一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法

摘要

本发明涉及一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。本发明的武平种质仙草的工厂化组培快繁方法，包括如下步骤：S1：无菌外植体的获取；S2：不定芽初代诱导培养；S3：不定芽继代增殖培养；S4：生根培养；S5：炼苗移栽。本发明选用福建省武平县种源仙草，该仙草具有产量高、品质优、耐病虫害等优良特点，本发明组培快繁方法培养基简单、培养周期较短、成功率高，诱导率高，繁殖系数高，遗传稳定性高，种苗品质好、成本低，适用于武平种质仙草工厂化生产，能满足武平种质仙草的规模化种植需求，以解决优质仙草资源日渐稀少而市场上供不应求的现状。

权利要求

1.一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：摘取健壮、无病虫害的带2‑3个茎节的武平种质仙草茎段，清洗、消毒，得无菌外植体；

S2：将步骤S1所得无菌外植体剪成1.0cm‑2.5cm带一个茎节的茎段接种到初代诱导培养基中培养5‑15天，得不定芽；所述初代诱导培养基的配方为：WPM，0.2‑0.8mg/L 6‑BA，

0.05‑0.1mg/L NAA，30‑50g/L香蕉泥，25‑40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2；

S3：从步骤S2所得不定芽的基部剪取0.5cm‑1.5cm接种到继代增殖诱导培养基中，培养

15‑30天，得继代增殖培养的不定芽；

S4：从步骤S3所得继代增殖培养的不定芽的基部剪取1.0cm‑3.0cm接种到生根培养基中，培养22‑43天，得可移栽试管苗；

S5：将步骤S4所得试管苗炼苗3‑5天，移栽于育苗基质中，浇以灭菌灵和生根粉的混合溶液，用透明塑料薄膜覆盖7‑15天，再放置在带有适度遮阳的小棚中继续培养15‑25天，即得仙草种苗。

2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述清洗、消毒的方法为：自来水冲洗1min‑2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台上用75％的酒精漂洗5s‑10s，无菌水清洗1‑3次，每次1min‑2min，再用10％二氧化氯溶液消毒13min‑

18min，无菌水漂洗3‑4次，每次1min‑2min。

3.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述初代诱导培养基的配方为：WPM，0.5mg/L 6‑BA，0.1mg/L NAA，50g/L香蕉泥，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.9。

4.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述继代增殖诱导培养基的配方为：WPM，0.1‑0.5mg/L 6‑BA，0.05‑0.1mg/L NAA，0.5‑1.0g/L蛋白胨，25‑

40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2。

5.根据权利要求4所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述继代增殖诱导培养基的配方为：WPM，0.1mg/L 6‑BA，0.05mg/L NAA，1g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.9。

6.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述生根培养基的配方为：1/2MS或WPM，0.2‑0.5g/L蛋白胨，25‑40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2。

7.根据权利要求6所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中，所述生根培养基的配方为：1/2MS或WPM，0.5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，7.6g/L琼脂，pH为5.9。

8.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S5中，所述灭菌灵的质量分数为0.4％‑0.6％，所述生根粉的质量分数为0.1％‑0.3％；所述育苗基质包括泥炭土、蛭石、珍珠岩和河沙。

9.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2、S3和S4中培养的培养温度为25℃‑26℃，光照强度为1500lx‑2000lx，光照时间为10‑12小时/天。

说明书

一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法。

背景技术

[0002] 仙草(凉粉草)Mesona chinensis Benth.为唇形科凉粉草属植物，主要分布在我国广东、台湾、福建、广西等热带亚热带湿润地区，属宿根一年生草本植物，其性味涩、甘、寒，具清暑解渴、凉血之功效，可用于治疗中暑、高血压、肌肉及关节疼痛等病症，为重要的药食两用植物，是重要的东方经济和药用植物资源。仙草作为中草药和制作凉粉冻的原料在我国乃至东南亚地区已有悠久历史，有研究表明，凉粉草多糖具有显著的抗脂质过氧化作用，提高机体免疫力作用，抗损伤作用等。此外，仙草被广泛用于制作各种保健性、功能性食品的原料，如凉茶、保健茶、龟苓膏、烧仙草等，还可加工成凉粉草露、凉粉草精、凉粉草蜜，通过高分子分离对定取凉粉草胶，取代进口的卡内胶应用于食品业，具有较广泛的市场前景，已成为我国一些地方出口创汇的重要农产品。

[0003] 凉粉草作为凉茶和凉粉的原料植物，对其需求量在逐年增大。仙草属无性繁殖作物，虽能开花结杆，但易变异，种子量不多，不易出苗成活，不宜以种子进行繁殖，故仙草主要以扦插繁殖方式为主。但是，由于长期的无性繁殖导致仙草种质严重退化，且野生资源供不应求，优良种苗十分匮乏，现有品种生长期过短且易倒伏、易感染病虫害等，良种仙草供不应求。

[0004] 因此开展不同种质仙草工厂化组培快繁研究，建立仙草工厂化组培快繁体系，培育出大量优质、健壮、高产的仙草种苗，是保护优良种质、解决供求矛盾的最有效途径，具有显著的社会效益和经济效益。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的问题，提供一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法。

[0006] 本发明是通过下述技术方案进行实现的：

[0007] 本发明提供一种武平种质仙草的工厂化组培快繁方法，包括如下步骤：

[0008] S1：摘取健壮、无病虫害的带2‑3个茎节的武平种质仙草茎段，清洗、消毒，得无菌外植体；

[0009] S2：将步骤S1所得无菌外植体剪成1.0cm‑2.5cm带一个茎节的茎段接种到初代诱导培养基中培养5‑15天，得不定芽；

[0010] S3：从步骤S2所得不定芽的基部剪取0.5cm‑1.5cm接种到继代增殖诱导培养基中，培养15‑30天，得继代增殖培养的不定芽；

[0011] S4：从步骤S3所得继代增殖培养的不定芽的基部剪取1.0cm‑3.0cm接种到生根培养基中，培养22‑43天，得可移栽试管苗；

[0012] S5：将步骤S4所得试管苗炼苗3‑5天，移栽于育苗基质中，浇以灭菌灵和生根粉的混合溶液，用透明塑料薄膜覆盖7‑15天，再放置在带有适度遮阳的小棚中继续培养15‑25天，即得仙草种苗。

[0013] 本发明选用福建省武平县种源仙草，该仙草具有产量高、品质优、耐病虫害等优良特点，本发明组培快繁方法培养基简单、培养周期较短、成功率高，诱导率高，繁殖系数高，遗传稳定性高，种苗品质好、成本低，适用于武平种质仙草工厂化生产，能满足武平种质仙草的规模化种植需求，以解决优质仙草资源日渐稀少而市场上供不应求的现状。

[0014] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S1中，所述清洗、消毒的方法为：自来水冲洗1min‑2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台上用75％的酒精漂洗5s‑10s，无菌水清洗1‑3次，每次1min‑2min，再用10％二氧化氯溶液消毒13min‑18min，无菌水漂洗3‑4次，每次1min‑2min。

[0015] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S2中，所述初代诱导培养基的配方为：WPM，0.2‑0.8mg/L 6‑BA，0.05‑0.1mg/L NAA，30‑50g/L香蕉泥，25‑40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2。

[0016] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S2中，所述初代诱导培养基的配方为：WPM，0.5mg/L 6‑BA，0.1mg/LNAA，50g/L香蕉泥，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.9。

[0017] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S3中，所述继代增殖诱导培养基的配方为：WPM，0.1‑0.5mg/L6‑BA，0.05‑0.1mg/LNAA，0.5‑1.0g/L蛋白胨，25‑40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2。

[0018] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S3中，所述继代增殖诱导培养基的配方为：WPM，0.1mg/L6‑BA，0.05mg/LNAA，1g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.9。

[0019] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S4中，所述生根培养基的配方为：1/2MS或WPM，0.2‑0.5g/L蛋白胨，25‑40g/L蔗糖，6.0‑8.0g/L琼脂，pH为5.8‑6.2。

[0020] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S4中，所述生根培养基的配方为：1/2MS或WPM，0.5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，7.6g/L琼脂，pH为5.9。

[0021] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S5中，所述灭菌灵的质量分数为0.4％‑0.6％，所述生根粉的质量分数为0.1％‑0.3％；所述育苗基质包括泥炭土、蛭石、珍珠岩和河沙。

[0022] 优选地，所述灭菌灵的质量分数为0.5％，所述生根粉的质量分数为0.2％；所述育苗基质包中泥炭土、蛭石、珍珠岩和河沙的质量比为泥炭土：蛭石：珍珠岩：河沙＝1：1：1：1。

[0023] 作为本发明所述组培快繁方法的优选实施方式，所述步骤S2、S3和S4中培养的培养温度为25℃‑26℃，光照强度为1500lx‑2000lx，光照时间为10‑12小时/天。

[0024] 优选地，本发明所述初代诱导培养基、继代增殖诱导培养基和生根培养基需经高温湿热灭菌处理后备用。

[0025] 本发明中0.5％多菌灵和0.2％生根粉的浓度分数为质量分数，其余涉及的浓度分数均为体积分数。

[0026] 本发明与现有技术相比，本发明具有以下的优点和效果：

[0027] (1)本发明选择武平种质仙草茎段为外植体，丛芽诱导速度快，通过筛选和优化丛生芽初代诱导、丛生芽继代增殖、生根培养、炼苗移栽等过程的培养基配方和培养条件，经诱导、继代、生根以及移栽等步骤，可在20‑40d内实现武平种质仙草的快速育苗。本发明具有成功率高、诱导率高、繁殖系数高、遗传稳定性高、种苗品质好、成本低、种苗生长一致，繁育周期短等特点。

[0028] (2)本发明采用植物组织培养技术建立了武平种质仙草的工厂化组培快繁，具有普遍的适用性，对于促进武平种质仙草的推广种植和良种资源保护开发具有重大意义，并有助于今后的仙草优质品种改良及其学术研究。

附图说明

[0029] 图1为实施例1武平种质仙草初代诱导不定芽；

[0030] 图2为实施例1武平种质仙草继代增殖诱导不定芽；

[0031] 图3为实施例1武平种质仙草伸长的组培苗；

[0032] 图4为实施例1武平种质仙草生根的组培苗；

[0033] 图5为实施例1移栽后的武平种质仙草组培苗；

[0034] 图6为实施例1武平种质仙草工厂化育苗试管苗移植管理。

具体实施方式

[0035] 为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

[0036] 实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中，多菌灵购于江苏三山农药有限公司，批号：HG/T3290‑2016；生根粉购于郑州施卡侬农业科技有限公司，批号：NY1428‑2010。

[0037] 实施例1

[0038] 一种武平种质仙草的组培快繁方法，步骤如下：

[0039] S1、无菌外植体的获取：选取从福建省龙岩市武平县仙草种植基地中移栽至广东汉潮中药科技有限公司温室中培养的仙草植株，摘取健壮、无病虫害的带2‑3个茎节的仙草茎段，摘取时间为晴天的14时左右；将摘取的幼嫩仙草茎段，自来水缓慢冲洗2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液漂洗5s，无菌水漂洗2次，每次1min，然后用10％二氧化氯溶液消毒13min后无菌水漂洗3次，每次1min；

[0040] S2、不定芽初代诱导培养：将消毒后的仙草茎段剪成1.5cm长度带一个茎节的茎段接种到丛生芽初代诱导培养基中，培养约3天茎节处明显长出仙草不定芽，培养7天，不定芽长度大于1cm，诱导率达100％。所述的初代诱导培养基为：WPM培养基、0.5mg/L6‑BA、0.1mg/LNAA、50g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0041] S3、不定芽继代增殖培养：剪取长度大于1.0cm的初代诱导培养的不定芽，接种到继代增殖培养基中，培养30天，实现不定芽的增殖，增殖系数达10.05；所述继代增殖诱导增殖培养基为：WPM培养基、0.1mg/L 6‑BA、0.05mg/LNAA、1g/L蛋白胨、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0042] S4、生根培养：从基部剪取步骤S3继代增殖培养的长约3.0cm且生长良好的不定芽并接种到生根培养基中，培养5天左右不定芽开始生根，继续培养35天获得可移载试管苗，生根率达到100％，所述生根培养基为：1/2MS培养基、0.5g/L蛋白胨、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0043] S5、移栽：选取步骤S4中根系生长较好的组培苗，打开瓶盖，喷施水雾，炼苗3天，将组培苗取出，冲洗干净根部的培养基后，移栽于已放置有一定配比基质的育苗盘中，移栽基质配比为泥炭土：蛭石：珍珠岩：河沙＝1：1：1：1，浇以0.5％灭菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，期间用透明塑料薄膜覆盖7天，再放置在带有适度遮阳的小棚中继续培养25天，即得武平种质仙草种苗，移栽30天后成活率达100％。

[0044] 上述步骤S2‑S4的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为1500lx，光照时间为12小时/天，培养基高温湿热灭菌，116℃/20min。

[0045] 实施例2

[0046] 一种仙草的组培快繁方法，包括如下步骤：

[0047] S1、无菌外植体的获取：选取从福建省龙岩市武平县仙草种植基地中移栽至广东汉潮中药科技有限公司温室中培养的仙草植株，摘取健壮、无病虫害的带2‑3个茎节的仙草茎段，摘取时间为晴天的14时左右；将摘取的幼嫩仙草茎段，自来水缓慢冲洗2min，无菌吸水纸吸干表面水分，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液漂洗5s，无菌水漂洗2次，每次1min，然后用10％二氧化氯溶液消毒14min后无菌水漂洗3次，每次1min；

[0048] S2、不定芽初代诱导培养：将消毒后的仙草茎段剪成1.5cm长度带一个茎节的茎段接种到丛生芽初代诱导培养基中，培养约3天茎节处明显长出仙草不定芽，培养7天，不定芽长度大于1cm，诱导率达100％；所述的初代诱导培养基为：WPM培养基、0.8mg/L6‑BA、0.1mg/LNAA、50g/L香蕉泥、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0049] S3、不定芽继代增殖培养：剪取长度大于1.0cm的初代诱导培养的不定芽，接种到继代增殖培养基中，培养40天，实现不定芽的增殖，增殖系数达11.20；所述不定芽诱导增殖培养基为：WPM培养基、0.2mg/L 6‑BA、0.05mg/LNAA、1g/L蛋白胨、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0050] S4、生根培养：从基部剪取步骤S3继代增殖培养的长约3.0cm且生长良好的不定芽并接种到生根培养基中，培养3天左右不定芽开始生根，继续培养35天获得可移载试管苗，生根率达到100％；所述生根培养基为：1/2MS培养基、0.5g/L蛋白胨、30g/L蔗糖和7.0g/L琼脂，pH为5.9；

[0051] S5、移栽：选取步骤S4中根系生长较好的组培苗，打开瓶盖，喷施水雾，炼苗5天，将组培苗取出，冲洗干净根部的培养基后，移栽于已放置有一定配比基质的育苗盘中，移栽基质配比为泥炭土：蛭石：珍珠岩：河沙＝1：1：1：1，浇以0.5％灭菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，期间用透明塑料薄膜覆盖7天，再放置在带有适度遮阳的小棚中继续培养25天，即得仙草种苗，移栽30天后成活率达99.65％。

[0052] 上述步骤S2‑S4培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为12小时/天。培养基高温湿热灭菌，116℃/20min。

[0053] 对比例1

[0054] 一种仙草的组培快繁方法，选取盆栽的从广东省广州市增城区移栽的已生长3个月的仙草植株的叶片为外植体，其余与实施例1相同，结果显示，初代诱导培养出芽率为53.33％，生长出高于1cm不定芽所需时间为35‑50天，玻璃化率为57.14％。猜测原因是由于叶片脱分化、再分化需要时间较长，且过程中易发生玻璃化现象，外植体的褐化率高，导致诱导率和萌发率低，不能快速组培繁育出仙草幼苗。

[0055] 对比例2

[0056] 一种仙草的组培快繁方法，未在初代诱导培养基中添加NAA，其余与实施例1相同，结果显示，初代诱导培养出芽率仅为62.50％，玻璃化率为55.56％，生长出高于1cm不定芽所需时间为15天。

[0057] 对比例3

[0058] 一种仙草的组培快繁方法，使用MS作为生根诱导的基本培养基，其余与实施例1相同，结果显示，出根所需时间为13‑15天，植株较矮小，主根数较少，根偏细短，茎细，叶片小，叶片较黄，生根率77.50％，移栽30天后成活率，仅为56％。

[0059] 以下为本发明仙草的组培快繁方法的试验探究。

[0060] 试验例1生长调节剂组合的筛选

[0061] 1、不同的植物生长调节剂组合对不定芽初代诱导的影响

[0062] 以MS为基本培养基，培养基中添加30g/L蔗糖，7.0g/L琼脂，pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。本发明培养基均需在温度116℃下高温湿热灭菌20min冷却后备用(下同)。各植物生长调节剂组合初代诱导培养基各接种30瓶，每瓶3块外植体，重复3次，培养20天后记录不定芽生长情况和诱导率，不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽初代诱导的影响见表1。

[0063] 表1不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽初代诱导的影响

[0064]

[0065] 注：同一例不同字母表示差异显著，P＜0.05。下同。

[0066] 由表1可知，植物生长调节剂组合为0.2‑0.8mg/L 6‑BA+0.05‑0.1mg/L NAA时，高于1cm不定芽数较多、不定芽较高，玻璃化率较低、出芽率大于87％以上，不定芽叶片较宽大、颜色翠绿，不定芽健壮，生长较好。

[0067] 2、不同的植物生长调节剂组合对不定芽诱导增殖的影响

[0068] 以MS为基本培养基、培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。各植物生长调节剂组合不定芽继代增殖诱导培养基各接种30瓶，每瓶2个不定芽，重复3次。培养40天后记录不定芽生长情况，统计每瓶高于1cm的不定芽数、最高新芽平均长度、玻璃化率、增殖系数。不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽继代增殖的影响见表2。

[0069] 表2不同类型及浓度的植物生长调节剂组合对不定芽继代增殖的影响

[0070]

[0071] 由表2可知，植物生长调节剂为0.1‑0.5mg/L6‑BA+0.05‑0.1mg/LNAA时，不定芽玻璃化率低，出芽率高，高于1cm不定芽数较多，芽平均长度较长，不定芽叶片较宽，呈绿色或浅绿色，茎偏粗，丛芽较多，生长较好。

[0072] 试验例2基本培养基的筛选

[0073] 1、不同基本培养基对初代诱导的影响

[0074] 分别以MS、1/2MS或WPM为基本培养基，植物生长调节剂为0.5mg/L6‑BA+0.1mg/LNAA，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。不同基本培养基各接种30瓶，每瓶接种2个外植体茎段，重复3次。培养20天后记录外植体长芽情况，统计每瓶外植体茎段的出芽天数，高于1cm不定芽数、不定芽长度、玻璃化率、出芽率。不同基本培养基对初代诱导的影响见表3。

[0075] 表3不同基本培养基对初代诱导的影响

[0076]

[0077] 由表3可知，基本培养基为WPM时，出芽较快、高于1cm不定芽数较多、不定芽较高，不定芽叶片较宽大、颜色翠绿，茎健壮，生长较好。

[0078] 2、不同基本培养基对继代诱导的影响

[0079] 分别以MS、1/2MS或WPM为基本培养基，植物生长调节剂为0.1mg/L6‑BA+0.05mg/LNAA，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。不同基本培养基各接种30瓶，每瓶接种2个不定芽，重复3次。培养40天后记录不定芽生长情况，统计每瓶不定芽高于1cm不定芽数、最高新芽长度、玻璃化率、增殖系数。不同基本培养基对继代诱导的影响见表4。

[0080] 表4不同基本培养基对继代诱导的影响

[0081]

[0082] 由表4可知，基本培养基为WPM时，高于1cm的不定芽较多、不定芽较高，增殖系数较大，不定芽健壮，生长较好。

[0083] 3、不同基本培养基对生根的影响

[0084] 分别以MS、1/2MS或WPM为基本培养基，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。各组合生根培养基各接种40瓶，每瓶移2个不定芽，重复3次。培养35天后记录不定芽生根生长情况，统计每瓶不定芽的开始生根天数，株高，主根数，平均主根长度及生根率。不同基本培养基对不定芽生根的影响见表5。

[0085] 表5不同基本培养基对生根的影响

[0086]

[0087] 由表5可知，基本培养基为1/2MS或WPM时，仙草不定芽根系生长较快，主根较粗长，叶片宽大，叶色深绿，茎粗健，植株生长较好，且移栽后更易成活，而基本培养基为MS的不定芽虽然主根数较多，植株偏高，但根系生长较慢，主根粗短，侧根少，叶片较小，叶色偏黄，茎细长，且移栽成活率较低。综合各项指标，武平种质仙草生根最佳的基本培养基为1/2MS或WPM。

[0088] 试验例3有机添加剂的筛选

[0089] 1、不同有机添加剂对初代诱导的影响

[0090] 以MS为基本培养基，植物生长调节剂为0.5mg/L6‑BA+0.1mg/LNAA，分别添加香蕉泥、土豆泥、蛋白胨、椰子汁有机添加剂，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。不同培养基各接种30瓶，每瓶接种2个外植体茎段，重复3次。培养20天后记录外植体长芽情况，统计每瓶外植体茎段的出芽天数，高于1cm不定芽数、不定芽长度、玻璃化率、出芽率。不同有机添加剂培养基对初代诱导的影响见表6。

[0091] 表6不同有机添加剂对初代诱导的影响

[0092]

[0093] 由表6可知，添加50g/L香蕉泥时，不定芽出芽较快，高于1cm的不定芽较多、不定芽较高，无玻璃化苗，出芽率100％，不定芽健壮，生长较好。

[0094] 2、不同有机添加剂对继代诱导的影响

[0095] 以MS为基本培养基，植物生长调节剂为0.1mg/L6‑BA+0.05mg/LNAA，分别添加香蕉泥、土豆泥、蛋白胨、椰子汁有机添加剂，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。不同培养基各接种30瓶，每瓶接种2个不定芽，重复3次。培养40天后记录不定芽生长情况，统计每瓶不定芽的出芽天数，高于1cm不定芽数、不定芽长度、玻璃化率、出芽率。不同有机添加剂培养基对继代诱导的影响见表7。

[0096] 表7不同有机添加剂对继代诱导的影响

[0097]

[0098] 由表7可知，添加1g/L蛋白胨时，高于1cm的不定芽较多、不定芽较高，无玻璃化苗，增殖系数较高，不定芽健壮，生长较好。

[0099] 3、不同有机添加剂对生根的影响

[0100] 以1/2MS为基本培养基，不添加植物生长调节剂，分别添加香蕉泥、土豆泥、蛋白胨、椰子汁有机添加剂，培养基中添加30g/L蔗糖、7.0g/L琼脂、pH为5.9，培养温度为25℃，连续光照12h/d，光照强度1500‑2000Lx。各组合生根培养基各接种40瓶，每瓶移2个不定芽，重复3次。培养35天后记录不定芽生根生长情况，统计每瓶不定芽的开始生根天数，株高，主根数，平均主根长度及生根率。不同基本培养基对不定芽生根的影响见表8。

[0101] 表8不同有机添加剂对生根的影响

[0102]

[0103] 由表8可知，添加0.5g/L蛋白胨时，不定芽根系生长较快，植株较高、主根数较多、主根较粗长，叶片宽大，叶色深绿，茎粗健，植株健壮。

[0104] 试验例4炼苗基质的筛选

[0105] 以泥炭土、蛭石、珍珠岩和河沙为炼苗移栽基质，选取经生根诱导后生长一致、长势良好的植株，首先在室温下敞口3d，期间用透明塑料薄膜覆盖，然后流水冲洗根系表面培养基，移栽至上述混合基质中，浇以0.5％灭菌灵以及0.2％生根粉混合溶液，每个处理100株，置于带有适度遮阳的小棚中炼苗，定期浇水，30d后统计成活率，不同基质混合比例对仙草组培苗移栽成活率的影响见表9。

[0106] 表9不同炼苗基质对仙草组培苗成活率的影响

[0107]

[0108] 由表9可知，当泥炭土、蛭石、珍珠岩和河沙的质量比为泥炭土：蛭石：珍珠岩：河沙＝1：1：1：1时，仙草组培苗成活率最高，达100％。

[0109] 最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。