治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其检测方法

摘要

本发明涉及治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其检测方法。具体的，本发明涉及检测药物组合物质量的方法，所述药物组合物包含：噻托溴铵或其水合物10～40μg、阿福特罗或其盐类5～30μg、乳糖5～40mg，该方法使用HPLC法对药物组合物中的噻托溴铵或其水合物、阿福特罗或其盐类二者的含量同时进行测定，操作如下：配制缓冲液、流动相、标准储备液、标准溶液、供试品溶液等试液；提供液相色谱条件；在液相色谱仪中测定噻托溴铵和阿福特罗的含量。本发明的药物组合物能够有效地治疗慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘等呼吸系统疾病。

权利要求

1.检测药物组合物质量的方法，所述药物组合物包含：噻托溴铵或其水合物10 40μg、~阿福特罗或其盐类5 30μg、乳糖5 40mg，该方法使用HPLC法对药物组合物中的噻托溴铵或~ ~其水合物、阿福特罗或其盐类二者的含量同时进行测定，操作如下：(1)配制试液：

10%磷酸：取磷酸2mL，加入15mL纯化水混合均匀；

缓冲液：精密称定无水磷酸二氢钠1.38g、癸烷磺酸钠1.22g，加1L纯化水溶解，缓慢滴加10%磷酸调节pH至3.0，过滤；

流动相：精密量取520mL乙腈和480mL缓冲液，混匀；

酒石酸阿福特罗标准储备液：精密称定酒石酸阿福特罗标准品22mg至250mL棕色容量瓶中，用增补添加0.1 0.15%w/v二异丙胺和0.15 0.2%w/v乙二醇的流动相溶解，并稀释至~ ~刻度，摇匀；

噻托溴铵标准储备液：精密称定噻托溴铵标准品20mg至100mL棕色容量瓶中，用增补添加0.1 0.15%w/v二异丙胺和0.15 0.2%w/v乙二醇的流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀；

~ ~

标准溶液：移取一定体积的二种标准储备液至同一容量瓶中，同法用增补添加0.1~

0.15%w/v二异丙胺和0.15 0.2%w/v乙二醇的流动相稀释制得；

~

供试品溶液：精密称取药物组合物供试品25mg置20ml量瓶中，加增补添加0.1 0.15%w/~v二异丙胺和0.15 0.2%w/v乙二醇的流动相溶解并稀释至刻度，混匀，用0.22µm微孔滤膜过~滤，得供试品溶液；

(2)液相色谱条件：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，

柱温45℃，检测波长225nm，进样量50μL，流速1.7mL/min；

理论塔板数以噻托铵峰计不低于3000，噻托铵与阿福特罗的分离度不小于1.5；

(3)测定：分别将供试品溶液或标准溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，使用外标法以峰面积计算供试品中各活性药物的含量。

2.根据权利要求1的方法，其中所述噻托溴铵水合物是其一水合物。

3.根据权利要求1的方法，其中所述阿福特罗的盐类选自：酒石酸盐、马来酸盐、硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、醋酸盐、富马酸盐和柠檬酸盐。

4.根据权利要求1的方法，其中所述药物组合物中包含噻托溴铵一水合物、酒石酸阿福特罗、乳糖，三者的重量比为：15 35μg：7.5 25μg：7.5 30mg。

~ ~ ~

5.根据权利要求1的方法，其中所述药物组合物中包含噻托溴铵一水合物、酒石酸阿福特罗、乳糖，三者的重量比为：20 30μg：10 20μg：10 20mg。

~ ~ ~

6.根据权利要求1的方法，其中所述药物组合物中包含噻托溴铵一水合物、酒石酸阿福特罗、乳糖，三者的重量比为：25μg：15μg：12mg。

7.根据权利要求1的方法，其中色谱柱的规格为150mm×4.6mm，3μm。

8.根据权利要求1的方法，其中用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1%w/v二异丙胺和0.15%w/v乙二醇。

9.根据权利要求1的方法，其中用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.15%w/v二异丙胺和0.2%w/v乙二醇。

说明书

治疗呼吸系统疾病的药物组合物及其检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及一种药物组合物用于治疗呼吸系统疾病的药物组合物，该药物组合物的制备方法以及它们的质量检测方法。所述药物组合物尤其是包含噻托溴铵(Tiotropium bromide)、阿福特罗(例如酒石酸阿福特罗即Arformoterol Tartrate)二者以及任选的药用载体，以用于治疗慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘等呼吸系统疾病。

背景技术

[0002] 慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Diseases，COPD)是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，可进一步发展为肺心病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。由于大气污染及吸烟人数增加等因素，COPD的发病率和死亡率有逐渐增加的趋势。

[0003] 支气管哮喘(简称哮喘)是一种慢性气道疾病，它表现为气道炎症，黏液分泌增多以及气道高反应性。Th2细胞，嗜酸性粒细胞，巨嗜细胞，嗜中性粒细胞以及其他一些炎症因子，趋化因子等共同参与了过敏性哮喘的炎症应答。

[0004] 部分COPD或哮喘患者对单药无效，需联合不同类型的药物治疗。长效β2‑受体激动剂(LABA)、长效抗胆碱能药物(LAMA)和吸入糖皮质激素(ICS)是治疗COPD和哮喘的主要药物。慢性阻塞性肺疾病全球倡议(global initiative forchronic obstructive lung disease，GOLD)已有证据表明，与单药相比，二联疗法可更好地改善肺功能、症状、健康相关生活质量，并进一步降低急性加重风险。

[0005] 吸入制剂为药械组合型制剂，在长期坚持规范用药的同时，吸入装置的规范操作也同等重要。本领域仍然需要有由噻托溴铵、阿福特罗二者制成的二联制剂。

[0006] 众所周知，二种药物联用时患者需学习不同吸入器的使用，患者用药依从性较差。本发明人的在先申请案CN111481550A(中国专利申请号202010406777.3)公开了上述二种药物混合配制的药物组合物，可以有利地实现二药联用时的依从性问题。该发明提供的药物组合物制剂包括抗胆碱能药物噻托铵盐类或其水合物、β2‑受体激动剂阿福特罗或其盐类；噻托溴铵作用于支气管平滑肌上的毒蕈碱受体，可抑制副交感神经末端所释放的乙酰胆碱的胆碱能作用，阻断肌紧张；阿福特罗作用于气道平滑肌细胞膜上的β2‑受体，减少肥大细胞和嗜碱细胞脱颗粒和介质的释放、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动；
二种药物联用时二种机制共同发挥舒张支气管作用和抗炎效果；在减少慢阻肺患者急性加重，降低全因死亡率，改善慢阻肺患者肺功能和提升生活质量等重要临床指标上，二联疗法使用的适应症范围更宽。

[0007] 然而，本领域技术人员仍然迫切需要对现有技术进行改进。

发明内容

[0008] 本发明属于医药技术领域，涉及一种药物组合物用于治疗呼吸系统疾病的药物组合物，该药物组合物的制备方法以及它们的质量检测方法。所述药物组合物尤其是包含噻托溴铵(Tiotropium bromide)、阿福特罗(例如酒石酸阿福特罗即Arformoterol Tartrate)二者以及任选的药用载体，以用于治疗慢性阻塞性肺疾病、支气管哮喘等呼吸系统疾病。已经出人意料的发现，本发明组合物和/或其相关方法呈现如说明书所述优良技术效果，本发明基于此类发现而得以完成。

[0009] 为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其包含：抗胆碱能药物、和β2‑受体激动剂。

[0010] 在本发明第一方面所述药物组合物的一个实施方案中，所述抗胆碱能药物包括噻托铵盐类或其水合物，一次给药范围为2.5‑200μg，例如为5‑100μg，例如为10‑50μg，噻托铵盐类的结构如化合物(I)所示：

[0011]

[0012] 其中，X‑为药物可接受的阴离子，其选自氯离子、溴离子、碘离子、氢氧根、硫酸根、硝酸根、磷酸根、乙酸根、三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃酸根、甲磺酸根和对甲苯磺酸根，优选为溴离子。优选的，抗胆碱能药物是噻托溴铵。

[0013] 在本发明第一方面所述药物组合物的一个实施方案中，所述β2‑受体激动剂包括阿福特罗或其盐类，一次给药范围为2‑200μg，例如为2.5‑100μg，例如为5‑50μg，阿福特罗的结构如化合物(II)所示：

[0014]

[0015] 在本发明第一方面所述药物组合物的一个实施方案中，所述阿福特罗的盐类选自酒石酸盐、马来酸盐、硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、醋酸盐、富马酸盐和柠檬酸盐。优选的，β2‑受体激动剂是酒石酸阿福特罗。

[0016] 在本发明中，阿福特罗是长效β2‑受体激动剂，通过兴奋气道平滑肌和肥大细胞膜表面的β2‑受体，从而舒张气道平滑肌、减少肥大细胞和嗜碱细胞脱颗粒和介质的释放、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动。

[0017] 在本发明中，噻托溴铵是一种长效抗胆碱能药物，通过和支气管平滑肌上的毒蕈碱受体结合，可抑制副交感神经末端所释放的乙酰胆碱的胆碱能(支气管收缩)作用，并可持续24h以上。噻托溴铵在吸入给药时是局部(支气管)选择性的，由此可达到治疗效果而不至于产生全身抗胆碱能作用。其支气管扩张作用基本上是局部性(气道)作用，而非全身性作用。

[0018] 在本发明中，优选地，化合物(I)和化合物(II)以适于依次给药的形式提供。

[0019] 在本发明中，优选地，化合物(I)和化合物(II)以适于同时给药的形式提供。

[0020] 在本发明中，优选地，化合物(I)和化合物(II)至少一种是用可药用载体或赋形剂配制的。

[0021] 进一步的，本发明第二方面提供了对药物组合物进行质量检测的方法，所述药物组合物包含：抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂以及任选的药用辅料。

[0022] 根据本发明第二方面的方法，其中所述抗胆碱能药物是噻托铵盐类或其水合物例如一水合物。

[0023] 根据本发明第二方面的方法，其中所述抗胆碱能药物是噻托铵盐类或其水合物例如一水合物，其一次给药范围为2.5‑200μg，例如为5‑100μg，例如为10‑50μg。

[0024] 根据本发明第二方面的方法，其中所述噻托铵盐类为噻托铵与选自下列阴离子形成的盐：氯离子、溴离子、碘离子、氢氧根、硫酸根、硝酸根、磷酸根、乙酸根、三氟乙酸根、富马酸根、柠檬酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、扁桃酸根、甲磺酸根和对甲苯磺酸根，优选为溴离子。根据本发明第二方面的方法，其中所述噻托铵盐类是噻托溴铵。

[0025] 根据本发明第二方面的方法，其中所述β2‑受体激动剂是阿福特罗或其盐类。

[0026] 根据本发明第二方面的方法，其中所述β2‑受体激动剂是阿福特罗或其盐类，其一次给药范围为2‑200μg，例如为2.5‑100μg，例如为5‑50μg。

[0027] 根据本发明第二方面的方法，其中所述阿福特罗的盐类选自：酒石酸盐、马来酸盐、硫酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、醋酸盐、富马酸盐和柠檬酸盐。根据本发明第二方面的方法，其中所述阿福特罗的盐类是酒石酸阿福特罗。

[0028] 根据本发明第二方面的方法，其中抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂二者以适于依次给药的形式提供。

[0029] 根据本发明第二方面的方法，其中抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂二者以适于同时给药的形式提供。

[0030] 根据本发明第二方面的方法，其中所述药用辅料是乳糖。

[0031] 根据本发明第二方面的方法，其中所述药物组合物中的抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂、乳糖三者的重量比为：10～40μg：5～30μg：5～40mg。

[0032] 根据本发明第二方面的方法，其中所述药物组合物中的抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂、乳糖三者的重量比为：15～35μg：7.5～25μg：7.5～30mg。

[0033] 根据本发明第二方面的方法，其中所述药物组合物中的抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂、乳糖三者的重量比为：20～30μg：10～20μg：10～20mg。

[0034] 根据本发明第二方面的方法，其中所述药物组合物中的抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂、乳糖三者的重量比为：25μg：15μg：12mg。

[0035] 根据本发明第二方面的方法，其是使用HPLC法对所述药物组合物中的抗胆碱能药物、β2‑受体激动剂二者的含量同时进行测定，操作如下：

[0036] (1)配制试液：

[0037] 10％磷酸：取磷酸2mL，加入15mL纯化水混合均匀；

[0038] 缓冲液：精密称定无水磷酸二氢钠1.38g、癸烷磺酸钠1.22g，加1L纯化水溶解，缓慢滴加10％磷酸调节pH至3.0，过滤；

[0039] 流动相：精密量取520mL乙腈和480mL缓冲液，混匀；

[0040] 酒石酸阿福特罗标准储备液：精密称定酒石酸阿福特罗标准品22mg至250mL棕色容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀；

[0041] 噻托溴铵标准储备液：精密称定噻托溴铵标准品20mg至100mL棕色容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀；

[0042] 标准溶液：移取一定体积的二种标准储备液至同一容量瓶中，同法用流动相稀释制得；

[0043] 供试品溶液：精密称取药物组合物供试品25mg置20ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，混匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液；

[0044] (2)液相色谱条件：

[0045] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(例如柱规格为150mm×4.6mm，3μm)，[0046] 柱温45℃，检测波长225nm，进样量50μL，流速1.7mL/min；

[0047] 理论塔板数以噻托铵峰计不低于3000，噻托铵与阿福特罗的分离度不小于1.5；

[0048] (3)测定：分别将供试品溶液或标准溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，使用外标法以峰面积计算供试品中各活性药物的含量。

[0049] 根据本发明第二方面的方法，其中用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1～0.15％(w/v)二异丙胺和0.15～0.2％(w/v)乙二醇。

[0050] 根据本发明第二方面的方法，其中用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1％(w/v)二异丙胺和0.15％(w/v)乙二醇。

[0051] 根据本发明第二方面的方法，其中用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.15％(w/v)二异丙胺和0.2％(w/v)乙二醇。

[0052] 根据本发明第二方面的方法，其中在制备标准溶液时，精密移取二种标准储备液各2mL至同一250mL棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

[0053] 根据本发明第二方面的方法，其中在制备标准溶液时，精密移取二种标准储备液各3mL至同一100mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

[0054] 根据本发明第二方面的方法，其中在制备标准溶液时，精密移取上述酒石酸阿福特罗标准储备液4mL、噻托溴铵标准储备液3mL至同一250mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

[0055] 发明详述

[0056] 本发明提供了一种药物组合物制剂，涉及一种长效抗胆碱能药物、长效β2‑受体激动剂的药物组合物，具体活性成分由噻托溴铵、阿福特罗组成，尤其是由噻托溴铵、酒石酸阿福特罗组成。

[0057] 本发明提及的各种文献，其全部内容通过引用并入本文。

[0058] (1)药物组合物的制备

[0059] 本发明人的在先申请案CN111481550A(中国专利申请号202010406777.3)公开了上述二种药物混合配制的药物组合物，可以有利地实现二药联用时的依从性问题。在该CN111467498A的实施例1中，提供了制备药物组合物的典型实例。

[0060] (2)给药方式

[0061] 在公开号为CN107412229A(201710221222.X)的专利“毒蕈碱受体拮抗剂和β2‑肾上腺素受体激动剂的组合”中记载：所述药物组合产品的各个化合物可以在分隔或合并的药物制剂/组合物中依次或同时给药。因此，化合物(I)和化合物(II)可以独立配制，并且在独立的包装或装置中提供，或者，独立配制的组分可以在单一的包装或装置中提供。如果合适的话，各个化合物可以在同一制剂内混合，并且作为固定的药物组合提供。通常，这样的制剂包括如下文中所描述的药物载体或添加剂，但是不含任何载体或添加剂的化合物的组合也在本发明的范围内。

[0062] 在另外的方面，本发明由此提供了：

[0063] 包含用于依次或同时给药的独立提供的化合物(I)和化合物(II)的药物组合产品。

[0064] 包含用于依次或同时给药，独立提供但是保持于同一包装或装置中的化合物(I)和化合物(II)的药物组合产品。

[0065] 和包含用于同时给药的彼此混合的化合物(I)和化合物(II)的药物组合产品。

[0066] (3)药物制剂

[0067] 药物组合物中抗胆碱能药物噻托铵盐类或其水合物的给药范围为2.5‑200μg；β2‑受体激动剂阿福特罗或其盐类的给药范围为4‑200μg。为使得活性物质有效到达肺部，需对活性物质进行粒度控制，最佳粒度通常为1‑10μm，优选为1‑5μm。一般通过原料药微粉化粉碎工艺实现。微粉化常用设备包括气流粉碎机、高速球磨仪、行星式球磨仪、盘式研磨仪等，这些设备可以通过气流、搅拌桨、研磨棒、研磨球、容器壁等带动容器内的颗粒相互碰撞、挤压、摩擦将疏松的活性成分打散成可吸入大小的粒子。气流粉碎最为常用，一般采用大于0.2MPa的粉碎压力，以气流带动颗粒高速运动使颗粒间相互碰撞达到减少颗粒尺寸的效果。

[0068] 本发明提供的噻托溴铵、阿福特罗药物组合的吸入制剂，包括吸入气雾剂、吸入粉雾剂和吸入雾化液。组合物可以通过制药领域众所周知的任何方法来制备。通常，所述方法包括将活性组分与构成一种或多种辅助组分的载体混合。组合物一般是这样制得的：将活性组分与液体载体或\和细分散的固体载体均匀且充分地混合制成，必要时可将产品成形得所需组合物，如形成聚集粒子。

[0069] 当组合物的活性成分为气雾给药时，可以混悬或溶解于抛射剂混合物中，可使用的抛射剂包括氢氟烷(优选HFA227和HFA134A、R‑152A)、二氧化碳、氮气、丙烷、异丁烷，其中每种抛射剂可以单独或与其它抛射剂混合地在组合物中使用。在该制剂中，优选抛射剂为FA134和或HFA227；更优选为HFA‑134A与HFA‑227混合物，其中HFA‑134A与HFA‑227混合物的密度与组合物悬浮的颗粒密度相同或相近：还可以加入无水乙醇、异丙醇、丙二醇等分散剂及油酸、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷酯、吐温等表面活性剂。

[0070] 当组合物的活性成分为吸入液体给药(即吸入雾化液)时，可选的溶剂为水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油等或其中的一种或几种溶剂，也可加入聚乙烯吡咯烷酮、油酸、油酸乙脂、卵磷酯、脱水山梨醇脂肪酸酯如吐温等表面活性剂，还可加入葡萄糖、氯化钠等渗透压调节剂或EDTA螯化钠等pH调节剂。

[0071] 当组合物的活性成分为吸入粉雾给药时，化合物(I)和化合物(II)分别可以采用或不采用药物载体或添加剂来配制。

[0072] 粉雾剂常用载体有单糖、二糖或多糖，如乳糖、葡聚糖、甘露糖醇、葡萄糖、阿拉伯糖、果糖、核糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖或淀粉。优选使用乳糖。乳糖可以是无水乳糖或α‑乳糖一水合物。除了活性组分和载体之外，粉雾剂还可以包含另外的添加剂，例如细乳糖、硬脂酸镁、硬脂酸钙、亮氨酸、乙酰半胱氨酸、甘氨酸、磷脂、微粉硅胶和聚乙二醇。或者，活性组分可以不用载体或添加剂来提供。

[0073] (4)吸入装置

[0074] 在公开号为CN107412229A的专利“毒蕈碱受体拮抗剂和β2‑肾上腺素受体激动剂的组合”中记载：适于吸入给药的组合物可以置于多个密封的剂量容器内，所述剂量容器在安放于合适的吸入容器内的药物包装上提供。如本领域已知的，所述容器可以是可撕裂、可剥离或其他可打开的一次一个型容器，并且干粉组合物的剂量在吸入装置的吸入口上通过吸入给药。药物包装可以呈多种不同形式，例如圆盘形或长条形。代表性吸入装置是DISKHALERTM、DISKUSTM装置，由GlaxoSmithKline销售，DISKUSTM吸入装置描述在例如GB2242134A中。

[0075] 干粉吸入组合物还可以作为填充贮库在吸入装置中提供，给所述装置提供计量机械以从贮库中计量出一定剂量的组合物提供给吸入通道，在吸入通道中，计量的剂量能够被患者在装置的吸入口上吸入。这种类型的示例性市售装置有AstraZeneca的TURBUHALERTM，Schering的TWISTHALERTM和Innovata的CLICKHALERTM。

[0076] 用于递送干粉可吸入组合物的另外的递送方法是将计量剂量的组合物在胶囊中提供(一粒胶囊一个剂量)，将胶囊放置在吸入装置内，通常由患者在需要时将胶囊放置在吸入装置内。装置具有撕裂、刺破或其他打开胶囊的工具，从而使得当患者在装置吸入剂吸入时，剂量能够被带入到患者肺内。市售实例有GlaxoSmithKline的ROTAHALERTM和Boehringer Ingelheim的HANDIHALERTM。

[0077] 此外，所述递送装置容许独立地包含任选与一种或多种赋形剂混合的化合物(I)、化合物(II)和化合物(III)。组合的各个化合物可同时给药但独立贮存，例如WO2003/061743Al，WO2007/012871A1和/或WO2007/068896中所述。容许独立包含活性组分的递送装置是具有可剥离泡眼长条形式的两个或三个药物包装的吸入器装置，每一包装在沿着其长度安置的泡眼袋中含有预先计量的剂量。所述装置具有内部标定的机械，每次当开启装置时，推杆打开每个长条的袋并且确定包装的位置，这样每个袋的每一新暴露的剂量与歧管相邻，该歧管与装置的吸入口相连通。当患者在吸入口吸入时，每一剂量被同时从其所在的袋中带入到歧管内，并经由吸入口进入到患者呼吸道内。因此，每次使用装置时，患者将接受由来自每一药物包装的剂量组成的联合治疗。这种类型的示例性市售装置有
GlaxoSmithKline的ELLIPTATM。容许独立包含不同化合物的另一装置是Innovata的DUOHALERTM。组合的各个化合物也可依次给药但独立贮存，如公开号为CN110237373A所述给药系统。

[0078] 在本发明上述各种操作步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的各种实例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

[0079] 本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

[0080] 本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

[0081] 由于采用上述方案，本发明的有益效果是：

[0082] 阿福特罗作用于气道平滑肌细胞膜上的β2‑受体，使气道平滑肌舒张，噻托溴铵作用于支气管平滑肌上的毒蕈碱受体并阻断肌紧张，二种药物联用时二种机制共同发挥舒张支气管作用。在减少慢阻肺患者急性加重，降低全因死亡率，因此，在改善慢阻肺患者肺功能和提升生活质量等重要临床指标上，二联疗法比单药使用的适应症范围更宽。

[0083] 本发明对药物组合物进行质量检测的方法，能够使用一种色谱条件同时测定二种化合物，大大提高了工作效率。

附图说明

[0084] 图1是本发明HPLC法的典型色谱图，图中TB为噻托溴铵峰、AF为酒石酸阿福特罗峰。

具体实施方式

[0085] 通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。

[0086] 实施例1：制备药物组合物

[0087] 本实施例药物组合物的配方：噻托溴铵一水合物25μg、酒石酸阿福特罗15μg、α‑乳糖一水合物12mg。

[0088] 以上配方量是每剂中包含的物料的量，实际制备时噻托溴铵一水合物的投料量为500mg。

[0089] 制法：

[0090] 将噻托溴铵一水合物原料药和酒石酸阿福特罗在气流粉碎机中进行微粉化，粉碎压力为0.6MPa，所得产物粒径D50在5μm以下。

[0091] 使用分级器对采购的商业乳糖(DEF公司LH200)进行分级处理，分级进料速度为1‑2kg/h，进料压力为0.55‑0.65MPa，分级转速控制在6500‑7500rpm，二级气流量控制在0.5‑
0.8Nm3/min。

[0092] 取配方量三分之一的乳糖与配方量噻托溴铵一水合物和酒石酸阿福特罗二种原料药在混合杯里手动混合10min，然后加入余下乳糖，装入混合罐，使用单臂混合机混合30min，然后取出，再通过手动混合10min，移入三维混合机混合60min，然后取出，再次手动混合10min，混合完毕后把混合好的物料收集在密封袋里，作为本实施例的粉末状的药物组合物，简称为粉末组合物。

[0093] 将上述组合物填充至泡罩中，每泡内填充包含噻托溴铵一水合物25μg的粉末(此量粉末即为每剂中的活性药物量)，并将填充完毕的泡罩组装至舒利迭吸入器中，即为包含二种活性成分的吸入粉雾剂。众所周知，本实施例药物组合物二种活性成分的重量比为噻托溴铵一水合物25μg：酒石酸阿福特罗15μg，该组合物中的二种活性成分混配妥当之后不能改变，当然，在将此粉末组合物填充至泡罩中时，可以通过改变填充量进而按比例改变每剂的活性药物剂量，例如以上述每剂(每泡)含噻托溴铵一水合物25μg的粉末为基础，可以每泡填充其80％量(即含噻托溴铵一水合物20μg的粉末)、其120％量(即含噻托溴铵一水合物30μg的粉末)、或者其它填充剂量，这在制剂工业上是相当容易实现的。

[0094] 照上述实施例1的配方和制法，重复制备三批粉末组合物，分别记为粉末组合物1a、粉末组合物1b、粉末组合物1c。

[0095] 实施例2：对药物组合物进行质量检测

[0096] 本实施例使用HPLC法对实施例1制备的粉末状的药物组合物进行质量检测，即使用HPLC法同时测定组合物中的二种活性成分的含量，方法如下。

[0097] 1、本实施例使用了一些如下常规仪器和试剂：

[0098] 精密分析天平、液相色谱仪、pH计等；

[0099] 乙腈(色谱纯)、无水磷酸二氢钠(分析纯)、癸烷磺酸钠(分析纯)、磷酸(分析纯)等等；

[0100] 标准品：酒石酸阿福特罗标准品，噻托溴铵标准品标准品；

[0101] 10％磷酸：取磷酸2mL，加入15mL纯化水混合均匀；

[0102] 缓冲液(pH＝3.0)：精密称定无水磷酸二氢钠1.38g、癸烷磺酸钠1.22g，加1L纯化水溶解，缓慢滴加10％磷酸调节pH至3.0，过滤；

[0103] 流动相(乙腈：缓冲液＝52:48)：精密量取520mL乙腈和480mL缓冲液，混匀；

[0104] 酒石酸阿福特罗标准储备液(88μg/mL)：精密称定酒石酸阿福特罗标准品22mg至250mL棕色容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀；

[0105] 噻托溴铵标准储备液(200μg/mL)：精密称定噻托溴铵标准品20mg至100mL棕色容量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀；

[0106] 标准溶液：根据需要精密移取不同体积的二种标准储备液至同一容量瓶中用流动相稀释制得；例如，精密移取上述二种标准储备液各2mL至同一250mL棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀(混合的标准溶液约含酒石酸阿福特罗0.704μg/mL、噻托溴铵1.6μg/mL)，为标准溶液a；或者，精密移取上述二种标准储备液各3mL至同一100mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀(混合的标准溶液约含酒石酸阿福特罗2.64μg/mL、噻托溴铵6μg/mL)，为标准溶液b；或者，精密移取上述酒石酸阿福特罗标准储备液4mL、噻托溴铵标准储备液3mL至同一250mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀(混合的标准溶液约含酒石酸阿福特罗1.408μg/mL、噻托溴铵2.4μg/mL)，为标准溶液c，其与实施例1组合物之二种成分的比例接近。[经另外测定，二种药物分别在如下浓度范围内线性优良：0.2‑5.0μg/mL，噻托溴铵＝0.6‑11.8μg/mL，可根据需要调整标准溶液、供试品溶液浓度]。

[0107] 供试品溶液：精密称取实施例1所得粉末组合物25mg置20ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，混匀，用0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

[0108] 2、本实施例使用如下色谱条件：

[0109] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(本实验使用经典的Waters品牌SPHERISORB ODS2柱，150mm×4.6mm，3μm)，

[0110] 柱温45℃，检测波长225nm，进样量50μL，流速1.7mL/min。

[0111] 本实施例HPLC法的色谱性能：理论塔板数以噻托铵峰计不低于3000，噻托铵与阿福特罗的分离度不小于1.5。

[0112] 3、测定：分别将供试品溶液或标准溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，使用外标法以峰面积计算供试品中各活性药物的量，以标准溶液c的测定结果进行计算。

[0113] 图1是一个典型的HPLC色谱图(标准溶液c)。

[0114] 4、测定结果：

[0115] 使用以上操作方法，测定实施例1所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：

[0116] 粉末组合物1a之酒石酸阿福特罗含量100.24％、噻托溴铵含量99.81％，[0117] 粉末组合物1b之酒石酸阿福特罗含量99.57％、噻托溴铵含量98.84％，[0118] 粉末组合物1c之酒石酸阿福特罗含量99.43％、噻托溴铵含量100.34％。

[0119] 本实施例2在进行实际测定时，所配制的各种储备液、标准溶液(c，下文若未注明，均指c)、供试品溶液，在配制后的1小时之内注入HPLC进行测定。出人预料的是，当将标准溶液置室温条件下放置12小时后其中的阿福特罗峰面积会降低，进一步发现这种降低是随时间延长而降低的；具体地说，在半小时内完成酒石酸阿福特罗标准储备液和标准溶液的配制，配制完成后立即使用液相仪测定标准溶液，记录标准溶液色谱图中阿福特罗的峰面积，此为初始峰面积，接着将此标准溶液置室温放置3h、6h、9h、12h四个时间点，在此时间分别测定标准溶液并读取不同时间测定所录得的阿福特罗峰面积，计算不同时间阿福特罗峰面积相对于初始峰面积的百分数，记为峰面积残余率，结果上述四个时间点的峰面积残余率分别为99.34％、98.13％、97.27％、96.55％，这种标准品稳定性不足的结果显然是不期望发生的，将会影响供试品的测定结果，原因在于通常情况下标准溶液或供试品溶液配制好后不能立即测定，而是需要在HPLC仪上等待一份一份进行测定。另外，对于标准溶液中的噻托铵峰，同样地计算峰面积残余率，结果显示全部测定时间点均在99.5～99.8％范围内，例如噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率为99.63％，表明标准溶液中的另一种标准品是稳定的。

[0120] 为克服阿福特罗的问题，本发明人在此补充一个实施例，在此称为实施例2a，其参照上述实施例2，不同的仅是将用于配制各种储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1％(w/v)二异丙胺和0.15％(w/v)乙二醇，色谱系统流动相不变，不添加此二者；如上述方法考察、测定并计算标准溶液中二种物质在四个时间点时的峰面积残余率，结果阿福特罗、噻托铵二者在四个时间点的峰面积残余率均在99.5～100.2％范围内，例如阿福特罗峰和噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率分别为99.83％和100.17％，表明在配液溶剂中同时添加两种物质后阿福特罗的稳定性问题得以克服；另外使用增补添加了两种试剂作为配液溶剂制备的供试品溶液，测定其中二种物质的初始峰面积以及室温放置12h后的四个时间点的峰面积，结果阿福特罗和噻托铵二者在四个时间点的峰面积残余率均在99.4～100.0％范围内，例如阿福特罗峰和噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率分别为99.82％和99.64％。进一步的，补充另一个实施例，在此称为实施例2b，其参照上述实施例2a，不同的仅是不添加二异丙胺，同法考察、测定并计算标准溶液中二种物质在四个时间点时的峰面积残余率，结果噻托铵在四个时间点的峰面积残余率均在99.5～100.2％范围内例如噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率为99.87％，而阿福特罗四个时间点的峰面积残余率分别为99.53％、98.07％、96.93％、96.02％。进一步的，补充另一个实施例，在此称为实施例2c，其参照上述实施例2a，不同的仅是不添加乙二醇，同法考察、测定并计算标准溶液中二种物质在四个时间点时的峰面积残余率，结果噻托铵在四个时间点的峰面积残余率均在99.9～100.4％范围内例如噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率为
100.16％，而阿福特罗四个时间点的峰面积残余率分别为99.03％、98.41％、97.27％、
96.34％。这些结果表明，在配制各种储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1％(w/v)二异丙胺和0.15％(w/v)乙二醇时可以有利地提高阿福特罗在各种测试溶液中的稳定性。因此，在本发明各个方面的一个实施方案中，用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1％(w/v)二异丙胺和0.15％(w/v)乙二醇。

[0121] 实施例3：对药物组合物进行质量检测

[0122] 使用实施例2a的方法，测定实施例1所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：粉末组合物1a之酒石酸阿福特罗含量99.84％、噻托溴铵含量100.04％，粉末组合物1b之酒石酸阿福特罗含量99.46％、噻托溴铵含量99.31％，粉末组合物1c之酒石酸阿福特罗含量99.63％、噻托溴铵含量98.74％。

[0123] 实施例4：对药物组合物进行质量检测

[0124] 参照实施例1的方法制备具有如下配方的药物组合物，配方4a：噻托溴铵一水合物20μg、酒石酸阿福特罗20μg、α‑乳糖一水合物20mg；配方4b：噻托溴铵一水合物30μg、酒石酸阿福特罗10μg、α‑乳糖一水合物10mg。以上配方量是每剂中包含的物料的量，实际制备时噻托溴铵一水合物的投料量为500mg。

[0125] 使用实施例2a的方法，测定配方4a和配方4b所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：配方4a之酒石酸阿福特罗含量99.75％、噻托溴铵含量99.31％，配方4b之酒石酸阿福特罗含量98.24％、噻托溴铵含量98.41％。上述配方4a二物质含量偏离100％通常是由于不同批次投料操作的精准性造成的。

[0126] 实施例5：对药物组合物进行质量检测

[0127] 参照本文实施例2a的，不同的仅是将用于配制各种储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.15％(w/v)二异丙胺和0.2％(w/v)乙二醇，其余测定条件不变，本测定方法称为E5法。

[0128] 使用E5法测定实施例1所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：粉末组合物1a之酒石酸阿福特罗含量100.13％、噻托溴铵含量99.78％，粉末组合物1b之酒石酸阿福特罗含量99.81％、噻托溴铵含量98.61％，粉末组合物1c之酒石酸阿福特罗含量99.52％、噻托溴铵含量100.14％。

[0129] 使用E5法测定并计算实施例2配制的标准溶液c中二种物质在四个时间点时的峰面积残余率，结果阿福特罗、噻托铵二者在四个时间点的峰面积残余率均在99.3～100.1％范围内，例如阿福特罗峰和噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率分别为99.56％和99.85％，表明在配液溶剂中同时添加两种物质后阿福特罗的稳定性问题得以克服；

[0130] 另外使用增补添加了两种试剂作为配液溶剂制备的粉末组合物1a的供试品溶液，测定其中二种物质的初始峰面积以及室温放置12h后的四个时间点的峰面积，结果阿福特罗和噻托铵二者在四个时间点的峰面积残余率均在99.7～100.2％范围内，例如阿福特罗峰和噻托铵峰在第四个时间点的峰面积残余率分别为99.86％和100.07％。

[0131] 使用E5法，测定实施例1所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：粉末组合物1a之酒石酸阿福特罗含量99.86％、噻托溴铵含量99.94％，粉末组合物1b之酒石酸阿福特罗含量99.63％、噻托溴铵含量99.56％，粉末组合物1c之酒石酸阿福特罗含量99.49％、噻托溴铵含量99.12％。

[0132] 使用E5法，测定配方4a和配方4b所得粉末组合物中二种活性药物的量，以其理论配方量比较计算二种活性成分的相对含量，结果：配方4a之酒石酸阿福特罗含量99.63％、噻托溴铵含量99.46％，配方4b之酒石酸阿福特罗含量98.04％、噻托溴铵含量98.67％。上述配方4a二物质含量偏离100％通常是由于不同批次投料操作的精准性造成的。

[0133] 根据本实施例5的结果，在配制各种储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.15％(w/v)二异丙胺和0.2％(w/v)乙二醇时可以有利地提高阿福特罗在各种测试溶液中的稳定性。因此，在本发明各个方面的一个实施方案中，用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.15％(w/v)二异丙胺和0.2％(w/v)乙二醇。

[0134] 结合上文，在本发明各个方面的一个实施方案中，用于配制储备液、标准溶液和供试品溶液所用的流动相中增补添加0.1～0.15％(w/v)二异丙胺和0.15～0.2％(w/v)乙二醇。

[0135] 上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。