一种盐酸多西环素溶液及其制备方法、配制方法

摘要

本申请属于新材料领域，公开了一种盐酸多西环素溶液，包括有机溶剂和溶解到有机溶剂中的络合物、络合剂；所述络合物为盐酸多西环素与金属离子络合的络合物，所述络合剂在有机溶剂中不与金属离子发生络合反应且遇水后和金属离子发生络合反应，使得盐酸多西环素溶液在无水环境下具有较高的稳定性，在实际应用时，便于长期储存、长途运输等，同时，其受温度因素的影响不大，在低温情况下仍具有良好的稳定性，并且，盐酸多西环素溶液中的盐酸多西环素含量更高，更加便于终端配制溶液。

权利要求

1.一种盐酸多西环素溶液，其特征在于，由有机溶剂和溶解到有机溶剂中的络合物、络合剂组成；所述络合物为盐酸多西环素与金属离子络合的络合物，所述络合剂在有机溶剂中不与金属离子发生络合反应且遇水后和金属离子发生络合反应，所述络合物中多西环素和络合剂的质量比为1：0.1‑0.4；

所述络合剂用于当盐酸多西环素溶液遇水后，与盐酸多西环素竞争金属离子，使络合物解离恢复成盐酸多西环素，所述有机溶剂中的以多西环素计的络合物的浓度为10 ‑

30wt%；所述金属离子为镁离子、钙离子、锌离子、铝离子、铜离子中的一种或多种；所述络合剂为醋酸钠、乙二胺四乙酸二钠、抗坏血酸钠、叔丁醇钠、柠檬酸钠中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的盐酸多西环素溶液，其特征在于，所述有机溶剂选自1,2－丙二醇、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N－甲基吡咯烷酮、α－吡咯烷酮、甘油缩甲醛、聚乙二醇200、聚乙二醇400中的一种或多种。

3.一种如权利要求1或2所述的盐酸多西环素溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素与金属离子溶液混合，得到络合物；

步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将步骤1制得的络合物、络合剂溶解至有机溶剂内，得到盐酸多西环素溶液。

4.根据权利要求3所述的盐酸多西环素溶液的制备方法，其特征在于，步骤1的具体操作为：在0℃水浴环境下，将盐酸多西环素溶于甲醇中，得到反应液A；

按金属离子与盐酸多西环素的摩尔比为1‑1.5：1配制金属离子溶液，得到反应液B；

向反应液A中以滴加或分批加入的方式加入反应液B，整个反应在0℃水浴环境下进行，边加入边搅拌，析出沉淀后，过滤、洗涤、干燥沉淀，即得络合物；

步骤2的具体操作为：加热有机溶剂至50‑65℃，加入络合物，并搅拌至络合物溶解，再加入络合剂，搅拌至完全溶解后，即得盐酸多西环素溶液。

5.一种盐酸多西环素的配制方法，其特征在于，将如权利要求1或2所述的盐酸多西环素溶液与水以任意比互溶后供畜禽饮用。

6.根据权利要求5所述的盐酸多西环素的配制方法，其特征在于，将盐酸多西环素溶液与水以1：10‑2000的质量比互溶后饮用。

说明书

一种盐酸多西环素溶液及其制备方法、配制方法

技术领域

[0001] 本发明涉及新材料领域，尤其涉及一种盐酸多西环素溶液及其制备方法、配制方法。

背景技术

[0002] 兽医临床上常用盐酸多西环素制剂包括注射液、片剂、可溶性粉、颗粒剂、子宫注入剂等。注射液与子宫注入剂不适用于群体给药，且反复多次给药易造成畜禽应激；片剂易受胃肠道pH及内容物影响；而当前应用最广泛的盐酸多西环素可溶性粉也存在一定的缺点，其给药方式主要有两种，一种是将可溶性粉直接加到给药桶中，溶解后连接水线直接饮用，但只适合小规模使用；另一种是将可溶性粉配成高浓度药液，再配合加药泵以一定比例稀释使用，而在配成高浓度药液时，目前盐酸多西环素原料在水中溶解度为5%，可溶性粉虽在溶解上有所改进，但在水中的溶解度同样受到限制，且北方地区在冬天气温较低，溶解度也相应降低，在结合加药泵使用时，无法达到溶液剂与水以任意比例稀释的效果；同时，可溶性粉水溶性辅料多为葡萄糖，吸湿性较强，易结块，在超高浓度溶解时易产生沉淀、溶解不均匀等现象，后经过加药泵的放大作用，浓度误差会更大，从而导致终端给药浓度不足，起不到治疗作用，长期使用还易产生耐药性，造成用药障碍，并且易滋生细菌，堵塞乳头、水线和加药泵而造成进一步损失。而盐酸多西环素溶液以饮用水稀释后口服的方式给药，畜禽依从性好，减少给药过程中动物产生应激反应，且结合加药泵稀释使用能够准确把握给药剂量，吸收快，为当前集约化养殖提供了一种准确、便利和稳定的给药选择。

[0003] 中国专利201510237198.X公开了一种盐酸多西环素注射液及其制备工艺，每100 ml该注射液含有：氯化镁络合剂4.2～12.4 g、盐酸多西环素5～15 g、α－吡咯烷酮20～30 ml、二甲基甲酰胺10～20 ml、甘油缩甲醛10～20 ml、抗氧化剂0.1～0.2 g、助溶剂5～10 g、余量为注射用水。

[0004] 该方案使用的络合剂氯化镁主要是金属离子镁起到络合的作用，利用多西环素与金属离子络合的特性使其形成络合物以提高盐酸多西环素的溶解度和稳定性。

[0005] 中国专利201210300975.7公开了一种兽用盐酸多西环素注射液及其制备方法，该方法将适量抗氧化剂、稳定剂溶于注射用水中，然后把其水溶液加到有机溶剂中，再加入盐酸多西环素和络合剂，调节pH，保温，接着加入金属离子螯合剂和部分抗氧化剂，然后过滤充氮气、灭菌，得到所述的兽用盐酸多西环素注射液。

[0006] 观察该方案说明书中的第38段可以发现，在盐酸多西环素络合时，为保证盐酸多西环素的络合效果，往往会添加过量的络合剂，但与此同时，过量的镁离子以及其他试剂、溶媒或设备等带入的各种微量金属离子均会加速药物的氧化变色，因此，使用螯合剂遮蔽过量的镁离子与其他微量的金属离子。

[0007] 上述两种方案均以盐酸多西环素作为注射液的活性成分，一方面，上述两种方案中的络合剂主要用于络合药物中多余的镁离子或其他试剂、溶媒或设备等带入的各种微量金属离子，以防止镁离子与其他微量的金属离子加速药物的氧化；

[0008] 另一方面，注射液相较于口服液的达峰时间更短，作用更加迅速，但与此同时，注射液相对口服液不利于多次群体给药，在大型禽畜养殖场，多采用口服的形式，虽然达峰时间会有一定程度的延长，但以水线对禽畜进行大范围的给药方式更加便利，同时也能降低畜禽的应激，依从性好，一定程度上可控制成本。

[0009] 中国专利202111242374 .0公开了一种盐酸多西环素溶液剂及其制备方法，所述溶液剂中包含盐酸多西环素、无水乙醇以及1,2‑丙二醇，该方案通过无水乙醇以及1,2‑丙二醇构成的有机体系隔绝了水的存在，避免了盐酸多西环素在水中的解离、降解等反应的进行，亦阻碍了盐酸多西环素溶液剂中异构体的生成，同时，该方案在说明书第16段阐述了在每100 ml中含有0.1‑1 g的络合剂，该络合剂用于与多西环素原料药中少量金属离子结合，增加盐酸多西环素溶液的稳定性。

[0010] 本方案需要解决的问题：如何使的盐酸多西环素以高浓度的溶液形式稳定存在且遇水能够稳定、快速释放。

发明内容

[0011] 本发明的目的是提供一种盐酸多西环素溶液，该盐酸多西环素溶液中的盐酸多西环素与金属离子络合形成络合物，该络合物溶于有机溶剂内，同时有机溶剂含有在有机溶剂中不与金属离子络合的络合剂；而当盐酸多西环素溶液遇水后，络合剂与金属离子络合，并释放络合物中的盐酸多西环素，这使得盐酸多西环素溶液在无水环境下具有较高的稳定性，当使用时，只需用水稀释盐酸多西环素溶液即可。

[0012] 为实现上述目的，本申请公开了一种盐酸多西环素溶液，包括有机溶剂和溶解到有机溶剂中的络合物、络合剂；所述络合物为盐酸多西环素与金属离子络合的络合物，所述络合剂在有机溶剂中不与金属离子发生络合反应且遇水后和金属离子发生络合反应。

[0013] 优选地，所述有机溶剂中的以多西环素计的络合物的浓度为10‑30wt%。

[0014] 更为优选地，所述有机溶剂中的以多西环素计的络合物的浓度为10wt%、15wt%、20wt%、25wt%或30wt%。

[0015] 需要说明的是，本发明的以多西环素计的络合物的浓度的上限可以更高，但是在实验中发现，当达到50%以上时，基于络合剂的可溶解性的限制，不能无限溶解络合剂，导致最终多西环素无法完全释放，因此本发明选择10‑30wt%的范围作为本发明的保护范围。

[0016] 优选地，所述金属离子为镁离子、钙离子、锌离子、铝离子、铜离子中的一种或多种。

[0017] 更为优选地，所述金属离子为锌离子、铝离子、钙离子中的一种或多种。

[0018] 优选地，所述络合剂为醋酸钠、乙二胺四乙酸二钠、抗坏血酸钠、叔丁醇钠、柠檬酸钠中的至少一种。

[0019] 更为优选地，所述络合剂为柠檬酸钠、醋酸钠、乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。

[0020] 优选地，所述络合物中多西环素和络合剂的质量比为1：0.1‑0.4；

[0021] 更为优选地，所述络合物中多西环素和络合剂的质量比为1：0.1111‑0.361；

[0022] 更为优选地，所述络合剂与络合物中多西环素的质量比包括但不限于0.111：1、0.161 ：1、0.211 ：1、0.261 ：1、0.311：1、0.361：1。

[0023] 优选地，所述有机溶剂选自1,2－丙二醇、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N－甲基吡咯烷酮、α－吡咯烷酮、甘油缩甲醛、聚乙二醇200、聚乙二醇400中的一种或多种。

[0024] 更为优选地，所述有机溶剂选自甘油缩甲醛、甲醇、1,2‑丙二醇、二甲基亚砜、聚乙二醇200、N,N‑二甲基甲酰胺、α‑吡咯烷酮中的至少一种。

[0025] 此外，还公开了一种上述的盐酸多西环素溶液的制备方法，包括以下步骤：

[0026] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素与金属离子溶液混合，得到络合物；

[0027] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将步骤1制得的络合物、络合剂溶解至有机溶剂内，得到盐酸多西环素溶液。

[0028] 优选地，步骤1的具体操作为：0℃水浴环境下，将盐酸多西环素溶于甲醇中，得到反应液A；实操过程中，建议配制成为盐酸多西环素饱和溶液；

[0029] 按金属离子与盐酸多西环素的摩尔比为1‑1.5:1配制金属离子水溶液，得到反应液B；由于本发明只需要获取黄色沉淀，因此对于金属离子水溶液的浓度并不做限制，各种浓度都可以形成沉淀；这是本领域常规技术；

[0030] 向反应液A中以滴加或分批加入的方式加入反应液B，整个反应在0℃水浴环境下进行，边加入边搅拌，析出沉淀后，过滤、洗涤、干燥沉淀即得络合物；

[0031] 步骤2的具体操作为：加热有机溶剂至50‑65℃，加入络合物，并搅拌至络合物溶解，再加入络合剂，搅拌至完全溶解后，即得盐酸多西环素溶液。

[0032] 此外，还公开了一种盐酸多西环素的配制方法，将上述的盐酸多西环素溶液与水以任意比互溶后饮用。

[0033] 优选地，将盐酸多西环素溶液与水以1：10‑2000的质量比互溶后饮用；

[0034] 更为优选地，将盐酸多西环素溶液与水以1:1000、1:2000、1:10、1:20、1:50的质量比互溶后饮用。

[0035] 本申请的有益效果是：该盐酸多西环素溶液中的盐酸多西环素与金属离子络合形成络合物，该络合物溶于有机溶剂内，同时有机溶剂含有在有机溶剂中不与金属离子络合的络合剂；而当盐酸多西环素溶液遇水后，络合剂与盐酸多西环素竞争金属离子，使络合物解离恢复成盐酸多西环素，这使得盐酸多西环素溶液在无水环境下具有较高的稳定性，在实际应用时，便于长期储存、长途运输等，同时，其受温度因素的影响不大，在低温情况下仍具有良好的稳定性，并且，盐酸多西环素溶液中的盐酸多西环素含量更高，更加便于终端配制溶液。

附图说明

[0036] 图1为多西环素光谱图；

[0037] 图2为多西环素镁络合物光谱图；

[0038] 图3为多西环素锌络合物光谱图；

[0039] 图4为多西环素3D光谱图；

[0040] 图5为多西环素镁3D光谱图。

具体实施方式

[0041] 下面将结合本发明的实施例，对本发明进行清楚、完整地描述，在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0042] 实施例1

[0043] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素溶于甲醇中，0℃ NaCl溶液水浴，溶解后得到反应液A；

[0044] 按Mg2+与多西环素按摩尔比1.5:1称取MgCl2配制成MgCl2水溶液，得到反应液B；

[0045] 向反应液A中滴加反应液B，整个反应在0℃ NaCl溶液水浴环境下进行，滴加的同时进行搅拌，待沉淀析出，进行过滤，并用冰甲醇对沉淀洗涤，洗涤后干燥即得黄色络合物；

[0046] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入3 g醋酸钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到10%浓度的盐酸多西环素溶液。

[0047] 说明：《兽用国家标准汇编‑兽用地方标准上升国家标准（第一册）》182页，盐酸多西环素可溶性粉，用法与用量：以多西环素计；

[0048] 即本发明的所有实施例和对比例中关于络合物的重量表述既不代表为络合物的重量，也不代表为盐酸多西环素的重量，而是指络合物中多西环素的重量。

[0049] 实施例2

[0050] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0051] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0052] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为20g），加入的同时搅拌，溶解后加入6 g醋酸钠，0.22 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到20%浓度的盐酸多西环素溶液。

[0053] 实施例3

[0054] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0055] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0056] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为30g），加入的同时搅拌，溶解后加入9 g醋酸钠，0.33 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到30%浓度的盐酸多西环素溶液。

[0057] 实施例4

[0058] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0059] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素溶于甲醇中，0℃ NaCl溶液水浴，溶解后得到反应液A；

[0060] 将Al3+与多西环素按摩尔比3:4的AlCl3配制成AlCl3水溶液，得到反应液B；

[0061] 向反应液A中滴加反应液B，整个反应在0℃ NaCl溶液水浴环境下进行，滴加的同时进行搅拌，待沉淀析出，进行过滤，并用冰甲醇对沉淀洗涤，洗涤后干燥即得黄褐色络合物；

[0062] 步骤2：与实施例1中步骤2相同。

[0063] 实施例5

[0064] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0065] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素溶于甲醇中，0℃ NaCl溶液水浴，溶解后得到反应液A；

[0066] 将Cu2+与多西环素按摩尔比1.5:1的CuCl2配制成CuCl2溶液，得到反应液B；

[0067] 向反应液A中滴加反应液B，整个反应在0℃ NaCl溶液水浴环境下进行，滴加的同时进行搅拌，待沉淀析出，进行过滤，并用冰甲醇对沉淀洗涤，洗涤后干燥即得墨绿色络合物；

[0068] 步骤2：与实施例1中步骤2相同。

[0069] 实施例6

[0070] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0071] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素溶于甲醇中，0℃ NaCl溶液水浴，溶解后得到反应液A；

[0072] 将Ca2+与多西环素按摩尔比1.5:1的CaCl2配制成CaCl2溶液，得到反应液B；

[0073] 向反应液A中滴加反应液B，整个反应在0℃ NaCl溶液水浴环境下进行，滴加的同时进行搅拌，待沉淀析出，进行过滤，并用冰甲醇对沉淀洗涤，洗涤后干燥即得黄褐色络合物；

[0074] 步骤2：与实施例1中步骤2相同。

[0075] 实施例7

[0076] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0077] 步骤1：络合物的制备，将盐酸多西环素溶于甲醇中，0℃ NaCl溶液水浴，溶解后得到反应液A；

[0078] 将Zn2+与多西环素按摩尔比3：4的ZnCl2配制成ZnCl2溶液，得到反应液B；

[0079] 向反应液A中滴加反应液B，整个反应在0℃ NaCl溶液水浴环境下进行，滴加的同时进行搅拌，待沉淀析出，进行过滤，并用冰甲醇对沉淀洗涤，洗涤后干燥即得黄色络合物；

[0080] 步骤2：与实施例1中步骤2相同。

[0081] 实施例8

[0082] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0083] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0084] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入3.5 g柠檬酸钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0085] 实施例9

[0086] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0087] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0088] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入质量比为2：1的醋酸钠和柠檬酸钠共3.3 g，0.11 g乙二胺四乙酸二钠搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0089] 实施例10

[0090] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0091] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0092] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入质量比为2：1的抗坏血酸钠和柠檬酸钠共3.3 g，0.11 g乙二胺四乙酸二钠搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0093] 实施例11

[0094] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0095] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0096] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入质量比为1：1的醋酸钠和抗坏血酸钠共3 g，0.11 g乙二胺四乙酸二钠搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0097] 实施例12

[0098] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0099] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0100] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入1 g叔丁醇钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解、定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0101] 实施例13

[0102] 与实施例1基本相同，区别在于，络合剂与络合物的质量比为0.4：1。

[0103] 实施例14

[0104] 与实施例1基本相同，区别在于，络合剂与络合物的质量比为0.1：1。

[0105] 实施例15

[0106] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0107] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将甘油缩甲醛与1,2‑丙二醇按1:2（v/v）[0108] 混匀得到反应液C，取适量反应液C，加热，温度在60～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入3 g醋酸钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解，用反应液C定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0109] 实施例16

[0110] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0111] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将二甲基亚砜与聚乙二醇200按2:1（v/v）混匀得到反应液D，取适量反应液D，加热，温度在60～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入3 g醋酸钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解，用反应液D定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0112] 实施例17

[0113] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0114] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将N,N‑二甲基甲酰胺与α‑吡咯烷酮1:1（v/v）混匀得到反应液E，取适量反应液E，加热，温度在55～60℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解后加入3 g醋酸钠，0.11 g乙二胺四乙酸二钠，搅拌、溶解，用反应液E定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液；

[0115] 其中，实施例17反应温度较实施例15、实施例16略低，因为N,N‑二甲基甲酰胺在体系中高温加热时间过长，容易产生初配原液颜色较深的情况，而温度过低则溶解时间较长，经试验验证选用55～60℃控温。

[0116] 对比例1

[0117] 与实施例1基本相同，区别在于：

[0118] 步骤1：与实施例1中步骤1相同；

[0119] 步骤2：盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素与镁离子形成的络合物（以多西环素计：络合物中多西环素为10g），加入的同时搅拌，溶解完全后，定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0120] 将该盐酸多西环素溶液与水稀释后生成大量淡黄色絮状沉淀。

[0121] 对比例2

[0122] 盐酸多西环素溶液的制备，将适量甘油缩甲醛加热，温度在50～65℃，加入盐酸多西环素（以多西环素计：多西环素为10 g），加入的同时搅拌，溶解完全后，定容至100 ml，冷却、过滤后，得到盐酸多西环素溶液。

[0123] 该溶液在避光室温密闭环境中储存48 h后出现颜色加深情况，一周后呈不透光酱油色，底部有少量结晶析出。

[0124] 通过对比例1可见，当盐酸多西环素溶液中不添加络合剂时，盐酸多西环素与水稀释后生成大量淡黄色絮状沉淀。说明盐酸多西环素金属离子络合物水溶性差，盐酸多西环素将无法完全游离。

[0125] 通过对比例2可见，当直接将盐酸多西环素溶解至有机溶剂并制备盐酸多西环素溶液时，该盐酸多西环素溶液在避光室温密闭环境中储存48 h后出现颜色加深情况，一周后呈不透光酱油色，底部有少量结晶析出。说明药液的性状及稳定性尚未达到预期要求。

[0126] 稀释后稳定性测试：

[0127] 根据兽医临床应用实际情况，本方案所制备的盐酸多西环素溶液与水直接稀释后进入水线供畜禽使用，按30%原液与水稀释为1:1000～2000；规模养殖场常配合加药器使用，通常先进行原液与水浓配成均一稳定的溶液后再由加药器按一定的稀释比例（1:50～500），浓配过程一般稀释比例为1:10～50。另外，水线给药分为集中饮水及全天饮水，顾名思义，集中饮水方式中药物与水混合后集中在较短时间内饮完，一般3小时左右；全天饮水则饮水时间一般在8小时左右，因此，本方案考察了所制备的盐酸多西环素溶液与水不同比例稀释后4小时、8小时、12小时的稳定性，结果如下表所示：

[0128] 表1 ：盐酸多西环素溶液的稀释倍数为10倍时的稳定度测试结果

[0129] 组别 0h 稀释4h后 稀释8h后 稀释12h后 差值实施例1 100.50% 100.20% 98.40% 97.80% 2.70%
实施例2 99.80% 99.80% 99.20% 97.20% 2.60%
实施例3 100.40% 100.50% 99.50% 97.70% 2.70%
实施例4 101.00% 100.90% 100.00% 98.50% 2.50%
实施例5 100.70% 100.30% 99.40% 97.90% 2.80%
实施例6 100.20% 99.90% 98.70% 97.60% 2.60%
实施例7 100.40% 99.90% 99.20% 98.10% 2.30%
实施例8 100.90% 100.30% 99.60% 98.60% 2.30%
实施例9 100.60% 100.10% 99.30% 98.10% 2.50%
实施例10 100.20% 99.60% 98.90% 97.80% 2.40%
实施例11 101.00% 100.5% 99.60% 98.50% 2.50%
实施例12 100.00% 98.30% 97.50% 96.80% 3.20%
实施例13 100.80% 99.90% 99.00% 98.30% 2.50%
实施例14 100.50% 99.80% 98.30% 97.80% 2.70%
实施例15 100.30% 100.00% 99.50% 98.60% 1.70%
实施例16 101.10% 100.30% 98.90% 97.30% 3.80%
实施例17 100.40% 98.00% 97.40% 96.20% 4.20%

[0130] 表2 ：盐酸多西环素的稀释倍数为50倍时的稳定度测试结果

[0131] 组别 0h 稀释4h后 稀释8h后 稀释12h后 差值实施例1 101.00% 100.70% 99.50% 98.40% 2.60%
实施例2 100.80% 100.20% 99.40% 98.20% 2.60%
实施例3 100.50% 99.90% 99.10% 98.00% 2.50%
实施例4 101.60% 101.00% 100.30% 99.20% 2.40%
实施例5 101.10% 100.70% 99.40% 98.30% 2.80%
实施例6 101.90% 101.20% 100.00% 99.40% 2.50%
实施例7 100.20% 99.70% 99.20% 97.90% 2.30%
实施例8 100.90% 100.10% 99.50% 98.00% 2.90%
实施例9 100.00% 99.30% 98.80% 97.50% 2.50%
实施例10 100.10% 99.60% 99.10% 97.70% 2.40%
实施例11 101.10% 100.70% 99.60% 98.50% 2.60%
实施例12 100.60% 99.70% 98.30% 97.50% 3.10%
实施例13 101.10% 100.00% 98.50% 98.50% 2.60%
实施例14 100.10% 99.70% 98.60% 97.50% 2.60%
实施例15 100.60% 100.10% 99.60% 98.10% 2.50%
实施例16 101.80% 100.70% 99.40% 98.30% 3.50%
实施例17 101.90% 100.50% 98.70% 97.60% 4.30%

[0132] 表3 ：盐酸多西环素的稀释倍数为2000倍时的稳定度测试结果

[0133] 组别 0h 稀释4h后 稀释8h后 稀释12h后 差值实施例1 100.70% 99.90% 98.40% 97.70% 3.00%
实施例2 101.20% 100.80% 100.50% 98.30% 2.90%
实施例3 100.10% 99.50% 99.00% 97.10% 3.00%
实施例4 100.90% 100.30% 99.60% 98.30% 2.60%
实施例5 101.90% 100.70% 99.50% 98.00% 3.90%
实施例6 101.20% 100.50% 99.90% 98.50% 2.70%
实施例7 100.40% 100.00% 99.70% 98.50% 1.90%
实施例8 100.40% 99.90% 99.00% 97.90% 2.50%
实施例9 101.90% 101.50% 100.80% 99.30% 2.60%
实施例10 101.00% 99.90% 99.00% 98.50% 2.50%
实施例11 100.50% 99.80% 98.60% 97.90% 2.60%
实施例12 101.80% 101.40% 100.90% 100.30% 1.50%
实施例13 100.40% 99.90% 99.20% 97.90% 2.80%
实施例14 100.10% 99.70% 98.60% 97.30% 2.50%
实施例15 100.80% 100.30% 99.80% 99.10% 1.70%
实施例16 101.40% 99.90% 98.60% 97.80% 3.60%
实施例17 100.90% 99.70% 98.50% 96.90% 4.00%

[0134] 表1至表3所示的差值是指0h的值减去12h的值。

[0135] 结果分析：

[0136] 通过表2和表3的分析（由于表1的浓度过高，数据代表性不强），可以得到如下结论：

[0137] 1.参考实施例1‑3，当盐酸多西环素溶液稀释50倍、2000倍时，稀释12小时后稳定性与原液的浓度之间的并无明显的关联性，实施例1‑3之间的差距不大。

[0138] 2.参考实施例1、实施例4‑7，当盐酸多西环素溶液稀释50倍，实施例7表现最佳，当稀释2000倍时，稀释12h后，实施例7表现最佳，说明锌离子进行络合不管是在高浓度还是低浓度的情况下都是最佳的选择。

[0139] 3.参考实施例1、实施例8‑12，其分别列出的络合剂为：醋酸钠：乙二胺四乙酸二钠=3：0.11、柠檬酸钠：乙二胺四乙酸二钠=3.5:0.11、醋酸钠：柠檬酸钠：乙二胺四乙酸二钠=2.2:1.1:0.11、抗坏血酸钠：柠檬酸钠：乙二胺四乙酸二钠=2.2:1.1:0.11、醋酸钠：抗坏血酸钠：乙二胺四乙酸二钠=1.5:1.5:0.11、叔丁醇钠：乙二胺四乙酸二钠=1:0.11；当盐酸多西环素溶液稀释50倍时，实施例10表现最佳，当稀释2000倍时，稀释12h后，实施例12表现最佳，可见，当稀释倍数较低情况下选择抗坏血酸、柠檬酸钠和乙二胺四乙酸二钠的复配是最优选择，当稀释倍数较高情况下选择叔丁醇钠、乙二胺四乙酸二钠最佳。

[0140] 4.参考实施例1、13和14，可见，在络合剂用量过量的情况下，对于稳定性的影响较为轻微。

[0141] 5.参考实施例1、15‑17可见，在高浓度的情况下，实施例1、15的稳定性最佳，但是区别没有达到显著的程度，在低浓度的情况下，实施例15最佳，也就是说，在低浓度情况下，采用甘油缩甲醛与1,2‑丙二醇作为有机相是最为可取的。

[0142] 在实际生产中，可以根据以上的实验结果的指导，灵活调配金属离子、络合剂和有机溶剂，以适应不同的稀释浓度。

[0143] 性能测试：

[0144] 1.盐酸多西环素及其金属离子络合物紫外光谱测定：将盐酸多西环素及其生成的金属离子络合物溶于DMSO中，制成25 μg/ml的溶液，将其放入紫外分光光度计中，设定波长为200‑400 nm区间，测定盐酸多西环素及其金属离子络合物的紫外吸收光谱，生成光谱图（见图1‑3）。

[0145] 表4：多西环素及其金属离子络合物的紫外吸收波长

[0146]

[0147] 由表4和图1‑5可知，多西环素在345 nm 和268 nm处有两个吸收峰，与金属离子结合后，除多西环素锌络合物外其他络合物的紫外吸收峰发生了不同程度的红移至348‑350 nm和267‑268 nm，分别红移了3‑5 nm和0‑1 nm；而多西环素锌络合物的两个吸收峰均发生了红移，分别为376 nm和275 nm，分别红移了31 nm和7 nm。红移结果的产生可以说明多西环素和金属离子之间发生了反应；同时，3D光谱图更加直观的证明了以上结论。

[0148] 2.反复冻融试验：

[0149] 考虑到本方案中涉及发明在未来在运输、贮存或使用过程中温度的变化范围在冰点以下，因此对实施例样品进行冻融试验，具体方法为：

[0150] 冻融试验包含三个循环，每次循环是先于‑20～‑10℃放置24 h，再于40℃放置24 h，取样检测。

[0151] 盐酸多西环素溶液含量测定方法：采用HPLC法进行含量测定。

[0152] 色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH值适用范围应大于9）；以醋酸盐缓冲液[0.25 mol/L醋酸铵溶液，0.1 mol/L乙二胺四醋酸二钠，三乙胺（100∶10∶1），用冰醋酸或氨水调节pH值至8.8]‑乙腈（85∶15）为流动相；柱温为35℃；检测波长为280 nm，结果如表5所示：

[0153] 表5：冻融试验结果表

[0154]

[0155] 冻融结果显示：所有实施例颜色均发生明显变化，且尚未有低温析出的现象，含量检测结果显示，虽经过三次冻融试验，含量下降在0.4‑1.0%，证明实施例的冻融稳定性较好。

[0156] 3.高温试验：

[0157] 将实施例中样品置于60℃稳定性试验箱中，分别于0、5、10天取样，检测药物的性状，含量，结果如表6所示：

[0158] 表6：高温试验稳定性测试结果

[0159]

[0160] 盐酸多西环素与其他四环素类药物一样，见光、遇热易发生水解、氧化及其他化学变化，结合多西环素的性质和上述高温试验结果发现，实施例在60℃高温放置10天过程中均产生了不同程度的颜色变化，从含量结果看，含量均未发生显著变化（与初始值相差5%），但也有一定程度的降解。

[0161] 4.加速试验：

[0162] 将实施例样品置于40℃±2℃、相对湿度75%±5%的稳定性试验箱中，分别于0、1、2、3、6月取样，检测药物的性状，含量，结果如表7所示：

[0163] 表7：加速试验稳定性测试结果

[0164]

[0165] 盐酸多西环素与其他四环素类药物一样，见光、遇热易发生水解、氧化及其他化学变化，结合多西环素的性质和上述高温试验结果发现，实施例在加速试验中均产生了不同程度的颜色变化，从含量结果看，含量均有一定程度的降解，但也未发生显著变化（与初始值相差5%），说明本研究所制备的盐酸多西环素溶液具有较好的稳定性。