用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法

摘要

本发明公开用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法，涉及蛋白酶修复技术领域，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液50‑60份、丝氨酸蛋白酶混合液15‑20份、牙龈蛋白酶K混合液10‑15份、果胶酶5‑8份、复合稳定剂5‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑3份。本发明采用基质金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和牙龈蛋白酶K为主要成分的复合蛋白酶，对于牙龈种植体的创伤面有很好的伤口愈合促进作用，同时能大大减轻牙龈创伤和牙槽骨创伤的炎症症状，具有很好的应用前景。

权利要求

1.用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液50‑60份、丝氨酸蛋白酶混合液15‑20份、牙龈蛋白酶K混合液10‑15份、果胶酶5‑8份、复合稳定剂5‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑3份；

所述基质金属蛋白酶混合液由以下物质组成：MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水；

MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水的重量份比例为：2:1:1：10；

所述丝氨酸蛋白酶混合液由以下物质组成：丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水，丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水的重量份比例为：3:1:10，siRNAs针对丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7进行靶向基因设计；

所述牙龈蛋白酶K混合液由以下物质组成：牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水，牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水的重量份比例为：5:0.2:10；

所述复合稳定剂是0.1mol/L的聚乙烯醇。

2.根据权利要求1所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53‑55份、丝氨酸蛋白酶混合液18‑20份、牙龈蛋白酶K混合液13‑15份、果胶酶7‑8份、复合稳定剂7‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液

1‑2份。

3.根据权利要求2所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

4.根据权利要求3所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，其特征在于，所述丝氨酸蛋白酶混合液的制备方法是：取Spink7质粒的菌液10mL，“井”字形划线涂在含卡那霉素抗性的LB固体培养板上，37℃培养10‑15小时；

挑取单菌落于5mL卡那霉素抗性LB液体培养基中，37℃，300转每分钟摇匀，后室温下静置10‑12小时；

取3mL菌液，室温下超高速离心机离心1分钟，弃去上清，加入1ml siRNAs，振荡重悬沉淀，向留有菌体沉淀的离心管中加入10mL DEPC水，反复颠倒2‑3次轻轻混匀备用。

5.用于口腔牙龈组织的蛋白酶组合物制备方法，其特征在于：采用权利要求1‑4任一所述的用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物组分进行制备，具体步骤是：步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置5‑10分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1‑2分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至‑20℃存储；

步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后在种植体表面均匀喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后将种植体安装在窝洞即可。

说明书

用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及蛋白酶修复技术领域，尤其是涉及用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法。

背景技术

[0002] 目前，人们越来越关注口腔内牙齿的健康，当出现严重蛀牙、牙齿破损等情况时，越来越多的人选择采用种植牙的手段进行修复。

[0003] 口腔种植体按其材料不同，分为：

[0004] 1．金属与合金材料类：包括金、316L不锈钢（铁－铬－镍合金）、铸造钴铬钼合金、钛及合金等。

[0005] 2．陶瓷材料类：包括生物惰性陶瓷、生物活性陶瓷、生物降解性陶瓷等。

[0006] 3．碳素材料类：包括玻璃碳、低温各向同性碳等。

[0007] 4．高分子材料类：包括丙烯酸酯类、聚四氟乙烯类、聚枫等。

[0008] 5．复合材料类，即以上两种或两种以上材料的复合，如金属表面喷涂陶瓷等。

[0009] 然而经研究表明，约12‑40％的经植入的牙发生种植体周围炎(peri‑implantitis)。这使得种植体周围炎在如今植入物可靠性和性能的提升中成为真正的威胁。

[0010] 炎症是免疫反应的重要组成部分，是机体针对病原体、组织损伤等刺激产生的重要病理生理反应，其目的是清除感染源、恢复组织稳态。

[0011] 可论证的是，大多数从业者遵从的用于诊断植入物周围感染和种植体周围炎(感染性植入物周围并发症的最晚期)的技术状态为探诊出血(bleeding on probing，BOP)。基础的假设是，探诊出血指示炎症和晚期组织退化，并且因此许多在植入物情形下被视为指示种植体周围炎。这个观点太过简单。已经证明了只有重复观察到不存在出血具有高阴性预测值(98％；即，牙齿和周围组织是健康的)，而存在出血不是预后的(阳性预测6％；即，对于预测牙齿和周围组织的疾病状态是无用的)。

[0012] 炎症是免疫反应的重要组成部分，是机体针对病原体、组织损伤等刺激产生的重要病理生理反应，其目的是清除感染源、恢复组织稳态。为了既能达到良好清除效果又能避免对宿主的过度损伤，炎症反应的进程受到严格的调控。炎症的消退，涉及免疫细胞与微环境的复杂相互作用。其关键环节的失调常导致炎症消退障碍，是多种慢性炎症性伤病的重要原因。因此，深入研究炎症消退的细胞、蛋白质分子机制，并探索新的调节策略，对于诸如慢性难愈创面等炎症消退的防治具有重要意义。

[0013] 如何通过种植体附带复合蛋白酶的方式降低种植体植入口腔后的炎症是解决种植体炎症的重要研究方向。

发明内容

[0014] 为了解决口腔内牙龈种植体的炎症问题，本发明提供用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法。采用如下的技术方案：

[0015] 用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液50‑60份、丝氨酸蛋白酶混合液15‑20份、牙龈蛋白酶K混合液10‑15份、果胶酶5‑8份、复合稳定剂5‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑3份。

[0016] 可选的，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53‑55份、丝氨酸蛋白酶混合液18‑20份、牙龈蛋白酶K混合液13‑15份、果胶酶7‑8份、复合稳定剂7‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑2份。

[0017] 优选的，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

[0018] 通过采用上述技术方案，基质金属蛋白酶的添加会在牙龈皮肤组织创伤愈合过程中会发挥重要作用，在种植体窝洞的制备过程中会化开牙龈处的皮肤，从组织损伤开始到组织结构和功能恢复的每一个阶段，可分为纤维蛋白凝块的形成、炎症反应的急性应答阶段、新生组织的上皮覆盖、枝芽状血管的新生、新生的肉芽组织形成、细胞周围基质的形成、胶原的重塑等病理进程。基质金属蛋白酶会对牙龈处的皮肤后期的愈合的每个阶段产生积极的促进作用；

[0019] 丝氨酸蛋白酶的添加可以通过胞外丝氨酸蛋白酶抑制剂活性和胞内非丝氨酸蛋白酶抑制剂活性两种途径发挥作用，促进牙龈处破损皮肤细胞的增殖表型，调控炎症反应，降低重度炎症的发生概率；

[0020] 牙龈蛋白酶K的添加，能够加速牙龈处已破损处皮肤细胞的死亡并凋谢，避免已破损处皮肤细胞影响健康细胞的增殖，加快牙龈处皮肤的愈合速度；

[0021] 果胶酶的添加，能够在一定程度上对愈合的皮肤组织形成保护膜，一定程度上避免还未愈合时的二次损伤；

[0022] 复合稳定剂的添加能够增加整个蛋白酶溶液的稳定性；

[0023] 0.025mol/L氯化钙溶液的添加可以加速种植体与窝洞处的骨组织的整合速度，提高种植体的稳定性。

[0024] 可选的，所述基质金属蛋白酶混合液由下物质组成：MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水；

[0025] MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水的重量份比例为：2:1:1：10。

[0026] 通过采用上述技术方案，MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白和MMP‑3蛋白分别发挥着不同的作用；

[0027] MMP‑1蛋白可以有效地促进牙龈皮肤组织细胞和蛋白的迁移，还可以有效地使创面Ⅲ型和IV型胶原比例增多，进而对组织的重塑有重要影响，对创面的愈合有明显的促进作用，影响组织的重塑，加速创面愈合；

[0028] MMP‑2蛋白在调节细胞外基质的降解过程中，对细胞移动有明显的促进作用。MMP‑2蛋白能促进细胞的移动功能，主要对血管内皮细胞、成纤维细胞和肌成纤维细胞的运动。
血管内皮细胞在移动过程中，可以有效地促进血管内皮生长因子的表达，进而对血管的生芽起重要作用，有效促进牙龈组织中血管的修复；

[0029] MMP‑3蛋白对炎症病变、血管的修复改建有重要的调节功能。MMP‑3 对血管内皮的作用是通过降解血管内皮细胞产生的硫酸软骨素释放的碱性成纤维细胞生长因子进行调节的。

[0030] 可选的，所述丝氨酸蛋白酶混合液由下物质组成：丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水，丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水的重量份比例为：3:1:10，siRNAs针对丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7进行靶向基因设计。

[0031] 可选的，所述丝氨酸蛋白酶混合液的制备方法是：

[0032] 取Spink7质粒的菌液10mL，“井”字形划线涂在含卡那霉素抗性的LB固体培养板上，37℃培养10‑15小时；

[0033] 挑取单菌落于5mL卡那霉素抗性LB液体培养基中，37℃，300转每分钟摇匀，后室温下静置10‑12小时；

[0034] 取3mL菌液，室温下超高速离心机离心1分钟，弃去上清，加入1mlsiRNAs，振荡重悬沉淀，向留有菌体沉淀的离心管中加入10mLDEPC水，反复颠倒2‑3次轻轻混匀备用。

[0035] 通过上述技术方案，丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7的表达水平比较适用于单纯急性创面的细胞增殖促进，而牙龈种植体的创面分为两部分，一是牙龈皮肤组织，一是牙槽骨的骨创伤中血管的创面，因此在采用Spink7特异性siRNAs抑制其表达，可以降低复合伤创面炎症反应，促进其愈合。

[0036] 可选的，所述牙龈蛋白酶K混合液由下物质组成：牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水，牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水的重量份比例为：5:0.2:10。

[0037] 通过上述技术方案，牙龈蛋白酶K的添加，能够加速牙龈处已破损处皮肤细胞的死亡并凋谢，十二烷基硫酸钠存在的情况下，牙龈蛋白酶K显示更高的酶活性。

[0038] 可选的，所述复合稳定剂是0.1mol/L的聚乙烯醇。

[0039] 通过上述技术方案，0.1mol/L的聚乙烯醇是很好的蛋白酶复合稳定剂。

[0040] 用于口腔牙龈组织的蛋白酶组合物制备方法，具体步骤是：

[0041] 步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置5‑10分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

[0042] 步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1‑2分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

[0043] 步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至‑20℃存储；

[0044] 步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后在种植体表面均匀喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后将种植体安装在窝洞即可。

[0045] 采用上述方法制备的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在牙龈种植体中的使用，能够大大减轻牙龈创伤和牙槽骨创伤的炎症症状，加快创面的愈合速度。

[0046] 综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：

[0047] 本发明提供用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法，采用基质金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶和牙龈蛋白酶K为主要成分的复合蛋白酶，对于牙龈种植体的创伤面有很好的伤口愈合促进作用，同时能大大减轻牙龈创伤和牙槽骨创伤的炎症症状，具有很好的应用前景。

附图说明

[0048] 图1是本发明用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶制备方法的流程示意图。

具体实施方式

[0049] 以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

[0050] 本发明实施例公开用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法。

[0051] 参照图1，用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶组合物，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液50‑60份、丝氨酸蛋白酶混合液15‑20份、牙龈蛋白酶K混合液10‑15份、果胶酶5‑8份、复合稳定剂5‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑3份。

[0052] 按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53‑55份、丝氨酸蛋白酶混合液18‑20份、牙龈蛋白酶K混合液13‑15份、果胶酶7‑8份、复合稳定剂7‑8份和0.025mol/L氯化钙溶液1‑2份。

[0053] 优选的，按重量百分比计，由下述物质组成：基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

[0054] 通过采用上述技术方案，基质金属蛋白酶的添加会在牙龈皮肤组织创伤愈合过程中会发挥重要作用，在种植体窝洞的制备过程中会化开牙龈处的皮肤，从组织损伤开始到组织结构和功能恢复的每一个阶段,可分为纤维蛋白凝块的形成、炎症反应的急性应答阶段、新生组织的上皮覆盖、枝芽状血管的新生、新生的肉芽组织形成、细胞周围基质的形成、胶原的重塑等病理进程。基质金属蛋白酶会对牙龈处的皮肤后期的愈合的每个阶段产生积极的促进作用；

[0055] 丝氨酸蛋白酶的添加可以通过胞外丝氨酸蛋白酶抑制剂活性和胞内非丝氨酸蛋白酶抑制剂活性两种途径发挥作用，促进牙龈处破损皮肤细胞的增殖表型，调控炎症反应，降低重度炎症的发生概率；

[0056] 牙龈蛋白酶K的添加，能够加速牙龈处已破损处皮肤细胞的死亡并凋谢，避免已破损处皮肤细胞影响健康细胞的增殖，加快牙龈处皮肤的愈合速度；

[0057] 果胶酶的添加，能够在一定程度上对愈合的皮肤组织形成保护膜，一定程度上避免还未愈合时的二次损伤；

[0058] 复合稳定剂的添加能够增加整个蛋白酶溶液的稳定性；

[0059] 0.025mol/L氯化钙溶液的添加可以加速种植体与窝洞处的骨组织的整合速度，提高种植体的稳定性。

[0060] 基质金属蛋白酶混合液由下物质组成：MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水；

[0061] MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水的重量份比例为：2:1:1：10。

[0062] 通过采用上述技术方案，MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白和MMP‑3蛋白分别发挥着不同的作用；

[0063] MMP‑1蛋白可以有效地促进牙龈皮肤组织细胞和蛋白的迁移，还可以有效地使创面Ⅲ型和IV型胶原比例增多，进而对组织的重塑有重要影响，对创面的愈合有明显的促进作用，影响组织的重塑，加速创面愈合；

[0064] MMP‑2蛋白在调节细胞外基质的降解过程中，对细胞移动有明显的促进作用。MMP‑2蛋白能促进细胞的移动功能，主要对血管内皮细胞、成纤维细胞和肌成纤维细胞的运动。
血管内皮细胞在移动过程中，可以有效地促进血管内皮生长因子的表达，进而对血管的生芽起重要作用，有效促进牙龈组织中血管的修复；

[0065] MMP‑3蛋白对炎症病变、血管的修复改建有重要的调节功能。MMP‑3 对血管内皮的作用是通过降解血管内皮细胞产生的硫酸软骨素释放的碱性成纤维细胞生长因子进行调节的。

[0066] 丝氨酸蛋白酶混合液由下物质组成：丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水，丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7、siRNAs和DEPC水的重量份比例为：3:1:10，siRNAs针对丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7进行靶向基因设计。

[0067] 丝氨酸蛋白酶混合液的制备方法是：

[0068] 取Spink7质粒的菌液10mL，“井”字形划线涂在含卡那霉素抗性的LB固体培养板上，37℃培养10‑15小时；

[0069] 挑取单菌落于5mL卡那霉素抗性LB液体培养基中，37℃，300转每分钟摇匀，后室温下静置10‑12小时；

[0070] 取3mL菌液，室温下超高速离心机离心1分钟，弃去上清，加入1mlsiRNAs，振荡重悬沉淀，向留有菌体沉淀的离心管中加入10mLDEPC水，反复颠倒2‑3次轻轻混匀备用。

[0071] 丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7的表达水平比较适用于单纯急性创面的细胞增殖促进，而牙龈种植体的创面分为两部分，一是牙龈皮肤组织，一是牙槽骨的骨创伤中血管的创面，因此在采用Spink7特异性siRNAs抑制其表达，可以降低复合伤创面炎症反应，促进其愈合。

[0072] 牙龈蛋白酶K混合液由下物质组成：牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水，牙龈蛋白酶K、十二烷基硫酸钠和纯水的重量份比例为：5:0.2:10。

[0073] 牙龈蛋白酶K的添加，能够加速牙龈处已破损处皮肤细胞的死亡并凋谢，十二烷基硫酸钠存在的情况下，牙龈蛋白酶K显示更高的酶活性。

[0074] 复合稳定剂是0.1mol/L的聚乙烯醇。

[0075] 0.1mol/L的聚乙烯醇是很好的蛋白酶复合稳定剂。

[0076] 用于口腔牙龈组织的蛋白酶组合物制备方法，具体步骤是：

[0077] 步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置5‑10分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

[0078] 步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1‑2分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

[0079] 步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至‑20℃存储；

[0080] 步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后在种植体表面均匀喷涂2‑3次，每次1‑3ml，后将种植体安装在窝洞即可。

[0081] 采用上述方法制备的用于口腔牙龈组织的蛋白酶组合物，在牙龈种植体中的使用，能够大大减轻牙龈创伤和牙槽骨创伤的炎症症状，加快创面的愈合速度。

[0082] 本发明用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶及制备方法具体实施例一：

[0083] 在某牙龈种植体的应用场景下，种植体采用4级纯钛金属制成，用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶的重量份组分为：基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液
2.5份。

[0084] 步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置8分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

[0085] 步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

[0086] 步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液53.5份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至‑20℃存储；

[0087] 步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂3次，每次2ml，后在种植体表面均匀喷涂3次，每次1ml，后将种植体安装在窝洞即可。

[0088] 采用上述组分和制备方法，并在种植体植入过程中使用后，对牙龈处的炎症及创伤愈合程度进行跟踪观察，结果如下：

[0089] 牙龈创伤面在三天内基本愈合，第三天时牙龈创口处颜色为深红色，轻度肿胀，第四天逐步转为鲜红色，肿胀现象消失。在第五天时种植体基本稳定，一个月后完成种植体与牙槽骨的整合，可以进行牙冠的植入。

[0090] 本发明实施例二：

[0091] 在某牙龈种植体的应用场景下，种植体采用4级纯钛金属制成，用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶的重量份组分为：基质金属蛋白酶混合液40份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

[0092] 步骤1，制备基质金属蛋白酶混合液，分别取重量份比例为：2:1:1：10的MMP‑1蛋白、MMP‑2蛋白、MMP‑3蛋白和DEPC水，于37℃下低速离心机以4000转每分的速度离心30秒；37℃下静置8分钟，于37℃下低速离心机以8000转每分的速度离心1分钟；

[0093] 步骤2，制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

[0094] 步骤3，取出基质金属蛋白酶混合液40份、丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内降至‑20℃存储；

[0095] 步骤4，在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂3次，每次2ml，后在种植体表面均匀喷涂3次，每次1ml，后将种植体安装在窝洞即可。

[0096] 采用上述组分和制备方法，并在种植体植入过程中使用后，对牙龈处的炎症及创伤愈合程度进行跟踪观察，结果如下：

[0097] 牙龈创伤面在五天内基本愈合，第一到第四天牙龈创口处颜色为深红色，轻度肿胀，第六天逐步转为鲜红色，肿胀现象消失。在第七天时种植体基本稳定，一个半月后完成种植体与牙槽骨的整合，可以进行牙冠的植入。

[0098] 本发明实施例三：

[0099] 在某牙龈种植体的应用场景下，种植体采用4级纯钛金属制成，用于口腔种植体牙龈组织的蛋白酶的重量份组分为：丝氨酸蛋白酶混合液16.7份、牙龈蛋白酶K混合液13份、果胶酶7份、复合稳定剂7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份。

[0100] 制备牙龈蛋白酶K混合液，将10mg十二烷基硫酸钠加入200mg的牙龈蛋白酶K中，放入粉末摇匀器中摇匀1分钟，后向均匀混合物中加入400mg纯水，于低速离心机中常温以4000转每分的速度离心2分钟，取出13份溶液备用；

[0101] 取出丝氨酸蛋白酶混合液16.7份和牙龈蛋白酶K混合液13份，37℃下低速离心机200转每分离心5分钟，加入果胶酶7份，继续离心1分钟，最后加入0.1mol/L的聚乙烯醇7.5份和0.025mol/L氯化钙溶液2.5份，低速离心机500转每分离心10分钟得到用于口腔牙龈组织的蛋白酶，取出于超低温冰箱中，2分钟内将至‑20℃存储；

[0102] 在制备种植体窝洞前12小时，取出低温存储的用于口腔牙龈组织的蛋白酶，在室温无菌室内放置5小时后，在3小时内均匀加温到37℃，保温2小时装入无菌喷雾器内备用，在牙槽骨上完成种植体窝洞的制备后，在窝洞处先喷涂3次，每次2ml，后在种植体表面均匀喷涂3次，每次1ml，后将种植体安装在窝洞即可。

[0103] 采用上述组分和制备方法，并在种植体植入过程中使用后，对牙龈处的炎症及创伤愈合程度进行跟踪观察，结果如下：

[0104] 牙龈创伤面在七天内基本愈合，第一到第六天牙龈创口处颜色为深红色，肿胀，第八天逐步转为鲜红色，轻度肿胀。在第十天天时种植体基本稳定，两个月后完成种植体与牙槽骨的整合，可以进行牙冠的植入。

[0105] 以上均为本发明的较佳实施例，并非以此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。