一种2型人博卡病毒型别特异性抗体及其应用转让专利
申请号 : CN202311394500.3
文献号 : CN117126270B
文献日 : 2024-02-13
发明人 : 赵林清 , 德日 , 张可祥
申请人 : 首都儿科研究所
摘要 :
权利要求 :
1.针对2型人博卡病毒的型别特异性单克隆抗体或其抗原结合片段,其包含重链可变区和轻链可变区,其中,所述重链可变区包含:
氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36和SEQ ID NO: 37所示的三个互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3;
和,所述轻链可变区包含:
氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 38、LAS和SEQ ID NO: 39所示的三个互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述重链可变区还包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42和SEQ ID NO: 43所示的框架区H‑FR1、H‑FR2、H‑FR3和H‑FR4;
和,所述轻链可变区还包含氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46和SEQ ID NO: 47所示的框架区L‑FR1、L‑FR2、L‑FR3和L‑FR4。
3.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 48所示的氨基酸序列;
和,所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 49所示的氨基酸序列。
4.如权利要求3所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含:重链可变区,其氨基酸序列如SEQ ID NO: 48所示;和,轻链可变区,其氨基酸序列如SEQ ID NO: 49所示。
5.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,在所述重链可变区的N端还具有前导序列,所述重链可变区的前导序列具有如SEQ ID NO: 65所示的氨基酸序列;
和/或,在所述轻链可变区的N端还具有前导序列,所述轻链可变区的前导序列具有如SEQ ID NO: 67所示的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含:重链,其包含如SEQ ID NO: 52所示的氨基酸序列;和,轻链,其包含如SEQ ID NO: 53所示的氨基酸序列。
7.如权利要求6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含:重链,其氨基酸序列如SEQ ID NO: 52所示;和,轻链,其氨基酸序列如SEQ ID NO: 53所示。
8.如权利要求1‑7任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、互补决定区片段、单链抗体、人抗体。
9.多核苷酸,其编码如权利要求1‑8任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
10.如权利要求9所述的多核苷酸,其中,所述多核苷酸为多核苷酸组,所述多核苷酸组包括:(I)第一多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 54、55和56所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子;和,(II)第二多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 57、CTTGCATCC和SEQ ID NO: 58所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子。
11.如权利要求10所述的多核苷酸,其中,所述多核苷酸组包括:(I)第一多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 59所示核苷酸序列和任选地如SEQ ID NO:
66所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子;和,(II)第二多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 60所示核苷酸序列和任选地如SEQ ID NO:
68所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子;
任选地,所述多核苷酸组还包括:
(III)第三多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 61所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子;和,(IV)第四多核苷酸,其包含如SEQ ID NO: 62所示核苷酸序列的DNA分子或其相应的mRNA分子。
12.如权利要求11所述的多核苷酸,其中,所述多核苷酸组包括:(I)第一多核苷酸,其为核苷酸序列如SEQ ID NO: 63所示的DNA分子或其相应的mRNA分子;和,(II)第二多核苷酸,其为核苷酸序列如SEQ ID NO: 64所示的DNA分子或其相应的mRNA分子。
13.核酸构建体,其包含如权利要求9‑12任一项所述的多核苷酸,以及,任选地,与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
14.一种重组载体,其包含如权利要求9‑12任一项所述的多核苷酸,或者如权利要求13所述的核酸构建体。
15.一种转化的宿主细胞,其中转化有如权利要求9‑12任一项所述的多核苷酸、如权利要求13所述的核酸构建体或如权利要求14所述的重组载体。
16.一种用于检测2型人博卡病毒的试剂或试剂盒,其包括如权利要求1‑8任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或如权利要求15所述的转化的宿主细胞。
17.一种制备如权利要求1‑8任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法,所述方法包括:在适合于所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下,使权利要求15所述的转化的宿主细胞表达所述单克隆抗体或其抗原结合片段,并从所述宿主细胞的培养物中回收所表达的单克隆抗体或其抗原结合片段。
18.如权利要求1‑8任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求9‑12任一项所述的多核苷酸、如权利要求13所述的核酸构建体、如权利要求14所述的重组载体、如权利要求15所述的转化的宿主细胞和/或如权利要求16所述的试剂在制备用于检测2型人博卡病毒在样品中的存在或其水平、用于诊断2型人博卡病毒感染、或用于1型人博卡病毒和2型人博卡病毒之间的鉴别诊断的产品中的应用。
19.如权利要求18所述的应用,其特征在于,所述样品为受试者的生物学样品。
说明书 :
一种2型人博卡病毒型别特异性抗体及其应用
技术领域
背景技术
发明内容
附图说明
具体实施方式
×10 M或更高,更优选1.0×10 M或更高。
指KD为10 M或更低,优选10 M或更低,更优选10 M或更低。
HBoV1 ‑HCDR2 2 INPDGGFT
HBoV1 ‑HCDR3 3 TRDRGMIKDRDALFAY
HBoV1 ‑LCDR1 4 QTIVHSNGNTY
HBoV1 ‑LCDR2 ‑ KVS
HBoV1 ‑LCDR3 5 FQGSHVPPT
HBoV1 ‑H‑FR1 6 EVHLVESGGDLVLPGGSLKLSCAVS
HBoV1 ‑H‑FR2 7 MCWVRQTPDKSLELVAN
HBoV1 ‑H‑FR3 8 YYPDNVKGRFTISRDSAKNTLYLQMTSLRSEDTALYYC
HBoV1 ‑H‑FR4 9 WGQGTLVTVSA
HBoV1 ‑L‑FR1 10 DILMTQTPLFLPVSLGDQASISCRSS
HBoV1 ‑L‑FR2 11 LEWYLQKPGQSPRLLIY
HBoV1 ‑L‑FR3 12 NRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYC
HBoV1 ‑L‑FR4 13 FGGGTKLEIK
HBoV1 ‑VH 14 EVHLVESGGDLVLPGGSLKLSCAVSGFTFSNHGMCWVRQ
TPDKSLELVANINPDGGFTYYPDNVKGRFTISRDSAKNT
LYLQMTSLRSEDTALYYCTRDRGMIKDRDALFAYWGQGT
LVTVSA
HBoV1 ‑VL 15 DILMTQTPLFLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLE
WYLQKPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL
KISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIK
HBoV1 ‑CH 16 AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTV
TWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSE
TVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV
FIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFV
DDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKE
FKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQ
MAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQP
IMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNH
HTEKSLSHSPGK
HBoV1 ‑CL 17 RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINV
KWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDE
YERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
HBoV1 ‑H链 18 EVHLVESGGDLVLPGGSLKLSCAVSGFTFSNHGMCWVRQ
TPDKSLELVANINPDGGFTYYPDNVKGRFTISRDSAKNT
LYLQMTSLRSEDTALYYCTRDRGMIKDRDALFAYWGQGT
LVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYF
PEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPS
STWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTV
PEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEV
QFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQD
WLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTI
PPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAEN
YKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLH
EGLHNHHTEKSLSHSPGK
HBoV1 ‑L链 19 DILMTQTPLFLPVSLGDQASISCRSSQTIVHSNGNTYLE
WYLQKPGQSPRLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL
KISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPPTFGGGTKLEIKRADAA
PTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKID
GSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHN
SYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
HBoV1 ‑HCDR1编码 20 GGATTCACTTTCAGTAACCATGGC
序列
HBoV1 ‑HCDR2编码 21 ATTAATCCTGATGGTGGTTTCACC
序列
HBoV1 ‑HCDR3编码 22 ACAAGAGATCGGGGTATGATTAAGGATAGGGACGCCCTA
序列 TTTGCTTAC
HBoV1 ‑LCDR1编码 23 CAGACCATTGTCCATAGTAATGGAAACACCTAT
序列
HBoV1 ‑LCDR2编码 ‑ AAAGTTTCC
序列
HBoV1 ‑LCDR3编码 24 TTTCAAGGTTCACATGTTCCTCCGACG
序列
HBoV1 ‑VH基因 25 GAAGTACATCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGCTG
CCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGA
TTCACTTTCAGTAACCATGGCATGTGTTGGGTTCGCCAG
ACTCCAGACAAGAGCCTGGAGTTGGTCGCAAACATTAAT
CCTGATGGTGGTTTCACCTATTATCCGGACAATGTGAAG
GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACTCTGCCAAGAACACC
CTGTACCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACA
GCCTTGTATTACTGTACAAGAGATCGGGGTATGATTAAG
GATAGGGACGCCCTATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACT
CTGGTCACTGTCTCTGCA
HBoV1 ‑VL基因 26 GATATTTTGATGACCCAAACTCCACTCTTCCTGCCTGTC
AGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGTAGATCTAGT
CAGACCATTGTCCATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAA
TGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAGGCTCCTG
ATCTACAAAGTTTCCAACCGCTTTTCTGGGGTCCCAGAC
AGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTC
AAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTAT
TACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCTCCGACGTTCGGT
GGGGGCACGAAGCTGGAAATCAAA
HBoV1 ‑CH基因 27 GCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCT
GGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGA
TGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTG
ACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACC
TTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGC
AGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAG
ACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACC
AAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGT
AAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTC
TTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATT
ACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATC
AGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTA
GATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGG
GAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAA
CTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAG
TTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCC
ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAG
GCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAG
ATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACA
GACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGG
AATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCC
ATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAG
CTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACT
TTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCAC
CATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA
28 CGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCA
TCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTG
TGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTC
AAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTC
CTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACC
TACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAG
TATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCAC
AAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGG
AATGAGTGT
HBoV1 ‑H链基因 29 GAAGTACATCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACTTAGTGCTG
CCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGA
TTCACTTTCAGTAACCATGGCATGTGTTGGGTTCGCCAG
ACTCCAGACAAGAGCCTGGAGTTGGTCGCAAACATTAAT
CCTGATGGTGGTTTCACCTATTATCCGGACAATGTGAAG
GGCCGATTCACCATCTCCAGAGACTCTGCCAAGAACACC
CTGTACCTGCAAATGACCAGTCTGAGGTCTGAGGACACA
GCCTTGTATTACTGTACAAGAGATCGGGGTATGATTAAG
GATAGGGACGCCCTATTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACT
CTGGTCACTGTCTCTGCAGCCAAAACGACACCCCCATCT
GTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAAC
TCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTC
CCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTG
TCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCT
GACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCC
AGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCC
CACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTG
CCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTC
CCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCC
AAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACG
TGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTC
CAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACA
GCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACT
TTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGAC
TGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGT
GCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA
ACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATT
CCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGT
CTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATT
ACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAAC
TACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCT
TACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAAC
TGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACAT
GAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCC
CACTCTCCTGGTAAA
HBoV1 ‑L链基因 30 GATATTTTGATGACCCAAACTCCACTCTTCCTGCCTGTC
AGTCTTGGAGATCAAGCCTCCATCTCTTGTAGATCTAGT
CAGACCATTGTCCATAGTAATGGAAACACCTATTTAGAA
TGGTACCTGCAGAAACCAGGCCAGTCTCCAAGGCTCCTG
ATCTACAAAGTTTCCAACCGCTTTTCTGGGGTCCCAGAC
AGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTC
AAGATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATCTGGGAGTTTAT
TACTGCTTTCAAGGTTCACATGTTCCTCCGACGTTCGGT
GGGGGCACGAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGATGCTGCA
CCAACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTA
ACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAAC
TTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGAT
GGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACT
GATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGC
ACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAAC
AGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCA
CCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
HBoV1 ‑H链前导序 31 MNLGLSFIFLALILKGVQC
列
HBoV1 ‑H链前导序 32 ATGAACTTAGGGCTCAGCTTCATTTTCCTTGCCCTCATT
列编码基因 TTAAAAGGTGTCCAGTGT
HBoV1 ‑L链前导序 33 MKLPVRLLVLMFWIPVSSS
列
HBoV1 ‑L链前导序 34 ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGATGTTCTGG
列编码基因 ATTCCTGTTTCCAGCAGT
HBoV2 ‑HCDR1 35 GFSLSTSGMG
HBoV2 ‑HCDR2 36 IWWDDVK
HBoV2 ‑HCDR3 37 ARIVGYYASRDALDY
HBoV2 ‑LCDR1 38 KSVSTSAYSY
HBoV2 ‑LCDR2 ‑ LAS
HBoV2 ‑LCDR3 39 QHSRELPWT
HBoV2 ‑H‑FR1 40 QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFS
HBoV2 ‑H‑FR2 41 VGWIRQPSGKGLEWLTH
HBoV2 ‑H‑FR3 42 RYNPALKSRLTISKDTSSSQVFLKIASVDTADTAAYYC
HBoV2‑H‑FR4 43 WGQGTSVTVSS
HBoV2 ‑L‑FR1 44 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRAS
HBoV2 ‑L‑FR2 45 MHWYQQRPGQPPKLLIY
HBoV2 ‑L‑FR3 46 NLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC
HBoV2 ‑L‑FR4 47 FGGGTKLEIK
HBoV2 ‑VH 48 QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWI
RQPSGKGLEWLTHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSSS
QVFLKIASVDTADTAAYYCARIVGYYASRDALDYWGQGT
SVTVSS
HBoV2 ‑VL 49 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSAYSYMHW
YQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLN
IHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIK
HBoV2 ‑CH 50 AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTV
TWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSE
TVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSV
FIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFV
DDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKE
FKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQ
MAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQP
IMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNH
HTEKSLSHSPGK
HBoV2 ‑CL 51 RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINV
KWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDE
YERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
HBoV2 ‑H链 52 QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWI
RQPSGKGLEWLTHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSSS
QVFLKIASVDTADTAAYYCARIVGYYASRDALDYWGQGT
SVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYF
PEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPS
STWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTV
PEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEV
QFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQD
WLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTI
PPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAEN
YKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLH
EGLHNHHTEKSLSHSPGK
HBoV2 ‑L链 53 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSAYSYMHW
YQQRPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLN
IHPVEEEDAATYYCQHSRELPWTFGGGTKLEIKRADAAP
TVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDG
SERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNS
YTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
HBoV2 ‑HCDR1编码 54 GGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGT
序列
HBoV2 ‑HCDR2编码 55 ATTTGGTGGGATGATGTCAAG
序列
HBoV2 ‑HCDR3编码 56 GCTCGAATAGTGGGATACTACGCTAGTAGGGATGCTTTG
序列 GACTAC
HBoV2 ‑LCDR1编码 57 AAAAGTGTCAGTACATCTGCCTATAGTTAT
序列
HBoV2 ‑LCDR2编码 ‑ CTTGCATCC
序列
HBoV2 ‑LCDR3编码 58 CAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACG
序列
HBoV2 ‑VH基因 59 CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAG
CCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGG
TTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATT
CGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGACACAC
ATTTGGTGGGATGATGTCAAGCGCTATAACCCAGCCCTG
AAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGCAGC
CAGGTATTCCTCAAGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGAT
ACTGCCGCATACTACTGTGCTCGAATAGTGGGATACTAC
GCTAGTAGGGATGCTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACC
TCAGTCACCGTCTCCTCA
HBoV2 ‑VL基因 60 GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTA
TCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGC
AAAAGTGTCAGTACATCTGCCTATAGTTATATGCACTGG
TACCAACAGAGACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATC
TATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGG
TTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAAC
ATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTAC
TGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGA
GGCACCAAGCTGGAAATCAAA
HBoV2 ‑CH基因 61 GCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCT
GGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGA
TGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTG
ACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGCGGTGTGCACACC
TTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACTCTGAGC
AGCTCAGTGACTGTCCCCTCCAGCACCTGGCCCAGCGAG
ACCGTCACCTGCAACGTTGCCCACCCGGCCAGCAGCACC
AAGGTGGACAAGAAAATTGTGCCCAGGGATTGTGGTTGT
AAGCCTTGCATATGTACAGTCCCAGAAGTATCATCTGTC
TTCATCTTCCCCCCAAAGCCCAAGGATGTGCTCACCATT
ACTCTGACTCCTAAGGTCACGTGTGTTGTGGTAGACATC
AGCAAGGATGATCCCGAGGTCCAGTTCAGCTGGTTTGTA
GATGATGTGGAGGTGCACACAGCTCAGACGCAACCCCGG
GAGGAGCAGTTCAACAGCACTTTCCGCTCAGTCAGTGAA
CTTCCCATCATGCACCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAG
TTCAAATGCAGGGTCAACAGTGCAGCTTTCCCTGCCCCC
ATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGCAGACCGAAG
GCTCCACAGGTGTACACCATTCCACCTCCCAAGGAGCAG
ATGGCCAAGGATAAAGTCAGTCTGACCTGCATGATAACA
GACTTCTTCCCTGAAGACATTACTGTGGAGTGGCAGTGG
AATGGGCAGCCAGCGGAGAACTACAAGAACACTCAGCCC
ATCATGGACACAGATGGCTCTTACTTCGTCTACAGCAAG
CTCAATGTGCAGAAGAGCAACTGGGAGGCAGGAAATACT
TTCACCTGCTCTGTGTTACATGAGGGCCTGCACAACCAC
CATACTGAGAAGAGCCTCTCCCACTCTCCTGGTAAA
HBoV2 ‑CL基因 62 CGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCCATCTTCCCACCA
TCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTG
TGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTC
AAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTC
CTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACC
TACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAG
TATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCAC
AAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGG
AATGAGTGT
HBoV2 ‑H链基因 63 CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAG
CCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGG
TTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATT
CGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGACACAC
ATTTGGTGGGATGATGTCAAGCGCTATAACCCAGCCCTG
AAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGCAGC
CAGGTATTCCTCAAGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGAT
ACTGCCGCATACTACTGTGCTCGAATAGTGGGATACTAC
GCTAGTAGGGATGCTTTGGACTACTGGGGTCAAGGAACC
TCAGTCACCGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCT
GTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAAC
TCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTC
CCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCTGGATCCCTG
TCCAGCGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCT
GACCTCTACACTCTGAGCAGCTCAGTGACTGTCCCCTCC
AGCACCTGGCCCAGCGAGACCGTCACCTGCAACGTTGCC
CACCCGGCCAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGTG
CCCAGGGATTGTGGTTGTAAGCCTTGCATATGTACAGTC
CCAGAAGTATCATCTGTCTTCATCTTCCCCCCAAAGCCC
AAGGATGTGCTCACCATTACTCTGACTCCTAAGGTCACG
TGTGTTGTGGTAGACATCAGCAAGGATGATCCCGAGGTC
CAGTTCAGCTGGTTTGTAGATGATGTGGAGGTGCACACA
GCTCAGACGCAACCCCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACT
TTCCGCTCAGTCAGTGAACTTCCCATCATGCACCAGGAC
TGGCTCAATGGCAAGGAGTTCAAATGCAGGGTCAACAGT
GCAGCTTTCCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA
ACCAAAGGCAGACCGAAGGCTCCACAGGTGTACACCATT
CCACCTCCCAAGGAGCAGATGGCCAAGGATAAAGTCAGT
CTGACCTGCATGATAACAGACTTCTTCCCTGAAGACATT
ACTGTGGAGTGGCAGTGGAATGGGCAGCCAGCGGAGAAC
TACAAGAACACTCAGCCCATCATGGACACAGATGGCTCT
TACTTCGTCTACAGCAAGCTCAATGTGCAGAAGAGCAAC
TGGGAGGCAGGAAATACTTTCACCTGCTCTGTGTTACAT
GAGGGCCTGCACAACCACCATACTGAGAAGAGCCTCTCC
CACTCTCCTGGTAAA
HBoV2 ‑L链基因 64 GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTA
TCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGC
AAAAGTGTCAGTACATCTGCCTATAGTTATATGCACTGG
TACCAACAGAGACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATC
TATCTTGCATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGG
TTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAAC
ATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTAC
TGTCAGCACAGTAGGGAGCTTCCGTGGACGTTCGGTGGA
GGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGATGCTGCACCA
ACTGTATCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACA
TCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTC
TACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGC
AGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGAT
CAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACC
CTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGC
TATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCC
ATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
HBoV2 ‑H链前导序 65 MGRLTSSFLLLIVPAYVLS
列
HBoV2 ‑H链前导序 66 ATGGGCAGGCTTACTTCTTCATTCCTGCTACTGATTGTC
列编码基因 CCTGCATATGTCCTGTCC
HBoV2 ‑L链前导序 67 METDTLLLWVLLLWVPGSTG
列
HBoV2 ‑L链前导序 68 ATGGAGACAGACACACTCCTGTTATGGGTACTGCTGCTC
列编码基因 TGGGTTCCAGGTTCCACTGGT
HBoV1 DR2抗原肽 69 IENELADLDGNAAGGNATEKALLYQM
HBoV2 DR2抗原肽 70 VIHELAEMEDANAVEKAIALQI
HBoV1 VP3基因的 71 AAGCAGATGCCTCCA
PCR扩增引物VP3F1
HBoV1 VP3基因的 72 CACCCTTCACTTTCCGC
PCR扩增引物VP3R1
HBoV1 VP3基因的 73 CCCAAGCTTCTGTCTGACACTGACATTCAA
PCR扩增引物VP3F2
HBoV1 VP3基因的 74 CCCTCGAGTTACAACACTTTATTGATGTTTG
PCR扩增引物VP3R2
HBoV2 VP3基因的 75 ATAACGAGCCTAAACCAG
PCR扩增引物VP3F1
HBoV2 VP3基因的 76 AATGTATGCTCTTTCGTT
PCR扩增引物VP3R1
HBoV2 VP3基因的 77 GAAGACGCAAATGCTGTA
PCR扩增引物VP3F2
HBoV2 VP3基因的 78 CTGTGTTTCCGTGCTGTC
PCR扩增引物VP3R2
HBoV2 VP3基因的 79 GACAGCACGGAAACACAG
PCR扩增引物VP3F3
HBoV2 VP3基因的 80 ATGCCTGACGCAGTACA
PCR扩增引物VP3R3
74所示,用于扩增HBoV2 VP3基因的引物序列如SEQ ID NO: 75~80所示。
将小鼠脾脏细胞制备成单细胞悬液(约1×10);同时取生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞(约1×
7
10)5:1比例混匀,离心后弃上清,快速转移至37°C水浴。吹打均匀分散细胞,37°C培养10天。
隆制备腹水。收集杂交瘤细胞(1×10)注射于小鼠腹腔,一周后取腹腔肿大者采集腹水,采集到的腹水离心,收集上清保存;同时,选取2株稳定传代的产单克隆抗体的细胞株,根据Proteintech公司Mouse单克隆抗体亚型鉴定试剂盒说明书操作,验证其抗体亚型种类,并进行测序。