一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，制备步骤为：将阳离子聚合物与负电性小分子溶解，得到共混溶液，其中阳离子聚合物与负电性小分子的质量比控制在1:0.15～2，将得到的共混溶液制成凝胶或膜，或将共混溶液对基材进行改性，制备得到止血材料。通过负电性小分子调控阳离子聚合物的正电性来达到消除过高正电性对凝血系统带来不利影响的目的，改善阳离子聚合物的促凝血性能，将阳离子聚合物与小分子混合溶液和亲水性不带电荷聚合物共混构建一种促凝血成分，进而制备不同形式的止血材料。

权利要求

1.一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，制备步骤为：

1）将阳离子聚合物与负电性小分子溶解，得到共混溶液，所述的阳离子聚合物与负电性小分子的质量比为1:0.15 2；步骤1）所述的阳离子聚合物其在溶液中的浓度范围在0.1~ ~

3 mg/mL；

步骤1）所述的负电性小分子为甲基硫酸钠、甲基磺酸钠、N‑环己基氨基磺酸钠、吗啉乙磺酸钠盐一水合物、3‑N（‑吗啉基）丙磺酸钠、3‑吗啉‑2‑羟基丙磺酸钠、葡萄糖酸的一种或多种混合；

2）将步骤1）得到的共混溶液制成凝胶或膜，或将共混溶液对基材进行改性，制备得到止血材料。

2.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，步骤1）所述的共混溶液为水溶液或水与甲醇、乙醇、乙酸乙酯、异丙醇形成的混合溶液；所述的水溶液为葡萄糖溶液，葡萄糖的浓度为5% 10%。

~

3.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，步骤1）所述的阳离子聚合物为聚赖氨酸、聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、聚六亚甲基双胍盐酸盐、聚六亚甲基胍盐酸盐、季铵化淀粉的一种或多种混合。

4.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，步骤1）所述的阳离子聚合物为聚赖氨酸或聚六亚甲基双胍盐酸盐。

5.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，步骤1）所述的负电性小分子为甲基硫酸钠或甲基磺酸钠。

6.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，步骤2）所述的共混溶液制成凝胶的制备方法为：将亲水性不带电荷聚合物加入步骤1）得到的共混溶液中，得到混合凝胶，所述亲水性不带电荷聚合物为泊洛沙姆、聚丙交酯‑乙交酯‑聚乙二醇‑聚丙交酯‑乙交酯、聚（N‑ 异丙基丙烯酰胺）一种或多种混合；步骤2）所述的共混溶液制成膜的制备方法为：将亲水性不带电荷聚合物加入步骤1）得到的共混溶液中，得到的混合溶液高温干燥，制成具有止血性能的止血膜，所述的亲水性不带电荷聚合物为羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素的一种或多种混合；步骤2）所述的共混溶液对基材改性方法为：利用步骤1）得到的共混溶液对基材进行浸泡，然后取出基材进行干燥，所选的基材为纱布、明胶海绵、海藻酸无纺布。

7.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，所述的共混溶液制成凝胶的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1 3 mg/mL、负电性小分子，和温敏性聚合物泊洛沙姆、聚丙~交酯‑乙交酯‑聚乙二醇‑聚丙交酯‑乙交酯或聚（N‑ 异丙基丙烯酰胺)，使温敏性聚合物在溶液中的浓度范围为100 400 mg/mL。

~

8.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，所述的共混溶液制成膜的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1 3 mg/mL、负电性小分子，加入羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤~维素或羟乙基纤维素使其在溶液中的浓度范围为20 200 mg/mL。

~

9.根据权利要求1所述的一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，其特征在于，所述的共混溶液对基材进行改性的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1 3 mg/mL、负电性小分子，将阳离子聚合物和负电性~小分子的混合溶液充分浸透基材。

说明书

一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备

方法

技术领域

[0001] 本发明属于医用止血材料的制备技术领域，涉及一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法。

背景技术

[0002] 高分子材料由于结构设计灵活多样，在止血、抗菌、药物载体等多领域研究广泛。其中阳离子聚合物有利于聚集负电性蛋白和细胞，被用于多类型止血材料的开发，但阳离子聚合物对凝血的作用是一把双刃剑，其过高的正电性也会延缓凝血酶的生成。因此有必要通过调控阳离子聚合物的结构以改善其促凝血性能。相对于精细的化学合成反应调控阳离子聚合物结构，通过小分子交换在阳离子聚合物上引入负电性小分子，将有望实现更加简便的聚合物结构调控。基于此，通过负电性小分子与阳离子聚合物原有抗衡阴离子的竞争作用，将一部分抗衡阴离子(如氢氧根、氯离子等)转变为新引入的负电性小分子，从而调控基材表面阳离子聚合物的强正电性以及伴随的与凝血过程中关键凝血因子/蛋白的强结合能力/黏附作用力(一般会造成凝血功能下降、血浆内源性凝血时间这一指标延长)。针对止血材料制备，本发明进一步提供了将这种负电性小分子/阳离子聚合物复合体转变为止血材料的制备技术，即可将其与亲水性不带电荷聚合物结合后得到止血凝胶或膜，也可以将其对高分子医用材料进行改性得到止血材料。

发明内容

[0003] 有鉴于此，本发明提供一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法。具体提供如下技术方案：

[0004] 一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料的制备方法，制备步骤为：

[0005] 1)将阳离子聚合物与负电性小分子溶解在水溶液中，得到共混溶液，所述的阳离子聚合物与负电性小分子的质量比为1:0.15～2；

[0006] 2)将步骤1)得到的共混溶液制成凝胶或膜，或将共混溶液对基材进行改性，制备得到止血材料。

[0007] 进一步，步骤1)所述的共混溶液为水溶液或水与甲醇、乙醇、乙酸乙酯、异丙醇形成的混合溶液；所述的水溶液为葡萄糖溶液，葡萄糖的浓度为5％～10％。

[0008] 进一步，步骤1)所述的阳离子聚合物为聚赖氨酸、聚甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、聚六亚甲基双胍盐酸盐、聚六亚甲基胍盐酸盐、季铵化淀粉的一种或多种混合，其在溶液中的浓度范围在0.1～3mg/mL。

[0009] 进一步，步骤1)所述的阳离子聚合物为聚赖氨酸或聚六亚甲基双胍盐酸盐。

[0010] 进一步，步骤1)所述的负电性小分子为甲基硫酸钠、甲基磺酸钠、N‑环己基氨基磺酸钠、吗啉乙磺酸钠盐一水合物、3‑N(‑吗啉基)丙磺酸钠、3‑吗啉‑2‑羟基丙磺酸钠、葡萄糖酸的一种或多种混合。

[0011] 进一步，步骤1)所述的负电性小分子为甲基硫酸钠或甲基磺酸钠。

[0012] 进一步，步骤2)所述的共混溶液制成凝胶的制备方法为：将亲水性不带电荷聚合物加入步骤1)得到的共混溶液中，得到混合凝胶，所述亲水性不带电荷聚合物为泊洛沙姆、聚丙交酯‑乙交酯‑聚乙二醇‑聚丙交酯‑乙交酯、聚(N‑异丙基丙烯酰胺)等温敏亲水性聚合物一种或多种混合；步骤2)所述的共混溶液制成膜的制备方法为：将亲水性不带电荷聚合物加入步骤1)得到的共混溶液中，得到的混合溶液高温干燥，制成具有止血性能的止血膜，所述的亲水性不带电荷聚合物为羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素等亲水性纤维素衍生物的一种或多种混合；步骤2)所述的共混溶液对基材改性方法为：利用步骤1)得到的共混溶液对基材进行浸泡，然后取出基材进行干燥，所选的基材为纱布、明胶海绵、海藻酸无纺布等高分子医用材料。

[0013] 进一步，所述的共混溶液制成凝胶的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1～3mg/mL、负电性小分子，和温敏性聚合物泊洛沙姆、聚丙交酯‑乙交酯‑聚乙二醇‑聚丙交酯‑乙交酯或聚(N‑异丙基丙烯酰胺，使温敏性聚合物在溶液中的浓度范围为100～400mg/mL。

[0014] 进一步，所述的共混溶液制成膜的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1～3mg/mL、负电性小分子，加入羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羟乙基纤维素使其在溶液中的浓度范围为20～200mg/mL。

[0015] 进一步，所述的共混溶液对基材进行改性的步骤为：在葡萄糖溶液中，加入阳离子聚合物使其在溶液中的浓度范围为0.1～3mg/mL、负电性小分子，将阳离子聚合物和负电性小分子的混合溶液充分浸透基材。

[0016] 本发明的有益效果在于：本发明制备了一种负电性小分子调控的阳离子聚合物基止血材料，通过负电性小分子与阳离子聚合物原有抗衡阴离子的竞争作用，将一部分抗衡阴离子(如氢氧根、氯离子等)转变为新引入的负电性小分子，从而调控基材表面阳离子聚合物的强正电性以及伴随的与凝血过程中关键凝血因子/蛋白的强结合能力/黏附作用力(一般会造成凝血功能下降、血浆内源性凝血时间这一指标延长)。针对止血材料制备，本发明进一步提供了将这种负电性小分子/阳离子聚合物复合体转变为止血材料的制备技术，即可将其与亲水性不带电荷聚合物结合后得到止血凝胶或膜，也可以将其对高分子医用材料进行改性得到止血材料。本发明实现了对阳离子聚合物过高正电性造成内源性凝血途径负面影响的消除，通过简便的聚合物结构调控改善了阳离子聚合物的促凝血性能。

[0017] 因此，本发明相对于精细的化学修饰合成反应调控阳离子聚合物结构以开发高分子基止血材料，提供了一种更简便的制备阳离子聚合物基止血材料的方法。

具体实施方式

[0018] 下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。

[0019] 实施例1

[0020] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为1：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液L1‑M1；

[0021] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液L1‑M1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到具有止血性能的凝胶X1。

[0022] 实施例2

[0023] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为2：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液L1‑M2；

[0024] 2)将一定量的羟丙基纤维素加入共混溶液L1‑M2中，使其在溶液中的浓度为75mg/2
mL，取2mL混合溶液充分铺展于4.4×4.4cm的模具中，60℃烘干6h，得到具有止血性能的膜X2。

[0025] 实施例3

[0026] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为0.25：1的甲基硫酸钠，得到混合溶液L1‑M0.25；

[0027] 2)取5mL混合溶液充分浸透8×6cm2共4层医用纱布，常温环境下风干24h，得到具有止血性能的改性纱布X3。

[0028] 实施例4

[0029] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚六亚甲基双胍盐酸盐使其浓度为1mg/mL，加入与聚六亚甲基双胍盐酸盐质量比为1：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液H1‑M1；

[0030] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液H1‑M1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到具有止血性能的凝胶X4。

[0031] 实施例5

[0032] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为1：1的甲基磺酸钠，得到共混溶液L1‑D1；

[0033] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液L1‑D1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到具有止血性能的凝胶X5。

[0034] 对比例1

[0035] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为0.1：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液L1‑M0.1；

[0036] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液L1‑M0.1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到凝胶Y1。

[0037] 对比例2

[0038] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为6：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液L1‑M6；

[0039] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液L1‑M6中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到凝胶Y2。

[0040] 对比例3

[0041] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为1mg/mL，得到溶液L1；

[0042] 2)将一定量的泊洛沙姆加入溶液L1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到凝胶Y3。

[0043] 对比例4

[0044] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚赖氨酸使其浓度为5mg/mL，加入与聚赖氨酸质量比为1：1的甲基硫酸钠，得到共混溶液L5‑M5；

[0045] 2)将一定量的泊洛沙姆加入共混溶液L5‑M5中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到具有止血性能的凝胶Y4。

[0046] 对比例5

[0047] 1)在10％葡萄糖溶液中加入一定量的聚六亚甲基双胍盐酸盐使其浓度为1mg/mL，得到溶液H1；

[0048] 2)将一定量的泊洛沙姆加入溶液H1中，使其在溶液中的浓度为300mg/mL，得到凝胶Y5。

[0049] 对比例6

[0050] 将一定量的羟丙基纤维素加入对比例3步骤1)中的L1溶液，使其在溶液中的浓度2
为75mg/mL，取2mL混合溶液充分铺展于4.4×4.4cm的模具中，60℃烘干6h，得到膜Y6。

[0051] 对比例7

[0052] 取5mL对比例3步骤1)中的L1溶液充分浸透8×6cm2共4层医用纱布，常温环境下风干24h，得到改性纱布Y7。

[0053] 对比例8

[0054] 将泊洛沙姆用10％葡萄糖溶液配制成浓度为300mg/mL的溶液，得到凝胶Y8。

[0055] 对比例9

[0056] 将羟丙基纤维素用10％葡萄糖溶液配制成浓度为75mg/mL的溶液，取2mL溶液充分2
铺展于4.4×4.4cm的模具中，60℃烘干6h，得到多糖膜Y9。

[0057] 对比例10

[0058] 未改性医用纱布Y10。

[0059] 测试例1BCI

[0060] 制备的促凝血增强型止血材料X1～X5，对比例Y1～Y10进行体外凝血效果对比实验。

[0061] 测试方法：止血凝胶吸取50μL放入2mL塑料离心管，在37℃预先使凝胶固化5min，2
膜称取5mg，纱布取0.5×0.5cm 放入2mL塑料离心管。将100μL SD大鼠的新鲜抗凝血加入10μL的氯化钙溶液(CaCl2；0.2M)中混匀，立刻与预先准备的材料接触，在37℃的恒温水浴锅中孵育1分钟。然后再缓慢的加入10mL去离子水，继续孵育3分钟，将没有形成血凝块的血细胞充分裂解，释放血红蛋白。3min后吸取100μL液体加入96孔板，用酶联免疫检测仪测试
545nm处的吸光度Abs来计算血红蛋白含量。空白组是取100μL新鲜抗凝血加入10mL去离子水，37℃的恒温水浴锅中孵育3分钟，吸取100μL测试545nm处的吸光度Abs。最后通过以下公式1来计算凝血指数(BCI)。

[0062] 凝血指数％(BCI)＝(Abs样品/Abs空白)×100％...................式1[0063] 式中：Abs样品是实验组在545nm处的吸光度；Abs空白是空白组在545nm处的吸光度。实施例及对比例的BCI指数如表1所示：

[0064] 表1体外凝血指数测试结果

[0065] 样品 X1 X2 X3 X4 X5 Y1 Y2 Y3BCI(％) 22.4 21.3 44.6 53.8 30.3 46.8 53.9 65.0
样品 Y4 Y5 Y6 Y7 Y8 Y9 Y10  
BCI(％) 54.9 87.5 62.8 92.6 50.6 58.1 76.5  

[0066] 体外凝血指数BCI是表征材料体外促凝血性能、筛选止血材料的重要指标，BCI值越小，表明材料的体外促凝血性能越好。从表1可以看出，本发明实施例1～5得到的止血材料X1～X5的BCI指数明显低于对比例Y1～Y10中的同种类材料。由此可见，采用本发明的制备方法，可以得到具有优异止血性能的止血材料。

[0067] 通过加入与阳离子聚合物不同质量比的负电性小分子，可有效调节阳离子聚合物的强正电性造成的凝血功能下降(即BCI指数增加)的影响，消除内源性凝血途径负面的影响，有效的提高阳离子聚合物的促凝血性能。

[0068] 对比例1是跟实施例1比，在制备步骤1)中，是将少量的甲基硫酸钠与聚赖氨酸共混得到共混溶液，再将泊洛沙姆加入共混溶液制备止血凝胶，实施例1的BCI为22.4％，对比例1的BCI为46.8％，结果表明，对比例1得到的凝胶的止血性能比实施例1的差。因此说明，加入少量负电性小分子对阳离子聚合物的正电性屏蔽不够，导致材料正电性过强，对内源性凝血途径产生负面影响，造成凝血功能下降，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0069] 对比例2是跟实施例1比，在制备步骤1)中，是将过量的甲基硫酸钠与聚赖氨酸共混得到共混溶液，再将泊洛沙姆加入共混溶液制备止血凝胶，实施例1的BCI为22.4％，对比例2的BCI为53.9％，结果表明，对比例2得到的凝胶的止血性能比实施例1的差。因此说明，加入过量的负电性小分子会极大的减弱阳离子聚合物的正电性，从而影响其聚集血细胞、血小板等性能，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0070] 对比例3是跟实施例1比，是在制备步骤1)中，不添加甲基硫酸钠，将聚赖氨酸溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，再将泊洛沙姆加入溶液制备止血凝胶，实施例1的BCI为22.4％，对比例3的BCI为65.0％，结果表明，对比例3得到的凝胶的止血性能比实施例1的差。因此说明，未经过小分子调控正电性的阳离子聚合物由于其过高的正电性，对内源性凝血途径产生负面影响，造成凝血功能下降，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0071] 对比例4是跟实施例1比，是在制备步骤1)中，将过量聚赖氨酸溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，添加等质量的甲基硫酸钠，再将泊洛沙姆加入溶液制备止血凝胶，实施例1的BCI为22.4％，对比例4的BCI为54.9％，结果表明，对比例4得到的凝胶的止血性能比实施例1的差。因此说明，过量阳离子聚合物的正电性很强，负电性小分子对其的削弱作用有限，因此仍对内源性凝血途径产生负面影响，造成凝血功能下降，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0072] 对比例5是跟实施例4比，是在制备步骤1)中，不添加负电性小分子甲基硫酸钠，将聚六亚甲基双胍盐酸盐溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，再将泊洛沙姆加入溶液制备止血凝胶，实施例4的BCI为53.8％，对比例5的BCI为87.5％，结果表明，对比例5得到的凝胶的止血性能比实施例4的差。因此说明，未经过小分子调控正电性的阳离子聚合物由于其过高的正电性，对内源性凝血途径产生负面影响，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0073] 对比例6是跟实施例2比，是制备步骤1)中，不添加负电性小分子甲基硫酸钠，将聚赖氨酸溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，再将羟丙基纤维素加入溶液制备止血膜，实施例2的BCI为21.3％，对比例6的BCI为62.8％，结果表明，对比例6得到的膜的止血性能比实施例2的差。因此说明，未经过负电性小分子调控正电性的阳离子聚合物由于其过高的正电性，对内源性凝血途径产生负面影响，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0074] 对比例7是跟实施例3比，是制备步骤1)中，不添加负电性小分子甲基硫酸钠，将聚赖氨酸溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，再浸泡医用纱布进行改性，实施例3的BCI为44.6％，对比例7的BCI为92.6％，结果表明，对比例6得到的纱布的止血性能比实施例4的差。因此说明，未经过负电性小分子调控正电性的阳离子聚合物由于其过高的正电性，对内源性凝血途径产生负面影响，以至于无法有效的提高止血材料的止血性能。

[0075] 对比例8是是不添加任何改性材料，单独使用泊洛沙姆制备水凝胶，水凝胶的BCI为50.6(远远大于采用本发明的方法改性得到的凝胶X1和X5的BCI)，止血性能没有添加改性材料之后的性能好。因此说明，采用本发明的方法用负电性小分子调控阳离子聚合物会提升凝胶的止血性能。

[0076] 对比例9是不添加任何改性材料，单独使用羟丙基纤维素制备膜，膜的BCI为58.1％(远远大于采用本发明的方法制备得到的膜X2的BCI)，止血性能没有采用本发明改性后的止血性能好。因此说明，采用本发明的方法用负电性小分子调控的阳离子聚合物会提升膜的止血性能。

[0077] 对比例10是不添加任何改性材料，单独使用医用纱布，纱布的BIC为76.5％(远远大于采用本发明的方法改性得到的医用纱布X3的BCI)，止血性能没有采用本发明的方法改性之后的性能好。因此说明，采用本发明的方法用负电性小分子调控阳离子聚合物会提升膜的止血性能。

[0078] 测试例2

[0079] 将制备的促凝血增强型止血材料X1，对比例Y1、Y3进行活化部分凝血活酶时间(APTT)对比实验。

[0080] 测试方法：止血凝胶吸取50μL放入2mL塑料离心管，在37℃预先使凝胶固化5min。SD大鼠抗凝全血在3000rpm离心15min，取出上清液贫血小板血浆(PPP)。取50μLPPP与50μL APTT试剂混合后立刻加入凝胶材料中，在37℃水浴孵育3min后，加入50μL氯化钙溶液，立即观察记录血浆凝固时间。空白组为不添加材料的APTT，将其作为100％。APTT(％)通过下式2计算：

[0081] APTT(％)＝(APTT材料组/APTT空白组)×100％...................式2[0082] 表2活化部分凝血活酶时间测试结果

[0083]样品 X1 Y1 Y3
APTT(％) 110 216 157

[0084] APTT指活化部分凝血活酶时间，是临床上最常用的反映内源性凝血系统凝血活性的测试。以正常血浆的APTT时间作为100％。APTT时间越长，代表对内源性凝血途径影响越大，越不利于凝血。

[0085] 对比例1是跟实施例1比，在是制备步骤1)中，是将少量的甲基硫酸钠与聚赖氨酸共混得到共混溶液，再将泊洛沙姆加入共混溶液制备止血凝胶，APTT测试结果显示，X1的APTT为110％，Y1的APTT为216％，Y1时间相较于正常血浆(100％)明显延长，因此说明，采用本发明的方法的得到的X1(适量负电性小分子+阳离子聚合物)对内源性凝血途径的影响更小，而少量负电性小分子不够削弱阳离子聚合物对内源性凝血途径的负面影响，不利于凝血。

[0086] 对比例3是跟实施例1比，是制备步骤1)中，不添加甲基硫酸钠，将聚赖氨酸溶解于10％葡萄糖溶液中得到阳离子聚合物溶液，再将泊洛沙姆加入溶液制备止血凝胶，APTT测试结果显示，X1的APTT为110％，Y3的APTT为157％，时间相较于正常血浆(100％)明显延长。
因此说明，只有阳离子聚合物，不用负电性小分子进行调节，阳离子聚合物的强正电性对内源性凝血途径的负面影响较大，不利于凝血。

[0087] 最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。