一株成团泛菌ZF15004及菌剂、液体菌肥及制备方法、应用和施用方法

摘要

本发明属于微生物肥料技术领域，具体涉及一株成团泛菌ZF15004及菌剂、液体菌肥及制备方法、应用和施用方法。本发明提供的一株成团泛菌(Pantoea agglomerans)ZF15004，保藏编号为CGMCC NO.24405。利用成团泛菌ZF15004制备的液体菌肥能够提高油麦菜、小麦的产量。可见，本发明的成团泛菌ZF15004在促生中具有良好的应用前景。

权利要求

1.一株成团泛菌（Pantoea agglomerans）ZF15004，其特征在于，保藏编号为CGMCC NO.24405。

2.一种含有权利要求1所述的成团泛菌ZF15004的菌剂。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，当所述菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中的成团泛菌ZF15004的活菌数为150 190亿/mL。

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4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，成团泛菌ZF15004液体菌剂的制备包括：对成团泛菌ZF15004种子液进行发酵培养得到成团泛菌ZF15004液体菌剂；所述发酵的温度为

25 35℃，时间为24 48h，发酵pH为5 7。

~ ~ ~

5.一种液体菌肥，其特征在于，以权利要求2 4任一项所述菌剂为基础，还包括以下浓~度的组分：黄原胶2 5g/L、悬浮剂1 3g/L和抗冻剂20 50mL/L。

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6.权利要求1所述的成团泛菌ZF15004或者权利要求2 4任一项所述的菌剂或者权利要~求5所述液体菌肥在如下（1）（4）中一种或多种中的应用；

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（1）土壤固氮；

（2）土壤解磷；

（3）促进植物生长；

（4）提高植物产量。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物包括油麦菜或小麦。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，成团泛菌ZF15004通过分泌IAA来促进植物生长。

9.权利要求5所述的液体菌肥的施用方法，其特征在于，在植物发芽8 12d后撒施，液体~菌肥稀释后施用，所述液体菌肥的稀释倍数为800 1000倍，稀释前液体菌肥的施用量为~

0.15 0.20L/亩。

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说明书

一株成团泛菌ZF15004及菌剂、液体菌肥及制备方法、应用和

施用方法

技术领域

[0001] 本发明属于微生物肥料技术领域，具体涉及一株成团泛菌ZF15004及菌剂、液体菌肥及制备方法、应用和施用方法。

背景技术

[0002] 微生物肥料又称生物肥料、接种剂或菌肥(bacterial manure)等，是指以微生物的生命活动为核心，使农作物获得特定的肥料效应的一类肥料制品。微生物肥料是最近几年在微生物技术发展的基础上研制而成的新型肥料。

[0003] 微生物肥料绿色环保，操作简单且有效。目前报道的可应用于植物促生的微生物种类繁多，包括真菌、细菌和放线菌。现有技术中报道的微生物肥料为多菌种混合肥料，例如中国专利CN101372425公开的一种微生物肥料及其制备方法中报道了利用蜡样芽孢杆菌培养物、巨大芽孢杆菌培养物、枯草芽孢杆菌培养物、胶冻样芽孢杆菌培养物、成团泛菌培养物、圆褐固氮菌培养物制备微生物肥料，肥料的应用效果好，能够提高水稻和马铃薯产量；再如中国专利CN102115347A公开的一种混合物肥料及其制备方法中利用蜡样芽胞杆菌培养物、枯草芽胞杆菌培养物、成团泛菌培养物、植物乳杆菌培养物和嗜酸乳杆菌培养物制备微生物肥料。现有技术中利用多种菌种制备微生物肥料，微生物肥料的制备比较复杂，而单一成团泛菌制备的微生物肥料未见报道。因此，需要加强成团泛菌的研究，制备植物促生效果好的单一成团泛菌液体菌肥。

发明内容

[0004] 本发明的目的提供一株成团泛菌(Pantoea agglomerans)ZF15004，本发明提供的成团泛菌ZF15004制备的液体菌肥，能够提高油麦菜或小麦的生长速率和生物量。

[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

[0006] 本发明提供了一株成团泛菌(Pantoea agglomerans)ZF15004，保藏编号为CGMCC NO.24405。

[0007] 本发明提供了一种含有上述技术方案所述的成团泛菌ZF15004的菌剂。

[0008] 优选的，当所述菌剂为液体菌剂时，所述液体菌剂中的成团泛菌ZF15004的活菌数为150～190亿/mL。

[0009] 优选的，成团泛菌ZF15004液体菌剂的制备包括：对成团泛菌ZF15004种子液进行发酵培养得到成团泛菌ZF15004液体菌剂；所述发酵的温度为25～30℃，时间为48～72h，发酵pH为5～7。

[0010] 本发明提供了一种液体菌肥，以上述技术方案所述菌剂为基础，还包括以下浓度的组分：黄原胶2～5g/L、悬浮剂1～3g/L和抗冻剂20～50mL/L。

[0011] 优选的，所述悬浮剂包括丙烯酰基二甲基牛磺酸钠、水性二氧化硅和硅酸镁铝中一种或几种；所述抗冻剂包括甲醇、乙醇、乙二醇和水溶性酰胺中一种或几种。

[0012] 本发明提供了上述技术方案所述的成团泛菌ZF15004或者上述技术方案任一项所述的菌剂或者上述技术方案所述液体菌肥在如下(1)～(4)中一种或多种中的应用；

[0013] (1)土壤固氮；

[0014] (2)土壤解磷；

[0015] (3)促进植物生长；

[0016] (4)提高植物产量。

[0017] 优选的，所述植物包括油麦菜或小麦。

[0018] 优选的，成团泛菌ZF15004通过分泌IAA来促进植物生长。

[0019] 本发明提供了上述技术方案所述液体菌肥或上述技术方案所述的制备方法制备得到的液体菌肥的施用方法，在植物发芽8～12d后撒施，液体菌肥稀释后施用，所述液体菌肥的稀释倍数为800～1000倍，稀释前液体菌肥的施用量为0.15～0.20L/亩。

[0020] 本发明的有益效果：本发明提供一株成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004，保藏编号为CGMCCNO.24405，本发明将成团泛菌ZF15004制备液体菌肥能够提高油麦菜或小麦的产量。可见，本发明的成团泛菌ZF15004在促生中具有良好的应用前景。

[0021] 生物保藏说明

[0022] 成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004，于2022年2月18日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.24405，保藏单位地址：北京朝阳区北辰西路1号院3号。

附图说明

[0023] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

[0024] 图1为实施例2成团泛菌ZF15004的溶磷能力图；

[0025] 图2为实施例2成团泛菌ZF15004的固氮能力；

[0026] 图3为实施例2不同菌株分泌IAA的量图；

[0027] 图4为实施例2成团泛菌ZF15004的菌落形态图；

[0028] 图5为实施例2成团泛菌ZF15004的革兰氏染色图；

[0029] 图6为实施例2成团泛菌ZF15004的系统发育树；

[0030] 图7为实施例2成团泛菌ZF15004分泌IAA的量图；

[0031] 图8为实施例4试验组和对照组的油麦菜表型图；

[0032] 图9为实施例4试验组和对照组的油麦菜生物量图；其中处理为试验组；

[0033] 图10为实施例5的试验组和对照组的小麦表型图。

具体实施方式

[0034] 本发明提供了一株成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004，保藏编号为CGMCCNO.24405。本发明所述成团泛菌ZF15004的16S基因序列优选如SEQ ID NO.1所示。

[0035] SEQ ID NO.1序列：ACGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTG ACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGTGTTGTGGTTAATAACCACAGCAATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCTGTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCGAAACTGGCAGGCTAGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTGCCCTTGAGGCGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGGTCCGGCCGGGAACTCAAAGGAGACTGCCAGTGATAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGCATACAAAGAGAAGCGAACTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAAAGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGG。

[0036] 本发明所述成团泛菌ZF15004优选从内蒙古农田根际土壤样品中分离得到，具备良好的环境适应，成团泛菌ZF15004属促生细菌，所述成团泛菌ZF15004具有固氮、解磷、分泌IAA的能力，能够促进油麦菜、小麦的生长。本发明所述成团泛菌ZF15004菌落形态外观呈乳白色，质地粘稠，侧看有凸起，有光泽。显微镜下呈杆状，用革兰氏染色法初步鉴定阴阳性为阳性。

[0037] 本发明提供了一种含有上述技术方案所述的成团泛菌ZF15004的菌剂。

[0038] 本发明所述菌剂优选为液体菌剂时，所述液体菌剂中成团泛菌ZF15004活菌数优选为150～190亿/mL，进一步优选为170～185亿/mL，更优选为180亿/mL。

[0039] 在本发明中，成团泛菌ZF15004液体菌剂的制备方法优选包括对成团泛菌ZF15004种子液进行发酵培养得到成团泛菌ZF15004液体菌剂；所述发酵的温度为25～30℃，时间为48～72h，发酵pH为5～7。

[0040] 在制备成团泛菌ZF15004液体菌剂之前，本发明优选制备成团泛菌ZF15004种子液。本发明所述成团泛菌ZF15004种子液的制备优选包括对成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004活化培养后得到成团泛菌ZF15004菌落，将所述成团泛菌ZF15004菌落接种于种子培养基进行种子培养得到成团泛菌ZF15004种子液。

[0041] 在本发明中，成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004活化培养后得到成团泛菌ZF15004菌落。本发明对所述活化培养的步骤没有特殊限定，采用常规的方法即可。本发明所述的活化培养优选包括第一活化培养和第二活化培养。在本发明中，所述成团泛菌ZF15004保存于‑40℃的冻存管，冻存管室温解冻后，挑取冻存管的成团泛菌ZF15004菌液接种于液体LB培养基进行第一活化培养获得成团泛菌ZF15004培养液；将所述成团泛菌ZF15004培养液在固体LB培养基划线后，进行第二活化培养得到成团泛菌ZF15004单菌落。本发明所述第一活化培养的温度优选为28～33℃，更优选为30℃；时间优选为70～80h，进一步优选为72～76h，更优选为72h。本发明所述第二活化培养的温度优选为26～32℃，更优选为30℃；时间优选为70～76h，更优选为72h。本发明对划线的操作没有特殊限定，采用常规的方法即可。本发明所述活化培养时也可以将保存在斜面的成团泛菌ZF15004在固体LB培养基中直接划线分离获得成团泛菌ZF15004菌落。

[0042] 在本发明中，固体LB培养基的组成优选为每1000mL蒸馏水中包括5～10gNaCl、胰蛋白胨5～10g、酵母提取物2～5g和琼脂15～20g，pH＝5～7，更优选为每1000mL蒸馏水中包括10gNaCl、胰蛋白胨10g、酵母提取物5g和琼脂18g，pH＝5～7；液体LB培养基的组成优选为每1000mL蒸馏水中包括NaCl5～10g，胰蛋白胨5～10g和酵母提取物2～5g，pH＝5～7，更优选为每1000mL蒸馏水中包括10gNaCl、胰蛋白胨10g和酵母提取物5g，pH＝5～7。

[0043] 得到成团泛菌ZF15004单菌落后，挑取成团泛菌ZF15004单菌落接种于种子培养基中进行种子培养得到成团泛菌ZF15004种子液。本发明所述种子培养的温度优选为25～35℃，更优选为30℃；种子培养时间优选为24～48h，进一步优选为24～36h，更优选为28h。本发明对成团泛菌ZF15004单菌落的挑取量没有特殊限定，采用常规的挑取量即可。

[0044] 在本发明中，所述种子培养基组分优选为红糖、麦麸、鱼蛋白胨和硫酸铵，所述种子培养基的组成优选为每1000mL水中包括红糖100～150g，麦麸30～50g，鱼蛋白胨100～150g，硫酸铵80～120g，pH＝5～7，更优选为每1000mL水中包括红糖100g，麦麸40g，鱼蛋白胨120g，硫酸铵100g，pH＝5～7。

[0045] 获得成团泛菌ZF15004种子液后，本发明优选将成团泛菌ZF15004种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，本发明所述发酵培养的温度优选为25～35℃，更优选为30℃；发酵培养的时间优选为24～48h，进一步优选为24～36h，更优选为36h。本发明所述发酵时优选pH为5～7，且发酵过程中优选用浓度为氨水维持pH在5～7。本发明对所述氨水的质量浓度无要求，采用常规的调节pH值的氨水浓度即可。本发明所述发酵培养转速优选为为350～480r/min，进一步优选为380～430r/min，更优选为400r/min；所述成团泛菌ZF15004种子液接种量优选为发酵培养基体积的20％～30％，进一步优选为25％～28％，更优选为25％。本发明所述发酵目的在于进一步促进成团泛菌ZF15004菌体代谢物分泌，代谢物中有促生成分。

[0046] 本发明所述发酵培养基的组成为红糖、麦麸、鱼蛋白胨、七水硫酸镁、硫酸铵和碳酸钙，优选为每1000mL水中包括包括红糖100～150g，麦麸30～50g，鱼蛋白胨100～150g，七水和硫酸镁10～15g，硫酸铵80～120g，碳酸钙40～60g，pH＝5～7，更优选为每1000mL水中包括红糖110g，麦麸35g，鱼蛋白胨140g，七水和硫酸镁12g，硫酸铵100g，碳酸钙40g，pH＝5～7。

[0047] 在发酵培养中，本发明优选36h停止发酵培养，得到成团泛菌ZF15004发酵液，即成团泛菌ZF15004菌剂。本发明所述成团泛菌ZF15004菌剂为液体菌剂，也可以在液体菌剂中添加相应的载体材料制备成固体菌剂。

[0048] 本发明还提供了一种液体菌肥，以上述技术方案所述成团泛菌ZF15004菌剂为基础，还包括以下浓度的组分：黄原胶2～5g/L、悬浮剂1～3g/L和抗冻剂20～50mL/L。

[0049] 本发明所述成团泛菌ZF15004菌剂优选以液体的形式添加配体后得到ZF15004液体菌肥。本发明优选液体菌肥的配体成分为所述黄原胶、悬浮剂和抗冻剂。

[0050] 以成团泛菌ZF15004液体菌剂的体积计，本发明提供的ZF15004液体菌肥中黄原胶添加量优选为2～5g/L，进一步优选为2.5～4.5g/L，更优选为2.5g/L；本发明所述黄原胶的作用为增加菌肥的粘稠度。

[0051] 以成团泛菌ZF15004液体菌剂的体积计，本发明提供的ZF15004液体菌肥中悬浮剂添加量优选为1～3g/L，进一步优选为1.5～2.5g/L，更优选为2g/L；本发明所述悬浮剂优选为聚丙烯酰基二甲基牛磺酸钠、水性二氧化硅、硅酸镁铝中一种或几种，更优选为聚丙烯酰基二甲基牛磺酸钠。本发明所述悬浮剂的作用为将菌剂中的细菌成分呈悬浮态，使得液体菌肥中菌液浓度均匀不沉降。

[0052] 以成团泛菌ZF15004液体菌剂的体积计，本发明提供的ZF15004液体菌肥中抗冻剂添加量优选为20～50ml/L，进一步优选为25～45ml/L，更优选为35ml/L；本发明所述抗冻剂优选为甲醇、乙醇、乙二醇、水溶性酰胺中一种或几种，更优选为乙二醇。

[0053] 本发明所述液体菌肥中成团泛菌ZF15004的活菌数优选为150～190亿/mL，进一步优选为170～190亿/mL，更优选为180亿/mL。

[0054] 本发明所述液体菌肥绿色环保，操作简单且有效。

[0055] 本发明提供了上述技术方案所述的成团泛菌ZF15004或上述技术方案所述的菌剂或上述技术方案所述的液体菌肥或上述技术方案所述的制备方法制备得到的液体菌肥在如下(1)～(4)中一种或多种中的应用；

[0056] (1)土壤固氮；

[0057] (2)土壤解磷；

[0058] (3)促进植物生长；

[0059] (4)提高植物产量。

[0060] 在本发明中，所述植物优选包括油麦菜或小麦，本发明所述成团泛菌ZF15004优选分泌IAA促进植物生长。

[0061] 本发明提供了上述技术方案所述液体菌肥或上述技术方案所述制备方法制备得到的液体菌肥的施用方法，在植物发芽8～12d后稀释施用，本发明液体菌肥的稀释倍数为800～1000倍，更优选为1000倍，本发明稀释前液体菌肥的施用量为0.15～0.20L/亩。

[0062] 在本发明中，所述液体菌肥优选为植物发芽8～12d后撒施，进一步优选为9～11d，更优选为10d。之所以选择植物发芽10d后撒施是由于发芽10天后嫩芽较为坚韧，浇水时不易被水流折断。

[0063] 在本发明中，稀释前液体菌肥的施用量优选为0.15～0.20L/亩，进一步优选为0.16～0.18L/亩，更优选为0.17L/亩。

[0064] 本发明对所述施用方式没有特殊限定，采用常规的方式即可。

[0065] 本发明利用微生物菌株和配体(黄原胶、悬浮剂和抗冻剂)制成液体菌肥。本发明所述液体菌肥促进油麦菜或小麦的生长，进而提高油麦菜或小麦的鲜重，加快油麦菜生产过程，为提高农田利用率提供环保有效的途径。本发明的液体菌肥能够改善土壤肥力状况：通过施用液体菌肥提高农田土壤的土质；液体菌肥还可以有效降低化肥的使用量，降低二次污染，绿色环保，应用效果好。

[0066] 为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的促生防病复合微生物菌剂及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

[0067] 实施例1

[0068] 从内蒙古呼和浩特市土默特左旗土默川路耕地(经度111.4936，纬度40.7341)采集土壤样品，土壤样品的深度为15cm，称取1g土壤样品到灭菌的试管中，然后加10mL灭菌的‑5去离子水，置于30℃震荡器震荡6h，震荡完成后取浸取液梯度稀释至10 。

[0069] 用移液枪吸取100μL稀释后的土壤样品溶液，在分离初筛培养基(10g/L葡萄糖，0.5g/L酵母提取物，0.2g/LNaCl，0.2g/LKCl，0.5g/L(NH4)2SO4，5g/LCa3(PO4)2，0.002g/LMnSO4·H2O，6ml/L0.4％溴酚蓝，琼脂18g，pH值为7)上进行涂布培养，培养基放置在30℃恒温培养箱中进行培养48h。

[0070] 挑取在分离初筛培养基上长出的形态圆润、大小中等的细菌菌落到固氮培养基(10g/L甘露醇，0.2g/LKH2PO4，0.2g/LMgSO4·7H2O，0.2g/LNaCl，0.1g/LCaSO4·2H2O，5g/LCaCO3，琼脂18g和去离子水1L，pH值为7.2)上进行第一次分离纯化，挑取第一次分离纯化后的单菌落再次进行分离纯化，重复上述分离纯化的过程5‑6次，将分离划线得到的单菌落转接到LB固体斜面培养基，在30℃培养2d保存在4℃冰箱中。

[0071] 实施例2

[0072] 对实施例1筛选出的菌株进行溶磷能力测试、固氮能力测试和分泌IAA能力检测。

[0073] 1溶磷能力的测定

[0074] 溶磷能力的测定采用平板溶磷圈法，采用的培养基为无机磷培养基(NBRIP)；

[0075] 无机磷培养基(NBRIP)的组成10gCa3(PO4)2，10g葡萄糖，10gNaCl，10gMgCl2·6H2O，0.03gMgSO4·7H2O，0.03gFeSO4·7H2O，18g琼脂，1L去离子水，pH＝7.2。

[0076] 将实施例1中斜面保藏的菌株接种到LB培养基中进行活化，在30℃培养1d，再把活化菌液稀释倍后涂布于NBRIP培养基平板上，于30℃培养3d，有溶磷圈的菌株即为有溶磷效果的菌株。其中一株溶磷能力见图1，有明显可见溶磷圈。

[0077] 2固氮能力测试

[0078] 培养基：固氮能力测试采用Ashby培养基，Ashby培养基(1L)的组成：10g甘露醇，0.2gKH2PO4，0.2gMgSO4·7H2O，0.2gNaCl，0.1gCaSO4·2H2O，5gCaCO3，琼脂18g和去离子水
1L，pH＝7.2。

[0079] 将有溶磷能力的菌株接种到LB培养基中进行活化，在30℃培养1d，再把活化菌液稀释倍后涂布于Ashby培养基平板上，于30℃培养2d，可以正常生长的菌株即为具有固氮能力的菌株。其中一株的固氮能力见图2。

[0080] 3分泌IAA能力检测

[0081] 将有溶磷能力和固氮能力的菌株进行分泌IAA能力定性检测和定量检测。

[0082] 显色剂Salkowski溶液：150mL浓H2SO4，7.5mL0.5mol/LFeC13，ddH2O250mL。

[0083] 定性检测：菌株分别接种于LB液体培养基中(添加浓度为0.5g/L的L‑色氨酸)，30℃、180r/min震荡培养3d，培养液离心后取100μL上清液加入100μLSackowcki显色剂在白瓷板上避光显色30min后观察，若溶液出现粉红色表示该菌株可以分泌IAA；显示溶磷能力和固氮能力的菌株经显色反应30min后出现粉红色。

[0084] 定量检测：取菌株的上清液与Sackowcki's显色剂避光显色30min后，测定在530nm2
的吸光值，以空白培养基作为对照，以纯IAA的吸光值制作标准曲线y＝0.0502x，R ＝
0.999，x代表IAA浓度，y代表OD值；然后测定不同菌株的上清液的OD值，定量检测时设置3个平行实验，再结合OD值和IAA的量的标准曲线计算得到各菌株产IAA的量(μmol/L)。培养72h后取样检测，分泌IAA的菌株分别命名为ZF12002、ZF13005、ZF13002、ZF15003、ZF15004、ZF23003、ZF23004，见图3，经对比，其中一株分泌IAA的量最多的菌株为ZF15004，菌株ZF15004同时为图1显示溶磷能力的菌株以及图2显示固氮能力的菌株，对ZF15004进行16S测序鉴定和生理生化鉴定。

[0085] 挑取保存在LB固体斜面培养基的ZF15004，稀释1000倍后涂布于LB培养基制备的平板上，30℃培养1d得到的菌落形态图见图4，ZF15004菌落外观呈乳白色，粘稠状，有凸起，有光泽，显微镜下呈杆状，用革兰氏染色法初步鉴定阴阳性为阳性。成团泛菌ZF15004的革兰氏染色结果见图5，成团泛菌ZF15004的系统发育树见图6，经鉴定，该菌株为成团泛菌，菌株的名称为成团泛菌ZF15004。

[0086] 测定成团泛菌ZF15004的分泌IAA的量时，成团泛菌ZF15004的上清液的OD值见表1，分泌IAA的量见表2‑1、表2‑2、表2‑3和图7。

[0087] 表1平行实验测定成团泛菌ZF15004的上清液的OD值

[0088]

[0089]

[0090] 表2‑1成团泛菌ZF15004的分泌IAA的量(μmol/L)

[0091]时间/h 平行1 平行2 平行3 平均值
0 0 0 0 0.000
12 0.498 0.478 0.538 0.505
24 5.259 5.060 4.821 5.047
36 10.398 10.199 10.538 10.378
48 20.398 20.299 20.239 20.312
60 26.494 26.394 26.195 26.361
72 27.988 27.789 27.908 27.895

[0092] 表2‑2平行实验测定不同菌株培养72h的上清液的OD值

[0093]菌株编号 平行1 平行2 平行3
ZF12002 0.606 0.631 0.559
ZF13005 0.707 0.731 0.715
ZF13002 0.054 0.032 0.044
ZF15003 0.278 0.301 0.287
ZF15004 1.410 1.400 1.424
ZF23003 0.382 0.377 0.404
ZF23004 0.231 0.211 0.201

[0094] 表2‑3不同菌株培养72h分泌IAA的量(μmol/L)

[0095]

[0096]

[0097] 实施例3液体菌肥的制备

[0098] 固体LB培养基的组成：1000mL蒸馏水中、NaCl10g/L、胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L和琼脂18g/L；

[0099] 液体LB培养基的组成：1000mL蒸馏水、NaCl10g/L、胰蛋白胨10g/L和酵母提取物5g/L。

[0100] 种子培养基的组成：1000mL蒸馏水、红糖100g、麦麸40g、鱼蛋白胨120g、硫酸铵100g、pH＝5～7。

[0101] 发酵培养基的组成：1000mL水、红糖110g、麦麸35g、鱼蛋白胨140g，七水硫酸镁12g、硫酸铵100g、碳酸钙40g，pH＝5～7。

[0102] 成团泛菌ZF15004(PantoeaagglomeransZF15004))在LB琼脂固体培养基中划线分离，在培养箱中温度为30℃的条件下恒温培养72h后得到成团泛菌ZF15004菌落；

[0103] 得到成团泛菌ZF15004单菌落后，挑取成团泛菌ZF15004单菌落接种于种子培养基中进行种子培养得到成团泛菌ZF15004种子液，种子培养的温度为30℃；种子培养时间为28h。

[0104] 将成团泛菌ZF15004种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，成团泛菌ZF15004种子液接种量为发酵培养基体积的25％，发酵培养的温度为30℃，发酵培养的时间为36h，发酵培养转速为400r/min。发酵时pH为5～7，且发酵过程中用氨水维持pH在5～7。

[0105] 发酵培养结束后得到成团泛菌ZF15004发酵液，即成团泛菌ZF15004液体菌剂，活菌数为180亿/mL。成团泛菌ZF15004液体菌剂1L中加入2.5g黄原胶、2g聚丙烯酰基二甲基牛磺酸钠、35mL乙二醇得到成团泛菌ZF15004液体菌肥。

[0106] 对比例1液体菌肥的制备

[0107] 选择实施例2筛选过程中得到的分泌IAA的菌株ZF13005制备液体菌肥，液体菌肥的制备方法同实施例3；

[0108] 选择实施例2筛选过程中得到的分泌IAA的菌株ZF12002制备液体菌肥，液体菌肥的制备方法同实施例3；

[0109] 选择实施例2筛选过程中得到的分泌IAA的菌株ZF23003制备液体菌肥，液体菌肥的制备方法同实施例3。

[0110] 实施例4液体菌肥对油麦菜的促生作用

[0111] (1)试验材料：选取籽粒饱满、大小均一的油麦菜种子，油麦菜品种为四季香妃；以内蒙古农田土壤为实验基质，去除土壤中的残留植物根系与碎石，自然风干后碾碎过200目筛，收集细土。

[0112] (2)生长试验：油麦菜种子2020年9月1日播种于种植盆中，种植盆中的土壤为步骤(1)中处理后的内蒙古农田细土，分为对照组和试验组，将种子施种在10cm*10cm*8.5cm的种植盆中，控制培养室温度24±2℃，湿度70％，光照：白天/黑暗＝14h/10h，培养基质pH自然，在油麦菜发芽10d后施用实施例3制备的液体菌肥，1mL液体菌肥稀释1000倍，稀释后液体菌肥施用200mL；对照组不施用液体菌肥，施用100mL清水。对照组、试验组的其他管理条件相同。9月4日发芽，9月14日施肥，两周后进行油麦菜鲜重的测定。

[0113] 收获后分别选取试验组和对照组4颗油麦菜，用天平称量单株油麦菜整颗鲜重，结果见表3和图8、图9。试验组和对照组的油麦菜表型图见图8，试验组和对照组的油麦菜单株鲜重图见图9。

[0114] 表3对照组和试验组单株整苗油麦菜整颗单株鲜重(g)

[0115]   油麦菜1 油麦菜2 油麦菜3 油麦菜4 平均值对照组 51.2 55.3 41 34 45.375
试验组 82.4 61.3 68 72 70.925

[0116] 实施例5液体菌肥对小麦的促生作用

[0117] (1)试验材料：选取籽粒饱满、大小均一的小麦种子，小麦品种为鲁麦15；以内蒙古农田土壤为实验基质，去除土壤中的残留植物根系与碎石，自然风干后碾碎过200目筛，收集细土。

[0118] (2)生长试验：小麦种子2020年9月1日播种于种植盆中，种植盆中的土壤为步骤(1)中处理后的内蒙古农田细土，分为对照组和试验组，将种子施种在8cm*8cm*18cm的种植盆中，在小麦发芽15d后施用实施例3制备的液体菌肥(稀释1000倍)稀释液200mL，对照组1施用对比例1制备的ZF13005液体菌肥(稀释1000倍)稀释液200mL，对照组2施用对比例1制备的ZF12002液体菌肥(稀释1000倍)稀释液200mL，对照组3施用对比例1制备的ZF23003液体菌肥(稀释1000倍)稀释液200mL。对照组、试验组、空白组，空白组不施用液体菌肥，清水200mL。对照组和试验组的其他管理条件相同。9月6日发芽，9月21日施肥，一周后利用尺子测量小麦的地上部高度进行测定。

[0119] 试验组和对照组的小麦表型图见表4和图10，图10不同处理下小麦表型图。根据图10可知，本发明的液体菌肥可以促进小麦的生长。根据表4和图10可知，利用成团泛菌ZF15004制备的液体菌肥促进小麦生长效果最优。

[0120] 表4空白组、对照组和试验组单株小麦的地上部高度(cm)

[0121]

[0122] 注：括号内的数字为施肥处理后小麦在一周内株高增加值；括号前面的数字代表施肥前小麦的株高。

[0123] 综上，本发明提供一株成团泛菌(Pantoeaagglomerans)ZF15004，利用成团泛菌ZF15004制备的液体菌肥可以促进小麦和油麦菜的生长，保藏编号为CGMCCNO.24405，本发明将成团泛菌ZF15004制备液体菌肥能够提高油麦菜、小麦或的产量。可见，本发明的成团泛菌ZF15004在促生中具有良好的应用前景。

[0124] 尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。