.1%，得率58.9%）。

[0025] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本发明的保护范围之内。