八氢吡嗪并二氮杂萘啶二酮类化生物转让专利
申请号 : CN202180025301.8
文献号 : CN115335372B
文献日 : 2024-01-12
发明人 : 陈曙辉 , 陈新海 , 周凯 , 江文 , 胡国平 , 黎健
申请人 : 南京明德新药研发有限公司
摘要 :
一类八氢吡嗪并二氮杂萘啶二酮化合物，具体公开了式(III)所示化合物及其药学上可接受的盐。
权利要求 :
1.式(III)或(III‑1)所示化合物或其药学上可接受的盐，其中，
m选自0、1和2；
n选自0、1、2、3和4；
X选自NH和O；
Y选自CH和N；
Z选自CH和N；
R1分别独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、NH2和C1‑3烷基，所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Ra取代；
R2选自H、F、Cl、Br、I和C1‑3烷基，所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rb取代；
R3选自H、F、Cl、Br、I和C1‑6烷基，所述C1‑6烷基任选被1、2或3个Rc取代；
R4选自H、F、Cl、Br、I和C1‑6烷基，所述C1‑6烷基任选被1、2或3个Rc取代；
R5选自H、F、Cl、Br和I；
Ra、Rb和Rc分别独立地选自H、F、Cl、Br和I。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物具有式(II)结构：R1、R2、R3、R4、R5、X、Y、m和n如权利要求1所定义。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R1分别独立地选自F、Cl、NH2和OH。
4.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R2选自CH3，所述CH3任选被1、2或3个Rb取代。
5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R2选自CF3。
6.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R3选自CH3、CH2CH3和
7.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R4选自CH3、CH2CH3和
8.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R5选自H和F。
9.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物的结构单元 选自
10.根据权利要求9所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物的结构单元 选自
11.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物的结构单元 选自 所述式(III‑1)所示化合物的结构单元 选自
12.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物的结构单元 选自
13.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述式(III)所示化合物选自其中，R1、R2、R3、R4和R5如权利要求1或2所定义。
14.下式化合物或其药学上可接受的盐，选自
15.根据权利要求14所述的化合物或其药学上可接受的盐，选自
16.一种药物组合物，包括作为活性成分的治疗有效量的根据权利要求1～15任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
17.根据权利要求1～15任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求16所述的药物组合物制备治疗癌症药物中的应用；所述的癌症选自人非小细胞肺癌和人源结肠癌。
说明书 :
八氢吡嗪并二氮杂萘啶二酮类化生物
[0001] 本申请主张如下优先权：
[0002] CN202010260612.X，申请日2020年04月03日；
[0003] CN202010568775.4，申请日2020年06月19日；
[0004] CN202011616152.6，申请日2020年12月30日。
技术领域
[0005] 本发明涉及新的一类八氢吡嗪并二氮杂萘啶二酮化合物，具体涉及式(III)所示化合物及其药学上可接受的盐。
背景技术
[0006] 第一个RAS癌基因发现自大鼠肉瘤(ratsarcoma)，因此得名。RAS蛋白是由RAS基因表达的产物，指一类紧密相关的，由189个氨基酸组成的单体球蛋白，其分子量为21KDa。它
可以与鸟嘌呤三核苷酸磷酸(GTP)或鸟嘌呤二核苷酸磷酸(GDP)结合。RAS蛋白的活性状态
对细胞的生长、分化、细胞骨架、蛋白质运输和分泌等都具有影响，其活性是通过与GTP或
GDP的结合进行调节。当RAS蛋白与GDP结合时，它处于休眠状态，也就是“失活”状态；当有上游特定的细胞生长因子刺激时，RAS蛋白被诱导交换GDP，与GTP结合，此时称为“活化”状态。
与GTP结合的RAS蛋白能够活化下游的蛋白，进行信号传递。RAS蛋白自身具有弱的水解GTP
水解活性，能够水解GTP到GDP.这样就可以实现从活化状态到失活状态的转化。在这个水解
过程中，还需要GAP(GTPase activating proteins，GTP水解酶活化蛋白)参与。它能与RAS
蛋白作用，大大促进其水解GTP到GDP的能力。RAS蛋白的突变将影响其与GAP的作用，也就影
响了其水解GTP到GDP的能力，使其一直处于活化状态。活化的RAS蛋白持续的给予下游蛋白
生长信号，最终导致细胞不停的生长和分化，最终产生肿瘤。RAS基因家族成员众多，其中与
各种癌症密切相关的亚家族主要有克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)、哈维大
鼠肉瘤病毒致癌同源物(HRAS)和神经母细胞瘤大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(NRAS)。人们
发现大约30％的人类肿瘤中都携带某些突变的RAS基因，其中以KRAS突变最为显著，占到所
有RAS突变中的86％。对于KRAS突变，最为常见的突变出现在12号甘氨酸(G12)，13号甘氨酸
(G13)和61号谷氨酰胺(Q61)残基上，其中G12突变占到83％。
可以与鸟嘌呤三核苷酸磷酸(GTP)或鸟嘌呤二核苷酸磷酸(GDP)结合。RAS蛋白的活性状态
对细胞的生长、分化、细胞骨架、蛋白质运输和分泌等都具有影响，其活性是通过与GTP或
GDP的结合进行调节。当RAS蛋白与GDP结合时，它处于休眠状态，也就是“失活”状态；当有上游特定的细胞生长因子刺激时，RAS蛋白被诱导交换GDP，与GTP结合，此时称为“活化”状态。
与GTP结合的RAS蛋白能够活化下游的蛋白，进行信号传递。RAS蛋白自身具有弱的水解GTP
水解活性，能够水解GTP到GDP.这样就可以实现从活化状态到失活状态的转化。在这个水解
过程中，还需要GAP(GTPase activating proteins，GTP水解酶活化蛋白)参与。它能与RAS
蛋白作用，大大促进其水解GTP到GDP的能力。RAS蛋白的突变将影响其与GAP的作用，也就影
响了其水解GTP到GDP的能力，使其一直处于活化状态。活化的RAS蛋白持续的给予下游蛋白
生长信号，最终导致细胞不停的生长和分化，最终产生肿瘤。RAS基因家族成员众多，其中与
各种癌症密切相关的亚家族主要有克尔斯滕大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(KRAS)、哈维大
鼠肉瘤病毒致癌同源物(HRAS)和神经母细胞瘤大鼠肉瘤病毒致癌基因同源物(NRAS)。人们
发现大约30％的人类肿瘤中都携带某些突变的RAS基因，其中以KRAS突变最为显著，占到所
有RAS突变中的86％。对于KRAS突变，最为常见的突变出现在12号甘氨酸(G12)，13号甘氨酸
(G13)和61号谷氨酰胺(Q61)残基上，其中G12突变占到83％。
[0007] G12C突变是KRAS基因突变中比较常见的一个，它是指12号甘氨酸突变为半胱氨酸。KRAS G12C突变在肺癌中最为常见，根据文献报道的数据推算，KRAS G12C突变占到所有
肺癌患者的10％左右。
肺癌患者的10％左右。
发明内容
[0008] 本发明提供式(III)所示化合物或其药学上可接受的盐，
[0009]
[0010] 其中，
[0011] m选自0、1和2；
[0012] n选自0、1、2、3和4；
[0013] X选自NH和O；
[0014] Y选自CH和N；
[0015] Z选自CH和N；
[0016] R1分别独立地为H、F、Cl、Br、I、OH、NH2和C1‑3烷基，所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Ra取代；
[0017] R2选自H、F、Cl、Br、I和C1‑3烷基，所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rb取代：
[0018] R3选自H、F、Cl、Br、I和C1‑6烷基，所述C1‑3烷基任选被1、2或3个Rc取代；
[0019] R4选自H、F、Cl、Br、I和C1‑6烷基，所述C1‑6烷基任选被1、2或3个Rc取代；
[0020] R5选自H、F、Cl、Br和I；
[0021] Ra、Rb和Rc分别独立地选自H、F、Cl、Br和I。
[0022] 在本发明的一些方案中，上述化合物具有式(II)结构：
[0023]
[0024] R1、R2、R3、R4、R5、X、Y、m和n如本发明所定义。
[0025] 在本发明的一些方案中，上述，R1分别独立地选自F、Cl、NH2和OH，其他变量如本发明所定义。
[0026] 在本发明的一些方案中，上述R2选自CH3，所述CH3任选被1、2或3个Rb取代，其他变量如本发明所定义。
[0027] 在本发明的一些方案中，上述R2选自CF3，其他变量如本发明所定义。
[0028] 在本发明的一些方案中，上述R3选自CH3、CH2CH3和 其他变量如本发明所定义。
[0029] 在本发明的一些方案中，上述R4选自CH3、CH2CH3和 其他变量如本发明所定义。
[0030] 在本发明的一些方案中，上述R5选自H和F，其他变量如本发明所定义。
[0031] 在本发明的一些方案中，上述结构单元 选自 其他变量如本发明所定义。
[0032] 在本发明的一些方案中，上述结构单元 选自 其他变量如本发明所定义。
[0033] 在本发明的一些方案中，上述结构单元 选自 其他变量如本发明所定义。
[0034] 在本发明的一些方案中，上述结构单元 选自其他变量如本发明所定义。
[0035] 在本发明的一些方案中，上述结构单元 选自其他变量如本发明所定义。
[0036] 在本发明的一些方案中，上述化合物选自
[0037]
[0038] 其中，R1、R2、R3、R4和R5如本发明所定义。
[0039] 在本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自
[0040]
[0041] 其中，R1、R2、R3、R4和R5如本发明所定义。
[0042] 本发明提供下式化合物或其药学上可接受的盐，选自
[0043]
[0044]
[0045] 在本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，选自
[0046]
[0047]
[0048] 本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
[0049] 本发明提供了一种药物组合物，包括作为活性成分的治疗有效量的本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
[0050] 本发明提供了上述的化合物或其药学上可接受的盐或上述组合物在制备KRAS G12C突变蛋白抑制剂的应用。
[0051] 本发明提供了上述的化合物或其药学上可接受的盐或上述组合物制备治疗癌症药物中的应用。
[0052] 定义和说明
[0053] 除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的
含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过
敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过
敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0054] 术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可
以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方
式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中
用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成
盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如
精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸
性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方
式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机胺或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中
用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成
盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如
精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸
性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0055] 本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游
离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0056] 除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以
在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
[0057] 本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
[0058] 本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(‑)‑和(+)‑对对映体、(R)‑和(S)‑对映体、非对映异构体、(D)‑异构体、(L)‑异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富
集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不
对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不
对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
[0059] 除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
[0060] 除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
[0061] 除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
[0062] 除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(‑)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。
[0063] 除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型，用波浪线 表
示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 和直形虚
线键
示楔形实线键 或楔形虚线键 或用波浪线 表示直形实线键 和直形虚
线键
[0064] 本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异
构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体
(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropictautomer))包括通过质子迁
移来进行的互相转化，如酮‑烯醇异构化和亚胺‑烯胺异构化。价键异构体(valence
tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮‑烯醇互变异构化的具体实
例是戊烷‑2，4‑二酮与4‑羟基戊‑3‑烯‑2‑酮两个互变异构体之间的互变。
构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体
(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropictautomer))包括通过质子迁
移来进行的互相转化，如酮‑烯醇异构化和亚胺‑烯胺异构化。价键异构体(valence
tautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮‑烯醇互变异构化的具体实
例是戊烷‑2，4‑二酮与4‑羟基戊‑3‑烯‑2‑酮两个互变异构体之间的互变。
[0065] 除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等
于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或
者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或
者大于等于99.9％。
于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或
者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或
者大于等于99.9％。
[0066] 除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映
体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。
[0067] 可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)‑和(S)‑异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成
或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂
开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如
羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常
规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构
体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍
生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物
的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚
3 125 14
(H)，碘‑125( I)或C‑14( C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比
普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定
性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无
论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或
状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事
件或状况不发生的情况。
或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂
开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如
羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常
规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构
体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍
生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物
的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚
3 125 14
(H)，碘‑125( I)或C‑14( C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比
普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定
性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无
论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或
状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事
件或状况不发生的情况。
[0068] 术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，取代基可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。
当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任
选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化
学上可以实现的基础上可以是任意的。
当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任
选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化
学上可以实现的基础上可以是任意的。
[0069] 当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0‑2个R所取代，则所述基团可以任选地
至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组
合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组
合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0070] 当一个连接基团的数量为0时，比如‑(CRR)0‑，表示该连接基团为单键。
[0071] 当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A‑L‑Z中L代表单键时表示该结构实际上是A‑Z。
[0072] 当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A‑X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上
时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任
意一个碳原子连接到被取代的基团上。
时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任
意一个碳原子连接到被取代的基团上。
[0073] 当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团L为‑M‑W‑，此时‑M‑W‑既可以按与从左往右的读取顺序相同的
方向连接环A和环B构成 也可以按照与从左往右的读取顺序相反的
方向连接环A和环B构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的组合
只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
方向连接环A和环B构成 也可以按照与从左往右的读取顺序相反的
方向连接环A和环B构成 所述连接基团、取代基和/或其变体的组合
只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0074] 除非另有规定，术语“C1‑6烷基”用于表示直链或支链的由1至6个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑6烷基包括C1‑5、C1‑4、C1‑3、C1‑2、C2‑6、C2‑4、C6和C5烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑6烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基
(Et)、丙基(包括n‑丙基和异丙基)、丁基(包括n‑丁基，异丁基，s‑丁基和t‑丁基)、戊基(包括n‑戊基，异戊基和新戊基)、己基等。
(Et)、丙基(包括n‑丙基和异丙基)、丁基(包括n‑丁基，异丁基，s‑丁基和t‑丁基)、戊基(包括n‑戊基，异戊基和新戊基)、己基等。
[0075] 除非另有规定，术语“C1‑3烷基”用于表示直链或支链的由1至3个碳原子组成的饱和碳氢基团。所述C1‑3烷基包括C1‑2和C2‑3烷基等；其可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。C1‑3烷基的实例包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(包括n‑丙基和异丙基)等。
[0076] 除非另有规定，Cn‑n+m或Cn‑Cn+m包括n至n+m个碳的任何一种具体情况，例如C1‑12包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11、和C12，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如C1‑12包括C1‑3、C1‑6、C1‑9、C3‑6、C3‑9、C3‑12、C6‑9、C6‑12、和C9‑12等；同理，n元至n+m元表示环上原子数为n至n+m个，例如3‑12元环包括3元环、4元环、5元环、6元环、7元环、8元环、9元环、10元环、11元环、和12元环，也包括n至n+m中的任何一个范围，例如3‑12元环包括3‑6元环、3‑9元环、5‑6元环、5‑7元环、6‑7元环、6‑8元环、和6‑10元环等。
[0077] 术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
[0078] 术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰
基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9‑芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基
甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1‑二‑(4′‑甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基
副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例
如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9‑芴基甲基(Fm)和二
苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基
(TBS)等等。
基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9‑芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基
甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1，1‑二‑(4′‑甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基
副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例
如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9‑芴基甲基(Fm)和二
苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基
(TBS)等等。
[0079] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的常规方法来确认结构，如果本发明涉及化合物的绝对构型，则该绝对构型可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如
单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数
据，光源为CuKα辐射，扫描方式： 扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)
解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
单晶X射线衍射法(SXRD)，把培养出的单晶用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数
据，光源为CuKα辐射，扫描方式： 扫描，收集相关数据后，进一步采用直接法(Shelxs97)
解析晶体结构，便可以确证绝对构型。
[0080] 本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术
上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
[0081] 本发明所使用的溶剂可经市售获得。
[0082] 化合物依据本领域常规命名原则或者使用 软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
[0083] 技术效果
[0084] 本发明化合物是优效的KRAS G12C突变蛋白抑制剂。
附图说明
[0085] 图1和图2为给药后人源结肠癌CO‑04‑0070肿瘤组织中ERK及p‑ERK的蛋白表达情况。
具体实施方式
[0086] 下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的
具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所
熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人
员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改
进将是显而易见的。
具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所
熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人
员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改
进将是显而易见的。
[0087] 实施例1
[0088]
[0089]
[0090] 1‑3的合成：氮气保护下，向化合物1‑1(14.82克，46.71毫摩尔)和化合物1‑2(10克，46.71毫摩尔)的叔戊醇(100毫升)溶液中一次加入BrettPhos‑Pd‑G3(2.96克，3.27毫摩
尔)和碳酸铯(30.44克93.41毫摩尔)，在105摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用硅胶
柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1至5∶1(v/v))分离得到化合物1‑3。LCMS(ESI)m/z：451(M+1)。
尔)和碳酸铯(30.44克93.41毫摩尔)，在105摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用硅胶
柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1至5∶1(v/v))分离得到化合物1‑3。LCMS(ESI)m/z：451(M+1)。
[0091] 1‑4的合成：氮气保护下，0℃下向化合物1‑3(12.4克，27.53毫摩尔)的二氯甲烷(120毫升)溶液中分批加入氮溴代丁二酰亚胺(4.90克，27.53毫摩尔)，在0摄氏度下搅拌
0.5小时。反应液用饱和亚硫酸钠溶液(30毫升)萃灭，二氯甲烷萃取(30毫升，1次)。并的有
机相用饱和食盐水(10毫升，1次)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用(石油醚∶
乙酸乙酯10∶1(v/v)，50毫升)打浆得到化合物1‑4。
0.5小时。反应液用饱和亚硫酸钠溶液(30毫升)萃灭，二氯甲烷萃取(30毫升，1次)。并的有
机相用饱和食盐水(10毫升，1次)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品用(石油醚∶
乙酸乙酯10∶1(v/v)，50毫升)打浆得到化合物1‑4。
[0092] 1‑6的合成：氮气保护下，向化合物1‑4(2.90克，5.48毫摩尔)和化合物1‑5(784.37毫克，6.03毫摩尔)的甲苯(40毫升)的混合溶剂中加入氯[(三‑三叔丁基膦)‑2‑(2‑氨基联
苯)]钯(II)(561.50毫克，1.10毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(1.18克，6.03毫摩尔)。反应在
100摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯5∶1至1∶1(v/
v))分离得到化合物1‑6。
苯)]钯(II)(561.50毫克，1.10毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(1.18克，6.03毫摩尔)。反应在
100摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯5∶1至1∶1(v/
v))分离得到化合物1‑6。
[0093] 1‑7的合成：氮气保护下，将化合物1‑6(8克，15.03毫摩尔)加入到盐酸水溶液中(12摩尔每升，150毫升)。反应在100℃下搅拌16小时。反应完毕后用碳酸氢钠调节pH＝4，然
后用二氯甲烷(150毫升，2次)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物1‑7。LCMS
(ESI)m/z：519(M+1)。
后用二氯甲烷(150毫升，2次)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物1‑7。LCMS
(ESI)m/z：519(M+1)。
[0094] 1‑8的合成：0摄氏度下，将化合物1‑7(5克，9.64毫摩尔)加入到乙酸(30毫升)和发烟硝酸(3.04克，48.22毫摩尔)的混合溶液中，然后再加入亚硝酸钠(3.33克，48.22毫摩
尔)，在20摄氏度下搅拌0.5小时。反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，然后用饱和食盐水(50
毫升，3次)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝10，有机相用无水硫酸钠干
燥，过滤，浓缩得到化合物1‑8。LCMS(ESI)m/z：564(M+1)。
尔)，在20摄氏度下搅拌0.5小时。反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，然后用饱和食盐水(50
毫升，3次)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝10，有机相用无水硫酸钠干
燥，过滤，浓缩得到化合物1‑8。LCMS(ESI)m/z：564(M+1)。
[0095] 1‑9的合成：氮气保护下，室温下向化合物1‑8(5.02克，8.91毫摩尔)的乙腈(12毫升)溶液中加入三氯氧磷(4.14毫升，44.55毫摩尔)，于70℃下觉拌15分钟。反应液浓缩，用
乙腈(12毫升)溶解，再浓缩一次，油泵减压干燥15分钟，用乙酸乙酯(150毫升)溶解，冷水
(0‑10℃，50毫升*3)洗涤，饱和食盐水(50毫升)，硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品化合物1‑
9。LCMS(ESI)m/z：582.0(M+1)。
乙腈(12毫升)溶解，再浓缩一次，油泵减压干燥15分钟，用乙酸乙酯(150毫升)溶解，冷水
(0‑10℃，50毫升*3)洗涤，饱和食盐水(50毫升)，硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品化合物1‑
9。LCMS(ESI)m/z：582.0(M+1)。
[0096] 1‑11的合成：氮气保护下，向化合物1‑9(4.00克，6.87毫摩尔)和化合物1‑10(4.75克，20.62毫摩尔)的乙腈(60毫升)加入4A分子筛(10克)，反应在室温下搅拌14小时。TLC显
示反应完毕。将反应液浓缩后用乙酸乙酯(300毫升)溶解，水(50毫升×2)洗涤，有机相浓
缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物1‑11。
示反应完毕。将反应液浓缩后用乙酸乙酯(300毫升)溶解，水(50毫升×2)洗涤，有机相浓
缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物1‑11。
[0097] 1‑12的合成：氮气保护下，向化合物1‑11(2.0克，2.58毫摩尔)的干燥DMF(20毫升)溶液中加入1，8‑二氮杂二环[5.4.0]十一碳‑7‑烯(0.79克，5.10毫摩尔)。反应液在130℃下搅拌30分钟。LCMS显示反应已经完成。将反应液用乙酸乙酯(350毫升)稀释，水(50毫升×3)
和饱和食盐水(50毫升)洗涤，浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/
v))分离得到化合物1‑12。LCMS(ESI)m/z：729.26(M+1)。
和饱和食盐水(50毫升)洗涤，浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/
v))分离得到化合物1‑12。LCMS(ESI)m/z：729.26(M+1)。
[0098] 1‑13的合成：将化合物1‑12(1.4克，1.92毫摩尔)加入到乙醇(30毫升)和水(10毫升)的混合溶液中，然后再将氯化铵(1.03克，19.2毫摩尔)和铁粉(1.07克，19.2毫摩尔)加
入到上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌2个小时。将反应液过滤，滤液用水(20毫升)稀
释，并用二氯甲烷(50毫升，1次)萃取，有机相用饱和食盐水(10毫升，1次)洗涤后用硫酸钠
干燥，过滤，滤液浓缩后得到化合物1‑13。LCMS(ESI)m/z：699.2(M+1)。
入到上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌2个小时。将反应液过滤，滤液用水(20毫升)稀
释，并用二氯甲烷(50毫升，1次)萃取，有机相用饱和食盐水(10毫升，1次)洗涤后用硫酸钠
干燥，过滤，滤液浓缩后得到化合物1‑13。LCMS(ESI)m/z：699.2(M+1)。
[0099] 1‑14的合成：将化合物1‑13(0.716克，1.02毫摩尔)溶解在乙酸(10毫升)和乙腈(5毫升)中，然后冷却到0‑5摄氏度将二氯海因(0.232克，1.1g毫摩尔)加入到上述混合溶液中
并搅拌25分钟。将反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(50毫升×2)和饱和
碳酸氢钠(50毫升)洗涤，浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶1至0∶1(v/v))分
离得到化合物1‑14。
并搅拌25分钟。将反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(50毫升×2)和饱和
碳酸氢钠(50毫升)洗涤，浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶1至0∶1(v/v))分
离得到化合物1‑14。
[0100] 1‑15的合成：将化合物1‑14(0.70克，0.95毫摩尔)溶解在乙酸(7毫升)和乙腈(3.5毫升)中，然后冷却到0‑5摄氏度将二氯海因(0.216克，1.02毫摩尔)加入到上述混合溶液中
并搅拌30分钟。将反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(50毫升×2)和饱和
碳酸氢钠(50毫升)洗涤，浓缩，用制备HPLC(色谱柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μ
m；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙腈％：35％‑70％，25分钟)分离得到化合物1‑15。
并搅拌30分钟。将反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(50毫升×2)和饱和
碳酸氢钠(50毫升)洗涤，浓缩，用制备HPLC(色谱柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10μ
m；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙腈％：35％‑70％，25分钟)分离得到化合物1‑15。
[0101] 1‑16的合成：将化合物1‑15(138毫克，0.18毫摩尔)溶解在二氯甲烷(2.0毫升)中，冷却到0‑5摄氏度加入三氟乙酸(1.5毫升)并搅拌40分钟。将反应液用乙酸乙酯(100毫升)，
用饱和碳酸氢钠(40毫升×2)和饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得化
合物1‑16。
用饱和碳酸氢钠(40毫升×2)和饱和食盐水(40毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得化
合物1‑16。
[0102] 1A～1D的合成：氮气保护下，向化合物1‑16(120毫克，0.18毫摩尔)的二氯甲烷(2毫升)溶液中加入三乙胺(36.38毫克，0.36毫摩尔)和丙烯酰氯(17.00，0.188毫摩尔)在0摄
氏度下搅拌30分钟。反应液用水(10毫升)萃灭，乙酸乙酯(50毫升×2)萃取。合并的有机相
用饱和食盐水(10毫升)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物1的粗品。将该粗品用SFC
分离(柱信息：REGIS(R，R)WHELK‑O1(250mm*25mm，10μm)；流动相：[0.1％氨水‑甲醇]；甲醇％：40％‑40％，3；50分钟)得到1ac(3.2054.163分钟)、化合物1D(4.7分钟)、化合物1B
(5.62分钟)。将1ac再次SFC分离(柱信息：(s，s)WHELK‑O1(250mm*50mm，10μm)；流动相：
[0.1％氨水‑异丙醇]；异丙醇％：60％‑60％，5.5min；90分钟)得到化合物1C(6.175分钟)、化合物1A(7.905分钟)。
氏度下搅拌30分钟。反应液用水(10毫升)萃灭，乙酸乙酯(50毫升×2)萃取。合并的有机相
用饱和食盐水(10毫升)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物1的粗品。将该粗品用SFC
分离(柱信息：REGIS(R，R)WHELK‑O1(250mm*25mm，10μm)；流动相：[0.1％氨水‑甲醇]；甲醇％：40％‑40％，3；50分钟)得到1ac(3.2054.163分钟)、化合物1D(4.7分钟)、化合物1B
(5.62分钟)。将1ac再次SFC分离(柱信息：(s，s)WHELK‑O1(250mm*50mm，10μm)；流动相：
[0.1％氨水‑异丙醇]；异丙醇％：60％‑60％，5.5min；90分钟)得到化合物1C(6.175分钟)、化合物1A(7.905分钟)。
[0103] 化合物1A：LCMS(ESI)m/z：721.0(M+1)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.38(br，1H)，7.31(d，J＝6.8Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.93(m，1H)，6.35(d，J＝16.8Hz，1H)，5.75(d，J＝
10.4Hz，1H)，4.62(br，2H)，4.30‑4.14(br，3H)，3.88(br，2H)，3.58‑3.43(m，3H)，3.42‑3.40(m，2H)，2.50(br，1H)，2.25(br，2H)，2.04(s，3H)，1.18‑1.14(m，6H)。
10.4Hz，1H)，4.62(br，2H)，4.30‑4.14(br，3H)，3.88(br，2H)，3.58‑3.43(m，3H)，3.42‑3.40(m，2H)，2.50(br，1H)，2.25(br，2H)，2.04(s，3H)，1.18‑1.14(m，6H)。
[0104] 化合物1B：LCMS(ESI)m/z：721.2(M+1)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.48(d，J＝5.2Hz，1H)，7.32(d，J＝6.8Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.93(m，1H)，6.32(d，J＝16.8Hz，1H)，5.76(dd，J＝10.4，1.6Hz，1H)，4.55‑4.95(br，2H)，4.25‑4.10(m，3H)，3.84(b r，2H)，3.60‑3.40(m，3H)，3.00‑3.25(m，2H)，2.75(br，1H)，2.24(br，2H)，2.04(s，3H)，1.18‑1.14(m，6H)。
[0105] 化合物1C：LCMS(ESI)m/z：721.0(M+1)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.48(d，J＝4.8Hz，1H)，7.31(d，J＝6.8Hz，1H)，7.14(s，1H)，7.02(d，J＝4.4Hz，1H)，6.52(br，1H)6.36(d，J＝16.8Hz，1H)，5.75(d，.J＝10.4Hz，1H)，4.55‑4.80(m，2H)，4.07‑4.14(m，3H)，3.85(br，2H)，3.60(br，1H)，3.45(br，1H)，2.95‑3.20(b r，2H)，2.54(m，1H)，2.25(br，2H)，2.00(s，3H)，1.18‑1.14(m，6H)。
[0106] 化合物1D：LCMS(ESI)m/z：721.1(M+1)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.48(d，J＝5.2Hz，1H)，7.31(d，J＝6.8Hz，1H)，7.14(s，2H)，6.50(m，1H)，6.36(d，J＝18.8Hz，1H)，5.75(d，J＝11.2Hz，1H)，4.62‑4.80(br，2H)，4.07‑4.14(m，2H)，3.50‑3.85(m，3H)，3.20‑3.60(m，4H)，2.50(br，1H)，2.25(br，2H)，2.04(s，3H)，1.18‑1.14(m，6H)。
[0107]
[0108] 同法在步骤1‑11的合成中使用手性的哌嗪化合物1‑18，经过同样的合成步骤和方法得到化合物1‑25。化合物1‑25经过手性SFC制备(柱信息；(s，s)WHELK‑O1(250mm*50mm，10μm)；流动相：流动相A为超临界二氧化碳，流动相B为[0.1％氨水‑异丙醇]；洗脱梯度：40％‑
40％)得到化合物1D，然后经过HPLC制备(柱信息：Phenomenex Luna C8 250*50mm*10μm；流
动相：流动相A为含有0.225％甲酸的水，流动相B为乙腈；洗脱梯度：20％‑60％30min.)得到
化合物1D。
40％)得到化合物1D，然后经过HPLC制备(柱信息：Phenomenex Luna C8 250*50mm*10μm；流
动相：流动相A为含有0.225％甲酸的水，流动相B为乙腈；洗脱梯度：20％‑60％30min.)得到
化合物1D。
[0109] 化合物1D：LCMS(ESI)m/z：721.2(M+1)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.52(d，J＝5.02Hz，1H)，7.39(d，J＝7.2Hz，1H)，7.23(s，1H)，7.09(brd，J＝4.0Hz，1H)，6.59(brs，1H)，
6.43(dd，J＝16.8，1.6Hz，1H)，5.84(brd，J＝10.4Hz，1H)，4.96(brs，1H)，4.73(brs，1H)，
4.21(brs，1H)，3.85‑4.05(m，4H)，3.43‑3.73(m，2H)，3.04‑3.34(m，2H)，2.58(m，1H)，2.32(brs，2H)，2.06(s，3H)，1.21(d，J＝6.8Hz，3H)1.15(d，J＝6.8Hz，3H)。
6.43(dd，J＝16.8，1.6Hz，1H)，5.84(brd，J＝10.4Hz，1H)，4.96(brs，1H)，4.73(brs，1H)，
4.21(brs，1H)，3.85‑4.05(m，4H)，3.43‑3.73(m，2H)，3.04‑3.34(m，2H)，2.58(m，1H)，2.32(brs，2H)，2.06(s，3H)，1.21(d，J＝6.8Hz，3H)1.15(d，J＝6.8Hz，3H)。
[0110] SFC：ee值100％，保留时间2.951分钟。(柱信息：(S，S)Whelk‑O1 100×4.6mmI.D.，5.0μm；流动相：流动相A为超临界二氧化碳，流动相B为[乙腈(含0.05％二甲胺)‑异丙醇(V∶V＝1∶2)]；洗脱梯度：40％流动相B在超临界二氧化碳中，流速2.5mL/min，检测器：PDA，柱温
40℃，背压100Bar。
40℃，背压100Bar。
[0111] 实施例2
[0112]
[0113]
[0114] 实施例3
[0115]
[0116] 实施例4
[0117]
[0118]
[0119] 4‑5‑C的合成：
[0120] 在0℃下，向化合物4‑5‑A(50g，320.28mmol，1eq)，碳酸钾(55.00g，397.93mmol，1.24eq)和乙腈(500mL)的悬混液中缓慢滴加丙二酸甲酯酰氯(51.20g，374.97mmol，
40.00mL，1.17eq)，滴加完毕后，在20℃下搅拌16小时。反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙
酯(100mL*2)洗涤，滤液浓缩得到的粗品用石油醚/乙酸乙酯(V/V＝3/1，150mL/50mL)打浆
16小时后过滤，滤饼用上述打浆溶剂洗涤(50mL*2)，收集固体并干燥，得到化合物4‑5‑C。相+ 1
关表征数据如下：LCMS m/z：256.9[M+1]；H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.92(br s，1H)，7.84
(td，J＝1.2，8.4Hz，1H)，7.49‑7.41(m，1H)，7.40‑7.32(m，1H)，3.85(s，3H)，3.57(s，2H)。
40.00mL，1.17eq)，滴加完毕后，在20℃下搅拌16小时。反应液用硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙
酯(100mL*2)洗涤，滤液浓缩得到的粗品用石油醚/乙酸乙酯(V/V＝3/1，150mL/50mL)打浆
16小时后过滤，滤饼用上述打浆溶剂洗涤(50mL*2)，收集固体并干燥，得到化合物4‑5‑C。相+ 1
关表征数据如下：LCMS m/z：256.9[M+1]；H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝9.92(br s，1H)，7.84
(td，J＝1.2，8.4Hz，1H)，7.49‑7.41(m，1H)，7.40‑7.32(m，1H)，3.85(s，3H)，3.57(s，2H)。
[0121] 4‑5‑E的合成：
[0122] 向化合物4‑5‑C(60g，234.20mmol，1eq)的乙腈(600mL)溶液中加入碳酸铯(78g，239.40mmol，1.02eq)，然后化合物(E)‑4‑乙氧基‑1，1，1‑三氟丁‑3‑烯‑2‑酮(40.12g，
238.65mmol，34mL，1.02eq)滴加入反应液中。反应液在20℃下搅拌1小时，反应结束后过滤，
滤饼用乙酸乙酯(100mL*2)洗涤后合并有机相，浓缩得到粗产品。粗品用石油醚/乙酸乙酯
(V/V＝10/1，600mL/60mL)打浆1小时后过滤，得到的滤饼用此溶剂洗涤(50mL*3)，收集滤饼
+
并真空干燥得到化合物4‑5‑E。相关表征数据如下：LCMS m/z：379.0[M+1] ；1H NMR
(400MHz，DMSO‑d6)δ＝11.40(br s，1H)，8.67‑8.31(m，1H)，7.81‑7.56(m，2H)，7.34(dt，J＝
5.5，8.3Hz，1H)，7.01‑6.02(m，1H)，3.83‑3.63(m，3H)。
238.65mmol，34mL，1.02eq)滴加入反应液中。反应液在20℃下搅拌1小时，反应结束后过滤，
滤饼用乙酸乙酯(100mL*2)洗涤后合并有机相，浓缩得到粗产品。粗品用石油醚/乙酸乙酯
(V/V＝10/1，600mL/60mL)打浆1小时后过滤，得到的滤饼用此溶剂洗涤(50mL*3)，收集滤饼
+
并真空干燥得到化合物4‑5‑E。相关表征数据如下：LCMS m/z：379.0[M+1] ；1H NMR
(400MHz，DMSO‑d6)δ＝11.40(br s，1H)，8.67‑8.31(m，1H)，7.81‑7.56(m，2H)，7.34(dt，J＝
5.5，8.3Hz，1H)，7.01‑6.02(m，1H)，3.83‑3.63(m，3H)。
[0123] 4‑5‑F的合成：
[0124] 向化合物4‑5‑E(129g，341.06mmol，leq)的2，2，2‑三氟乙醇(650mL)中加入三乙胺(50.89g，502.92mmol，70mL，1.47eq)。反应液在80℃下反应16小时。反应结束后将反应液浓缩得到残留物。向残留物中加入乙酸乙酯500mL并搅拌1小时，然后过滤，滤饼用乙酸乙酯洗
涤(50mL*2)，收集滤饼并真空干燥，得到化合物4‑5‑F。相关表征数据如下：LCMS m/z：346.9+
[M+1]；1HNMR(400MHz，DMSO‑d6)δ＝8.25(d，J＝8.3Hz，1H)，8.07‑7.85(m，2H)，7.37(d，J＝
8.0Hz，1H)，6.99(d，J＝8.0Hz，1H)。
涤(50mL*2)，收集滤饼并真空干燥，得到化合物4‑5‑F。相关表征数据如下：LCMS m/z：346.9+
[M+1]；1HNMR(400MHz，DMSO‑d6)δ＝8.25(d，J＝8.3Hz，1H)，8.07‑7.85(m，2H)，7.37(d，J＝
8.0Hz，1H)，6.99(d，J＝8.0Hz，1H)。
[0125] 4‑5‑K的合成：
[0126]
[0127] 在25摄氏度下，向化合物4‑5‑F(90g)的醋酸异丙酯(810mL)悬浊液中加入4‑5‑G(15.75g，0.5eq)的醋酸异丙酯溶液(90mL)，得到澄清溶液。加入晶种(30mg，ee值91％)，混
合物在25摄氏度下搅拌16小时，析出大量固体，过滤，母液用2N的盐酸洗涤。完全除去4‑5‑G时，母液浓缩，给出残余物。然后，残余物加入乙腈(540mL)和加入4‑5‑H(29.1g，0.8eq.)的乙腈溶液(20mL)，得到澄清溶液，5分钟后，固体析出。在80摄氏度下，固体溶解得到澄清溶
液，冷却到60～65℃，加入晶种(60mg，100％ee)，搅拌1小时。冷却到25摄氏度搅拌16小时，
固体过滤得到手性纯4‑5‑K的盐。用2N的氢氧化钠溶液溶解，甲基叔丁醚萃取，干燥，有机相减压蒸馏给出4‑5‑K。EE值99.5％；保留时间3.976分钟，SFC分析方法：柱子型号：Chiralpak IC‑3 150：A4.6mm I.D.，3μm，流动相：A：CO2B：乙醇(0.05％二乙胺，v/v)洗脱梯度：5分钟B从5％升到40％，并保持B 40％2.5分钟，然后并保持B 5％2.5分钟流速：2.5mL/min柱温：35
℃柱压：1500psi；
合物在25摄氏度下搅拌16小时，析出大量固体，过滤，母液用2N的盐酸洗涤。完全除去4‑5‑G时，母液浓缩，给出残余物。然后，残余物加入乙腈(540mL)和加入4‑5‑H(29.1g，0.8eq.)的乙腈溶液(20mL)，得到澄清溶液，5分钟后，固体析出。在80摄氏度下，固体溶解得到澄清溶
液，冷却到60～65℃，加入晶种(60mg，100％ee)，搅拌1小时。冷却到25摄氏度搅拌16小时，
固体过滤得到手性纯4‑5‑K的盐。用2N的氢氧化钠溶液溶解，甲基叔丁醚萃取，干燥，有机相减压蒸馏给出4‑5‑K。EE值99.5％；保留时间3.976分钟，SFC分析方法：柱子型号：Chiralpak IC‑3 150：A4.6mm I.D.，3μm，流动相：A：CO2B：乙醇(0.05％二乙胺，v/v)洗脱梯度：5分钟B从5％升到40％，并保持B 40％2.5分钟，然后并保持B 5％2.5分钟流速：2.5mL/min柱温：35
℃柱压：1500psi；
[0128] 4‑5的合成：
[0129]
[0130] 在80摄氏度下，向4‑5‑K(20g)的四氢呋喃溶液(160mL)溶液中加入吡啶(18.62g，4.07eq)，然后滴加液溴(18.6g，2.01eq)的四氢呋喃溶液(40mL)溶液。混合物在80摄氏度下
搅拌16小时。LC‑MS检测产物生成，有机相减压蒸馏给出残余物，残余物乙酸乙酯(120mL)稀
释，过滤，滤液用1M HCl溶液(30mL)，水(30mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠洗涤，浓缩给出4‑
5粗品，粗品用甲基叔丁醚(6mL)和石油醚(12mL)打浆，得到中间体4‑5。LCMS m/z：380.8[M+
+
1] 。EE值99.5％；保留时间1.206分钟，SFC分析方法：柱子型号：Chiralcel OJ‑3，100×
4.6mm I.D.，3μm。流动相：A：CO2B：异丙醇(0.05％异丙胺，v/v)。洗脱梯度：0.0分钟A 95％B
5％，0.5分钟；A 95％B 5％，2.0分钟；A60％B 40％，3.0分钟；A 60％B 40％，3.6分钟；A
95％B 5％，4.0分钟，A 95％B 5％流速：3.4mL/min柱温.35℃柱压：1800psi。
搅拌16小时。LC‑MS检测产物生成，有机相减压蒸馏给出残余物，残余物乙酸乙酯(120mL)稀
释，过滤，滤液用1M HCl溶液(30mL)，水(30mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠洗涤，浓缩给出4‑
5粗品，粗品用甲基叔丁醚(6mL)和石油醚(12mL)打浆，得到中间体4‑5。LCMS m/z：380.8[M+
+
1] 。EE值99.5％；保留时间1.206分钟，SFC分析方法：柱子型号：Chiralcel OJ‑3，100×
4.6mm I.D.，3μm。流动相：A：CO2B：异丙醇(0.05％异丙胺，v/v)。洗脱梯度：0.0分钟A 95％B
5％，0.5分钟；A 95％B 5％，2.0分钟；A60％B 40％，3.0分钟；A 60％B 40％，3.6分钟；A
95％B 5％，4.0分钟，A 95％B 5％流速：3.4mL/min柱温.35℃柱压：1800psi。
[0131] 4‑3的合成：
[0132] 氮气保护下，向化合物4‑1(2.00克，12.20毫摩尔)和化合物4‑2(8.20克，48.78毫摩尔)的二氧六环(20毫升)和水(5毫升)的混合溶液中一次加入1，1‑双(二苯基磷)二茂铁
氯化钯(892.36毫克，1.22毫摩尔)和碳酸钾(3.37克，24.39毫摩尔)，在85摄氏度下搅拌12
小时。反应液用水(50毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升×2)，后用饱和食盐水(50毫
升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶0至3∶
1(v/v))分离得到化合物4‑3。
氯化钯(892.36毫克，1.22毫摩尔)和碳酸钾(3.37克，24.39毫摩尔)，在85摄氏度下搅拌12
小时。反应液用水(50毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升×2)，后用饱和食盐水(50毫
升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶0至3∶
1(v/v))分离得到化合物4‑3。
[0133] 4‑4的合成：
[0134] 将化合物4‑3(1.90克，10.84毫摩尔)溶解在甲醇(20毫升)溶液中，向溶液中加入湿钯碳(190毫克，10％纯度)，通入氢气(15Psi)在25摄氏度下搅拌12小时。反应液用硅藻土
过滤，浓缩得到化合物4‑4。LCMS(ESI)m/z：180.2(M+1)。
过滤，浓缩得到化合物4‑4。LCMS(ESI)m/z：180.2(M+1)。
[0135] 4‑6的合成：
[0136]
[0137] 氮气保护下，向化合物4‑4(1.30克，7.25毫摩尔)和化合物4‑5(2.76克，7.25毫摩尔)的二氧六环(30毫升)的混合溶剂中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(664.08毫克，0.725毫
摩尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(839.23毫克，1.45毫摩尔)和碳酸铯(4.73
克，14.50亳摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌12小时。反应液用水(100毫升)稀释，用乙酸乙
酯萃取然(50毫升×2)，然后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过
滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物4‑6。LCMS
(ESI)m/z∶480.1(M+1)。
摩尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(839.23毫克，1.45毫摩尔)和碳酸铯(4.73
克，14.50亳摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌12小时。反应液用水(100毫升)稀释，用乙酸乙
酯萃取然(50毫升×2)，然后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过
滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯10∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物4‑6。LCMS
(ESI)m/z∶480.1(M+1)。
[0138] 4‑7的合成：
[0139]
[0140] 向化合物4‑6(2.5克，5.21毫摩尔)的醋酸(30毫升)溶液中加入N‑溴代丁二酰亚胺(928.11毫克，5.21毫摩尔)。反应在25℃下搅拌0.5小时。反应完毕后用饱和亚硫酸钠溶液
(10毫升)萃灭，用饱和碳酸氢钠溶液将溶液pH调到8，然后用乙酸乙酯(50毫升)萃取，然后
用饱和食盐水(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到化合物4‑7。LCMS
(ESI)m/z：558.0(M+1)。
(10毫升)萃灭，用饱和碳酸氢钠溶液将溶液pH调到8，然后用乙酸乙酯(50毫升)萃取，然后
用饱和食盐水(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后得到化合物4‑7。LCMS
(ESI)m/z：558.0(M+1)。
[0141] 4‑9的合成：
[0142]
[0143] 在氮气保护下，向化合物4‑7(1.90克，3.40毫摩尔)和化合物1‑5(434.66毫克，3.74毫摩尔)的甲苯(20毫升)的混合溶剂中加入氯[(三‑三叔丁基膦)‑2‑(2‑氨基联苯)]钯
(II)(384.75毫克，0.68毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(731.24毫克，3.74毫摩尔)。反应在
110摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(100毫
升×2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层
析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑9。LCMS(ESI)m/z∶562.1
(M+1)。
(II)(384.75毫克，0.68毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(731.24毫克，3.74毫摩尔)。反应在
110摄氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(100毫
升×2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层
析(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑9。LCMS(ESI)m/z∶562.1
(M+1)。
[0144] 4‑10的合成：
[0145]
[0146] 将化合物4‑9(1.30克，2.32毫摩尔)加入到盐酸水溶液中(12摩尔每升，30毫升)。反应在115℃下搅拌36小时。反应完毕后将反应液浓缩后用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯
萃取然(150毫升×2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓
缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至0∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑10。LCMS
(ESI)m/z：548.0(M+1)。
萃取然(150毫升×2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓
缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至0∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑10。LCMS
(ESI)m/z：548.0(M+1)。
[0147] 4‑11的合成：
[0148]
[0149] 0摄氏度下，将化合物4‑10(0.7克，1.28亳摩尔)加入到乙酸(10毫升)和发烟硝酸(1.26克，20.00毫摩尔)的混合溶液中，然后再加入亚硝酸钠(441.10毫克，6.39毫摩尔)，在
25摄氏度下搅拌0.5小时。反应液加入到冰水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升
×2)，后用饱和食盐水(50毫升)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝6，有机
相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物4‑11。LCMS(ESI)m/z：593.0(M+1)。
25摄氏度下搅拌0.5小时。反应液加入到冰水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升
×2)，后用饱和食盐水(50毫升)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝6，有机
相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物4‑11。LCMS(ESI)m/z：593.0(M+1)。
[0150] 4‑12的合成：
[0151]
[0152] 室温下向化合物4‑11(0.70克，1.18毫摩尔)的乙腈(10毫升)溶液中加入三氯氧磷(985.83毫克，5.95毫摩尔)和N，N‑二甲基甲酰胺(863.62微克，11.82微摩尔)，于45℃下搅
拌1小时。反应液加入到水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升)，后用饱和食盐水
(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物4‑12。LCMS(ESI)m/z：
611.0(M+1)。
拌1小时。反应液加入到水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(50毫升)，后用饱和食盐水
(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物4‑12。LCMS(ESI)m/z：
611.0(M+1)。
[0153] 4‑14的合成：
[0154]
[0155] 向化合物4‑12(0.60克，0.982亳摩尔)和化合物4‑13(452.39毫克，1.96毫摩尔)的乙腈(10毫升)加入4A分子筛(1克)，反应在45摄氏度下搅拌12小时。将反应液用硅藻土过滤
并浓缩，用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升×2)，后用饱和食盐水(20毫升)洗
涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑14。LCMS(ESI)m/z：805.1(M+1)。
并浓缩，用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升×2)，后用饱和食盐水(20毫升)洗
涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物4‑14。LCMS(ESI)m/z：805.1(M+1)。
[0156] 4‑15的合成：
[0157]
[0158] 向化合物4‑14(0.4克，0.497毫摩尔)的干燥DMF(8毫升)溶液中加入1，8‑二氮杂二环[5.4.0]十一碳‑7‑烯(151.34毫克，0.994毫摩尔)。反应液在130℃下搅拌30分钟。将反应
液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，用水(30毫升×3)和饱和食盐水(20×2毫升)洗涤，有机相用
无水硫酸钠干燥得到化合物4‑15。LCMS(ESI)m/z：758.2(M+1)。
液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，用水(30毫升×3)和饱和食盐水(20×2毫升)洗涤，有机相用
无水硫酸钠干燥得到化合物4‑15。LCMS(ESI)m/z：758.2(M+1)。
[0159] 4‑16的合成：
[0160]
[0161] 将化合物4‑15(0.35克，0.461毫摩尔)加入到乙醇(5毫升)和水(3毫升)的混合溶液中，然后再将氯化铵(247.08毫克，4.62毫摩尔)和铁粉(257.95毫克，4.62亳摩尔)加入到
上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌2个小时。将反应液过滤，滤液用水(20毫升)稀释，并
用乙酸乙酯(30毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，
滤液浓缩后得到化合物4‑16。LCMS(ESI)m/z：728.2(M+1)。
上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌2个小时。将反应液过滤，滤液用水(20毫升)稀释，并
用乙酸乙酯(30毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，
滤液浓缩后得到化合物4‑16。LCMS(ESI)m/z：728.2(M+1)。
[0162] 4‑17的合成：
[0163]
[0164] 将化合物4‑16(0.18克，0.247毫摩尔)溶解在DMF(10毫升)和THF(5毫升)中，然后冷却到0摄氏度将二氯海因(82.84毫克，0.42毫摩尔)加入到上述混合溶液中并搅拌30分
钟。将反应液用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫
升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到粗产品化合物4‑17。LCMS(ESI)m/z：796.1
(M+1)。
钟。将反应液用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫
升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到粗产品化合物4‑17。LCMS(ESI)m/z：796.1
(M+1)。
[0165] 4‑18的合成：
[0166]
[0167] 将化合物4‑17(200毫克，0.25毫摩尔)溶解在二氯甲烷(3.0毫升)中，在25摄氏度下加入三氟乙酸(1毫升)并搅拌20分钟。将反应液浓缩得粗产品化合物4‑18。
[0168] 化合物4的合成：
[0169]
[0170] 将化合物4‑18(200毫克，0.287毫摩尔)溶解在THF(4毫升)和水(2毫升)的混合溶液中，用碳酸钾将上述溶液的pH调到8，然后向反应液滴加丙烯酰氯(38.98毫克，0.43毫摩
尔)并搅拌5分钟。将反应液用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱
和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后用制备HPLC(色谱柱：
Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙腈％：49％‑
1
69％，10分钟)分离得到化合物4。LCMS(ESI)m/z：750.1(M+1)。HNMR(400MHz，DMSO‑d6)δ＝
8.98(s，1H)，7.63(d，J＝7.6Hz，1H)，7.2(s，1H)，6.99‑6.74(m，1H)，6.25‑6.07(m，3H)，
5.81‑5.72(m，1H)，4.71‑4.35(m，2H)，4.18(dd，J＝4.8，8.4Hz，2H)，4.02‑3.70(m，2H)，
3.66‑3.43(m，3H)，2.92‑2.74(m，1H)，2.14(s，2H)，1.13‑0.83(m，13H)
尔)并搅拌5分钟。将反应液用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱
和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后用制备HPLC(色谱柱：
Phenomenex luna C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙腈％：49％‑
1
69％，10分钟)分离得到化合物4。LCMS(ESI)m/z：750.1(M+1)。HNMR(400MHz，DMSO‑d6)δ＝
8.98(s，1H)，7.63(d，J＝7.6Hz，1H)，7.2(s，1H)，6.99‑6.74(m，1H)，6.25‑6.07(m，3H)，
5.81‑5.72(m，1H)，4.71‑4.35(m，2H)，4.18(dd，J＝4.8，8.4Hz，2H)，4.02‑3.70(m，2H)，
3.66‑3.43(m，3H)，2.92‑2.74(m，1H)，2.14(s，2H)，1.13‑0.83(m，13H)
[0171] 实施例5
[0172]
[0173] 5‑3的合成：氮气保护下，向化合物5‑1(14克，85.37毫摩尔)和化合物5‑2(52.59克，341.48毫摩尔)的二氧六环(150毫升)和水(30毫升)的混合溶液中一次加入1，1‑双(苯
基磷)二茂铁氯化钯(2.5克，3.41毫摩尔)和碳酸钾(35.40克，256.11毫摩尔)，在85摄氏度
下搅拌12小时。将反应液浓缩后用水(500毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(500毫升×2)，后
用饱和食盐水(200毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油
醚∶乙酸乙酯1∶0至1∶1(v/v))分离得到化合物5‑3。
基磷)二茂铁氯化钯(2.5克，3.41毫摩尔)和碳酸钾(35.40克，256.11毫摩尔)，在85摄氏度
下搅拌12小时。将反应液浓缩后用水(500毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(500毫升×2)，后
用饱和食盐水(200毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油
醚∶乙酸乙酯1∶0至1∶1(v/v))分离得到化合物5‑3。
[0174] 5‑4的合成：将化合物5‑3(5.7克，38.73毫摩尔)溶解在甲醇(50毫升)溶液中，向溶液中加入湿钯碳(500毫克，10％纯度)，通入氢气(15Psi)在25摄氏度下搅拌12小时。反应液
用硅藻土过滤，浓缩得到化合物5‑4。LCMS(ESI)m/z：152.2(M+1)。
用硅藻土过滤，浓缩得到化合物5‑4。LCMS(ESI)m/z：152.2(M+1)。
[0175] 5‑6的合成：
[0176]
[0177] 氮气保护下，向化合物5‑4(3.7克，24.47毫摩尔)和化合物4‑5(10.26克，26.92毫摩尔)的二氧六环(30毫升)的混合溶剂中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(2.24克，2.45毫摩
尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(2.83克，4.89毫摩尔)和碳酸铯(15.95克，
48.94毫摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌12小时。反应液用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃
取然(50毫升×2)，然后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓
缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯5∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物5‑6。LCMS(ESI)m/z：
452.1(M+1)。
尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(2.83克，4.89毫摩尔)和碳酸铯(15.95克，
48.94毫摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌12小时。反应液用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃
取然(50毫升×2)，然后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓
缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯5∶1至1∶1(v/v))分离得到化合物5‑6。LCMS(ESI)m/z：
452.1(M+1)。
[0178] 5‑7的合成：
[0179]
[0180] 向化合物5‑6(5.4克，11.96毫摩尔)的醋酸(50毫升)溶液中加入N‑溴代丁二酰亚胺(3.19克，17.95毫摩尔)。反应在25℃下搅拌0.5小时。反应完毕后用饱和亚硫酸钠溶液
(50毫升)萃灭，用氢氧化钠将溶液pH调到8，然后用乙酸乙酯(200毫升)萃取，然后用饱和食
盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸
乙酯4∶1至2∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物5‑7。LCMS(ESI)m/z：529.9(M+1)。
(50毫升)萃灭，用氢氧化钠将溶液pH调到8，然后用乙酸乙酯(200毫升)萃取，然后用饱和食
盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸
乙酯4∶1至2∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物5‑7。LCMS(ESI)m/z：529.9(M+1)。
[0181] 5‑9的合成：
[0182]
[0183] 在氮气保护下，向化合物5‑7(1.5克，2.83毫摩尔)和化合物1‑5(492.69毫克，4.24毫摩尔)的甲苯(15毫升)的混合溶剂中加入氯[(三‑三叔丁基膦)‑2‑(2‑氨基联苯)]钯(II)
(289.89毫克，0.565毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(607.84毫克，3.11毫摩尔)。反应在110摄
氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(100毫升×
2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析
(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物5‑9。LCMS(ESI)m/z：534.1(M+
1)。
(289.89毫克，0.565毫摩尔)和N，N‑二环己基甲胺(607.84毫克，3.11毫摩尔)。反应在110摄
氏度下搅拌16小时。将反应液浓缩后用水(100毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(100毫升×
2)，后用饱和食盐水(100毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析
(石油醚∶乙酸乙酯3∶1至1∶1(v/v))分离得到浓缩得到化合物5‑9。LCMS(ESI)m/z：534.1(M+
1)。
[0184] 5‑10的合成：
[0185]
[0186] 将化合物5‑9(0.5克，0.937毫摩尔)加入到盐酸水溶液中(12摩尔每升，20毫升)。反应在115℃下搅拌36小时。反应完毕后将反应液浓缩后用水(50毫升)稀释，用乙酸乙酯萃
取然(50毫升×2)，后用饱和食盐水(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得
到化合物5‑10。LCMS(ESI)m/z：520.0(M+1)。
取然(50毫升×2)，后用饱和食盐水(50毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得
到化合物5‑10。LCMS(ESI)m/z：520.0(M+1)。
[0187] 5‑11的合成：
[0188]
[0189] 0摄氏度下，将化合物5‑10(0.40克，0.77毫摩尔)加入到乙酸(5毫升)和发烟硝酸(0.96克，15.23毫摩尔)的混合溶液中，然后再加入亚硝酸钠(265.67毫克，3.85毫摩尔)，在
25摄氏度下搅拌0.5小时。反应液加入到冰水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升
×2)，后用饱和食盐水(20毫升×2)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝6，有
机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物5‑11。LCMS(ESI)m/z：565.0(M+1)。
25摄氏度下搅拌0.5小时。反应液加入到冰水(50毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升
×2)，后用饱和食盐水(20毫升×2)洗涤，所得有机相用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝6，有
机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物5‑11。LCMS(ESI)m/z：565.0(M+1)。
[0190] 5‑12的合成：
[0191]
[0192] 室温下向化合物5‑11(0.30克，0.53毫摩尔)的乙腈(3毫升)溶液中加入三氯氧磷(407.51毫克，2.66毫摩尔)和N，N‑二甲基甲酰胺(388.52微克，5.32微摩尔)，于45℃下搅拌
1小时。反应液加入到水(10毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(10毫升)，后用饱和食盐水(10
毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物5‑12。LCMS(ESI)m/z：583.0(M+1)。
1小时。反应液加入到水(10毫升)中稀释，用乙酸乙酯萃取然(10毫升)，后用饱和食盐水(10
毫升)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物5‑12。LCMS(ESI)m/z：583.0(M+1)。
[0193] 5‑14的合成：
[0194]
[0195] 向化合物5‑12(0.28克，0.48毫摩尔)和化合物4‑13(221.28毫克，0.96毫摩尔)的乙腈(3毫升)加入4A分子筛(0.5克)，反应在45摄氏度下搅拌12小时。将反应液用硅藻土过
滤并浓缩，用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升×2)，后用饱和食盐水(20毫升)
洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至0∶1(v/
v))分离得到浓缩得到化合物5‑14。LCMS(ESI)m/z：777.1(M+1)。
滤并浓缩，用水(20毫升)稀释，用乙酸乙酯萃取然(20毫升×2)，后用饱和食盐水(20毫升)
洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1至0∶1(v/
v))分离得到浓缩得到化合物5‑14。LCMS(ESI)m/z：777.1(M+1)。
[0196] 5‑15的合成：
[0197]
[0198] 向化合物5‑14(0.15克，0.19毫摩尔)的干燥DMF(2毫升)溶液中加入1，8‑二氮杂二环[5.4.0]十一碳‑7‑烯(44.10毫克，0.29毫摩尔)。反应液在130℃下搅拌30分钟。将反应液
用乙酸乙酯(20毫升)稀释，用水(10毫升×3)和饱和食盐水(10×2毫升)洗涤，有机相用无
水硫酸钠干燥得到化合物5‑15。LCMS(ESI)m/z：730.2(M+1)。
用乙酸乙酯(20毫升)稀释，用水(10毫升×3)和饱和食盐水(10×2毫升)洗涤，有机相用无
水硫酸钠干燥得到化合物5‑15。LCMS(ESI)m/z：730.2(M+1)。
[0199] 5‑16的合成：
[0200]
[0201] 将化合物5‑15(0.11克，0.15毫摩尔)加入到乙醇(1毫升)和水(1毫升)的混合溶液中，然后再将氯化铵(80.64毫克，1.51毫摩尔)和铁粉(84.19毫克，1.51毫摩尔)加入到上述
混合溶液中并在80摄氏度下搅拌12个小时。将反应液过滤，滤液用水(10毫升)稀释，并用乙
酸乙酯(10毫升)萃取，有机相用饱和食盐水(10毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩
后得到化合物5‑16。LCMS(ESI)m/z：700.2(M+1)。
混合溶液中并在80摄氏度下搅拌12个小时。将反应液过滤，滤液用水(10毫升)稀释，并用乙
酸乙酯(10毫升)萃取，有机相用饱和食盐水(10毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩
后得到化合物5‑16。LCMS(ESI)m/z：700.2(M+1)。
[0202] 5‑17的合成：
[0203]
[0204] 将化合物5‑16(0.1克，0.14毫摩尔)溶解在DMF(2毫升)中，然后冷却到0摄氏度将二氯海因(47.87毫克，0.24毫摩尔)加入到上述混合溶液中并搅拌30分钟。将反应液用水
(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸
钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到粗产品化合物5‑17。LCMS(ESI)m/z：.768.2(M+1)。
(20毫升)稀释，用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20毫升)洗涤后用硫酸
钠干燥，过滤，滤液浓缩后得到粗产品化合物5‑17。LCMS(ESI)m/z：.768.2(M+1)。
[0205] 5‑18的合成：
[0206]
[0207] 将化合物5‑17(140毫克，0.18毫摩尔)溶解在二氯甲烷(2毫升)中，在25摄氏度下加入三氟乙酸(0.5毫升)并搅拌20分钟。将反应液浓缩得粗产品化合物5‑18。
[0208] 化合物5的合成：
[0209]
[0210] 将化合物5‑18(120毫克，0.18毫摩尔)溶解在THF(2毫升)和水(1毫升)的混合溶液中，用碳酸钾将上述溶液的pH调到8，然后向反应液滴加丙烯酰氯(24.37毫克，0.27毫摩尔)
并搅拌5分钟。将反应液用水(10毫升)稀释，用乙酸乙酯(10毫升)萃取，有机相用饱和食盐
水(10毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后用制备HPLC(色谱柱：Phenomenexluna
C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.1％三氟乙酸)‑乙腈]；乙腈％：50％‑80％，10分钟)分离得到化合物5。LCMS(ESI)m/z：722.1(M+1)。
并搅拌5分钟。将反应液用水(10毫升)稀释，用乙酸乙酯(10毫升)萃取，有机相用饱和食盐
水(10毫升)洗涤后用硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后用制备HPLC(色谱柱：Phenomenexluna
C18 150*25mm*10μm；流动相：[水(0.1％三氟乙酸)‑乙腈]；乙腈％：50％‑80％，10分钟)分离得到化合物5。LCMS(ESI)m/z：722.1(M+1)。
[0211] 实施例6
[0212]
[0213] 6‑3的合成：氮气保护下，向化合物6‑1(10克，37.70毫摩尔)和化合物5‑2(24.46克，158.79毫摩尔)二氧六环(80毫升)和水(20毫升)的溶液中一次加入Pd(dppf)Cl2(2.90
克，3.97毫摩尔)和碳酸钾(16.46克，119.09毫摩尔)，在100摄氏度下搅拌12小时。将反应液
浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑3。LCMS(ESI)m/z：
147.2(M+1)。
克，3.97毫摩尔)和碳酸钾(16.46克，119.09毫摩尔)，在100摄氏度下搅拌12小时。将反应液
浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑3。LCMS(ESI)m/z：
147.2(M+1)。
[0214] 6‑4的合成：氮气保护下，20℃下向化合物6‑3(5.2克，35.57毫摩尔)的甲醇(20毫升)溶液中加入钯碳(0.5克，17.10毫摩尔)，在20摄氏度氢气(15PSI)的条件下搅拌10分钟。
反应液通过硅藻土过滤、旋干得粗品6‑4。LCMS(ESI)m/z：151.2(M+1)
反应液通过硅藻土过滤、旋干得粗品6‑4。LCMS(ESI)m/z：151.2(M+1)
[0215] 6‑6的合成：
[0216]
[0217] 氮气保护下，向化合物6‑4(5克，33.28毫摩尔)和化合物4‑5(12.68克，32.28毫摩尔)的二氧六环(150毫升)的混合溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(1.52克，1.66毫摩
尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(1.93克，3.33毫摩尔)和碳酸铯(21.69克，
66.57毫摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌3小时。将反应液浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙
酸乙酯1∶1(v/v))分离得到化合物6‑6。LCMS(ESI)m/z：451.1(M+1)
尔)，4，5‑双(二苯基膦)‑9，9‑二甲基氧杂蒽(1.93克，3.33毫摩尔)和碳酸铯(21.69克，
66.57毫摩尔)。反应在100摄氏度下搅拌3小时。将反应液浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙
酸乙酯1∶1(v/v))分离得到化合物6‑6。LCMS(ESI)m/z：451.1(M+1)
[0218] 6‑7的合成：
[0219]
[0220] 氮气保护下，将化合物6‑6(6克，13.323毫摩尔)溶于乙酸乙酯(100毫升)，然后分批次加入NBS(2.37克，13.32毫摩尔)。反应在20摄氏度下反应0.5小时。反应完毕后经萃取
浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶1(v/v))分离得到化合物6‑7。LCMS(ESI)m/z：
1
530.9(M+1)。H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.25(s，2H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(dt，J＝
5.6，8.4Hz，1H)，7.54(dt，J＝1.2，8.4Hz，1H)，6.88(s，2H)，2.63‑2.36(m，4H)，1.18‑1.04(m，6H)。
浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯1∶1(v/v))分离得到化合物6‑7。LCMS(ESI)m/z：
1
530.9(M+1)。H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.25(s，2H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(dt，J＝
5.6，8.4Hz，1H)，7.54(dt，J＝1.2，8.4Hz，1H)，6.88(s，2H)，2.63‑2.36(m，4H)，1.18‑1.04(m，6H)。
[0221] 6‑9的合成：
[0222]
[0223] 20摄氏度氮气保护下，将化合物6‑7(5克，9.45毫摩尔)和化合物1‑5(4.39克，37.79毫摩尔)至于二氧六环(50毫升)中依次加入二环己基甲基胺(2.77克，14.17毫摩尔)，
氯化锂(1.6克，37.79毫摩尔)和三叔丁基磷钯(724.17毫克，1.42毫摩尔)。反应在105摄氏
度氮气保护下反应12小时。反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，然后用饱和食盐水(50毫升，
3次)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/
v))分离得到化合物6‑9。
氯化锂(1.6克，37.79毫摩尔)和三叔丁基磷钯(724.17毫克，1.42毫摩尔)。反应在105摄氏
度氮气保护下反应12小时。反应液用乙酸乙酯(150毫升)稀释，然后用饱和食盐水(50毫升，
3次)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/
v))分离得到化合物6‑9。
[0224] 6‑10的合成：
[0225]
[0226] 氮气保护下，向化合物6‑9(2克，3.76毫摩尔)加入到盐酸水溶液中(12摩尔每升，20毫升)。反应在110℃下搅拌2小时。反应完毕后用直接减压浓缩，然后用乙酸乙酯(25毫
升，2次)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物6‑10。LCMS(ESI)m/z：519.0(M+
1)。
升，2次)萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物6‑10。LCMS(ESI)m/z：519.0(M+
1)。
[0227] 6‑11的合成：
[0228]
[0229] 0摄氏度下，将化合物6‑10(2克，3.86毫摩尔)加入到乙酸(15毫升)和发烟硝酸(1.22克，19.29毫摩尔)的混合溶液中，然后再加入亚硝酸钠(1.33克，19.29毫摩尔)，在15
摄氏度下搅拌0.5小时。反应液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，然后用饱和碳酸氢钠(40毫升)洗
涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物6‑11。LCMS(ESI)m/z：564.2(M+1)
摄氏度下搅拌0.5小时。反应液用乙酸乙酯(50毫升)稀释，然后用饱和碳酸氢钠(40毫升)洗
涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物6‑11。LCMS(ESI)m/z：564.2(M+1)
[0230] 6‑12的合成：
[0231]
[0232] 氮气保护下，室温下向化合物6‑11(1.85克，3.28毫摩尔)和DMF(24毫克，0.33毫摩尔)的乙腈(15毫升)溶液中加入三氯氧磷(2.52克，16.42毫摩尔)，于40℃下搅拌0.5小时。
反应完毕后经萃取浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1(v/v))分离得到化合物6‑
12。LCMS(ESI)m/z：582.0(M+1)。
反应完毕后经萃取浓缩后用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯2∶1(v/v))分离得到化合物6‑
12。LCMS(ESI)m/z：582.0(M+1)。
[0233] 6‑14的合成：
[0234]
[0235] 氮气保护下，向化合物6‑12(0.5克，0.859毫摩尔)和化合物4‑13(435.39毫克，1.89毫摩尔)的乙腈(15毫升)加入4A分子筛(2克)，反应在45摄氏度下搅拌12小时。反应经
硅藻土过滤，用乙酸乙酯(20毫升x2)和水(20毫升)萃取，浓缩后经硅胶柱层析(石油醚∶二
氯甲烷∶乙酸乙酯6∶7∶8(v/v))分离得到化合物6‑14。LCMS(ESI)m/z：776.5(M+1)。
硅藻土过滤，用乙酸乙酯(20毫升x2)和水(20毫升)萃取，浓缩后经硅胶柱层析(石油醚∶二
氯甲烷∶乙酸乙酯6∶7∶8(v/v))分离得到化合物6‑14。LCMS(ESI)m/z：776.5(M+1)。
[0236] 6‑15的合成：
[0237]
[0238] 氮气保护下，向化合物6‑14(300毫克，386.75微摩尔)的干燥DMF(3毫升)溶液中加入1，8‑二氮杂二环[5.4.0]十一碳‑7‑烯(88.32毫克，580.12微摩尔)。反应液在130℃下搅
拌0.5小时。LCMS显示反应已经完成。将反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，水(20毫升)洗涤，
浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑15。LCMS(ESI)
m/z：729.1(M+1)。
拌0.5小时。LCMS显示反应已经完成。将反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，水(20毫升)洗涤，
浓缩，剩余物用硅胶柱层析(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑15。LCMS(ESI)
m/z：729.1(M+1)。
[0239] 6‑16的合成：
[0240]
[0241] 将化合物6‑15(0.12克164.68微摩尔)加入到乙醇(4毫升)和水(2毫升)的混合溶液中，然后再将氯化铵(44.04毫克，823.40微摩尔)和铁粉(45.99毫克，823.40微摩尔)加入
到上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌0.5小时。将反应液过滤旋干，剩余物用硅胶柱层析
(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑16。LCMS(ESI)m/z：699.2(M+1)。
到上述混合溶液中并在80摄氏度下搅拌0.5小时。将反应液过滤旋干，剩余物用硅胶柱层析
(石油醚∶乙酸乙酯0∶1(v/v))分离得到化合物6‑16。LCMS(ESI)m/z：699.2(M+1)。
[0242] 6‑17的合成：
[0243]
[0244] 将化合物6‑16(50毫克，71.56微摩尔)溶解在DMF(2毫升)和乙酸乙酯(2毫升)中，然后冷却到0摄氏度将二氯海因(23.97毫克，121.65微摩尔)加入到上述混合溶液中并搅拌
10分钟。将反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(10毫升×2)和饱和碳酸氢钠
(10毫升)洗涤，浓缩，得到粗品化合物6‑17。LCMS(ESI)m/z：767.1(M+1)。
10分钟。将反应液用乙酸乙酯(20毫升)稀释，饱和亚硫酸氢钠(10毫升×2)和饱和碳酸氢钠
(10毫升)洗涤，浓缩，得到粗品化合物6‑17。LCMS(ESI)m/z：767.1(M+1)。
[0245] 6‑18的合成：
[0246]
[0247] 将化合物6‑17(50毫克，65.14毫摩尔)溶解在二氯甲烷(3.0毫升)中，冷却到0‑5摄氏度加入三氟乙酸(1.54克，13.51毫摩尔)并于15摄氏度搅拌15分钟。反应液直接减压浓缩
得化合物6‑18。LCMS(ESI)m/z：667.4(M+1)。
得化合物6‑18。LCMS(ESI)m/z：667.4(M+1)。
[0248] 化合物6的合成：
[0249]
[0250] 氮气保护下，向化合物6‑18(50毫克，65.14微摩尔)的四氢呋喃(5毫升)和水(2毫升)溶液中加入碳酸钾(20.71毫克，149.82微摩尔)和丙烯酰氯(8.14毫克，89.89微摩尔)在
25摄氏度下搅拌30分钟。反应液用水(10毫升)，乙酸乙酯(50毫升×2)萃取。合并的有机相
用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物6的粗品。该粗品用prep‑HPLC分离(柱信息：
Phenomenex Gemini‑NX C18 75*30毫米*3微米；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙
腈％：32％‑42％，7分钟)纯化得到化合物6。LCMS(ESI)m/z：721.1(M+1)。
25摄氏度下搅拌30分钟。反应液用水(10毫升)，乙酸乙酯(50毫升×2)萃取。合并的有机相
用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物6的粗品。该粗品用prep‑HPLC分离(柱信息：
Phenomenex Gemini‑NX C18 75*30毫米*3微米；流动相：[水(0.225％甲酸)‑乙腈]；乙
腈％：32％‑42％，7分钟)纯化得到化合物6。LCMS(ESI)m/z：721.1(M+1)。
[0251] 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝8.45(br d，J＝8.5Hz，2H)，7.42(d，J＝7.0Hz，1H)，7.27‑7.16(m，1H)，6.73‑6.35(m，2H)，5.89‑5.78(m，1H)，5.07‑4.59(m，1H)，4.30‑3.83(m，
4H)，3.75‑2.93(m，3H)，2.51‑2.17(m，7H)，1.22‑0.88(m，8H)。
4H)，3.75‑2.93(m，3H)，2.51‑2.17(m，7H)，1.22‑0.88(m，8H)。
[0252] 实验例1：H358细胞抗增殖实验
[0253] 实验材料：
[0254] RPMI‑1640培养基，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特，胎牛血清购自Biosera。CellTiter‑Glo(细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。NCI‑H358细胞系购自中国
科学院细胞库。Nivo多标记分析仪(PerkinElmer)。
科学院细胞库。Nivo多标记分析仪(PerkinElmer)。
[0255] 实验方法：
[0256] 将NCI‑H358细胞种于白色96孔板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含4000个NCI‑H358细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
[0257] 将待测化合物用排枪进3倍稀释至第9个浓度，即从2mM稀释至304nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中
间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至
1.52nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。另准备一块细胞板，在加药当天读取信号
值作为最大值(下面方程式中Max值)参与数据分析。向此细胞板每孔加入25μL细胞活率化
学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至
1.52nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。另准备一块细胞板，在加药当天读取信号
值作为最大值(下面方程式中Max值)参与数据分析。向此细胞板每孔加入25μL细胞活率化
学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
[0258] 向细胞板中加入每孔25μL的细胞活率化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
[0259] 数据分析：
[0260] 利用方程式(Sample‑Min)/(Max‑Min)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism中″log(inhibitor)vs.response‑‑
Variable slope″模式得出)。表1提供了本发明的化合物对NCI‑H358细胞增殖的抑制活性。
Variable slope″模式得出)。表1提供了本发明的化合物对NCI‑H358细胞增殖的抑制活性。
[0261] 表1
[0262]样品 H358 IC50(纳摩尔每升)
化合物1A 5.27
化合物1B 16.2
化合物1C 0.462
化合物1D 0.917
化合物4 0.9
化合物5 4
化合物6 2
化合物1A 5.27
化合物1B 16.2
化合物1C 0.462
化合物1D 0.917
化合物4 0.9
化合物5 4
化合物6 2
[0263] 结论：
[0264] 本发明化合物对H358细胞增殖有强抑制作用。
[0265] 实验例2：MIA‑PA‑CA‑2细胞抗增殖实验
[0266] 实验材料：
[0267] DMEM培养基，胎牛血清购自Biosera，马血清购自Gibco。CellTiter‑Glo(细胞活率化学发光检测试剂)试剂购自Promega。MIA‑PA‑CA‑2细胞系购南京科佰生物科技有限公司。
EnVision多标记分析仪(PerkinElmer)。
EnVision多标记分析仪(PerkinElmer)。
[0268] 实验方法：
[0269] 将MIA‑PA‑CA‑2细胞种于白色96孔板中，80μL细胞悬液每孔，其中包含1000个MIA‑PA‑CA‑2细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
[0270] 将待测化合物用排枪进行5倍稀释至第8个浓度，即从2mM稀释至26nM，设置双复孔实验。向中间板中加入78μL培养基，再按照对应位置，转移2μL每孔的梯度稀释化合物至中
间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至
0.13nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养3天。另准备一块细胞板，在加药当天读取信号
值作为最大值(下面方程式中Max值)参与数据分析。向此细胞板每孔加入25μL细胞活率化
学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
间板，混匀后转移20μL每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是10μM至
0.13nM。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养3天。另准备一块细胞板，在加药当天读取信号
值作为最大值(下面方程式中Max值)参与数据分析。向此细胞板每孔加入25μL细胞活率化
学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
[0271] 数据分析：
[0272] 利用方程式(样品‑最小值)/(最大值‑最小值)*100％将原始数据换算成抑制率，IC50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(GraphPad Prism软件中″log(抑制剂)/响应‑‑
变量作用域″模式得出)。表2提供了本发明的化合物对MIA‑PA‑CA‑2细胞增殖的抑制活性。
变量作用域″模式得出)。表2提供了本发明的化合物对MIA‑PA‑CA‑2细胞增殖的抑制活性。
[0273] 表2
[0274] 样品 MIA‑PA‑CA‑2 IC50(纳摩尔每升)化合物1A 46
化合物1B 52
化合物1C 7
化合物1D 8
化合物4 1
化合物5 5
化合物6 4
化合物1B 52
化合物1C 7
化合物1D 8
化合物4 1
化合物5 5
化合物6 4
[0275] 结论：本发明化合物对MIA‑PA‑CA‑2细胞增殖展现出较好的抑制活性。
[0276] 实验例3：体内异种动物移植肿瘤模型上的抗肿瘤活性测试
[0277] 实验目的：
[0278] 人非小细胞肺癌H358在体内肿瘤模型上考察待测化合物的单用抑瘤效果。
[0279] 实验方法：
[0280] 在雌性Balb/c nude小鼠皮下接种H358人非小细胞肺癌细胞株，接种后第6天按照肿瘤大小及动物体重随机分组，并且按照下列描述进行给药处理。
[0281] 溶剂对照组：分组当天下午开始给药，每天一次，按照0.1mL/10g体重的剂量灌胃给予溶媒(10％DMSO/60％PEG400/30％去离子水)，连续给药28天。
[0282] 给药组：分组当天下午开始给药，每天一次，3组分别按照1mg/kg、3mg/kg和10mg/kg体重的剂量灌胃给予化合物化合物1D(10％DMSO/60％PEG400/30％去离子水)，连续给药
28天。
28天。
[0283] 实验期间每周二次称量小鼠体重、测量肿瘤体积(按照长×宽2/2的公式计算瘤体积)。按照公式计算肿瘤抑制率TGI(％)＝[(1‑处理组给药结束时平均瘤体积‑处理组分组
给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积‑溶剂对照组分组给药时平均瘤
体积)]×100％。
给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积‑溶剂对照组分组给药时平均瘤
体积)]×100％。
[0284] 相对肿瘤体积计算公式为RTV＝TVn/TV1×100％
[0285] 其中，TV1为分组给药当天的肿瘤体积，而TVn为测量当天的肿瘤体积。
[0286] 相对肿瘤增殖率(T/C％)＝RTVt/RTVc×100％
[0287] 其中RTVt为治疗组平均相对肿瘤体积，RTVc为溶媒对照组平均相对肿瘤体积。
[0288] 实验结果：
[0289] 给药后28天，溶剂对照组的平均肿瘤体积达669.16mm3，化合物1D在1、3和10mg/kg3 3 3
剂量下的平均肿瘤体积分别为341.36mm、199.4mm和37.5mm，TGI分别为58.78％、84.17％
和113.19％，T/C分别为51.35％、27.59％和5.76％，与溶剂对照组相比能显著抑制肿瘤的
生长(P值分别为0.0629，0.0029和p＜0.0001)。
剂量下的平均肿瘤体积分别为341.36mm、199.4mm和37.5mm，TGI分别为58.78％、84.17％
和113.19％，T/C分别为51.35％、27.59％和5.76％，与溶剂对照组相比能显著抑制肿瘤的
生长(P值分别为0.0629，0.0029和p＜0.0001)。
[0290] 实验结论：
[0291] 本发明化合物具有良好的剂量依赖的趋势，能显著抑制肿瘤的生长，且小鼠体重没有明显下降，有较好耐受性。
[0292] 实验例4：雌性BALB/c裸鼠的药物代谢动力学研究
[0293] 本试验为雌性BALB/c裸鼠分别经口给予化合物1D后的药物代谢动力学研究。试验共分三组，分别灌胃给予1、3和10mg/kg化合物1D。每组动物分两批，分别采集给药后不同时
间点血浆和肿瘤组织样品。每组动物血浆样品的采集时间点分别为：0.083、0.25、0.5、1、2、
4、6和8小时，肿瘤组织样品的采集时间点分别为1、4和8小时，给药后到相应样品采集时间
点时，收集血浆，剥离肿瘤组织并称重。血浆‑80℃保存，肿瘤组织装于冻存管中，液氮中速
冻保存。交叉采集血浆样品计算每组对应时间点的浓度平均值用于计算PK参数。
间点血浆和肿瘤组织样品。每组动物血浆样品的采集时间点分别为：0.083、0.25、0.5、1、2、
4、6和8小时，肿瘤组织样品的采集时间点分别为1、4和8小时，给药后到相应样品采集时间
点时，收集血浆，剥离肿瘤组织并称重。血浆‑80℃保存，肿瘤组织装于冻存管中，液氮中速
冻保存。交叉采集血浆样品计算每组对应时间点的浓度平均值用于计算PK参数。
[0294] 实验结果：
[0295] 表3灌胃给予化合物1D后雌性BAL B/c裸鼠血浆和肿瘤药代动力学参数
[0296]
[0297] “NR”缺乏末端消除相或者暴露量过低：
[0298] “ND”无法确定：
[0299] AUC比值＝肿瘤AUC0‑last/血浆AUC0‑last。
[0300] 表4灌胃给予化合物1D后雌性各时间BALB/c裸鼠平均血浆和肿瘤中的药物浓度
[0301]
[0302] “ND”无法确定。
[0303] 结论：本发明化合物在小鼠体内代谢速度适中，在肿瘤组织中药物浓度高，具有良好的药代动力学性质。
[0304] 实验例5：化合物在人结肠癌CO‑04‑0070皮下异种移植肿瘤模型上的体内药效学研究
[0305] 实验目的：
[0306] 评价化合物在人结肠癌CO‑04‑0070皮下异种移植肿瘤BALB/c裸小鼠模型上的体内药效。
[0307] 肿瘤组织接种及分组：
[0308] 每只动物于右后背位置接种体积约30mm3的CO‑04‑0070 FP7代瘤块，肿瘤平均体3
积达到151mm时，采用随机分组，开始给药。
积达到151mm时，采用随机分组，开始给药。
[0309] 表5实验动物分组及给药方案
[0310] 组别 药物 剂量(mg/kg) 给药体积(μL/g)2 给药途径 给药频次1 溶剂对照 ‑‑ 10 PO QD×3周
2 化合物1D 3 10 PO QD×3周
3 化合物1D 10 10 PO QD×3周
4 化合物1D 30 10 PO QD×3周
2 化合物1D 3 10 PO QD×3周
3 化合物1D 10 10 PO QD×3周
4 化合物1D 30 10 PO QD×3周
[0311] 肿瘤测量和实验指标：
[0312] 每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。
[0313] 化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。相对肿瘤增殖率T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％(TRTV：治疗组平均RTV；CRTV：阴性对照组平均RTV)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝Vt/V0，其中V0
是分组给药时(即D0)测量所得肿瘤体积，Vt为某一次测量时的肿瘤体积，TRTV与CRTV取同一
天数据。TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。
是分组给药时(即D0)测量所得肿瘤体积，Vt为某一次测量时的肿瘤体积，TRTV与CRTV取同一
天数据。TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。
[0314] TGI(％)＝[(1‑(某处理组给药结束时平均瘤体积‑该处理组开始给药时平均瘤体积))/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积‑溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
[0315] 在实验结束后将检测肿瘤重量，并计算T/Cweight百分比，Tweight和Cweight分别表示给药组和溶媒对照组的瘤重。
[0316] 实验结果：
[0317] 表6化合物对人源结肠癌CO‑04‑0070异种移植瘤模型的抑瘤效果
[0318]
[0319] 注：a.平均值±SEM，n＝8。
[0320] 表7各组肿瘤重量
[0321]
[0322]
[0323] 注：a.平均值±SEM，n＝8。
[0324] b.肿瘤生长抑制由T/Cweight＝TWtreatment/TWvehicle计算。
[0325] c.p值运用one‑way ANOVA与溶媒治疗组进行分析肿瘤重量所得，F值有显著性差异(p＜0.01)，应用Games‑Howell法进行分析。
[0326] 体重变化情况：在此模型中所有给药组体重均未有明显下降
[0327] 结论：本发明化合物具有显著的抑制肿瘤生长的作用，且呈现一定的剂量依赖性。。
[0328] 实验例6：肿瘤组织中ERK和p‑ERK的蛋白水平实验
[0329] 本实验通过免疫印迹法分析人源结肠癌CO‑04‑0070皮下异种移植肿瘤模型在化合物1D(30mg/kg)给药6小时后，不同给药组肿瘤组织中ERK和p‑ERK的蛋白水平。
[0330] 实验材料：
[0331] 1)试剂
[0332]
[0333] 2)仪器
[0334]
[0335]
[0336] 3)抗体
[0337]
[0338] 实验方法：
[0339] 1)蛋白抽提及定量
[0340] ‑80℃冰箱中取出速冻组织样品。干冰上操作，剪取部分组织(约50‑100mg)，放入2mL加有钢珠的离心管中，加500μL细胞裂解液RIPA(已新鲜加入1％的蛋白酶抑制剂和磷酸
酶抑制剂)。Tissuelyser LT使用最高频率破碎组织5分钟。组织裂解液置于冰上裂解30分
钟。12,000rpm at 4℃离心10分钟，取上清放入新的1.5mL离心管中。用BCA定量试剂盒进行
蛋白定量。根据定量结果，配置上样用的蛋白样品，统一样品蛋白浓度至2μg/μL，并加入LDS加样缓冲液(4倍)和样品还原剂(10倍)，100℃恒温加热样品，10分钟。蛋白印迹，或将已变
性的样品‑80℃冰箱保存。
酶抑制剂)。Tissuelyser LT使用最高频率破碎组织5分钟。组织裂解液置于冰上裂解30分
钟。12,000rpm at 4℃离心10分钟，取上清放入新的1.5mL离心管中。用BCA定量试剂盒进行
蛋白定量。根据定量结果，配置上样用的蛋白样品，统一样品蛋白浓度至2μg/μL，并加入LDS加样缓冲液(4倍)和样品还原剂(10倍)，100℃恒温加热样品，10分钟。蛋白印迹，或将已变
性的样品‑80℃冰箱保存。
[0341] 2)免疫印迹
[0342] 上样样品解冻。上样：SDS‑PAGE胶中，每孔上样10μL。电泳：80伏，30分钟，后120伏，90分钟。转膜：利用iBlot2转膜套装及转膜仪转膜，P3程序运行7分钟。转膜结束后，按所需
检测蛋白的分子量大小裁剪膜。封闭：膜置于封闭液(用1倍TBST配置的5％的脱脂牛奶)中
封闭，室温，摇动，1小时。孵育一抗：加入合适稀释度的一抗(1∶1000)(用1倍TBST配置的5％的脱脂牛奶或牛血清白蛋白稀释)，4℃过夜，缓慢摇动。1倍TBST洗膜，3次，10分钟每次，室
温，摇动。孵育二抗：加入合适稀释度的二抗(1∶10000)，室温，缓慢摇动，1小时。1倍TBST洗膜，3次，10分钟每次，室温，摇动。化学发光：膜上加入West Femto超敏感化学发光试剂盒中的HRP底物。Tanon5200multi机器上检测化学发光并拍照。
检测蛋白的分子量大小裁剪膜。封闭：膜置于封闭液(用1倍TBST配置的5％的脱脂牛奶)中
封闭，室温，摇动，1小时。孵育一抗：加入合适稀释度的一抗(1∶1000)(用1倍TBST配置的5％的脱脂牛奶或牛血清白蛋白稀释)，4℃过夜，缓慢摇动。1倍TBST洗膜，3次，10分钟每次，室
温，摇动。孵育二抗：加入合适稀释度的二抗(1∶10000)，室温，缓慢摇动，1小时。1倍TBST洗膜，3次，10分钟每次，室温，摇动。化学发光：膜上加入West Femto超敏感化学发光试剂盒中的HRP底物。Tanon5200multi机器上检测化学发光并拍照。
[0343] 3)表达定量
[0344] 运用ImageJ等相关软件对免疫印迹化学发光谱带的密度强度进行相对定量。
[0345] 实验结果：见图1和图2。
[0346] 图2中“**”表示p值＜0.01双尾T检验。“normalized fold change”为归一化改变倍数。
[0347] 结论：本发明化合物处理组肿瘤组织中的p‑ERK蛋白表达水平降低程度显著。