蜂胶脂质体的制备方法和应用

摘要

本申请公开了一种蜂胶纳米脂质体的制备方法和应用。本申请中，所述方法包括以下步骤：55至65℃下，在含有蜂胶的有机介质中加入分散介质，持续反应至少一小时，获得所述蜂胶纳米脂质体；所述分散介质包括磷脂酰胆碱、甘油和水；所述含有蜂胶的有机介质和所述分散介质的质量比为(0.8‑1.1)：(0.8‑1.1)。本申请通过优化蜂胶纳米脂质体的制备方法，提升了其载药率和稳定性，并提升了关键成分咖啡酸苯乙酯在生命体中的生物利用度，使制备所得的化妆品组合物抗菌消炎效果得以提升。

权利要求

1.一种制备蜂胶纳米脂质体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

55至65℃下，在含有蜂胶的有机介质中加入分散介质，持续反应至少一小时，获得所述蜂胶纳米脂质体；

所述分散介质由磷脂酰胆碱、甘油和水组成；

所述含有蜂胶的有机介质和所述分散介质的质量比为(0.8‑1.1)：(0.8‑1.1)；

所述磷脂酰胆碱、甘油和水的质量比为（2.8‑3.2）:（0.8‑1.2）:（0.8‑1.2）；

所述有机介质为丁二醇、乙醇或正丙醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的温度为58至62℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述持续反应的时间为1至3小时。

4.一种蜂胶纳米脂质体，其特征在于，所述蜂胶纳米脂质体根据权利要求1至3中任一项所述的方法制备。

5.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求4所述的蜂胶纳米脂质体，以及化妆品可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述化妆品可接受的辅料包括保湿剂、表面活性剂和抗炎剂。

说明书

蜂胶脂质体的制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及化妆品领域，特别涉及蜂胶脂质体的制备方法和应用。

背景技术

[0002] 蜂胶(propolis)是由蜜蜂从植物中采集的粘性树脂物质，与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的固体胶状物，由于其具有多种药理特性被广泛应用于化妆品领域。蜂胶中含有黄酮、萜稀类、有机酸类、芳香性醛类及多种氨基酸酶、维生素、矿物质等多种物质。发明人在研究中发现，咖啡酸苯乙酯(CAPE)是蜂胶的主要活性成分之一，具有强大的抗氧化作用和消炎抗菌活性，能针对炎症的多个靶点发挥作用。将蜂胶直接添加在化妆品中，其中的咖啡酸苯乙酯难以被吸收，生物利用度低，导致抗炎抗菌效果大打折扣。现有技术中，部分药剂的制备中使用乙醇注入法将咖啡酸苯乙酯封装在载体中形成脂质体，但咖啡酸苯乙酯不稳定，难以耐受包封方法，使最终所得产品的生物利用度并没有获得显著提高。此因此，本领域尚需寻找一种稳定的提高蜂胶核心成分咖啡酸苯乙酯的生物利用度的方法。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种蜂胶纳米脂质体的制备方法。

[0004] 本发明的另一目的在于提供一种稳定且载药率优良的蜂胶纳米脂质体。

[0005] 本发明的另一目的在于提供一种含有蜂胶纳米脂质体的组合物。

[0006] 为解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种蜂胶纳米脂质体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

[0007] 55至65℃下，在含有蜂胶的有机介质中加入分散介质，持续反应至少一小时，获得所述蜂胶纳米脂质体；

[0008] 所述分散介质包括磷脂酰胆碱、甘油和水；

[0009] 所述含有蜂胶的有机介质和所述分散介质的质量比为(0.8‑1.1)：(0.8‑1.1)。最优选为1:1。

[0010] 在一些优选的方案中，所述分散介质由磷脂酰胆碱、甘油和水的混合物组成。

[0011] 在一些优选的方案中，所述反应在搅拌条件下进行；更优选在转速为400‑600r/min磁力搅拌条件下进行。

[0012] 在一些优选的方案中，所述磷脂酰胆碱、甘油和水的质量比为(2.8‑3.2):(0.8‑1.2):(0.8‑1.2)；最优选为：3:1:1。

[0013] 在一些优选的方案中，所述反应的温度为58至62℃，最优选为60℃。

[0014] 在一些优选的方案中，所述持续反应的时间为1至3小时，更优选为1.5至2.5小时，最优选为2小时。

[0015] 在一些优选的方案中，所述有机介质为丁二醇、乙醇、正丙醇或甲醇；更优选为丁二醇、乙醇或正丙醇；最优选为丁二醇。

[0016] 本发明的第二方面提供了一种使用本发明第一方面所述的方法制备的蜂胶纳米脂质体。

[0017] 本发明的第三方面提供了一种组合物，所述组合物包括本发明第一方面所述的蜂胶纳米脂质体和化妆品可接受的辅料。

[0018] 在一些优选的方案中，相对于所述化妆品的总质量，所述蜂胶纳米脂质体的质量比为0.1至99％。

[0019] 在一些优选的方案中，所述化妆品可接受的辅料包括保湿剂、表面活性剂和抗炎剂。

[0020] 在一些优选的方案中，所述化妆品可接受的辅料还包括抗氧化剂和防腐剂。

[0021] 在一些优选的方案中，所述保湿剂选自丙二醇和甘油中的至少一种，更优选为至少两种。

[0022] 在一些优选的方案中，所述表面活性剂选自GTCC辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸异辛酯、Montanov 68、Simusol 165和SEPIPLUS 400、聚二甲基硅氧烷中的至少一种，更优选为至少两种，更优选为至少三种，更优选为至少四种，更优选为至少五种，更优选为全部六种。

[0023] 在一些优选的方案中，所述抗炎剂为甘草酸二钾。

[0024] 在一些优选的方案中，所述化妆品选自以下任一种形式：化妆水、乳液、化妆霜、精华、面膜、膏状凝胶、喷雾、香皂、洗面奶、沐浴露、洗发露、护发素、粉底、粉霜、身体乳或按摩膏。

[0025] 本发明的第四方面，提供了组合物的用途，用于：

[0026] (i)减少炎症细胞因子IL‑1α和IL‑1β；

[0027] (ii)抑制口腔念珠菌生物膜；

[0028] (iii)促进胶原蛋白Ⅰ的合成；和/或

[0029] (iv)抑制黑色素生成酶的表达。

[0030] 本发明相对于现有技术而言，至少具有下述优点：

[0031] (1)本发明提供的蜂胶纳米脂质体制备方法，简单方便，以低成本的方式提升了蜂胶中关键成分咖啡酸苯乙酯的载药率，并提升了在人体的生物利用度和稳定性；

[0032] (2)本发明提供的蜂胶纳米脂质体制备方法制备的蜂胶纳米脂质体颗粒，应用于化妆品中，所得使制备所得的化妆品组合物抗炎、抗菌、抗衰老和美白能力得以显著提升。

[0033] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

[0034] 一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。

[0035] 图1是根据本发明实施例中所制备蜂胶纳米脂质体电镜图；

[0036] 图2是根据本发明实施例中施用不同脂质体对皮肤炎症因子IL‑1α含量变化示意图；

[0037] 图3是根据本发明实施例中施用不同脂质体对皮肤炎症因子IL‑1β含量变化示意图；

[0038] 图4是根据本发明实施例中施用不同脂质体对细菌生物膜生成能力变化示意图；

[0039] 图5是根据本发明实施例中施用不同脂质体对皮肤胶原蛋白Ⅰ的含量影响示意图；

[0040] 图6是根据本发明实施例中不同脂质体对总RNA黑色素生成酶的表达水平影响示意图；

[0041] 图7是根据本发明实施例中不同脂质体对蛋白质黑色素生成酶的表达水平影响示意图；

[0042] 图8是根据本发明实施例中施用不同产品皮肤的黑色素含量影响示意图。

具体实施方式

[0043] 蜂胶作为天然产物，由于其具有独特的药理特性(例如抗炎)，常被应用于各类化妆品。但发明人发现直接将蜂胶添加在化妆品中，产生的抗炎抗氧化的作用均十分低，拉高了原料成本的同时不能产生相应的效果。为提高蜂胶的生物利用度，将其封装在载体中构筑脂质体，虽然一定程度上提高了蜂胶的吸收率，但制备做的化妆品的抗炎抗菌能力提高不明显。本发明人通过研究发现，导致蜂胶脂质体产品抗炎抗菌性能不佳的原因是其关键活性成分咖啡酸苯乙酯(CAPE)在脂质体包封方法中分解，使最终产品的抗炎抗菌抗氧化的性能下降。

[0044] 蜂胶纳米脂质体的制备方法

[0045] 基于此，本发明人改进了蜂胶纳米脂质体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

[0046] 55至65℃下，在含有蜂胶的有机介质中加入分散介质，持续反应至少一小时，获得所述蜂胶纳米脂质体；

[0047] 所述分散介质包括磷脂酰胆碱、甘油和水；

[0048] 所述含有蜂胶的有机介质和所述分散介质的质量比为(0.8‑1.1)：(0.8‑1.1)。最优选为1:1。

[0049] 上述方法中，分散介质的组成、分散介质和蜂胶溶液的比例、反应时间和反应温度均是影响成型脂质体的重要因素，影响着形成的脂质体外膜的流动性，进而影响成品脂质体的载药率。

[0050] 作为分散介质，优选由磷脂酰胆碱、甘油和水组成的体系，所述磷脂酰胆碱、甘油和水的质量比为(2.8‑3.2):(0.8‑1.2):(0.8‑1.2)；最优选为：3:1:1，当分散介质的组成为磷脂酰胆碱、甘油和水且质量比为3:1:1时，制备所得的蜂胶纳米脂质体中咖啡酸苯乙酯载药率更高，产物稳定性更好。

[0051] 作为制备方法的反应时间，同等条件下，随着反应时间的增加，所得脂质体中的载药率先增加后减少。作为优选，所述持续反应的时间为1至3小时，更优选为1.5至2.5小时，最优选为2小时。

[0052] 作为制备方法的反应温度，发明人发现，更高的温度和更低的温度均不利于稳定的脂质体颗粒的成型。在本发明优选的实施方式中，反应温度为58至62℃，最优选为60℃。

[0053] 发明人发现，溶解蜂胶的有机介质，对脂质体载药率也存在较大的影响。作为优选，有机介质选择小分子醇类有机溶剂例如丁二醇、乙醇、正丙醇或甲醇，最优选为丁二醇，使用丁二醇可以让所得产品中咖啡酸苯乙酯载药率更高。

[0054] 含有蜂胶纳米脂质体的化妆品组合物

[0055] 本发明中，化妆品包括上述的上述方法制备的蜂胶纳米脂质体，和化妆品中可接受的辅料。

[0056] 作为化妆品中可接受的辅料，可选自溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。例如本发明的一个实施例中，所述化妆品中可接受的辅料为保湿剂、表面活性剂、抗炎剂和防腐剂。

[0057] 相对于所述化妆品的总质量，所述组合物的质量百分含量为0.1至99％；优选为1至90％；更优选为1至90％；更优选为1至80％；更优选为1至70％；更优选为1至60％；更优选为1至50％；更优选为1至30％；更优选为1至15％；更优选为1至10％；更优选为1至9％；更优选为1至7％；更优选为1至6％；更优选为1至5％，例如：2％、3％、4％或5％。本发明中特别优选地，所述组合物的质量百分含量为1至5％。

[0058] 作为防腐剂，非限制地可以选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯甲酸酯、山梨酸、三氯生、三氯卡班等)、金属螯合剂。剂(如EDTA、NTA等)、蛋白水解酶、防腐剂(zincpyrythion、octropix等)、渗透促进剂(苯甲醇、苄氧基乙醇等)、增稠剂(羧乙烯基聚合物等)可含有羧甲基纤维素、聚乙烯醇、角叉菜胶、水溶性聚合物如明胶)、电解质、pH调节剂(缓冲剂如乳酸‑乳酸钠和柠檬酸‑柠檬酸钠)。

[0059] 防腐剂在本发明的化妆品中的添加量优选为0.01～50重量％(以下简称为％)，特别优选为0.5～20％。

[0060] 作为保湿剂，非限制地可以选自甘油、神经酰胺或其类似结构物质、胆固醇酯、山梨糖醇、木糖醇、甘油、martitol、丙二醇、1,3‑丁二醇等其实例包括1,4‑丁二醇、吡咯烷酮羧酸钠、乳酸、乳酸钠、聚氧丙烯脂肪酸酯、聚乙二醇中的至少一种。本发明中特别优选地，保湿剂为甘油和丙二醇。

[0061] 保湿剂在本发明的化妆品中的添加量优选为0.01～50重量％(以下简称为％)，特别优选为0.5～20％。

[0062] 作为抗炎剂，非限制地可以选自水杨酸甲酯、水杨酸乙二醇酯、消炎痛、布洛芬、尿囊素、氯化溶菌酶、愈创木灵、γ‑香豆素、醋酸生育酚、甘草酸、甘草酸二钾、甘草次酸及其盐。这些可以单独使用或两种以上组合使用。本发明中特别优选地，所述抗炎剂为甘草酸二钾。

[0063] 抗炎剂在本发明的化妆品中的添加量优选为0.001～5％，特别优选为0.1～2％。

[0064] 作为表面活性剂，非限制地可以是辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸异辛酯、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂基葡糖苷/鲸蜡硬脂醇、甘油硬脂酸酯/PEG‑100硬脂酸酯、聚丙烯酸13/聚异丁烯/聚山梨酸酯‑20等，本发明中特别优选地，所述表面活性剂为GTCC辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸异辛酯、Montanov 68、Simusol 165和SEPIPLUS 400、聚二甲基硅氧烷中的组合。

[0065] 表面活性剂在本发明的化妆品中的添加量优选为1～50％，特别优选为10～30％。

[0066] 在本发明最的一个最优选的实施方式中，所述化妆品组合物由组分制成：GTCC辛酸/癸酸甘油三酯5g、棕榈酸异辛酯3g、聚二甲基硅氧烷(粘度100型号)1g、蜂胶纳米脂质体5g、Montanov 68(鲸蜡硬脂基葡糖苷/鲸蜡硬脂醇)2g、Simusol 165(甘油硬脂酸酯/PEG‑
100硬脂酸酯)1g、甘草酸二钾0.1g、丙二醇3g、甘油3g、SEPIPLUS 400(聚丙烯酸13/聚异丁烯/聚山梨酸酯‑20)1g、防腐剂1g、水74.9g。

[0067] 本发明中所用的术语“化妆品”是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，如皮肤、毛发、指趾甲、唇齿等，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品。根据本发明的优选实施方式中，所述化妆品包括：保湿化妆品、具有保湿功效的抗炎症化妆品，以及具有保湿功效的抗衰老或美白化妆品。

[0068] 应将化妆品定期地局部施用在任何需要使用获得所需结果必不可少的频率和用量治疗的皮肤面积上。优选将所述的化妆品每天至少施用一次、最优选每天施用两次。治疗的频率取决于皮肤损害或恶化的程度、使用者皮肤的反应性、活性组分在化妆品中的浓度、用于将活性组分转运入角质层的载体的有效性、通过与衣服的物理性接触而除去该制品或通过出汗或其它内部或外部液体而除去该制品的便利性以及对使用者类型的便利性。以所述化妆品的总重为基准，诸如本文所述的化妆品这样相对简单的生化活性物质的典型浓度可以在约0.01％‑约5.0％(重量)的范围，且应将该制品以等于约1.0mg/cm2皮肤‑约20.0mg/cm2皮肤的比例施用于皮肤。以所述化妆品组合物的总重为基准，优选该配方应含有约0.39％‑约0.78％。最优选该配方应含有约0.78％的活性组分且以约5.0mg/cm2皮肤的比例将其施用于皮肤。

[0069] 本发明中化妆品的作用，包括但不限于：抗炎、抗菌、抗老去皱、美白保湿。

[0070] 含有蜂胶纳米脂质体组合物的用途

[0071] 本发明还涉及所制备的含有蜂胶纳米脂质体的组合物的用途，用于：

[0072] (i)减少炎症细胞因子IL‑1α和IL‑1β；

[0073] (ii)抑制口腔念珠菌生物膜；

[0074] (iii)促进胶原蛋白Ⅰ的合成；和/或

[0075] (iv)抑制黑色素生成酶的表达。

[0076] 发明人发现，相比现有技术中其他制备蜂胶脂质体的方法(例如乙醇注入法)，本发明方法制备所得蜂胶纳米脂质体可更显著减少炎症细胞因子IL‑1α和IL‑1β水平、更显著抑制口腔念珠菌生物膜、更显著促进促进胶原蛋白Ⅰ的合成和更显著抑制黑色素生成酶的表达。

[0077] 为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。

[0078] 除非另有指明，本文所用的技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义，需要注意的是，本文所用的术语仅为了描述具体实施方式，而非意图限制本申请的示例性实施方式。

[0079] 实施例1、蜂胶纳米脂质体的制备

[0080] 取蜂胶10g，加入40g丁二醇将蜂胶完全溶解后，在温度为60℃的条件下，在转速为500r/min的磁力搅拌器的搅拌下边搅拌边加入30g磷脂酰胆碱、10g甘油以及10g水，后于60℃加热时间2小时即得。所得蜂胶纳米脂质体的电镜照片如图1。由图可知，本实施例制备的蜂胶脂质体颗粒细度达到纳米级别。

[0081] 对比例1、乙醇注入法制备蜂胶脂质体

[0082] 称取10g卵磷脂、10g胆固醇和10g蜂胶，使用30mL无水乙醇溶解。在水浴温度为50℃、转速为30r/min磁力搅拌下缓慢注入20mLPBS缓冲液，继续搅拌30min。将所得溶液于40℃下减压蒸发，获得蜂胶脂质体。

[0083] 载药量测试

[0084] 使用下述方式分别检测实施例1和对比例1所得蜂胶纳米脂质体中咖啡酸苯乙酯的载药率。具体步骤如下：

[0085] 取1mL实施例1所得蜂胶纳米脂质体用0.9％氯化钠溶液漂洗，15000rpm离心20min，上清液用无水甲醇超声溶解。置于5mL离心管，9000rpm离心10min，用高效液相色谱测定脂质体中的咖啡酸苯乙酯含量，记为A。脂质体总量记为B。用以下公式计算可得载药量：LC％＝A/B*100％。针对对比例1制备的蜂胶脂质体的载药量测试方法同上。测试结果见表1。

[0086] 稳定性测试

[0087] 使用下述方式分别检测实施例1和对比例1所得蜂胶纳米脂质体中咖啡酸苯乙酯的稳定性。具体步骤如下：

[0088] 将等量的实施例1所得蜂胶纳米脂质体分别置于4℃、25℃、45℃下，于第1、2、3、4周测量其中的咖啡酸苯乙酯含量，与未测试前的含量进行比较，以四次测量比较后的数值计算出的平均值作为稳定性评判的依据。针对对比例1制备的蜂胶脂质体的稳定性测试方法同上。测试结果见表1。

[0089] 表1

[0090]

[0091] 实施例2、溶剂种类对制备所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响

[0092] 本实施例研究了溶剂对所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响。本实施例中，制备蜂胶纳米脂质体的方法和实施例1相同，仅所用溶剂不同。详见下表1。

[0093] 表1

[0094]编号 溶剂 载药量(％) 稳定性(25℃，4weeks，％)
1 丁二醇 8.64 99.56
2 乙醇 6.41 97.69
3 正丁醇 5.78 98.01
4 正丙醇 6.01 97.14
5 甲醇 4.38 97.36

[0095] 实施例3、分散体系对制备所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响

[0096] 本实施例研究了分散体系对所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响。本实施例中，制备蜂胶纳米脂质体的方法和实施例1大致相同，不同在于，所用的分散体系的组成和配比不同。详见下表2。

[0097] 表2

[0098]

[0099] 实施例4、加热时间和加热温度对制备所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响[0100] 本实施例研究了加热时间和加热温度对所得蜂胶纳米脂质体载药量的影响。本实施例中，制备蜂胶纳米脂质体的方法和实施例1大致相同，不同在于，方法中加热的时间和温度有所差异。详见下表3。

[0101] 表3

[0102]

[0103] 下述实施例5至8测试了实施例1、对比例1和实施例3第2组所得蜂胶纳米脂质体的消炎作用、抗菌作用、抗衰老作用和美白效果。

[0104] 实施例5、消炎作用测试

[0105] 将培养的角化细胞分别放置于两个培养皿中，分别施加对比例1、实施例1和实施例3第2组所得蜂胶纳米脂质体，在第0、1、2、3、4、5天测定IL‑1α的浓度。结果见图2。

[0106] 将培养的巨噬细胞分别放置于两个培养皿中，分别施加对比例1和实施例1和第2组实施例3所得蜂胶纳米脂质体，在第0、1、2、3、4、5天测定IL‑1β的浓度。结果见图3。

[0107] 由图2、图3可见，实施例1所得蜂胶纳米脂质体有效减少炎症细胞因子IL‑1α和IL‑1β，具有更显著的抑制炎症的作用。

[0108] 实施例6、抗菌作用测试

[0109] 将培养的口腔念珠菌分别放置于三个培养皿中，分别施加对比例1、实施例1和实施例3第2组所得蜂胶纳米脂质体，在第0、8、16、24、32、40、48小时测量口腔念珠菌生物膜质量。结果见图4。

[0110] 实施例1所得蜂胶纳米脂质体可以有效抑制口腔念珠菌生物膜的形成，且48小时后口腔念珠菌不再存在，具有强大的抑菌杀菌能力。

[0111] 实施例7、抗衰老测试

[0112] 随着年龄的增长，皮肤胶原蛋白含量呈下降趋势，到了一定年纪胶原蛋白流失速度会急速加快。因此胶原蛋白的变化被认为是衰老的特征表现。

[0113] 将培养的人真皮成纤维细胞分别放置于三个培养皿中，分别施加对比例1、实施例1和实施例3第2组所得蜂胶纳米脂质体，十天后测定胶原蛋白Ⅰ的含量，结果见图5。

[0114] 可显示实施例1所得蜂胶纳米脂质体可以促进胶原蛋白Ⅰ的合成。

[0115] 实施例8、美白效果测试

[0116] 将培养的B16‑F10细胞分别放置于五个培养皿中，分别施加0、0.5、1.0、1.5、2.0μM的实施例1所得蜂胶纳米脂质体，培养48小时后提取总RNA，通过RT‑PCR和Western blot分析黑色素生成酶的表达。结果见图6。

[0117] 将培养的B16‑F10细胞分别放置于五个培养皿中，分别施加0、0.5、1.0、1.5、2.0μM的实施例1所得蜂胶纳米脂质体，培养48小时后提取蛋白质，通过RT‑PCR和Western blot分析黑色素生成酶的表达。结果见图7。

[0118] 实施例1所得蜂胶纳米脂质体可以通过剂量依赖性地抑制黑色素生成酶的表达，减少黑色素的生成。

[0119] 实施例9、化妆品组合物制备

[0120] 以每100g由下述组分制成：

[0121] GTCC辛酸/癸酸甘油三酯5g、棕榈酸异辛酯3g、聚二甲基硅氧烷(粘度100型号)1g、蜂胶纳米脂质体5g、Montanov 68(鲸蜡硬脂基葡糖苷/鲸蜡硬脂醇)2g、Simusol 165(甘油硬脂酸酯/PEG‑100硬脂酸酯)1g、甘草酸二钾0.1g、丙二醇3g、甘油3g、SEPIPLUS 400(聚丙烯酸13/聚异丁烯/聚山梨酸酯‑20)1g、防腐剂1g、水74.9g。

[0122] 按照上述配比分别使用实施例1、对比例1、以及实施例3中的第2组制备的蜂胶纳米脂质体制备成不同组化妆品组合物。

[0123] 实施例10、美白效果测试

[0124] 取志愿者面部一块黑色素沉积较为严重的区域，等分为3个部分，分别记为A、B、C。A区域每日早晚两次施加含有对比例1所得蜂胶纳米脂质体的化妆品组合物，B区域每日早晚两次施加含有实施例1所得蜂胶纳米脂质体的化妆品组合物，C区域每日早晚两次施加含有实施例3第2组所得蜂胶纳米脂质体的化妆品组合物，并于第4天、第8天、第12天、第16天、第20天测定皮肤的黑色素含量。结果见图8。可得实施例1所得的蜂胶纳米脂质体制备的化妆品有助于缓解黑色素沉积，皮肤美白效果明显。

[0125] 本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。