一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用

摘要

母水溶性维生素中缺乏或过量的种类。本发明涉及一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用，按下述步骤进行：（1）采集母乳样品，在采集母乳样品的同时收集该母乳样品对应的母乳信息，所述母乳信息包括母亲基本信息、婴儿基本信息、膳食摄入信息和婴儿喂养信息；2）母乳样品预处理，得到待测样品；（3）测定待测样品中的水溶性维生素含量，并与母乳信息结合，建立母乳中水溶性维生素的模型；（4）根据模型评估计算母乳中对应水溶性维生素的含量水平。本发明所述的方法可以有效的建立动态回归模型，根据母亲的膳食情况即可有效的判断母乳(56)对比文件任向楠.人乳中B族维生素水平及其影响因素.中国博士学位论文全文数据库.2016,(第5期),E055-7页.

权利要求

1.一种母乳水溶性维生素的评估方法，其特征在于，所述水溶性维生素包括维生素B1、维生素B5，所述评估方法按下述步骤进行：（1）采集母乳样品，在采集母乳样品的同时收集该母乳样品对应的母乳信息，所述母乳信息包括母亲基本信息、婴儿基本信息、膳食摄入信息和婴儿喂养信息；

（2）母乳样品预处理，得到待测样品；预处理方法为：向母乳样品中加入盐酸和氢氧化钠，避光静置反应，用超纯水定量，避光离心，用微孔滤膜过滤即得待测样品；

（3）采用超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用法测定待测样品中的水溶性维生素含量，并与母乳信息结合，建立母乳中水溶性维生素的模型；

维生素B1模型为YB1=(‑0.246×泌乳时间+0.045×畜禽肉类摄入量+0.025×鱼虾类摄入量‑0.068×蛋类摄入量‑0.057×大豆类及坚果摄入量+57.245)/10；

维生素B5模型为YB5=‑0.710×泌乳时间‑0.087×畜禽肉类摄入量+0.234×蛋类摄入量‑0.084×奶类摄入量+0.377×大豆类及坚果摄入量+243.444；

其中，各类食物的单位为24小时该食物的摄入量的克数，泌乳时间为乳母产后时间的天数；

所使用的超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪为Waters ACQUITY UPLC TQD，色谱柱为HSS T3，柱温30℃，进样体积为10μL，流速为0.3mL/min；

流动相A相为10mM甲酸铵和0.1%甲酸的水溶液，B相为乙腈，洗脱梯度如下表所示：；

（4）根据模型评估计算母乳中对应水溶性维生素的含量水平；

将通过各模型计算得到的YB1和YB5值带入到各维度表内即可得到该母乳中维生素B1和维生素B5的含量水平：。

2.根据权利要求1所述的母乳水溶性维生素的评估方法，其特征在于，所述样品中加入盐酸后的pH为1.7±0.1。

3.根据权利要求1所述的母乳水溶性维生素的评估方法，其特征在于，所述样品中加入氢氧化钠后的pH为4.7±0.1。

4.根据权利要求1所述的母乳水溶性维生素的评估方法，其特征在于，所述离心为在4°C，9000‑11000×g条件下离心15‑25min。

5.根据权利要求1所述的母乳水溶性维生素的评估方法，其特征在于，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

6.权利要求1‑5任一所述的方法在营养咨询和膳食建议领域的应用。

说明书

一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用

技术领域

[0001] 本发明主要涉及母乳评价领域，特别涉及一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用。

背景技术

[0002] 维生素是多种不同类型的低分子量有机化合物，具有不同结构和功能。人类不断完善对营养物质的需求，维生素含量也成为评价营养成分的重要指标。对于0‑6个月的婴儿而言，母乳是最完美的营养来源。母乳中维生素成分在低浓度下也具有高水平的生物利用度，可维持婴儿的生命活动（新陈代谢、发育和抗氧化性）。母乳中的维生素在营养学上，按照溶解方式可以分为水溶性维生素和脂溶性维生素两大类。水溶性维生素主要包括维生素C和B族维生素。脂溶性维生素主要包括维生素A（维生素A和类胡萝卜素）、维生素D、维生素E和维生素K。

[0003] 维生素B1主要以硫胺素盐酸盐的形式存在，在体内能量代谢中发挥重要作用。严重缺乏维生素B1可引起婴儿脚气病，新生儿缺乏维生素B1还可能影响未来的神经系统功能与认知发育和行为能力。

[0004] 维生素B5在体内转变成辅酶A（CoA）或酰基载体蛋白（ACP）参与脂肪酸代谢反应。维生素B5是脂肪酸合成类固醇所必需的物质，可参与类固醇紫质、褪黑素和亚铁血红素的合成；还是体内柠檬酸循环、胆碱乙酰化、合成抗体等代谢所必需的中间物。因此，维生素B5在体内可作用于正常的上皮器官如神经、肾上腺、消化道及皮肤，提高对病原体的抵抗力。

[0005] 母乳中维生素检测大多采用液相色谱法或是液相色谱‑质谱联用法进行检测，对于乳母来说，需要到相关检测机构进行母乳检测才可以得知自身母乳中维生素含量水平，耗费时间和金钱。同时，由于维生素在母乳中含量偏低，并且母乳在采集、贮藏、运输和测试过程中会出现不同程度的损失。由于母乳中维生素含量受泌乳期、膳食摄入等的影响，这些因素可以作为评价母乳中维生素含量的重要手段。

[0006] 因鉴于此，特提出此发明。

发明内容

[0007] 本发明的目的旨在提供一种可以简单快速评估母乳中水溶性维生素含量的方法。

[0008] 为了实现上述目的，本发明提供了一种母乳水溶性维生素的评估方法和应用，按下述步骤进行：

[0009] （1）采集母乳样品，在采集母乳样品的同时收集该母乳样品对应的母乳信息，所述母乳信息包括母亲基本信息、婴儿基本信息、膳食摄入信息和婴儿喂养信息；

[0010] （2）母乳样品预处理，得到待测样品；

[0011] （3）测定待测样品中的水溶性维生素含量，并与母乳信息结合，建立母乳中水溶性维生素的模型；

[0012] （4）根据模型评估计算母乳中对应水溶性维生素的含量。

[0013] 优选或可选地，所述水溶性维生素包括维生素B1、维生素B5。

[0014] 优选或可选地，步骤（2）中的预处理方法为：向母乳样品中加入盐酸和氢氧化钠，避光静置反应，用超纯水定量，避光离心，用微孔滤膜过滤即得待测样品。

[0015] 优选或可选地，所述样品中加入盐酸后的pH为1.7。

[0016] 优选或可选地，所述样品中加入氢氧化钠后的pH为4.7。

[0017] 优选或可选地，所述离心为在4°C，10000×g条件下离心20min。

[0018] 优选或可选地，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

[0019] 优选或可选地，步骤（3）中测定待测样品中的水溶性维生素含量采用超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用法进行。

[0020] 本发明还提供了上述的母乳水溶性维生素的评估方法在营养咨询和膳食建议领域的应用。

[0021] 由上可见，本发明所述的方法可以有效的建立动态回归模型，根据母亲的膳食情况即可有效的判断母乳中水溶性维生素的含量水平，从而实现母乳水溶性维生素的评价，以便推断母乳水溶性维生素是否满足婴儿生长需要、避免存在过量摄入或者缺乏的风险，预防某些疾病的发生，同时反馈给乳母水溶性维生素中缺乏或过量的种类，在膳食建议中给出相关的饮食建议。

附图说明

[0022] 图1为实施例2中方法测定的维生素B1的提取离子色谱图；

[0023] 图2为实施例3中方法测定的维生素B5的提取离子色谱图。

具体实施方式

[0024] 以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

[0025] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0026] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0027] 实施例1

[0028] 本实施例中，提供了一种母乳样品的采集和预处理方法。

[0029] 其中，母乳样品的采集方法如下：

[0030] 规定在统一的时间点进行母乳样品的采集，所有母乳样品来源的乳母身体指标正常，婴儿足月分娩(妊娠38 42周)，无先天性或遗传性疾病。~

[0031] 乳母需要在早上6:00‑7:00间排空一个乳房，之后于上午9:00‑11:00间从一个乳房(之前已排空)收集全乳。将全乳混合后分装至1mL无菌冻存管中，贮存于‑80℃超低温冰箱。

[0032] 在采集母乳样品的过程中，同时进行信息采集，收集该母乳样品对应的母乳信息，包括母亲基本信息、婴儿基本信息、膳食摄入信息和婴儿喂养信息。

[0033] 其中，母亲基本信息包括姓名、年龄、分娩方式、开奶时间、身高、体重、母乳样本（前段、后段、全乳）。

[0034] 婴儿基本信息则包括姓名、出生日期、身长、体重、性别、出生身长、出生体重。

[0035] 膳食记录信息则通过膳食回顾法对各种主、副食物的摄入情况进行填写，并参考《中国营养科学全书》第二版，按照大类畜禽肉类、水果类、蔬菜类、鱼虾类、蛋类、奶类、谷类薯类及杂豆、大豆类及坚果、油脂共九大类记录食物摄入情况。

[0036] 婴儿喂养信息则包括哺乳次数、母乳摄入量以及泌乳时间。

[0037] 将收集到的母乳样品置于‑80℃下保存，并在使用时在室温下解冻。

[0038] 取4mL单一来源的母乳样品，称重后置于40mL圆底离心管中。

[0039] 先用1mol/L HCl调节试样pH值至1.7，避光静置2分钟后，用1mol/L NaOH调节试样pH值调节至4.7，避光静置2分钟后，试样用超纯水定量至10g。试样混匀后，在4°C，10000×g条件下离心20min，上清液过0.22μm微孔滤膜，即得待测样品。

[0040] 上述各预处理步骤中，使用铝箔以保证试样避光。

[0041] 实施例2

[0042] 采用超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪测定实施例1中方式制备的待测样品并得到母乳样品的维生素B1的含量。

[0043] 本实施例中，使用的超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪为Waters ACQUITY UPLC TQD，色谱柱为HSS T3（50mm×2.1mm，1.8μm），柱温30℃，进样体积为10μL，流速为0.3mL/min。

[0044] 流动相A相为10mM甲酸铵和0.1%甲酸的水溶液，B相为乙腈，洗脱梯度如下表所示：

[0045] 时间 流量（mL/min） A% B%0.0 0.3 99.0 1.0
2.0 0.3 99.0 1.0
3.0 0.3 80.0 20.0
4.0 0.3 20.0 80.0
4.5 0.3 5.0 95.0
5.0 0.3 5.0 95.0
5.5 0.3 99.0 1.0
8.0 0.3 99.0 1.0
。

[0046] 质谱仪检测在带有MRM跃迁的正离子模式下运行。其他参数如下：离子源温度110°C，去溶剂化温度350°C，去溶剂化气体流速(N2)700L/h，锥孔气体流速30L/h，碰撞气体流速(Ar)0.13mL/min。

[0047] 采用下述方法测定的维生素B1的提取离子色谱图如图1所示：

[0048] 名称 主要形式 英文名 母离子 子离子 保留时间维生素B1 硫胺素盐酸盐 Thiamine Hydrochloride 265 122,144 0.43min
。

[0049] 测定全部的209个样品后，随机选取其中的146个通过SPSS统计软件对样品的膳食摄入数据、泌乳时间和测定出的维生素B1含量进行相关性分析，选取最低显著性差异在95%置信水平(P＜0.05)的因素，并通过单因素方差分析及多元线性回归分析，建立数据模型。

[0050] SPSS分析结果如下表所示：

[0051] 模型 B Sig.常量 57.245 0.000
泌乳时间 ‑0.246 0.000
畜禽肉类 0.045 0.012
鱼虾类 0.025 0.007
蛋类 ‑0.068 0.003
大豆类及坚果 ‑0.057 0.039
。

[0052] 根据该表，建立的数据模型为YB1=(‑0.246×泌乳时间+0.045×畜禽肉类摄入量+0.025×鱼虾类摄入量‑0.068×蛋类摄入量‑0.057×大豆类及坚果摄入量+57.245)/10[0053] 其中，各类食物的单位为24小时该食物的摄入量的克数，泌乳时间为乳母产后时间的天数。

[0054] 统计各样品的YB1值设置维度，结果如下表所示：

[0055]维度 YB1
0 3.975
25% 6.521
50% 7.039
75% 7.720
100% 12.495
。

[0056] 将通过模型计算得到的YB1值带入到该维度表内即可得到该母乳样品维生素B1在整体乳母中的水平，当该水平过低时，如低于25%，即可建议对乳母进行及时的膳食和营养学干预措施。

[0057] 测定全部的209个样品后，以剩余的63个样品作为验证集对上述模型进行验证，以模型计算的YB1值对应维度与样本中维生素B1的实际测定含量所属维度一致计为正确结果。

[0058] 通过相关性分析得到上述模型的显著性值P<0.05，相关系数r=0.600，经验证集验证，上述模型准确率为72.50%。上述结果表明，上述模型具备良好的准确性。

[0059] 实施例3

[0060] 采用超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪测定实施例1中方式制备的待测样品并得到母乳样品的维生素B5的含量。

[0061] 本实施例中，使用的超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪为Waters ACQUITY UPLC TQD，色谱柱为HSS T3（50mm×2.1mm，1.8μm），柱温30℃，进样体积为10μL，流速为0.3mL/min。

[0062] 流动相A相为10mM甲酸铵和0.1%甲酸的水溶液，B相为乙腈，洗脱梯度如下表所示：

[0063]时间 流量（mL/min） A% B%
0 0.3 99.0 1.0
2 0.3 99.0 1.0
3 0.3 80.0 20.0
4 0.3 20.0 80.0
4.5 0.3 5.0 95.0
5 0.3 5.0 95.0
5.5 0.3 99.0 1.0
8 0.3 99.0 1.0
。

[0064] 质谱仪检测在带有MRM跃迁的正离子模式下运行。其他参数如下：离子源温度110°C，去溶剂化温度350°C，去溶剂化气体流速(N2)700L/h，锥孔气体流速30L/h，碰撞气体流速(Ar) 0.13mL/min。

[0065] 采用下述方法测定的维生素B5的提取离子色谱图如图2所示：

[0066] 名称 主要形式 英文名 母离子 子离子 保留时间维生素B5 泛酸钙 Calcium Pantothenate 220 90,202 3.20min
。

[0067] 测定全部的220个样品后，随机选取其中的126个通过SPSS统计软件对样品的膳食摄入数据、泌乳时间和测定出的维生素B5含量进行相关性分析，选取最低显著性差异在95%置信水平(P＜0.05)的因素，并通过单因素方差分析及多元线性回归分析，建立数据模型。

[0068] SPSS分析结果如下表所示：

[0069]模型 B Sig.
常量 243.444 0.000
泌乳时间 ‑0.710 0.000
畜禽肉类 ‑0.087 0.007
蛋类 0.234 0.000
奶类 ‑0.084 0.032
大豆类及坚果 0.377 0.000
。

[0070] 根据该表，建立的数据模型为YB5=‑0.710×泌乳时间‑0.087×畜禽肉类摄入量+0.234×蛋类摄入量‑0.084×奶类摄入量+0.377×大豆类及坚果摄入量+243.444。

[0071] 其中，各类食物的单位为24小时该食物的摄入量的克数，泌乳时间为乳母产后时间的天数。

[0072] 统计各样品的YB5值设置维度，结果如下表所示：

[0073]维度 YB5
0 83.984
25% 155.872
50% 182.447
75% 231.615
100% 358.954
。

[0074] 将通过模型计算得到的YB5值带入到该维度表内即可得到该母乳样品维生素B5在整体乳母中的水平，当该水平过低时，如低于25%，即可建议对乳母进行及时的膳食和营养学干预措施。

[0075] 测定全部的220个样品后，以剩余的94个样品作为验证集对上述模型进行验证，以模型计算的YB5值对应维度与样本中维生素B5的实际测定含量所属维度一致计为正确结果。

[0076] 通过相关性分析得到上述模型的显著性值P<0.05，相关系数r=0.759，经验证集验证，上述模型准确率为71.71%。上述结果表明，上述模型具备良好的准确性。

[0077] 由上可见，本发明所述的方法可以有效的建立动态回归模型，根据母亲的膳食情况即可有效的判断母乳中水溶性维生素的含量水平，从而实现母乳水溶性维生素的评价，以便推断母乳水溶性维生素是否满足婴儿生长需要、避免存在过量摄入或者缺乏的风险，预防某些疾病的发生，同时反馈给乳母水溶性维生素中缺乏或过量的种类，在膳食建议中给出相关的饮食建议。

[0078] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

[0079] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。