一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用

摘要

本发明属于中医药领域，具体涉及一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用。本发明所述组合物对心脏手术中暂时性结扎血管导致的心肌缺血再灌注损伤具有良好的预防和恢复作用，能够有效预防心脏手术中暂时性结扎血管导致的心肌缺血再灌注损伤引起的乳酸脱氢酶含量下降、心脏形态改变、心肌肥大的发生、心肌细胞结构紊乱、心肌细胞凋亡和心肌梗死面积增大；能够有效促进心肌缺血再灌注后的心脏乳酸脱氢酶含量回升、心脏形态恢复、心肌肥大的恢复、心肌纤维化的恢复和代谢紊乱的改善。

权利要求

1.臻通集在制备改善或预防手术致心脏损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述心脏损伤为心脏手术中暂时性结扎血管导致的心肌缺血再灌注损伤。

说明书

一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用

技术领域

[0001] 本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用。

背景技术

[0002] 心脏搭桥手术，又称为冠状动脉旁路移植术，指当一条或多条冠状动脉由于动脉粥样硬化发生狭窄、阻塞导致供血不足时，在冠状动脉狭窄的近端和远端之间建立一条通道，使血液绕过狭窄部位而到达远端的手术。多取患者本身的血管，如大隐静脉、乳内动脉、胃网膜右动脉、桡动脉、腹壁下动脉等，将狭窄冠状动脉的远端和主动脉连接起来，让血液绕过狭窄的部分，到达缺血的部位。心脏搭桥手术是公认的改善冠心病最有效的方法，可以改善心肌血液供应，达到缓解心绞痛症状、改善心功能、提高生活质量、延长寿命的目的。在做这个手术的时候，需要切断心脏对全身的供血，然后利用心肺机将血液进行体外循环。选择进行心脏搭桥手术的患者也越来越多。

[0003] 但心脏搭桥手术需要将血管暂时性结扎，在这个过程中，会导致心脏短时间内缺血，对心脏造成一定的损伤，目前针对因心脏搭桥手术导致的缺血再灌注损伤，还没有较为深入的研究，因此，亟待寻找一种方法，改善/预防心脏搭桥手术导致的缺血再灌注损伤，让患者能够避免因手术导致的进一步心脏损伤。

发明内容

[0004] 为解决上述问题，本发明提供了一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用，所述组合物或药物能够有效预防心脏损伤；此外，可对已造成的心脏损伤产生明显改善作用。

[0005] 本发明提供了一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用，所述组合物包括以下原料：三七、黄芪、丹参、银杏叶、葛根、余甘子和玉竹。

[0006] 优选的，所述组合物的原料中：三七直接粉碎得到三七细粉，黄芪、丹参、银杏叶、葛根、余甘子和玉竹均为有效成分提取物细粉。

[0007] 优选的，所述有效成分提取物细粉的提取溶剂包括水和乙醇水溶液。

[0008] 优选的，所述心脏损伤包括心脏手术中暂时性结扎血管导致的心肌缺血再灌注损伤。

[0009] 优选的，所述预防心脏损伤包括以下至少一种：(1)预防乳酸脱氢酶含量下降；

[0010] (2)预防心脏形态改变；

[0011] (3)预防心肌肥大的发生；

[0012] (4)预防心肌细胞结构紊乱、心肌细胞凋亡；

[0013] (5)预防心肌梗死面积增大。

[0014] 优选的，所述改善心脏损伤包括以下至少一种：(1)乳酸脱氢酶含量升高；

[0015] (2)心脏形态的恢复；

[0016] (3)心肌肥大的恢复；

[0017] (4)心肌纤维化的恢复；

[0018] (5)缺血再灌注后导致的代谢紊乱的改善。

[0019] 有益效果：本发明所述的组合物，各组份合理配比，经试验证明，使得经心脏手术暂时性结扎血管后仍然能够维持心肌正常形态、功能，由此证明其能够有效预防由心脏手术中暂时性结扎血管导致的缺血再灌注损伤，使患者避免因心脏手术暂时性结扎血管导致的心脏损伤。此外，本发明所述的化合物能够改善心脏手术中暂时性结扎血管导致的心脏损伤及代谢紊乱。因此，本发明提供的中药组合物具有辅助预防和辅助改善手术致心脏损伤的作用。

附图说明

[0020] 图1为实施例1臻通集组小黑鼠给予臻通集组合物时间轴示意图；

[0021] 图2为实施例1各组小黑鼠心脏系数示意图；

[0022] 图3为实施例1各组小黑鼠心脏梗死面积示意图；

[0023] 图4为实施例1各组小黑鼠LDH含量示意图；

[0024] 图5为实施例1各组小黑鼠HE染色示意图；

[0025] 图6为实施例2臻通集组小黑鼠给予臻通集组合物时间轴示意图；

[0026] 图7为实施例2各组小黑鼠LDH含量示意图；

[0027] 图8为实施例2各组小黑鼠的心脏超声评价示意图；

[0028] 图9为实施例2各组小黑鼠心脏重量与胫骨长度比值(心肌肥厚指标)示意图；

[0029] 图10为实施例2各组小黑鼠HE染色及MASSON染色示意图；

[0030] 图11为实施例2各组小黑鼠心肌纤维化相关指标Col1a1、Col3a1、Acta1表达水平示意图；

[0031] 图12为实施例2各组小黑鼠心脏组织非靶向代谢组学中的差异代谢表征示意图；

[0032] 图13为实施例2各组小黑鼠血浆代谢产物热图。

具体实施方式

[0033] 本发明提供了一种组合物在制备改善或预防手术致心脏损伤产品的应用，所述组合物包括以下原料：三七、黄芪、丹参、银杏叶、葛根、余甘子和玉竹。

[0034] 本发明对所述中药原料的来源和药用部位没有特殊限定，采用本领域常用来源和药用部位即可。

[0035] 本发明所述组合物的原料中：三七直接粉碎得到三七细粉，黄芪、丹参、银杏叶、葛根、余甘子和玉竹均为有效成分提取物细粉，且所述有效成分提取物细粉的提取溶剂包括水和乙醇水溶液。

[0036] 本发明所述组合物的制备方法优选先将黄芪、丹参、银杏叶、葛根余甘子和玉竹加提取溶剂提取、浓缩、干燥得到提取物细粉，将三七粉碎成细粉。

[0037] 本发明得到上述提取物细粉和三七细粉后，优选将所述提取物细粉和三七细粉混合，得到本发明所述组合物。

[0038] 本发明所述组合物的剂型优选包括片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、颗粒剂、膏剂或口服液。

[0039] 本发明所述组合物及其制备方法在中国专利201410123261.2(申请日：2014.03.28公开日：2014.07.30)中已公开，并在本发明中称为臻通集。

[0040] 本发明所述臻通集来源为常规市售产品，购自石家庄御芝林医药有限公司，生产批号为2200700802，规格为24g(0.4g*60粒)，为胶囊剂，生产厂家为河北御芝林药业有限公司。

[0041] 本发明所述心脏损伤包括心脏手术中暂时性结扎血管导致的缺血再灌注损伤。

[0042] 在本发明实施例中，通过术前给予臻通集组合物测定缺血再灌注损伤情况实验，证实了本发明所述组合物具有预防乳酸脱氢酶含量下降，预防心脏形态改变，预防心肌肥大的发生，预防心肌细胞结构紊乱、心肌细胞凋亡和预防心肌梗死面积增大的作用。

[0043] 在本发明实施例中，通过术后给予臻通集组合物测定缺血再灌注损伤情况实验，证实了本发明所述组合物具有升高乳酸脱氢酶含量，恢复心脏形态，缓解心肌肥大，缓解心肌纤维化和改善缺血再灌注后导致的代谢紊乱的作用。

[0044] 为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的组合物在制备辅助改善或预防心脏损伤的药物中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

[0045] 实施例1

[0046] 术前给予臻通集组合物：

[0047] 选取40只C57小黑鼠随机分为等数量的4组：空白组、模型组和臻通集低剂量组和臻通集高剂量组。第1天至第3天，臻通集低剂量组每日喂食臻通集胶囊，每日一次，每次喂食量以小黑鼠体重180mg/kg为准；臻通集高剂量组每日喂食臻通集胶囊，每日一次，每次喂食量以小黑鼠体重720mg/kg为准；空白组与模型组灌胃给予生理盐水，灌胃量以小黑鼠体重0.1ml/10g为准，连续喂食3天。第4天，模型组和臻通集组进行左前降支结扎缺血再灌注，结扎方法采用冠状动脉结扎；而空白组仅模拟胸腔切开，不做结扎，实验流程如图1所示(其中ZTJ表示臻通集，Ischemia表示局部缺血，Reperfusion表示再灌注，Heart Tissue Harvest表示心脏组织取材)。

[0048] 冠状动脉结扎方法：小黑鼠腹腔注射乌拉坦1.0g/kg麻醉，背位固定，人工呼吸(通气量20ml/kg，频率48～52次/min)，记录心电图。开胸，暴露心脏，在左心耳与主动脉圆锥之间的冠状动脉左前降支下方2mm处进针，50号丝线穿过心肌表层在肺动脉圆锥旁出针，拉紧后结扎。立即将心脏送回原位并关闭胸腔，以ECGⅡ导联ST段明显抬高或T波高耸作为结扎成功标志，缺血30min后解开活结，进行再灌注。再灌注23.5h后进行心脏组织采集，进行如下测定：

[0049] (1)心重

[0050] 将小鼠处死，处死后收集各组小黑鼠的心脏组织称量后于4℃冰箱冷藏暂存用于下一步检测。心脏系数(心脏重量/体质量，mg/g)结果如图2所示。

[0051] 图2中，sham组为空白组(假手术组)，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，720组为臻通集高剂量组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

[0052] 由图2可知，相比于空白组，模型组的心脏系数明显升高，意味着出现心肌肥大症状。而相比于模型组，臻通集低剂量组和臻通集两组的心脏系数均有所下降。由此可知，低剂量和高剂量组臻通集能够预防缺血再灌注引起的心肌肥大。

[0053] (2)TTC染色

[0054] 取(1)中保存的心脏组织每组各5只，从主动脉连续灌注2％伊文思蓝3～4ml，整齐地放在冰冷的铁板上，‑20℃保存过夜；

[0055] 取出冷冻的心脏，在冷冻状态下用预冷的刀片沿左心室长轴将心脏均匀地连续切片，使每片厚2～3mm；

[0056] 将切取的心脏厚片置于2％TTC溶液中，37℃孵育15～30分钟；

[0057] 取出切片，PBS漂洗片刻，整理平整后于4％甲醛液中固定；

[0058] 拍照比较结果。染色后的心肌片正常呈3种不同的颜色，蓝色为正常心肌组织，红色为缺血心肌组织，灰白色为坏死心肌组织。通过拍照后统计不同小黑鼠相同位置切片上不同染色的面积比例，比较心肌梗死程度，结果如图3所示。

[0059] 图3中，sham组为空白组(假手术组)，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，720组为臻通集高剂量组。

[0060] 由图3可知，相比于空白组，模型组出现了明显的心肌梗死。与模型组相比，臻通集低剂量组和臻通集高剂量组两组的心肌梗死面积显著减少，与空白组更为相近。由此可知，臻通集能够预防缺血再灌注引起的心肌梗死面积增大。

[0061] (3)乳酸脱氢酶含量

[0062] 采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)ELISA试剂盒。每组随机取七只处死后小黑鼠的血浆，各取10μL，严格按照试剂盒测定LDH含量，结果如图4所示。

[0063] 图4中，sham组为空白组(假手术组)，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，720组为臻通集高剂量组。

[0064] 本领域技术人员知晓，心脏损伤会导致LDH的含量升高，由图4结果可知，相比于空白组，模型组的LDH显著升高，说明其心脏受损情况严重。相比于模型组，臻通集高剂量组的LDH显著下降。由此可知，臻通集高剂量组能够预防短期缺血再灌注引起的心脏损伤。

[0065] (4)HE染色

[0066] HE染色：

[0067] S1：取出(1)中保存的小鼠心脏组织每组各5只，各取心脏组织的1/2，剩余1/2于‑80℃冰箱冷冻保存，在磷酸盐缓冲液(PBS)中清洗，轻柔挤压心脏，将心脏中残余的血排除，直至心脏中挤压出的液体完全清澈；

[0068] S2：将心脏从PBS中取出，彻底吸干PBS，将心脏从中间位置以水平面切开，放入10％多聚甲醛中固定；

[0069] S3：取出小鼠心脏，将心脏在中间位置以水平面切开，流水冲4h去除多聚甲醛后，按照75％、85％、90％、95％、100％酒精、二甲苯的顺序依次脱水1h，之后放入新鲜融化的蜡液中，于60℃的烤箱中浸蜡3h，取出并包埋蜡块；

[0070] S4：将切片机调至4μm/次，切取完整的心脏组织后，将切片转移至载玻片上，于60℃烤片1h后，将载玻片放置拨片收藏盒于常温保存备用，每份组织留存3张片子；

[0071] S5：染色过程：常规脱蜡至水后，苏木素染核10min，清水震洗3次，盐酸酒精分化10s，清水震洗3次，伊红染色30s，清水震洗1次，按照封片流程进行封片。

[0072] S6：置于显微镜下观察小鼠心肌组织病理变化情况，并拍照记录。

[0073] 结果如图5所示。

[0074] 图5中，sham组为空白组(假手术组)，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，720组为臻通集高剂量组。

[0075] 由图5结果可知，HE染色结果中，相比于空白组，模型组心肌细胞排列更为紊乱，且在心肌细胞之间的间距明显变大，提示缺血再灌注显著影响了心肌的正常结构，势必也会影响心脏的正常功能，而于术前72小时先给予臻通集组合物的两个组别，心肌细胞排列明显变得整齐致密，尤其是臻通集高剂量组，心肌细胞结构与正常水平更为接近。

[0076] 综上可知，本实施例在血管暂时性结扎的前72小时开始给予臻通集组合物，并持续给予臻通集组合物3天后，再进行血管暂时性结扎，血管暂时性结扎后23.5h后再进行测定，结果心肌情况非常接近未进行血管暂时性结扎的组别，说明该组合物能够有效预防心脏搭桥手术中血管暂时性结扎导致的心脏损伤。

[0077] 实施例2

[0078] 术后给予臻通集组合物：

[0079] 选取50只C57小黑鼠随机分为等数量的5组：空白组、模型组和臻通集低剂量臻组、臻通集中剂量组和臻通集高剂量组。模型组和臻通集组进行左前降支结扎缺血再灌注，空白组仅模拟胸腔切开，不做结扎，计为第1天。第1天术后至第28天，臻通集低剂量组每日灌胃一次臻通集胶囊，喂食量以小黑鼠体重180mg/kg为准；臻通集中剂量组每日喂食臻通集胶囊，每日一次，每次喂食量以小黑鼠体重360mg/kg为准；臻通集高剂量组每日喂食臻通集胶囊，每日一次，每次喂食量以小黑鼠体重720mg/kg为准；空白组与模型组灌胃给予生理盐水，灌胃量以小黑鼠体重小黑鼠体重0.1ml/10g为准，连续喂食28天。给予臻通集组合物流程如图6所示。

[0080] 冠状动脉结扎方法：小黑鼠腹腔注射乌拉坦1.0g/kg麻醉，背位固定，人工呼吸(通气量20ml/kg，频率48～52次/min)，记录心电图。开胸，暴露心脏，在左心耳与主动脉圆锥之间的冠状动脉左前降支下方2mm处进针，50号丝线穿过心肌表层在肺动脉圆锥旁出针，拉紧后结扎。立即将心脏送回原位并关闭胸腔，以ECGⅡ导联ST段明显抬高或T波高耸作为结扎成功标志缺血30min后解开活结，进行再灌注。28天后，进行如下测定。

[0081] (1)LDH含量

[0082] 采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)ELISA试剂盒。每组随机取7～8只小黑鼠的血浆，取10μl，严格按照试剂盒测定LDH含量，结果如图7所示。

[0083] 图7中，sham组为空白组，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，360组为中剂量臻通集组，720组为臻通集高剂量组，除臻通集低剂量组外，其他组别差异均有统计学意义(P<0.05)。

[0084] 由图7结果可知，相比于空白组，模型组的LDH显著升高，说明其心脏受损情况严重。相比于模型组，臻通集低剂量组和臻通集高剂量组的LDH显著下降。由此可知，臻通集高剂量组能够改善缺血再灌注引起的心脏损伤。

[0085] (2)超声心动检测

[0086] 各组小鼠各10只，分别予异氟烷持续吸入麻醉后，使其仰卧在加热板上，保持其体温37℃，脱毛膏予褪去剑突以上胸前体毛，采用Visual Sonics vevo2100小动物超声仪B型超声探测到左心室长轴切面，同时切换M超声记录获得左心室舒张末期内径和室壁厚度、LA等参数指标：切换彩色多普勒在四腔心切面测量二尖瓣口血流速度E(舒张早期最大峰值速度)、A(舒张晚期最大峰值速度)。最后切换组织多普勒测量二尖瓣口E”峰、A”峰。对超声测量者予隐瞒小鼠分组信息，并为同一人操作及测量，结果如图8所示。

[0087] 其中，FS为左心室短轴收缩力、EF为射血分数、LVAW为左心室前壁厚度、LVPW为左心室后壁厚度。

[0088] 图8中，sham组为空白组，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，360组为中剂量臻通集组，720组为臻通集高剂量组，除臻通集低剂量组外，其他组别差异均有统计学意义(P<0.05)。

[0089] 由图8可知，相比于空白组，模型组的FS、EF、LVAW和LVPW指标均显著降低，说明其心肌受损情况严重。相比于模型组，臻通集中剂量组和臻通集高剂量组的FS、EF、LVAW和LVPW指标均显著增加。由此可知，臻通集中剂量组和臻通集高剂量组能够改善缺血再灌注造成的心脏损伤。

[0090] (3)心脏质量/胫骨长度(HW/TL)

[0091] 取各组小黑鼠各10只，麻醉后迅速摘取完整的心脏，于预冷的PBS缓冲液漂洗血污，并排出心腔内的残血。心脏置于冰盘上剔除多余的组织，用干净的滤纸吸干表面水分，电子分析天平分别称取心脏质量(Heartweight,HW)并记录。称重后的心脏置于冷PBS中，周边放置标尺，拍照记录心脏的形态后于4℃冷藏备用。分离小鼠右下肢胫骨，用游标卡尺测量记录胫骨长度(Tibial length,TL)。计算HW/TL，结果如图9所示。

[0092] 图9中，sham组为空白组，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，360组为中剂量臻通集组，720组为臻通集高剂量组，所有组别差异均有统计学意义(P<0.05)。

[0093] 由图9的结果可知，相比于空白组，模型组的HW/TL显著增大。相比于模型组，臻通集低剂量组、臻通集中剂量组和臻通集高剂量组的HW/TL显著降低。由此可知，臻通集能够改善缺血再灌注造成的心肌肥大。

[0094] (4)HE染色和MASSION染色

[0095] S1：取出(3)中保存的小鼠心脏，每只取1/2的心脏组织，在磷酸盐缓冲液(PBS)中清洗，轻柔挤压心脏，将心脏中残余的血排除，直至心脏中挤压出的液体完全清澈。另外1/2心脏组织于‑80℃冰箱冷冻保存；

[0096] S2：将心脏从PBS中取出，彻底吸干PBS，将心脏从中间位置以水平面切开，放入10％多聚甲醛中固定；

[0097] S3：取出小鼠心脏，将心脏在中间位置以水平面切开，流水冲4h去除多聚甲醛后，按照75％、85％、90％、95％、100％酒精、二甲苯的顺序依次脱水1h，之后放入新鲜融化的蜡液中，于60℃的烤箱中浸蜡3h，取出并包埋蜡块；

[0098] S4：将切片机调至4μm/次，切取完整的心脏组织后，将切片转移至载玻片上，于60℃烤片1h后，将载玻片放置拨片收藏盒于常温保存备用，每份组织留存3张片子；

[0099] S5：染色过程：常规脱蜡至水后，苏木素染核10min，清水震洗3次，盐酸酒精分化10s，清水震洗3次，伊红染色30s，清水震洗1次，按照封片流程进行封片；

[0100] S6：置于显微镜下观察小鼠心肌组织病理变化情况，并拍照记录。

[0101] MASSION染色

[0102] S1：HE染色S4中制备的各组石蜡切片，梯度脱蜡至水：首先将石蜡切片置于二甲苯中洗脱两次，每次20min，其次，用无水乙醇洗脱两次，每次5min，然后依次加入95％乙醇、85％乙醇各各5min，最后用三蒸水冲洗2min；

[0103] S2：重铬酸钾浸染:将切片放入盛有重铬酸钾的玻璃缸里浸泡过夜，然后用三蒸水冲洗；

[0104] S3：铁木素浸染:将切片放入盛有铁木素的玻璃缸里浸染约3min，然后用三蒸水冲洗，接着再放入盐酸酒精里进行分化数秒，最后用三蒸水冲洗；

[0105] S4：丽春红染色:将切片放入盛有丽春红的玻璃缸里浸染约7min，然后用三蒸水冲洗；

[0106] S5：磷酸染色:将切片放入盛有磷酸的玻璃缸里浸染约2min，浸染后不水洗。S6：苯胺蓝染色:将切片放入盛有苯胺蓝的玻璃缸里浸染约4min；

[0107] S7：冰醋酸分化:将切片放入盛有冰醋酸的玻璃缸里分化，然后放入无水乙醇的玻璃缸里脱水；

[0108] S8:梯度脱水封：先将切片依次放入85％乙醇、95％乙醇脱水各5min,其次将其放入无水乙醇中脱水两次，每次各5min，然后将切片放入二甲苯中透明1～3min，用中性树脂封片，最后在显微镜下观察，获得图片信息，进行分析。

[0109] 结果如图10所示。

[0110] 图10中，sham组为空白组，0组为模型组，180组为臻通集低剂量组，360组为中剂量臻通集组，720组为臻通集高剂量组。

[0111] 由图10结果可知，HE染色结果，相比于空白组，模型组心肌细胞排列更为紊乱，且在心肌细胞之间的间距明显变大，提示缺血再灌注显著影响了心肌的正常结构，势必也会影响心脏的正常功能，经给予臻通集后，心肌细胞排列明显变得整齐致密，尤其是臻通集高剂量组，心肌细胞结构与正常水平更为接近。由此可知，臻通集能够改善缺血再灌注造成的心肌结构紊乱。Masson染色结果，对小鼠心脏切片进行Masson染色将胶原纤维染成蓝色，可以直观地观察纤维化的程度。空白组心肌结构完整、心肌纤维排列整齐。相比于空白组，模型组出现大量胶原纤维蓝染，胶原容积分数大幅度提高，预示着发生了严重的心肌纤维化。与模型组相比，臻通集中剂量组和臻通集高剂量组的胶原纤维蓝染明显减少，尤其了臻通集高剂量组，仅有少部分胶原纤维蓝染。由此可知，臻通集能够改善缺血再灌注引起的心肌纤维化。

[0112] (5)心肌纤维化相关指标的表达水平

[0113] 取(4)中保留的剩余心脏组织，各组小鼠各取5只。心脏组织总RNA提取以及RT‑PCR检测按照试剂盒说明书提取心脏组织中总RNA并合成cDNA，进行qRT‑PCR分析。引物序列见‑ΔΔCT表1，将β‑actin作为Col1a1、Col3a1、Acta1的内参，2 法计算mRNA的相对表达量。

[0114] 结果如图11所示，引物序列如表1所示：

[0115] 表1引物序列

[0116]

[0117] 图11中，sham组为空白组，I/R组为模型组，I/R+360mg/kg组为臻通集中剂量组，I/R+720mg/kg组为臻通集高剂量组。

[0118] 由图11结果可知，所有组别差异均有统计学意义(P<0.05)。根据心肌纤维化检测结果可知，相比于空白组，模型组的Col1a1、Col3a1、Acta1表达水平显著升高，预示着心肌纤维化。相比于模型组，臻通集中剂量组和臻通集高剂量组的Col1a1、Col3a1、Acta1表达水平显著降低。由此可知，臻通集能够改善缺血再灌注引起的心肌纤维化。

[0119] (6)代谢

[0120] 取各组小鼠各10只，全部处死后采集血浆，优化血浆样品前处理的方法，建立UPLC‑Q‑TOF‑MS/MS的色谱条件，将采集到的UPLC‑Q‑TOF‑MS/MS数据导入Profinder，对谱图进行峰的发现、对齐、滤过及归一化等操作，导出CEF文件及CSV文件。利用安捷伦Mass Profiler Professional(MPP)软件对导出的CEF文件数据进行批处理，比较对照组、模型组、臻通集胶囊组之间的差异，运用MetaboAnalyst 5.0(https://www.metaboanalyst.ca/)平台对筛选得到的潜在生物标志物进行富集，获取臻通集可能代谢通路。结果如图12所示(左侧为正离子下不同组的PCA得分图，右侧为负离子下不同组的PCA得分图)。

[0121] 图12中Sham为假手术组(即空白对照组)，IR为模型组，ZTJ‑low为臻通集低剂量组。

[0122] 图12中每个点代表包含样品信息的代谢物数据集。生理或病理状态相似的样品通常由类型和含量相似的代谢物组成，因此它们在PCA图上往往彼此接近。在图中正离子和负离子模式下，QC样品均表现出良好的聚集性，表明生物样品的色谱分离和质谱采集在整个分析过程中相对稳定，数据的准确性和可靠性符合要求。各组样品分布呈现出组间分散和组内聚集的趋势。Sham组和IR组之间的离散趋势表明，缺血再灌注的小鼠出现明显的代谢紊乱。臻通集组与IR组之间均存在离散趋势，表明给予臻通集后缺血再灌注的内源性代谢物水平发生显著改变。此外，臻通集组接近Sham组，从而证实臻通集能够改善缺血再灌注引发的代谢紊乱。

[0123] 此外本发明还提供了各组小鼠血浆代谢产物热图，如图13所示。

[0124] 该热图表示每只动物的代谢产物相对含量，图中小方格颜色越红，表征相应动物血浆中代谢产物含量越高，颜色越蓝，表示含量越低，其中横轴Sham+数字表示空白对照组相应动物，I/R表示模型组相应小鼠，I/R+180mg/kg+数字表示臻通集低剂量组相应小鼠，纵轴为差异代谢产物。从各组代谢分析可知，模型组与空白组的代谢出现了明显的差异，比如模型组XanthineLysoPI(20:4(5Z,8z,11Z,14Z)/0:0)、indolelactic acid、N‑Lauroylglycine、2,6‑Dihydroxybenzoic acid、Cysteine‑S‑sulfate、L‑Threonine.neg、L‑Threonine.pos、L‑Methionine等代谢产物与空白组明显升高，LysoPE(16:0/0:0)、3‑Oxododecanoic acid、9‑Decenoylcarnitine、Cervonyl  carnitine、9‑Hexadecenoylcarnitine、trans‑2‑Tetradecenoylcarnitine、3‑Hydroxy‑11Z‑octadecenoylcarnitine、2‑Hydroxyhexadecanoylcarnitine、Hexanoylcarnitine、Tetradecanoylcarnitine等代谢产物明显下降，臻通集低剂量组显著改善了上述因缺血再灌注导致的代谢产物异常，说明臻通集能够全面改善缺血再灌注造成的机体代谢紊乱。

[0125] 综上可知，本实施例在血管暂时性结扎当天开始给予臻通集组合物，持续给予臻通集组合物28天后，血管暂时性结扎引发的心脏损伤基本已经消除，恢复至术前水平；说明该组合物能够有效改善心脏搭桥手术中血管暂时性结扎导致的心脏损伤。

[0126] 尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。