本发明涉及一种德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，属于医药检测技术领域。所述德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，采用高效液相色谱法色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，检测波长250‑350nm，柱温30‑40℃，以磷酸缓冲溶液体系为流动相A，以水‑甲醇‑乙腈体系为流动相B，梯度洗脱。本发明的检测方法能有效检测德拉沙星葡甲胺原料药中有关物质的含量，方法简便快捷、专属性强、灵敏度高、分离度好、检测杂质种类多，提高了药品安全性。
1.一种德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，检测波长250‑350nm，柱温30‑40℃，以磷酸缓冲溶液体系为流动相A，以水‑甲醇‑乙腈体系为流动相B，所述流动相B中乙腈、甲醇、水的体积比为810:90:100，梯度洗脱；
第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
第二梯度洗脱时间20±3min，流动相A占比55±5%，流动相B占比45±5%；
第三梯度洗脱时间45±3min，流动相A占比25±5%，流动相B占比75±5%；
第四梯度洗脱时间55±3min，流动相A占比25±5%，流动相B占比75±5%；
第五梯度洗脱时间65±3min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
第六梯度洗脱时间75±3min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
所述德拉沙星葡甲胺原料药有关物质包括德拉沙星葡甲胺和有关物质，所述有关物质为杂质IM4、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J中的一种或多种；所述杂质A为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑7‑氟‑6‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
杂质B为1‑（6‑氨基‑3‑氟‑5‑（3‑羟基氮杂丁‑1‑基）吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂丁‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
杂质C为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（6‑（3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧喹啉‑1（4H）‑基）‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）氨基）‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
杂质D为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（（1‑（1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑
3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑7‑基）氮杂丁‑3‑基）氧基）‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
杂质E为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（3‑（（1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑
3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑7‑基）氨基）‑2‑羟丙氧基）氮杂环丁‑1‑基）‑8‑氯‑
杂质F为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑3‑羟基‑7‑（3‑羟基氮杂环糊精‑
杂质H为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮芥‑1‑基）喹啉‑4（1H）‑酮；
杂质J为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮芥‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
杂质IM4为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸乙酯；
取德拉沙星葡甲胺对照品，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml含1µg的溶液，作为对照品溶液；
取德拉沙星葡甲胺供试品，精密称定，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含1mg的溶液，作为供试品溶液；
分别取德拉沙星葡甲胺对照品、杂质IM4、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J对照品各适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含德拉沙星葡甲胺
1mg、杂质各1µg的混合溶液，作为系统适用性溶液；
分别精密量取所述溶剂、系统适用性溶液、对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，并分离德拉沙星葡甲胺及其有关物质。
2.根据权利要求1所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：流动相A中磷酸缓冲溶液为采用0.01%的磷酸水溶液。
3.根据权利要求1所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：高效液相采用PDA或紫外检测器。
4.根据权利要求1所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：流动相流速为0.8‑1.2ml/min。
5.根据权利要求1所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：进样量为5‑20μl。
6.根据权利要求1‑5任一项所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：色谱条件如下：
色谱柱：Symmetry Shield RP18，规格3.9mm×150mm，5µm，填料十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系，梯度洗脱；
第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比70%，流动相B占比30%。
7.根据权利要求1‑5任一项所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：供试品溶液色谱图中，确定所得供试品溶液中如有与有关物质保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J、杂质IM4，分别按校正后的峰面积计算，即分别乘以校正因子0.71、0.85、1.00、
1.15、0.80、1.72、1.61、0.75、0.79。
8.根据权利要求7所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，其特征在于：配制溶液时所用溶剂为体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，属于医药检测技术领域。
背景技术
[0002] 德拉沙星葡甲胺(Delafloxacin Meglumine)，是一种新型氟喹诺酮类广谱抗菌药，于2017年在美国首次上市。适用于急性细菌性皮肤和皮肤结构感染（ABSSSI）及社区获得性肺炎（CAP）。目前，国内原料药仅有南京海润医药有限公司一家备案，状态为“I”。在德拉沙星葡甲胺原料药制备过程中，存在多种杂质，包括工艺杂质、降解杂质等，均需要进行严格控制，因此需要对德拉沙星葡甲胺原料药的有关物质进行检测。目前，国内外尚无药典收载的德拉沙星葡甲胺有关物质检测方法。因此，开发一种快速、简单且准确检测德拉沙星葡甲胺原料药更多有关物质的方法，对德拉沙星葡甲胺原料药的质量控制具有非常重要的
意义。
发明内容
[0003] 本发明要解决的技术问题是：
[0004] 提供一种德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，能有效检测德拉沙星葡甲胺原料药中有关物质的含量，方法简便快捷、专属性强、灵敏度高、分离度好、检测杂质种类多，提高了药品安全性。
[0005] 本发明所述的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质的高效液相色谱检测方法，采用高效液相色谱法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，检测波长250‑350nm，柱温30‑40℃，以磷酸缓冲溶液体系为流动相A，以水‑甲醇‑乙腈体系为流动相B，梯度洗脱。
[0006] 优选的，梯度洗脱条件为：
[0007] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
[0008] 第二梯度洗脱时间20±3min，流动相A占比55±5%，流动相B占比45±5%；
[0009] 第三梯度洗脱时间45±3min，流动相A占比25±5%，流动相B占比75±5%；
[0010] 第四梯度洗脱时间55±3min，流动相A占比25±5%，流动相B占比75±5%；
[0011] 第五梯度洗脱时间65±3min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
[0012] 第六梯度洗脱时间75±3min，流动相A占比65±5%，流动相B占比35±5%；
[0013] 所述检测方法包括如下步骤：
[0014] 1）对照品溶液制备：
[0015] 取德拉沙星葡甲胺对照品，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml含1µg的溶液，作为对照品溶液；
[0016] 2）供试品溶液制备：
[0017] 取德拉沙星葡甲胺供试品，精密称定，用溶剂溶解并稀释制成每1ml含1mg的溶液，作为供试品溶液；
[0018] 3）系统适用性溶液制备：
[0019] 分别取德拉沙星葡甲胺对照品、杂质IM4、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J对照品各适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含德拉沙星葡甲胺1mg、杂质各1µg的混合溶液，作为系统适用性溶液；
[0020] 4）检测：
[0021] 分别精密量取所述溶剂、系统适用性溶液、对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，并分离德拉沙星葡甲胺及其有关物质。
[0022] 优选的，流动相B为乙腈、甲醇和水，体积比为810:90:100。在该配比下，有关物质的分离度更优。
[0023] 优选的，流动相A为磷酸缓冲溶液；所述磷酸缓冲溶液为采用0.01%的磷酸水溶液。
[0024] 优选的，高效液相采用PDA或紫外检测器。
[0025] 优选的，流动相流速为0.8‑1.2ml/min。
[0026] 优选的，进样量为5‑20μl。
[0027] 在一种最优选方案中，色谱条件如下：
[0028] 色谱柱：Symmetry ShieldTM RP18，规格3.9mm×150mm，5µm，填料十八烷基硅烷键合硅胶；
[0029] 柱温：35℃；
[0030] 检测波长：290nm；
[0031] 流速：1.0ml/min；
[0032] 进样量：10μl；
[0033] 流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系，梯度洗脱；
[0034] 梯度洗脱条件：
[0035] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0036] 第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0037] 第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0038] 第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0039] 第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0040] 第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比70%，流动相B占比30%。
[0041] 优选的，在上述方法中，配制溶液时所用溶剂为体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
[0042] 优选的，供试品溶液色谱图中，确定所得供试品溶液中如有与有关物质保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J、杂质IM4，分别按校正后的峰面积计算，即分别乘以校正因子0.71、0.85、1.00、1.15、
0.80、1.72、1.61、0.75、0.79，杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J、杂质IM4均不得过0.10%，其他单个杂质不得过0.10%，杂质总量不得过0.5%；
[0043] 各杂质具体如下：
[0044] 杂质A为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑7‑氟‑6‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0045] 杂质B为1‑（6‑氨基‑3‑氟‑5‑（3‑羟基氮杂丁‑1‑基）吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂丁‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0046] 杂质C为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（6‑（3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧喹啉‑1（4H）‑基）‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）氨基）‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0047] 杂质D为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（（1‑（1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑7‑基）氮杂丁‑3‑基）氧基）‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0048] 杂质E为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑7‑（3‑（（1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑3‑羧基‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑7‑基）氨基）‑2‑羟丙氧基）氮杂环丁‑1‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑4‑氧‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0049] 杂质F为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑3‑羟基‑7‑（3‑羟基氮杂环糊精‑1‑基）喹啉‑4（1H）‑酮；
[0050] 杂质H为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮芥‑1‑基）喹啉‑4（1H）‑酮；
[0051] 杂质J为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮芥‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸；
[0052] 杂质IM4为1‑（6‑氨基‑3,5‑二氟吡啶‑2‑基）‑8‑氯‑6‑氟‑7‑（3‑羟基氮杂环丁烷‑1‑基）‑4‑氧代‑1,4‑二氢喹啉‑3‑羧酸乙酯。
[0053] 与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0054] 本发明通过大量实验后优选出最佳的分析条件和供试品溶液的配制方法，经多次实验验证表明，本发明提供的德拉沙星葡甲胺原料药有关物质高效液相色谱测定方法灵敏
度高、分离度好、专属性强，可以准确的定性、定量检测德拉沙星葡甲胺原料药中的多种杂质，从而客观、准确、全面的评价德拉沙星葡甲胺原料药的质量，对产品质量的控制具有重要的现实意义。
附图说明
[0055] 图1为本发明空白溶剂的高效液相色谱图；
[0056] 图2为本发明专属性混合溶液的高效液相色谱图；
[0057] 图3为本发明对照品溶液的高效液相色谱图；
[0058] 图4为本发明供试品溶液的高效液相色谱图；
[0059] 图5为对比例1专属性混合溶液的高效液相色谱图；
[0060] 图6为对比例2专属性混合溶液的高效液相色谱图；
[0061] 图7为杂质A的结构式；
[0062] 图8为杂质B的结构式；
[0063] 图9为杂质C的结构式；
[0064] 图10为杂质D的结构式；
[0065] 图11为杂质E的结构式
[0066] 图12为杂质F的结构式；
[0067] 图13为杂质H的结构式;
[0068] 图14为杂质J的结构式;
[0069] 图15为杂质IM4的结构式;
具体实施方式
[0070] 下面结合实施例对本发明作出进一步说明，但本发明的保护范围不仅限于此，该领域专业人员对本发明技术方案所作的改变，均应属于本发明的保护范围内。
[0071] 实施例中所使用的原料，如无特别说明，均为市售常规原料；实施例中所使用的工艺方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。
[0072] 在以下实施例中，高效液相色谱条件如下：
[0073] 实施例1
[0074] 检测器：紫外检测器；
[0075] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Symmetry ShieldTM RP18，3.9mm×150mm，5μm）；
[0076] 检测波长：290nm；
[0077] 柱温：35℃；
[0078] 流速：1.0ml/min；
[0079] 进样量：10μl；
[0080] 流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系；梯度洗脱；
[0081] 梯度洗脱条件：
[0082] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0083] 第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0084] 第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0085] 第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0086] 第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0087] 第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比70%，流动相B占比30%。
[0088] 溶剂：体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
[0089] 专属性：
[0090] 各杂质储备溶液：分别取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质H、杂质J、杂质IM4各10mg，置不同100ml量瓶中，分别用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（其中，杂质D先加入三氟乙酸2ml，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀即得。杂质J先加入N‑甲基吡咯烷酮1ml，再用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得）。
[0091] 混合溶液：精密称取德拉沙星葡甲胺对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂适量使溶解，加入上述杂质贮备液各0.2ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0092] 精密量取空白溶剂和专属性混合溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，结果见表1。图谱见图1、图2。
[0093] 表1专属性试验结果（混合溶液）
[0094]
[0095] 结论：空白溶剂不干扰德拉沙星及各杂质的检测，主峰与相邻杂质峰的分离度为4.487，大于1.5，分离效果良好。
[0096] 实施例2
[0097] 检测器：PDA；
[0098] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Symmetry ShieldTM RP18，3.9mm×150mm，5μm）；
[0099] 检测波长：250nm；
[0100] 柱温：30℃；
[0101] 流速：0.8ml/min；
[0102] 进样量：5μl；
[0103] 流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系；梯度洗脱；
[0104] 梯度洗脱条件：
[0105] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0106] 第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0107] 第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0108] 第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0109] 第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0110] 第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比70%，流动相B占比30%。
[0111] 溶剂：体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
[0112] 强制降解试验：
[0113] 对照品溶液（含量）：精密称取德拉沙星葡甲胺对照品20mg，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0114] 对照品溶液（杂质）：精密称取德拉沙星葡甲胺对照品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0115] 未降解供试品溶液制备：精密称取供试品20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0116] 酸降解供试品溶液制备：精密称取供试品20mg，置20ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1ml，室温放置24小时，再加入1mol/L氢氧化钠溶液1ml中和，加甲醇适量溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得。
[0117] 碱降解供试品溶液制备：精密称取供试品20mg，置20ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml，室温放置24小时，再加入1mol/L盐酸溶液1ml中和，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0118] 氧化降解供试品溶液制备：精密称取供试品20mg，置20ml量瓶中，加3%过氧化氢溶液2ml，室温放置15小时，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0119] 高温降解供试品溶液制备：取供试品适量，置60℃烘箱中，放置30天，取出，放冷至室温，精密称取20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0120] 高湿降解供试品溶液制备：取供试品适量，在相对湿度75%的条件下，放置30天，取出，精密称取20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0121] 光照降解供试品溶液制备：取供试品适量，置光照条件（1.2×106 Lux•hr）下，放置30天，取出，精密称取20mg，置20ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0122] 未降解供试品溶液制备（含量）：取未破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0123] 酸降解供试品溶液制备（含量）：取酸破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0124] 碱降解供试品溶液制备（含量）：取碱破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0125] 氧化降解供试品溶液制备（含量）：取氧化破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0126] 高温降解供试品溶液制备（含量）：取高温破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0127] 高湿降解供试品溶液制备（含量）：取高湿破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0128] 光照降解供试品溶液制备（含量）：取光照破坏溶液5ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0129] 酸、碱降解空白溶液：取1mol/L盐酸溶液和1mol/L氢氧化钠溶液各1ml，置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为酸、碱降解空白溶液；
[0130] 氧化降解空白溶液：取3%过氧化氢溶液2ml，置20ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为氧化降解空白溶液。
[0131] 精密量取上述各溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，按外标法计算各杂质含量，结果见表2。未降解供试品溶液见图4。
[0132] 表2 强制降解试验结果
[0133]
[0134] 结论：溶剂及各空白溶液对样品测定无干扰，各降解条件下，主峰纯度相似度均大于纯度阈值，主峰与相邻峰的分离度均大于1.5，说明该方法专属性强。
[0135] 实施例3
[0136] 检测器：紫外检测器；
[0137] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Symmetry ShieldTM RP18，3.9mm×150mm，5μm）；
[0138] 检测波长：350nm；
[0139] 柱温：40℃；
[0140] 流速：1.2ml/min；
[0141] 进样量：20μl；
[0142] 流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系；梯度洗脱；
[0143] 梯度洗脱条件：
[0144] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0145] 第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0146] 第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0147] 第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比30%，流动相B占比70%；
[0148] 第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；
[0149] 第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比70%，流动相B占比30%。
[0150] 溶剂：体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
[0151] 系统精密度：
[0152] 对照品溶液：精密称取德拉沙星葡甲胺对照品20mg，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取贮备液1ml，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0153] 精密量取对照品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，计算对照品溶液连续进样6次，各峰的峰面积和保留时间的相对标准偏差（RSD），结果见表3。图谱见图3。
[0154] 表3 系统精密度试验结果
[0155]
[0156] 结论：对照品溶液连续进样6次，对照品峰面积的RSD小于10.0%，保留时间的RSD均小于1.0%，说明系统精密度良好。
[0157] 实施例4
[0158] 检测器：紫外检测器；
[0159] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Symmetry ShieldTM RP18，3.9mm×150mm，5μm）；
[0160] 检测波长：290nm；
[0161] 柱温：35℃；
[0162] 流速：1.0ml/min；
[0163] 进样量：10μl；
[0164] 流动相：流动相B为体积比810:90:100的乙腈‑甲醇‑水体系，流动相A为0.01%磷酸水溶液体系；梯度洗脱；
[0165] 梯度洗脱条件：
[0166] 第一梯度洗脱时间0min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0167] 第二梯度洗脱时间20min，流动相A占比50%，流动相B占比50%；
[0168] 第三梯度洗脱时间45min，流动相A占比20%，流动相B占比80%；
[0169] 第四梯度洗脱时间55min，流动相A占比20%，流动相B占比80%；
[0170] 第五梯度洗脱时间65min，流动相A占比60%，流动相B占比40%；
[0171] 第六梯度洗脱时间75min，流动相A占比60%，流动相B占比40%。
[0172] 溶剂：体积比为20:80的磷酸溶液‑甲醇体系，其中磷酸溶液为采用0.01%磷酸水溶液。
[0173] 检测限/定量限：
[0174] 以溶剂为空白，调整仪器灵敏度，连续进样3次，记录在被测物出峰时间范围内仪器的噪声水平，计算平均噪声。
[0175] 检测限：准确配制被测物对照品溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，连续测定3次。计算其峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在3以上的样品浓度即为检测限浓度，其相对于理论样品浓度的比值为检测限。
[0176] 定量限：准确配制被测物对照品溶液，逐步稀释至一定浓度并进样，连续测定6次。计算其峰高与噪声的比值（信噪比），其信噪比（S/N）在10以上的样品浓度即为定量限浓度，其相对于理论样品浓度的比值为定量限。
[0177] 定量限溶液：分别精密量取“专属性”项下杂质储备液各2ml，“系统精密度”项下的德拉沙星葡甲胺对照品贮备液0.2ml，置同一50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置20ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液；
[0178] 检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml，置10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。
[0179] 精密量取溶剂按上述色谱条件连续进样3次、检测限溶液连续进样3次和定量限溶液连续进样6次，记录色谱图，计算信噪比，结果见表4、表5、表6。
[0180] 表4 基线噪声测定结果
[0181]
[0182] 表5 定量限测定结果
[0183]
[0184] 表6 检测限测定结果
[0185]
[0186] 结论：该方法下，德拉沙星葡甲胺及各杂质的灵敏度均符合要求。
[0187] 对比例1
[0188] 本对比例的高效液相色谱条件与实施例不同之处仅在于，流动相B为甲醇。
[0189] 其专属性混合溶液的高效液相色谱图如图5所示，从图中可以看出，德拉沙星葡甲胺与前面相邻峰分离度差。
[0190] 对比例2
[0191] 本对比例的高效液相色谱条件与实施例不同之处仅在于，流动相B采用90%乙腈溶液。
[0192] 其专属性混合溶液的高效液相色谱图如图6所示，从图中可以看出，混合溶液中杂质重合，分离度较差。
