一种酰化吲哚啉类衍生物、组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种酰化吲哚啉类衍生物、组合物及其应用，该衍生物为具有如结构通式(Ⅰ)所述的化合物或其药学上可接受盐；该组合物包括酰化吲哚啉类衍生物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。本发明还提供酰化吲哚啉类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗疼痛类疾病药物方面的应用。该衍生物对σ1受体和5‑HT2A受体具有较高的亲和力，能明显改善福尔马林诱导的II相疼痛；将其应用治疗疼痛、特别是神经痛中，具有应答率高、副作用小、不良反应少等特点，满足临床用药的需求。

权利要求

1.一种酰化吲哚啉类衍生物，其特征在于，所述衍生物为：

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（吡啶‑2‑基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（嘧啶‑2‑基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（邻甲苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（间甲苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（4‑甲氧基苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2‑甲氧基苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（3‑甲氧基苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2,3‑二甲基）苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（4‑氟苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2‑氟苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（3‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（4‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2,3‑二氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（苯并噻吩）‑ 4‑基）哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑（2,4‑二氟苯甲酰基）哌啶‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

1‑（1‑乙酰吲哚啉‑5‑基）‑3‑（4‑环己基哌嗪‑1‑基）丙烷‑1‑酮、

5‑（3‑（4‑（苯并噻吩‑4‑基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、N,N‑二甲基‑5‑（3‑（4‑（邻甲苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）吲哚啉‑1‑甲酰胺、N,N‑二甲基‑5‑（3‑（4‑（间甲苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）吲哚啉‑1‑甲酰胺、

5‑（3‑（4‑（2,3‑二氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、

5‑（3‑（4‑（2,3‑二甲基苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、

5‑（3‑（4‑（4‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、

5‑（3‑（4‑（2‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、

5‑（3‑（4‑（3‑氯苯基）哌嗪‑1‑基）丙酰基）‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺。

2.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1中所述的酰化吲哚啉类衍生物，和一种或多种药学上可接受的载体。

3.根据权利要求1中所述的酰化吲哚啉类衍生物在制备用于预防或治疗疼痛类疾病药物方面的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，所述的疼痛类疾病为神经痛。

说明书

一种酰化吲哚啉类衍生物、组合物及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于有机化学合成领域，具体涉及一种酰化吲哚啉类衍生物、组合物及其应用。

背景技术

[0002] 疼痛是人类天生具有的基本感觉，在保护人体免受伤害、保持人体内环境等方面具有重要意义。但长期或过度的疼痛会严重影响人的正常生理生活，慢性疼痛和神经痛在医学上被定义为严重危害人类健康的疾病。神经痛是疼痛类疾病中对患者生活危害重大的一类疾病，全球约有8％的人正受到这一疾病的影响。神经痛发作突然、程度剧烈、且难以治愈，尽管在基础研究和临床研究领域中，研究人员做了很多相关工作，但在临床上对神经痛的研究和镇痛机理依然存在巨大的挑战。由于神经痛的诱因和发病机制纷繁复杂，目前还没有广谱性和特异性的针对神经痛的靶向药物。目前在临床上用于治疗神经痛的药物大多是一些在临床应用中发现有神经痛镇痛活性的治疗抑郁、癫痫等疾病的药物。这些药物用于神经痛的治疗时大多都超标签使用，镇痛效果往往低于预期，且治疗应答率因个体差异而有明显不同。

[0003] 神经痛在临床治疗中尚没有特效方法和有效药物，临床上一般使用神经精神类药物进行辅助治疗，主要使用药物有：1)神经递质再摄取抑制剂如抗抑郁药物(如阿米替林及新近上市的度洛西汀)，此类药物副作用较大，应答率不高；2)钙离子通道α2‑δ配体抗癫痫药物(如加巴喷丁和普瑞巴林)，此类药物有效率有限，大约40％左右，且个体差异明显；3)阿片受体镇痛剂，此类药物容易产生耐药性和成瘾性，且不良反应明显。其它新靶点(如大麻素受体、5‑羟色胺受体、NMDA受体、代谢型谷氨酸受体等)的新药研究近年也在兴起，但大部分还处在研究的前期，少数进入一期、二期临床。因此，寻找基于新作用机理、作用靶点，同时对神经痛有良好治疗效果的新型神经痛镇痛药物具有重要的意义。

[0004] sigma‑1受体(σ1受体)是近年来新兴的药物靶点，特别在神经痛镇痛方面表现出优异的生物活性。研究表明，σ1受体拮抗剂本身就具有疼痛、特别是神经痛镇痛效果。目前sigma‑1受体拮抗剂研究中最前沿的是S1RA，其对σ1受体有很高的亲和性(Ki＝17nM)，同时有很高的选择性。目前S1RA用于治疗多种疼痛的实验以及进入临床阶段，其中单独用于治疗神经痛的实验已经进入临床II期。5‑羟色胺(5‑HT)是脊髓疼痛传递的关键调节剂。在5‑HT受体中，5‑HT2A亚型在疼痛性信息的调节中起着关键作用。研究表明，5‑HT2A受体产生镇痛作用的机制有可能是通过抑制脊髓神经递质GABA的释放，产生突触抑制作用。因此，寻找具有σ1受体和5‑HT2A受体双重活性的分子用于抗疼痛治疗，对临床治疗疼痛、神经痛具有重要的科学价值和社会意义。

发明内容

[0005] 本发明的目的之一是提供一种酰化吲哚啉类衍生物和组合物，该衍生物对σ1受体和5‑HT2A受体具有较高的亲和力，能明显改善福尔马林诱导的II相疼痛；将其应用治疗疼痛、特别是神经痛中，具有应答率高、副作用小、不良反应少等特点，满足临床用药的需求。

[0006] 本发明的目的之二是提供酰化吲哚啉类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗疼痛类疾病药物方面的应用。

[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种酰化吲哚啉类衍生物，为具有如结构通式(Ⅰ)所述的化合物或其药学上可接受盐：

[0008]

[0009] 其中，Z为‑(CH2)i‑或取代的‑(CH2)i‑，i为1‑6的整数，所述取代的‑(CH2)i‑中的取代基为羟基或甲基；Q为N或CH；n和m分别为0、1或2；

[0010] R1选自氢、卤素、C1‑5烷氧基、C1‑5烷基、取代的C1‑5烷基、芳基中的一种，R2选自氢、C1‑5烷氧基、C1‑5烷基、取代的C1‑5烷基、C3‑7环烷基、取代的C3‑7环烷基、芳基、取代芳基中的一种，取代基选自烷基、氰基、羟基、卤素中的一种。

[0011] 优选的，R1选自氢、氟、苯基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、羟甲基中一种。

[0012] 优选的，所述R2选自氢、氟、苯基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、羟甲基中的一种。

[0013] 优选的，所述的盐为含有药物上可接受的阴离子盐，选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐中的一种。

[0014] 优选的，所述酰化吲哚啉类衍生物为：

[0015] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(6‑氟苯并[d]异恶唑‑3‑基)哌啶‑1‑基)丙烷‑1‑酮、

[0016] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(吡啶‑2‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0017] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(嘧啶‑2‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0018] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(邻甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0019] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(间甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0020] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0021] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0022] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(3‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0023] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,3‑二甲基)苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0024] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑氟苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0025] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑氟苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0026] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0027] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(3‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0028] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0029] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0030] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(苯并噻吩)‑4‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0031] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,4‑二氟苯甲酰基)哌啶‑1‑基)丙烷‑1‑酮、[0032] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑环己基哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮、

[0033] 5‑(3‑(4‑(苯并噻吩‑4‑基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0034] N、N‑二甲基‑5‑(3‑(4‑(邻甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0035] N、N‑二甲基‑5‑(3‑(4‑(间甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0036] 5‑(3‑(4‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0037] 5‑(3‑(4‑(2,3‑二甲基苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0038] 5‑(3‑(4‑(4‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0039] 5‑(3‑(4‑(2‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺、[0040] 5‑(3‑(4‑(3‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺。

[0041] 另一方面，本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的所述的酰化吲哚啉类衍生物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂，该药物组合物是含有足以产生疼痛、神经痛镇痛活性的化合物。

[0042] 本发明进一步还提供了本发明的酰化吲哚啉类衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于预防或治疗疼痛类疾病药物方面的应用。

[0043] 优选的，所述的疼痛类疾病为神经痛。

[0044] 本发明衍生物的通用合成方法是先合成一个酰化吲哚啉或四氢(异)喹啉，然后使之与一个直链的氯代酰氯反应后，再与不同取代基的芳基哌嗪(哌啶)而反应制得。例如：

[0045]

[0046] 本发明化合物的有效剂量可与如惰性稀释剂或某种载体一起口服。可将其包于明胶胶囊中或压制成片。为口服治疗的目的，本发明化合物可与赋形剂一起使用并以片剂、锭剂、胶囊、混悬剂、糖浆剂等形式使用。这些制剂应含有至少0.5wt％的本发明的活性化合物，但可根据特定的剂型变化，占单位重量的4％至约70％是便利的。在这样的组合物中活性化合物的量应达到适当的剂量。本发明优先的组合物和制剂的口服单位剂量含有1.0‑300毫克的本发明活性化合物。

[0047] 本发明提供的化合物及其药学上可接受的盐，溶剂化物和水合物可以与药学上可以接受的载体或稀释剂联合应用组成药物制剂。药学上可接受的适当的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂和无菌水溶液或有机溶液。

[0048] 本发明化合物的用量取决于疾病或病症的类型和严重性，还取决于对象的特征，例如一般健康、年龄、性别、体重和药物耐受性。技术人员能够根据这些或其它因素来确定适当的剂量。通常所用的中枢神经系统药物的有效剂量是技术人员熟知的。每日总剂量通常在约0.05mg～2000mg之间。

[0049] 本发明涉及药物组合物，其每单位剂量能提供约0.01～1000mg的活性成分。组合物可通过任何适当的途径施用，例如胶囊形式口服，以注射液的形式胃肠外施用，以膏剂或洗剂的形式局部施用，以栓剂的形式直肠施用，以贴片的传递系统的形式经皮施用。

[0050] 本发明提供的化合物可与适当的固体或液体载体或稀释剂组合形成胶囊、片剂、丸剂、散剂、糖浆剂、溶液剂等。片剂、丸剂、胶囊等包含约0.01到约99重量百分比的活性成分和粘合剂，例如明胶、玉米淀粉、阿拉伯树胶；赋形剂例如磷酸氢钙；崩解剂例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或藻酸；润滑剂例如硬脂酸镁；和甜味剂例如蔗糖、乳糖。当制剂形式为胶囊时，除上述类型的原料外，还可包含液体载体，例如油脂。

[0051] 对于胃肠外施用，本发明提供的化合物可与无菌水或有机介质组合形成可注射的溶液或悬液。

[0052] 此外，本发明提供的化合物以及由化合物组成的药物组合物可应用于治疗和预防疼痛；所述疼痛指急性疼痛，如软组织及关节急性损伤疼痛、手术后疼痛、产科疼痛、急性带状疱疹疼痛、痛风等；慢性疼痛如软组织及关节劳损性或退变疼痛、椎间盘源性疼痛、神经源性疼痛等；顽固性疼痛如三叉神经痛、疱疹后遗神经痛、椎间盘突出症、顽固性头痛等；癌性疼痛如晚期肿瘤痛、肿瘤转移痛等；特殊疼痛类如血栓性脉管炎、顽固性心绞痛、特发性胸腹痛等。

[0053] 体外受体结合试验表明，本发明提供的衍生物对σ1受体和5‑HT2A受体具有较高的亲和力，而与σ2以及其他5‑HT受体亚型的亲和力较低。另外，动物试验结果也显示，这类化合物能明显改善福尔马林诱导的II相疼痛。因此，本发明提供的衍生物具有治疗疼痛、特别是神经痛的潜力。将其应用治疗疼痛、特别是神经痛中，具有应答率高、副作用小、不良反应少等特点，满足临床用药的需求。

具体实施方式

[0054] 下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

[0055] 实施例1

[0056] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(6‑氟苯并[d]异恶唑‑3‑基)哌啶‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备，反应式为：

[0057]

[0058] 具体制备过程为：

[0059] (1)取吲哚啉5.0g，加入50ml丙酮，然后慢慢加入乙酰氯3.3g，搅拌至回流，4h后反应完毕；冷至室温，浓缩反应液，用乙酸乙酯溶解后，依次经过水洗、无水硫酸镁干燥、抽滤、浓缩、打浆得白色固体6.3g，收率为93.2％；

[0060] (2)取步骤(1)得到的产物5.0g，加入4.9g 3‑氯丙酰氯和25mL1,2‑二氯乙烷，冰水浴降温至0℃左右，分批次加入11.8g无水三氯化铝，内温控制0℃左右，加完后保温0.5h，撤去冰水浴，室温反应2h；加入冰水淬灭体系，依次经过过滤、用乙酸乙酯萃取、水洗、无水硫酸镁干燥、抽滤、浓缩、柱层析(PE：EA＝6：1)得固体6.8g，收率87.3％；

[0061] (3)取步骤(2)得到的产物0.5g，加入1‑苯基哌嗪0.35g、无水碳酸钾1g、碘化钾0.01g和DMF 25ml，80℃反应7h，冷至室温，加入100ml自来水，加入适量二氯甲烷，水洗，分去水层，有机层加无水硫酸镁干燥，蒸干溶剂得浅黄色油状物，柱层析得白色固体0.53g。

[0062] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.96–7.80(m,2H),7.35–7.19(m,2H),6.95(d,J＝8.2Hz,2H),6.88(t,J＝7.3Hz,1H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.35–
3.13(m,7H),2.91(t,J＝7.4Hz,2H),2.82–2.67(m,4H),2.28(s,2H),1.71(s,2H).MS(ESI)+
m/z 378.2([M+H]).

[0063] 实施例2

[0064] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(吡啶‑2‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0065] 用“1‑(吡啶‑2‑基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0066] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.26(d,J＝8.4Hz,1H),8.20(dd,J＝5.0,1.9Hz,1H),7.91–7.81(m,2H),7.49(ddd,J＝8.8,7.1,2.0Hz,1H),6.71–6.58(m,2H),4.14(t,J＝
8.6Hz,2H),3.61–3.52(m,4H),3.23(dt,J＝21.1,8.0Hz,4H),2.89(t,J＝7.4Hz,2H),2.68–+
2.60(m,4H),2.27(s,3H).MS(ESI)m/z 379.2([M+H]).

[0067] 实施例3

[0068] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(嘧啶‑2‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0069] 用“1‑(嘧啶‑2‑基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0070] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.32(d,J＝4.8Hz,2H),8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.91–7.81(m,2H),6.50(t,J＝4.7Hz,1H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.85(t,J＝5.1Hz,4H),
3.23(dt,J＝23.0,8.0Hz,4H),2.89(t,J＝7.4Hz,2H),2.59(t,J＝5.1Hz,4H),2.28(s,3H)+
.MS(ESI)m/z 380.2([M+H]).

[0071] 实施例4

[0072] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(邻甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0073] 用“1‑(2‑甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0074] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.93–7.84(m,2H),7.19(t,J＝7.8Hz,2H),7.10–6.96(m,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.27(t,J＝8.6Hz,2H),3.22(t,J＝7.4Hz,2H),2.97(t,J＝4.8Hz,4H),2.93(t,J＝7.4Hz,2H),2.71(s,4H),2.33(s,+3H),2.29(s,3H).MS(ESI)m/z 392.2([M+H]).

[0075] 实施例5

[0076] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(间甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0077] 用“1‑(3‑甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0078] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.91–7.80(m,2H),7.16(t,J＝7.7Hz,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝7.4Hz,1H),4.13(t,J＝8.5Hz,2H),3.29–3.17(m,8H),2.90(t,J＝7.4Hz,2H),2.73–2.65(m,4H),2.33(s,3H),2.27(s,3H).MS+
(ESI)m/z 392.2([M+H]).

[0079] 实施例6

[0080] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0081] 用“1‑(4‑甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0082] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.91–7.81(m,2H),6.92(d,J＝9.1Hz,2H),6.86(d,J＝9.1Hz,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.79(s,3H),3.27(t,J＝8.5Hz,2H),3.21(t,J＝7.4Hz,2H),3.18–3.10(m,4H),2.92(t,J＝7.4Hz,2H),2.76–2.67+
(m,4H),2.29(s,3H).MS(ESI)m/z 392.2([M+H]).

[0083] 实施例7

[0084] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0085] 用“1‑(2‑甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0086] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.93–7.83(m,2H),7.02(td,J＝7.4,2.2Hz,1H),6.99–6.91(m,2H),6.88(d,J＝7.9Hz,1H),4.14(t,J＝8.5Hz,2H),3.88(s,3H),3.26(t,J＝8.5Hz,2H),3.21(t,J＝7.4Hz,2H),3.13(s,4H),2.93(t,J＝
+
7.4Hz,2H),2.75(t,J＝4.8Hz,4H),2.28(s,3H).MS(ESI)m/z 392.2([M+H]).

[0087] 实施例8

[0088] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(3‑甲氧基苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0089] 用“1‑(3‑甲氧基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0090] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.92–7.81(m,2H),7.19(t,J＝8.2Hz,1H),6.56(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),6.49(d,J＝2.5Hz,1H),6.44(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.81(s,3H),3.32–3.14(m,8H),2.91(t,J＝7.4Hz,2H),+
2.69(t,J＝5.0Hz,4H),2.28(s,3H).MS(ESI)m/z 392.2([M+H]).

[0091] 实施例9

[0092] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,3‑二甲基)苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0093] 用“1‑(2,3‑二甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0094] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.18(d,J＝8.3Hz,1H),7.23–7.15(m,2H),6.82–6.70(m,3H),4.94(dd,J＝7.8,3.8Hz,1H),4.08(t,J＝8.5Hz,2H),3.31–3.17(m,6H),2.80(ddt,J＝17.3,8.7,4.6Hz,4H),2.66(dt,J＝8.8,5.0Hz,4H),2.35(s,3H),2.25(s,3H),+
1.90(dq,J＝9.8,4.7,4.3Hz,2H).MS(ESI)m/z 406.2([M+H]).

[0095] 实施例10

[0096] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑氟苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0097] 用“1‑(4‑氟苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0098] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.97–7.76(m,2H),6.98(t,J＝8.6Hz,2H),6.89(dd,J＝9.1,4.6Hz,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.27(t,J＝8.6Hz,2H),3.20(t,J＝7.4Hz,2H),3.15(t,J＝4.9Hz,4H),2.91(t,J＝7.3Hz,2H),2.70(t,J＝+
5.0Hz,4H),2.28(s,3H).MS(ESI)m/z 396.2([M+H]).

[0099] 实施例11

[0100] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑氟苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0101] 用“1‑(2‑氟苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0102] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.91–7.83(m,2H),7.13–7.03(m,2H),7.03–6.91(m,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.27(t,J＝8.6Hz,2H),3.21(t,J＝
7.4Hz,2H),3.14(t,J＝4.8Hz,4H),2.93(t,J＝7.4Hz,2H),2.73(t,J＝4.9Hz,4H),2.28(s,+
3H).MS(ESI)m/z 396.2([M+H]).

[0103] 实施例12

[0104] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0105] 用“1‑(2‑氯苯基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0106] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.26(d,J＝8.4Hz,1H),7.91–7.81(m,2H),7.37(d,J＝7.9Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.98(t,J＝7.6Hz,1H),4.14(t,J＝8.5Hz,2H),3.26(t,J＝8.5Hz,2H),3.21(t,J＝7.4Hz,2H),3.11(t,J＝4.8Hz,+
4H),2.93(t,J＝7.4Hz,2H),2.74(t,J＝4.6Hz,4H),2.28(s,3H).MS(ESI)m/z 412.2([M+H]).[0107] 实施例13

[0108] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(3‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0109] 用“1‑(3‑氯苯基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0110] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.95–7.77(m,2H),7.18(t,J＝8.1Hz,1H),6.89(d,J＝2.6Hz,1H),6.85–6.72(m,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.39–3.12(m,8H),2.91(t,J＝7.3Hz,2H),2.68(t,J＝5.0Hz,4H),2.29(s,3H).MS(ESI)m/z +
412.2([M+H]).

[0111] 实施例14

[0112] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(4‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0113] 用“1‑(4‑氯苯基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0114] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.93–7.79(m,2H),7.22(d,J＝8.6Hz,2H),6.85(d,J＝8.6Hz,2H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.27(t,J＝8.6Hz,2H),3.23–3.16(m,6H),2.91(t,J＝7.3Hz,2H),2.74–2.64(m,4H),2.28(s,3H).MS(ESI)m/z +
412.2([M+H]).

[0115] 实施例15

[0116] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0117] 用“1‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0118] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.92–7.83(m,2H),7.21–7.15(m,2H),6.98(dd,J＝6.7,2.8Hz,1H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.25(dt,J＝19.4,
8.0Hz,4H),3.11(t,J＝4.8Hz,4H),2.95(t,J＝7.3Hz,2H),2.75(s,4H),2.29(s,3H).MS+
(ESI)m/z446.1([M+H]).

[0119] 实施例16

[0120] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(苯并噻吩)‑4‑基)哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0121] 用“1‑(苯并噻吩‑4‑基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0122] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.28(d,J＝8.4Hz,1H),7.93–7.83(m,2H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.47–7.39(m,2H),7.33–7.26(m,1H),6.92(d,J＝7.6Hz,1H),4.14(t,J＝8.4Hz,2H),3.29–3.20(m,8H),2.97(t,J＝7.2Hz,2H),2.80(t,J＝4.8Hz,4H),2.28(s,+3H).MS(ESI)m/z 434.2([M+H]).

[0123] 实施例17

[0124] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑(2,4‑二氟苯甲酰基)哌啶‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备

[0125] 用“(2,4‑二氟苯基)(哌啶‑4‑基)甲酮盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0126] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.26(d,J＝8.5Hz,1H),7.94–7.79(m,3H),7.00(td,J＝8.2,2.4Hz,1H),6.89(ddd,J＝11.1,8.5,2.5Hz,1H),4.15(t,J＝8.5Hz,2H),3.32(d,J＝7.2Hz,2H),3.25(q,J＝16.6,12.5Hz,3H),3.11(dd,J＝10.9,4.9Hz,2H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.45(s,2H),2.28(s,3H),2.15–2.02(m,2H),1.90(d,J＝11.9Hz,2H).MS+(ESI)m/z441.2([M+H]).

[0127] 实施例18

[0128] 1‑(1‑乙酰吲哚啉‑5‑基)‑3‑(4‑环己基哌嗪‑1‑基)丙烷‑1‑酮的制备[0129] 用“1‑环己基哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0130] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ8.24(d,J＝8.4Hz,1H),7.87–7.80(m,2H),4.14(t,J＝8.5Hz,2H),3.25(t,J＝8.5Hz,2H),3.16(t,J＝7.5Hz,2H),2.84(t,J＝7.5Hz,2H),2.60(d,J＝19.4Hz,8H),2.27(s,3H),1.94–1.76(m,7H),1.22(td,J＝11.9,11.4,6.2Hz,+
4H).MS(ESI)m/z 384.3([M+H]).

[0131] 实施例19

[0132] 5‑(3‑(4‑(苯并噻吩‑4‑基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备

[0133] 用“1‑(苯并噻吩‑4‑基)哌嗪”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0134] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.96–7.82(m,2H),7.65(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(d,J＝5.6Hz,1H),7.34–7.29(m,2H),7.02–6.91(m,2H),3.99(t,J＝8.4Hz,2H),3.82(t,J＝6.4Hz,2H),3.73–3.47(m,8H),3.24(s,2H),3.10(t,J＝8.4Hz,2H),2.98(s,6H).MS(ESI)+m/z463.2([M+H]).

[0135] 实施例20

[0136] N、N‑二甲基‑5‑(3‑(4‑(邻甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备[0137] 用“1‑(2‑甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0138] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.91–7.82(m,2H),7.18(t,J＝7.5Hz,2H),7.08(dd,J＝9.8,7.7Hz,2H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),3.98(t,J＝8.3Hz,2H),3.79(t,J＝6.7Hz,2H),3.57(t,J＝6.7Hz,6H),3.11(dt,J＝16.8,10.4Hz,6H),2.97(s,6H),2.28(s,3H).MS+
(ESI)m/z421.3([M+H]).

[0139] 实施例21

[0140] N、N‑二甲基‑5‑(3‑(4‑(间甲苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备[0141] 用“1‑(3‑甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0142] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.84(s,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,1H),6.97–6.86(m,4H),3.99(t,J＝8.3Hz,2H),3.79(q,J＝10.8,6.5Hz,4H),3.68–
3.54(m,6H),3.33(s,2H),3.10(t,J＝8.3Hz,2H),2.98(d,J＝1.5Hz,6H),2.35(s,3H).MS+
(ESI)m/z 421.3([M+H]).

[0143] 实施例22

[0144] 5‑(3‑(4‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备用“1‑(2,3‑二氯苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0145] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.85(d,J＝10.4Hz,2H),7.24–7.12(m,2H),7.02–6.92(m,2H),4.00(t,J＝8.3Hz,2H),3.31(t,J＝7.2Hz,2H),3.19(t,J＝4.7Hz,4H),+
3.09(dt,J＝17.9,7.8Hz,4H),2.99(s,6H),2.87(s,4H).MS(ESI)m/z 475.2([M+H]).

[0146] 实施例23

[0147] 5‑(3‑(4‑(2,3‑二甲基苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备

[0148] 用“1‑(2,3‑二甲基苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0149] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.85(d,J＝8.8Hz,2H),7.10(t,J＝7.7Hz,1H),6.99–6.88(m,3H),4.00(t,J＝8.3Hz,2H),3.20(t,J＝7.4Hz,2H),3.11(t,J＝8.3Hz,2H),
2.99(s,6H),2.97–2.87(m,6H),2.72(s,4H),2.29(s,3H),2.24(s,3H).MS(ESI)m/z 435.3+
([M+H]).

[0150] 实施例24

[0151] 5‑(3‑(4‑(4‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备[0152] 用“1‑(4‑氯苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0153] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.84(d,J＝8.6Hz,2H),7.25–7.18(m,2H),6.96(d,J＝8.3Hz,1H),6.91–6.81(m,2H),3.99(t,J＝8.3Hz,2H),3.22–3.14(m,6H),3.10(t,J＝8.3Hz,2H),2.98(s,6H),2.91(t,J＝7.3Hz,2H),2.70(t,J＝4.9Hz,4H).MS(ESI)m/z +441.2([M+H]).

[0154] 实施例25

[0155] 5‑(3‑(4‑(2‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备[0156] 用“1‑(2‑氯苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0157] 1H NMR(400MHz,Chloroform‑d)δ7.90(dd,J＝8.5,1.8Hz,1H),7.85(s,1H),7.39(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),7.26(d,J＝7.4Hz,1H),7.08(ddd,J＝17.1,7.9,1.6Hz,2H),6.94(d,J＝8.5Hz,1H),3.99(t,J＝8.3Hz,2H),3.80(t,J＝6.9Hz,2H),3.68–3.55(m,6H),3.42(d,J＝12.7Hz,2H),3.24–3.13(m,2H),3.10(t,J＝8.4Hz,2H),2.98(d,J＝1.6Hz,6H).MS+(ESI)m/z441.2([M+H]).

[0158] 实施例26

[0159] 5‑(3‑(4‑(3‑氯苯基)哌嗪‑1‑基)丙酰基)‑N，N‑二甲基吲哚啉‑1‑甲酰胺的制备[0160] 用“1‑(3‑氯苯基)哌嗪盐酸盐”代替实施例1步骤(3)中的“1‑苯基哌嗪”，用“N，N‑二甲基甲酰氯”代替实施例1步骤(1)中的“乙酰氯”，其他过程均按实施例1的方法制备目标化合物。

[0161] 1H NMR(400MHz,DMSO‑d6)δ7.90–7.81(m,2H),7.27(t,J＝8.1Hz,1H),7.06(d,J＝2.6Hz,1H),6.99(t,J＝8.9Hz,2H),6.88(d,J＝7.9Hz,1H),3.90(t,J＝8.4Hz,2H),3.57(s,+
8H),3.08(t,J＝8.4Hz,2H),2.88(s,6H),2.57–2.46(m,4H).MS(ESI)m/z 441.2([M+H]).[0162] 以上实施例制备得到的化合物的结构式如下表1所示：

[0163] 表1实施例1‑26分别制备得到的化合物的结构式

[0164]

[0165]

[0166]

[0167] 实施例27

[0168] 受体膜的制备及配体亲和性的测定(抑制率)

[0169] 受体结合实验材料：

[0170] 同位素配基[3H]‑Ketanserin(67.0Ci/mmol)，3H‑8‑OH‑DPAT(67.0Ci/mmol)，[3H]‑3 3 3 3
(+)‑pentazocine(250μCi)，[ H]‑DTG([ H]‑DTG,250μCi)，[ H]‑paroxetine，[ H]‑Nisoxetine购自PerkinElmer公司；Methysergide，购自RBI公司；GF/C玻璃纤维滤纸，购自Whatman公司；Tris进口分装；PPO、POPOP购自上海试剂一厂；脂溶性闪烁液。Wallace 
1450MicroBeta TriLux闪烁发光计数器，Perkin Elmer公司产品。CHO‑5‑HT1A细胞，ThermoFisher公司。

[0171] (1)σ1受体膜的制备及配体亲和性的测定(抑制率)

[0172] σ1受体膜的制备：豚鼠断头，冰上操作，迅速取脑，将组织合到一根离心管中，加入50mM的Tris‑HCl缓冲液于4档匀浆3‑4s，匀浆4次，然后加入50mM的Tris‑HCl缓冲液，调整为
10ml/g，将匀浆完的试管用天平调整重量，1000r离心10min；取上层液加50mM的Tris‑HCl缓冲液调整为2ml/g，1000r、4℃离心10min；取上清液，11500r、4℃离心25min；取沉淀加50mM的Tris‑HCl缓冲液调整为3ml/g，于25℃下孵育15min，11500r、4℃离心25min，将沉淀于‑80℃储存备用。

[0173] σ1受体竞争结合实验：

[0174] (1‑1)将制备好的σ1受体膜中加入适量的50mM的Tris‑HCl缓冲液，用匀浆机分散均匀，50mM的Tris‑HCl缓冲液制成220mg/ml膜的混悬液，备用；

[0175] (1‑2)各反应管分别加入膜的混悬液100μL；

[0176] (1‑3)总结合管(TB)加入100μL 50mM的Tris‑HCl缓冲液，非特异性结合管(NB)加‑5入100μL氟哌啶醇(终浓度10 M)，各受试化合物特异性结合管(SB)加入100μL受试化合物‑5
(终浓度10 M)；

[0177] (1‑4)各反应管分别加入放射性配体[3H]‑(+)‑pentazocine 10μL(终浓度4nM)；

[0178] (1‑5)将各反应管25℃温孵3h，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，Whatman试纸GF/C提前2h使用0.25％PEI溶液饱和，用冰冷的50mM的Tris‑HCl缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到2ml闪烁杯中，加入1ml的甲苯闪烁液并混匀；

[0179] (1‑6)将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0180] (2)σ2受体膜的制备及配体亲和性的测定(抑制率)

[0181] σ2受体膜的制备：豚鼠断头，冰上操作，迅速取脑，将组织合到一根离心管中，加入0.01M Tris HCl+0.32M蔗糖溶液于4档匀浆3‑4s，匀浆4次，然后加入0.01M Tris HCl+
0.32M蔗糖溶液，调整为10ml/g，将匀浆完的试管用天平调整重量，1000r离心10min；取上层液加0.01M Tris HCl+0.32M蔗糖溶液调整为2ml/g，1000r、4℃离心10min；取上清液，
11000r、4℃离心30min；取沉淀用0.01M Tris HCl+0.32M蔗糖溶液混悬30s，调整为3ml/g，
25℃孵育15min，11000r离心30min，将上清于‑20℃储存12h以上，使用时50Mm‑Tris孵育。

[0182] σ2受体竞争结合实验：

[0183] (2‑1)将制备好的σ2受体膜中加入适量的匀浆液(0.01M Tris HCl)，用匀浆机分散均匀，将匀浆机上的15只试管混入到100ml的容器中，加入适量的匀浆液(0.01M Tris HCl)制备250mg/mL膜的混悬液，备用；

[0184] (2‑2)各反应管分别加入膜的混悬液100μL，匀浆液(0.01M Tris HCl)100μL；

[0185] (2‑3)总结合管(TB)加入100μL匀浆液(0.01M Tris HCl)，非特异性结合管(NB)加‑5入5uM DTG 100μL(终浓度0.5*10 M)，各受试化合物特异性结合管(SB)加入100μL受试化合‑5
物(终浓度10 M)；各管中均加入100nM(+)‑NANM(CAS号：133005‑41‑1)屏蔽sigma‑1受体；

[0186] (2‑4)各反应管分别加入放射性配体3H‑DTG 10μL(终浓度5nM)(各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上)；

[0187] (2‑5)将各反应管25℃温孵3h，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，Whatman试纸GF/C使用0.25％PEI溶液饱和，用冰冷的试验缓冲液(0.01M Tris HCl)充分洗涤，将滤片取出放到2ml闪烁杯中，加入1ml的甲苯闪烁液并混匀；

[0188] (2‑6)将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0189] (3)5HT1A受体膜的制备及配体亲和性的测定(抑制率)

[0190] CHO‑5‑HT1A细胞由‑80℃冰箱取出后自然解冻，取1000g、4℃下离心10min；弃上清液，取沉淀，向沉淀中加匀浆液(50mM Tris‑HCl缓冲液，含1mM EDTA、0.1％的抗坏血酸、20μM优降宁和10mM MgSO4，pH＝7.4)混匀20‑30s，然后取50000g、4℃离心15min，小心的弃去上层液，再次加入匀浆液(50mM Tris‑HCl缓冲液，含1mM EDTA、0.1％的抗坏血酸、20μM优降宁和10mM MgSO4，pH＝7.4)混匀，取50000g、4℃离心15min离心，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于‑80℃储存备用。

[0191] 实验方法：

[0192] (3‑1)将制备好的5HT1A受体膜中加入适量的匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液，含0.1％的抗坏血酸、10um优降宁和4mM CaCl2)，用匀浆机分散均匀，制成8mg/mL膜的混悬液备用；

[0193] (3‑2)各反应管分别加入膜的混悬液100μL，匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液，含0.1％的抗坏血酸、10um优降宁和4mM CaCl2)100μL；

[0194] (3‑3)总结合管(TB)加入100μL匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液，含0.1％的抗坏‑5血酸、10um优降宁和4mM CaCl2)，非特异性结合管(NB)加入5‑HT 100μL(终浓度10 M)，各受‑5
试化合物特异性结合管(SB)加入100μL受试化合物(终浓度10 M)；

[0195] (3‑4)各反应管分别加入放射性配体3H‑8‑OH‑DPAT 10μL(各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上)；

[0196] (3‑5)将各反应管37℃温孵10min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的试验缓冲液(0.05M的Tris‑HCl)充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

[0197] (3‑6)将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0198] 化合物每次实验做两复管，进行两次单独实验。

[0199] (4)5HT2A受体膜的制备及配体亲和性的测定(抑制率)

[0200] 5HT2A受体膜的制备：大鼠断头，冰上操作，迅速取脑纹状体，将2个纹状体合到一根离心试管中，加入3ml缓冲液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)于4档3‑4s匀浆，匀浆4次，然后加入5ml缓冲液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)，于37℃孵化10min，孵化完后试管用天平调整重量，在12000r，4℃离心20min，弃上清液，加入3ml匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)，用旋涡混合器混匀，再加入5ml缓冲液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)，离心，弃上清液，将沉淀于‑80℃储存备用。

[0201] 实验方法：

[0202] (4‑1)将制备好的5HT2A膜中加入适量的匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)，用匀浆机分散均匀，制成210mg/mL膜的混悬液备用；

[0203] (4‑2)各反应管分别加入膜的混悬液100μL，匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)100μL；

[0204] (4‑3)总结合管(TB)加入100μL匀浆液(0.05M的Tris‑HCl缓冲液)，非特异性结合‑5管(NB)加入Methysergide 100μL(终浓度10 M)，各受试化合物特异性结合管(SB)加入100μ‑5
L受试化合物(终浓度10 M)；

[0205] (4‑4)各反应管分别加入放射性配体3H‑Ketanserin 10μL(各反应管均设2个平行管，加样时各管置于冰上)；

[0206] (4‑5)将各反应管37℃温孵15min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，用冰冷的0.05M的Tris‑HCl缓冲液充分洗涤，将滤片取出放到3ml闪烁杯中，加入2ml的甲苯闪烁液并混匀；

[0207] (4‑6)将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0208] 化合物每次实验做两复管，进行两次单独实验。

[0209] (5)SERT和NET(组织)受体膜的制备

[0210] 取大鼠脑皮层，加入匀浆液(50mM Tris‑HCl，120mM NaCl，5mM KCl，pH＝7.4)匀浆，取50000g、4℃离心10min，弃上清液，加入匀浆液(50mM Tris‑HCl，120mM NaCl，5mM KCl，pH＝7.4)匀浆于37℃孵化10min，离心后取沉淀，再加入50mM的Tris‑HCl缓冲液(pH＝7.4)洗涤，重复三次离心，离心完毕，弃上清液，将沉淀于‑80℃储存备用。

[0211] SERT受体竞争结合试验

[0212] 先将制备好的膜用适量的匀浆液(50mM Tris‑HCl,NaCl 120mM，KCl 5mM，pH＝7.4)，用匀浆机分散均匀，制成210mg/mL膜的混悬液备用；各反应管分别加入膜的混悬液
100μl；总结合管(TB)加入100μl匀浆液(50mM Tris‑HCl，NaCl 120mM，KCl 5mM,pH＝7.4)，‑5
非特异性结合管(NSB)加入paroxetine 100μl(终浓度1.0*10 M，各受试化合物结合管(CB)‑5 3
加入100μl受试化合物(终浓度1.0*10 M)；各反应管分别加入放射性配体[H]‑paroxetine终浓度为0.5nM；将各反应管23℃温孵60min，反应完毕，结合的配基通过减压快过滤，Whatman试纸GF/C提前1h使用0.5％PEI溶液饱和，用冰冷的试验缓冲液(50mM Tris‑HCl缓冲液，pH＝7.4)充分洗涤，将滤片取出放到2ml闪烁杯中，加入1ml的甲苯闪烁液并混匀；将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0213] NET受体竞争结合试验

[0214] 先将制备好的膜用适量的匀浆液(50mM的Tris‑HCl，pH＝7.4)，用匀浆机分散均匀，制成210mg/mL膜的混悬液备用；各反应管分别加入膜的混悬液100μl；总结合管(TB)加入100μl匀浆液(50mM的Tris‑HCl，pH＝7.4)，非特异性结合管(NSB)加入100μl ‑5
desipramine(终浓度1.0*10 M，各受试化合物结合管(CB)加入100μl受试化合物(终浓度‑5
1.0*10 M)；各反应管分别加入放射性配体[3H]‑Nisoxetine终浓度为0.5nM；将各反应管25℃温孵30min，反应完毕，结合的配基通过减压快速过滤，Whatman试纸GF/C提前1h使用
0.5％PEI溶液饱和，用冰冷的试验缓冲液(50mM Tris‑HCl，pH＝7.4)充分洗涤，将滤片取出放到2ml闪烁杯中，加入1ml的甲苯闪烁液并混匀；将闪烁瓶放入液闪计数仪计数。

[0215] 按以下公式计算各化合物对同位素配基结合的抑制率百分率：

[0216] 抑制率(I％)＝(TB‑SB)/(TB‑NB)╳100％

[0217] TB：总结和常数；NB：非特异性结合常数；SB：化合物的结合常数。

[0218] 实验结果见表2，体外实验结果表明：本发明所涉及的化合物，与度洛西汀相比，实施例1‑6、实施例7‑16所制备得到的化合物对5‑HT1A受体亲和力与之相当；实施例4、实施例16和实施例26分别制备得到的化合物对NET的亲和力与之相当；实施例1‑2、实施例4‑5、实施例7‑8、实施例10、实施例12‑16、实施例19‑21、实施例23、实施例25‑26分别制备得到的化合物对5‑HT2A受体亲和力与之相当；与S1RA相比，实施例4‑6、实施例11‑13、实施例15、实施例20‑22、实施例26分别所制备得到的化合物对σ1受体亲和力与之相当，全部化合物对σ2受体亲和力均较弱。其中，实施例4‑5、实施例12、实施例15分别所制备得到的化合物对σ1以及
5‑HT1A和5‑HT2A受体亲和力均较高。基于化合物对这些受体高的亲和性，表明这类化合物具有较好的镇痛活性。

[0219] 表2化合物对各受体的亲和力结果(抑制率(％))

[0220] 编号 5‑HT1A SERT NET 5‑HT2A σ1 σ2实施例1 100.11 22.62 4.51 97.12 63.92 40.58
实施例2 95.22 29.29 54.30 110.33 37.19 27.16
实施例3 91.96 25.97 44.06 83.29 36.55 23.62
实施例4 112.83 92.38 95.08 126.75 95.39 38.78
实施例5 107.93 77.91 54.71 118.60 91.56 10.03
实施例6 51.25 79.02 55.10 87.11 100.20 57.30
实施例7 103.04 32.65 23.57 94.90 71.41 49.05
实施例8 102.07 61.08 47.23 102.43 83.75 23.03
实施例9 96.52 70.23 34.63 88.97 80.17 36.78
实施例10 105.65 46.34 37.81 95.39 82.47 13.26
实施例11 101.74 30.55 59.22 66.01 94.88 40.35
实施例12 98.48 61.77 82.79 98.60 89.00 36.13
实施例13 106.96 82.88 65.37 105.51 87.21 41.25
实施例14 105.98 42.06 19.26 90.70 37.83 30.56
实施例15 103.92 55.92 57.95 102.76 92.99 36.48
实施例16 103.70 62.91 94.26 127.24 70.70 41.74
实施例17 57.07 25.45 5.84 81.56 82.73 27.24
实施例18 37.17 4.74 70.90 27.74 72.49 30.76
实施例19 ‑20.51 46.28 ‑124.15 97.10 51.57 44.16
实施例20 ‑105.13 41.83 20.34 111.32 91.51 10.06
实施例21 ‑107.05 38.68 21.56 108.82 88.38 21.01
实施例22 ‑93.59 17.69 ‑35.58 83.02 99.80 50.26
实施例23 6.41 35.82 20.34 90.85 57.21 44.69
实施例24 66.03 77.15 ‑16.19 87.37 23.39 62.58
实施例25 73.72 ‑0.86 62.59 108.75 95.35 54.36
实施例26 4.49 28.08 113.20 111.19 59.39 49.07
度洛西汀 93.23 98.50 99.44 89.96 / /
SIRA / / / / 96.13 35.11

[0221] 实施例28福尔马林诱导的大鼠疼痛模型实验

[0222] SD大鼠，雄性，200–260g，随机分为阴性对照组、模型组、阳性药组(S1RA)以及实施例4、实施例5、实施例12、实施例15分别制备得到的化合物组(40mg/kg剂量)，每组8只。阴性对照组和模型组皮下给与相应溶剂生理盐水，阳性药物组皮下给与相应阳性药，化合物各剂量组皮下给与相应剂量化合物，给药体积为5ml/kg。皮下给药5min后，大鼠左后足脚掌内注射5％的福尔马林75ul造模，以形成皮丘为造模成功标准。软件自动记录造模后第0‑60min之间以1min为时间段的抬足次数，再根据软件的结果分别分析和计算第I相(1‑
10min)和第II相(10‑60min)大鼠抬足次数总和。以化合物II相检测结果与模型II相检测结果比较，以抬足抑制率作为判断是否有镇痛作用的客观标准。

[0223] 表3优选化合物对福尔马林致痛大鼠抬腿次数的影响(Mean±SD)

[0224] 组别 剂量(mg/kg) n 第I相 第II相模型组 ‑ 8 22.75±7.08 123.75±32.85
S1RA 40 8 20.25±9.71 49.75±24.71**
实施例4 40 8 24.635±.83 65.38±46.13*
实施例5 40 8 21.63±10.22 73.50±30.13*
实施例12 40 8 18.00±8.82 59.88±41.97**
实施例15 40 8 30.38±15.33 45.88±49.54**

[0225] 注：*P<0.05，**P<0.01VS模型组。

[0226] 与阳性对照药物S1RA相比，优选实施例4、实施例5、实施例12、实施例15分别制备得到的化合物在大鼠福尔马林诱导的疼痛模型的II相疼痛中也表现出良好的镇痛作用。