一种温肺化纤颗粒剂及其制备方法

摘要

本发明提供一种温肺化纤颗粒剂及其制备方法，所述温肺化纤颗粒剂包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄20‑25份、鹿角霜16‑20份、炒白芥子12‑15份、生麻黄12‑15份、肉桂4‑6份、炮姜12‑15份、红花12‑15份、地龙12‑15份、土鳖虫10‑14份、川芎12‑15份、燀桃仁10‑14份、炙甘草5‑7份；所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1。本发明采用麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉作为辅料，且具体限定辅料中各组分的重量配比，同时限定主成分与辅料的重量配比，配合本发明优化的制备工艺，能够改善制粒效果，且提升制备得到的颗粒剂的药效。

权利要求

1.一种温肺化纤颗粒剂，其特征在于，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄20‑25份、鹿角霜16‑20份、炒白芥子12‑15份、生麻黄12‑15份、肉桂4‑6份、炮姜

12‑15份、红花12‑15份、地龙12‑15份、土鳖虫10‑14份、川芎12‑15份、燀桃仁10‑14份、炙甘草5‑7份；

所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

所述主成分与辅料的重量配比为：

主成分：辅料=（2‑3）：1。

2.根据权利要求1所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）按比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8 8.5倍量水，煎煮1~小时，第二次加5 5.5倍量水，煎煮1小时，合并提取液，滤过，将滤液减压浓缩至60℃下相对~密度为1.08～1.12的浸膏；

（2）对浸膏进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为140‑160℃，进料流速为12‑16r/min，雾化压强为0.2Mpa，得到含水量<8%的浸膏粉；

（3）向浸膏粉加入辅料、润湿剂、矫味剂，混合制粒，再过14目筛，得到湿颗粒；

（4）对湿颗粒进行干燥，制成温肺化纤颗粒剂。

3.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度75 80℃，时间12h。

~

4.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（1）具体包括：按比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8 8.5倍量水，煎煮1小~时，以200目滤布滤过，第二次加5 5.5倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，合并提取液，~滤过，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.08～1.12的浸膏。

5.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，润湿剂为60%乙醇，浸膏粉与润湿剂的重量配比为：浸膏粉：润湿剂=3：1。

6.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，矫味剂为三氯蔗糖，矫味剂的加入量为浸膏粉的0.2%。

7.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，混合制粒的条件为：搅拌浆速度为100‑150rpm，制粒刀速度为1000‑1500rpm，混合3min。

8.根据权利要求2所述的温肺化纤颗粒剂的制备方法，其特征在于，步骤（4）中干燥条件为：70℃，2h。

说明书

一种温肺化纤颗粒剂及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中医药领域，特别是涉及一种温肺化纤颗粒剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 肺纤维化是肺部正常组织被过度增生的纤维组织取代的过程，临床表现为原因不明的慢性劳力性呼吸困难，并且伴有咳嗽、双肺底爆裂音和杵状指、低氧血症。中医认为特发性肺纤维化的患者多为素体阳虚，或为长期久咳或大病久病之后，损及肺脏生机，肺气虚寒，不能布津，或为病至后期，累及脾肾心之阳，出现阳虚水泛，或阴损及阳、阴阳两虚，致聚湿生痰，寒凝血瘀，形成阳虚为本，痰瘀为标之证，故治疗方法着重温阳散寒，化痰行瘀。

[0003] 温肺化纤汤补血与温阳合用，祛痰与通络相伍，有温阳补血、散寒通滞之功，申请人前期研究结果表明温肺化纤汤能通过Akt/Nrf2/HO‑1信号通路抑制肺间充质干细胞在氧化应激环境下的凋亡，且能通过PINK1/Parkin信号通路调控其线粒体质量，最终改善肺间充质干细胞的活力，达到治疗肺间质纤维化的效果。

[0004] 温肺化纤汤剂虽然可以充分发挥中药复方多成分的综合疗效，吸收快，制备方法简单，但是存在留置易发霉变质稳定性差，携带不方便，服用体积大，口感不佳患者顺应差等缺点，因此，针对汤剂存在的问题，需要研制成颗粒剂，然而现有的制备温肺化纤颗粒剂的方法，例如公开号为CN104940883A的中国发明专利，还存在制粒效果差，制备得到的颗粒剂药效有待提升的问题。

发明内容

[0005] 为此，本发明提出一种温肺化纤颗粒剂及其制备方法，以解决现有技术制粒效果差，制备得到的颗粒剂药效有待提升的问题。

[0006] 本发明的一方面提供一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄20‑25份、鹿角霜16‑20份、炒白芥子12‑15份、生麻黄12‑15份、肉桂4‑6份、炮姜12‑15份、红花12‑15份、地龙12‑15份、土鳖虫10‑14份、川芎12‑15份、燀桃仁10‑14份、炙甘草5‑7份；

[0007] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0008] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0009] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0010] 主成分：辅料=（2‑3）：1。

[0011] 本发明另一方面提供上述温肺化纤颗粒剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

[0012] （1）按比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8 8.5倍量水，煎~煮1小时，第二次加5 5.5倍量水，煎煮1小时，合并提取液，滤过，将滤液减压浓缩至60℃下~
相对密度为1.08～1.12的浸膏；

[0013] （2）对浸膏进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为140‑160℃，进料流速为12‑16r/min，雾化压强为0.2Mpa，得到含水量<8%的浸膏粉；

[0014] （3）向浸膏粉加入辅料、润湿剂、矫味剂，混合制粒，再过14目筛，得到湿颗粒；

[0015] （4）对湿颗粒进行干燥，制成温肺化纤颗粒剂。

[0016] 本发明提供的温肺化纤颗粒剂的制备方法，采用麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉作为辅料，且具体限定辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；同时限定主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=（2‑3）：1，配合本发明优化的制备工艺，首先将主成分加水煎煮两次，合理设置加水量和煎煮时间，并将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.08～1.12的浸膏，然后在限定的条件下进行喷雾干燥，得到含水量<8%的浸膏粉，再加入辅料、润湿剂、矫味剂，混合制粒，再过14目筛，得到湿颗粒，最后对湿颗粒进行干燥，制成温肺化纤颗粒剂，实验结果表明，该方法改善了制粒效果，且提升了制备得到的颗粒剂的药效。

附图说明

[0017] 图1是芥子碱HPLC图，其中，A为阴性样品溶液，B为对照品溶液，C为供试品溶液；

[0018] 图2是芥子碱含量测定的线性回归方程；

[0019] 图3是小鼠的体重、体重增长率的变化图；

[0020] 图4是小鼠的肺重、肺重指数、脾重、脾重指数图；

[0021] 图5是小鼠的细胞因子指标和免疫球蛋白指标图；

[0022] 图6是小鼠的HE染色结果图；

[0023] 图7是小鼠的Masson染色结果图；

[0024] 图8是小鼠的COL1A1、TNF‑α、α‑SMA免疫组化结果图。

具体实施方式

[0025] 为了便于理解本发明，下面将参照各实施例对本发明进行更全面的描述，但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。

[0026] 除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

[0027] 下面分多个实施例对本发明实施例进行进一步的说明。本发明实施例不限定于以下的具体实施例。在不变主权利的范围内，可以适当的进行变更实施。

[0028] 实施例1：

[0029] 一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄20份、鹿角霜18份、炒白芥子14份、生麻黄12份、肉桂5份、炮姜13份、红花14份、地龙15份、土鳖虫12份、川芎13份、燀桃仁12份、炙甘草6份；

[0030] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0031] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0032] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0033] 主成分：辅料=2：1。

[0034] 实施例2：

[0035] 一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄22份、鹿角霜16份、炒白芥子12份、生麻黄13份、肉桂6份、炮姜15份、红花12份、地龙12份、土鳖虫10份、川芎15份、燀桃仁10份、炙甘草7份；

[0036] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0037] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0038] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0039] 主成分：辅料=3：1。

[0040] 实施例3：

[0041] 一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄25份、鹿角霜20份、炒白芥子13份、生麻黄15份、肉桂6份、炮姜15份、红花15份、地龙14份、土鳖虫14份、川芎12份、燀桃仁14份、炙甘草7份；

[0042] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0043] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0044] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0045] 主成分：辅料=2：1。

[0046] 实施例4：

[0047] 一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄22份、鹿角霜18份、炒白芥子15份、生麻黄14份、肉桂4份、炮姜12份、红花13份、地龙14份、土鳖虫12份、川芎13份、燀桃仁12份、炙甘草6份；

[0048] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0049] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0050] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0051] 主成分：辅料=2：1。

[0052] 实施例5：

[0053] 一种温肺化纤颗粒剂，包括主成分和辅料，按重量份数计，所述主成分包括熟地黄20份、鹿角霜16份、炒白芥子12份、生麻黄12份、肉桂4份、炮姜14份、红花13份、地龙12份、土鳖虫12份、川芎14份、燀桃仁14份、炙甘草5份；

[0054] 所述辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0055] 麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；

[0056] 所述主成分与辅料的重量配比为：

[0057] 主成分：辅料=3：1。

[0058] 实施例6

[0059] 一种温肺化纤颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

[0060] （1）按实施例1的比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，第二次加5倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，合并提取液，滤过，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.08的浸膏，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度75℃，时间12h；

[0061] （2）对浸膏进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为140℃，进料流速为12r/min，雾化压强为0.2Mpa，得到含水量<8%的浸膏粉；

[0062] （3）向浸膏粉加入辅料、60%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒，混合制粒的条件为：搅拌浆速度为100rpm，制粒刀速度为1000rpm，混合3min，再过14目筛，得到湿颗粒，浸膏粉与60%乙醇的重量配比为：浸膏粉：60%乙醇=3：1，矫味剂的加入量为浸膏粉的0.2%；

[0063] （4）对湿颗粒进行干燥，干燥条件为：70℃，2h，制成温肺化纤颗粒剂。

[0064] 实施例7

[0065] 一种温肺化纤颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

[0066] （1）按实施例1的比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8.5倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，第二次加5倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，合并提取液，滤过，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.12的浸膏，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度80℃，时间12h；

[0067] （2）对浸膏进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为150℃，进料流速为16r/min，雾化压强为0.2Mpa，得到含水量<8%的浸膏粉；

[0068] （3）向浸膏粉加入辅料、60%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒，混合制粒的条件为：搅拌浆速度为120rpm，制粒刀速度为1200rpm，混合3min，再过14目筛，得到湿颗粒，浸膏粉与60%乙醇的重量配比为：浸膏粉：60%乙醇=3：1，矫味剂的加入量为浸膏粉的0.2%；

[0069] （4）对湿颗粒进行干燥，干燥条件为：70℃，2h，制成温肺化纤颗粒剂。

[0070] 实施例8

[0071] 一种温肺化纤颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

[0072] （1）按实施例1的比例称取主成分和辅料，将主成分加水煎煮两次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，第二次加5.5倍量水，煎煮1小时，以200目滤布滤过，合并提取液，滤过，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度75℃，时间12h；

[0073] （2）对浸膏进行喷雾干燥，喷雾干燥的进风温度为160℃，进料流速为14r/min，雾化压强为0.2Mpa，得到含水量<8%的浸膏粉；

[0074] （3）向浸膏粉加入辅料、60%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒，混合制粒的条件为：搅拌浆速度为150rpm，制粒刀速度为1500rpm，混合3min，再过14目筛，得到湿颗粒，浸膏粉与60%乙醇的重量配比为：浸膏粉：60%乙醇=3：1，矫味剂的加入量为浸膏粉的0.2%；

[0075] （4）对湿颗粒进行干燥，干燥条件为：70℃，2h，制成温肺化纤颗粒剂。

[0076] 实施例9

[0077] 实施例9与实施例6基本一致，不同之处在于，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度80℃，时间12h。

[0078] 实施例10

[0079] 实施例10与实施例6基本一致，不同之处在于，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.12的浸膏。

[0080] 实施例11

[0081] 实施例11与实施例6基本一致，不同之处在于，喷雾干燥的进风温度为160℃。

[0082] 实施例12

[0083] 实施例12与实施例6基本一致，不同之处在于，喷雾干燥的进料速度为16r/min。

[0084] 实施例13

[0085] 实施例13与实施例6基本一致，不同之处在于，主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=3：1。

[0086] 实施例14

[0087] 实施例14与实施例6基本一致，不同之处在于，搅拌浆速度为150rpm。

[0088] 实施例15

[0089] 实施例15与实施例6基本一致，不同之处在于，制粒刀速度为1500rpm。

[0090] 对照例1

[0091] 对照例1与实施例6基本一致，不同之处在于，第一次加5倍量水。

[0092] 对照例2

[0093] 对照例2与实施例6基本一致，不同之处在于，第一次加11倍量水。

[0094] 对照例3

[0095] 对照例3与实施例6基本一致，不同之处在于，第一次煎煮时间为1.5h。

[0096] 对照例4

[0097] 对照例4与实施例6基本一致，不同之处在于，第一次煎煮时间为2h。

[0098] 对照例5

[0099] 对照例5与实施例6基本一致，不同之处在于，第二次加4.5倍量水。

[0100] 对照例6

[0101] 对照例6与实施例6基本一致，不同之处在于，第二次加6倍量水。

[0102] 对照例7

[0103] 对照例7与实施例6基本一致，不同之处在于，第二次煎煮时间为1.5h。

[0104] 对照例8

[0105] 对照例8与实施例6基本一致，不同之处在于，第二次煎煮时间为2h。

[0106] 对照例9

[0107] 对照例9与实施例6基本一致，不同之处在于，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度70℃，时间12h。

[0108] 对照例10

[0109] 对照例10与实施例6基本一致，不同之处在于，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度85℃，时间12h。

[0110] 对照例11

[0111] 对照例11与实施例6基本一致，不同之处在于，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.06的浸膏。

[0112] 对照例12

[0113] 对照例12与实施例6基本一致，不同之处在于，将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.14的浸膏。

[0114] 对照例13

[0115] 对照例13与实施例6基本一致，不同之处在于，喷雾干燥的进风温度为120℃。

[0116] 对照例14

[0117] 对照例14与实施例6基本一致，不同之处在于，喷雾干燥的进风温度为180℃。

[0118] 对照例15

[0119] 对照例15与实施例6基本一致，不同之处在于，进料速度为8r/min。

[0120] 对照例16

[0121] 对照例16与实施例6基本一致，不同之处在于，进料速度为20r/min。

[0122] 对照例17

[0123] 实施例17与实施例6基本一致，不同之处在于，主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=1：1。

[0124] 对照例18

[0125] 对照例18与实施例6基本一致，不同之处在于，主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=4：1。

[0126] 对照例19

[0127] 对照例19与实施例6基本一致，不同之处在于，主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=9：1。

[0128] 对照例20

[0129] 对照例20与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料为麦芽糊精。

[0130] 对照例21

[0131] 对照例21与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料为环糊精。

[0132] 对照例22

[0133] 对照例22与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料为蔗糖粉。

[0134] 对照例23

[0135] 对照例23与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料为可溶淀粉。

[0136] 对照例24

[0137] 对照例24与实施例6基本一致，不同之处在于，由麦芽糊精和环糊精，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0138] 麦芽糊精：环糊精=1：1。

[0139] 对照例25

[0140] 对照例25与实施例6基本一致，不同之处在于，由麦芽糊精和蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0141] 麦芽糊精：蔗糖粉=1：1。

[0142] 对照例26

[0143] 对照例26与实施例6基本一致，不同之处在于，由环糊精和蔗糖粉组成，所述辅料中各组分的重量配比为：

[0144] 环糊精：蔗糖粉=1：1。

[0145] 对照例27

[0146] 对照例27与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=1：0.5：0.5。

[0147] 对照例28

[0148] 对照例28与实施例6基本一致，不同之处在于，辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=1：1：1。

[0149] 对照例29

[0150] 对照例29与实施例6基本一致，不同之处在于，向浸膏粉加入辅料、50%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒。

[0151] 对照例30

[0152] 对照例30与实施例6基本一致，不同之处在于，向浸膏粉加入辅料、70%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒。

[0153] 对照例31

[0154] 对照例31与实施例6基本一致，不同之处在于，搅拌浆速度为90rpm。

[0155] 对照例32

[0156] 对照例32与实施例6基本一致，不同之处在于，搅拌浆速度为200rpm。

[0157] 对照例33

[0158] 对照例33与实施例6基本一致，不同之处在于，制粒刀速度为900rpm。

[0159] 对照例34

[0160] 对照例34与实施例6基本一致，不同之处在于，制粒刀速度为1700rpm。

[0161] 对照例35

[0162] 对照例35与实施例6基本一致，不同之处在于，干燥条件为：60℃，1h。

[0163] 对照例36

[0164] 对照例36与实施例6基本一致，不同之处在于，干燥条件为：60℃，2h。

[0165] 对照例37

[0166] 对照例37与实施例6基本一致，不同之处在于，干燥条件为：70℃，1h。

[0167] 对照例38

[0168] 按照实施例1的比例称取主成分，然后采用公开号为CN104940883A的中国发明专利中的制粒方法，具体为：

[0169] 第一步，称取熟地黄20份、鹿角霜18份、炒白芥子14份、生麻黄12份、肉桂5份、炮姜13份、红花14份、地龙15份、土鳖虫12份、川芎13份、燀桃仁12份、炙甘草6份，加水煎煮，加水煎煮分为两次，两次煎煮的第一次煎煮为80分钟，第二次煎煮为100分钟，两次煎煮后分别将两次煎液过滤后合并浓缩至密度为1.1g/mL的浓缩液；

[0170] 第二步，向浓缩液加入乙醇至乙醇体积分数为 60% 进行醇沉，然后过滤，浓缩至密度为 1.14g/mL，然后干燥得到干粉；

[0171] 第三步，将干粉与糊精混合后加入安赛蜜，干粉、糊精与安赛蜜的质量比为500：1000：3，然后加入体积分数为85%的乙醇干燥，然后加水制成颗粒，得到温肺化纤颗粒剂。

[0172] 下面对本发明进行验证

[0173] 实验1 评价制粒效果标准的选择

[0174] 根据温肺化纤方解可知，君药为鹿角霜、熟地黄，臣药为生麻黄、白芥子、肉桂、炮姜，佐药为桃仁、红花、川芎、地龙、土鳖虫，使药为炙甘草。本发明采用芥子碱作为评价制粒效果的标准。

[0175] 验证芥子碱作为评价制粒效果的可行性：

[0176] 1.1 对照品溶液的制备

[0177] 精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品适量，加乙腈‑0.08mol·L‑1磷酸二氢钾溶液（10:90）配制成每1 mL含0.2139mg 的对照品溶液。

[0178] 1.2 供试品溶液的制备

[0179] 取实施例6得到的温肺化纤颗粒剂，制备出温肺化纤颗粒浓缩液，摇匀，取适量离心（10000r，10min）取上清液，微孔滤膜（0.22µm）滤过，得到供试品溶液。

[0180] 1.3 阴性样品溶液的制备

[0181] 根据已公开的温肺化纤汤处方，制备不含白芥子的阴性样品，加10倍量水，提取1次，每次1h，提取滤过后，得水提液，摇匀，取适量离心（10000r，10min）取上清液，微孔滤膜（0.22µm）滤过，得到阴性样品溶液。

[0182] 1.4 色谱条件

[0183] C18色谱柱（Diamonsil 5μm C18，250*4.6mm），流动相乙腈‑0.08mol/L磷酸（12:‑1
88），流速1.0mL·min ，检测波长326nm；柱温30℃；进样量：10μL。

[0184] 1.5 系统适应性试验

[0185] 分别取阴性样品溶液、供试品溶液及对照品溶液，在1.4的色谱条件下进样测定，结果见图1。

[0186] 从图1可知，供试品溶液和芥子碱硫氰酸盐对照品的出峰位置在相同保留时间处有对应峰，而阴性对照品无对应峰，说明样品中其他成分对芥子碱成分的测定无干扰，结果初步表明采用芥子碱作为评价制粒效果可行。

[0187] 1.6 线性关系试验

[0188] 精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液适量，稀释成系列浓度的对照品溶液，依1.4色谱条件进样，记录色谱峰峰面积。以对照品浓度(X)为横坐标、色谱峰峰面积(Y)为纵坐2
标，绘制标准曲线，得芥子碱硫氰酸盐对照品的回归方程为Y=3E+07x‑51669，R=0.9999，由‑1
相关系数说明芥子碱含量在0.0086～0.2139 mg·mL 之间呈良好的线性关系，结果见图2和表1。

[0189] 表1 芥子碱与峰面积线性关系

[0190]

[0191] 1.7 精密度试验

[0192] 精密吸取芥子碱硫氰酸盐对照品溶液10μL，按确定色谱条件重复进样6次，分别记录峰面积值。结果见表2。

[0193] 表2 精密度试验结果

[0194]

[0195] 从表2可知，芥子碱峰面积的RSD为0.17%，表明仪器的精密度良好。

[0196] 1.8 重复性试验

[0197] 取同一批号样品按1.2中方法平行制备供试品溶液6份，在确定色谱条件下进行测定，记录峰面积，结果见表3。

[0198] 表3 重复性试验结果

[0199]

[0200] 从表3可知，芥子碱的峰面积RSD为0.81%，表明重复性良好。

[0201] 1.9 稳定性试验

[0202] 取同一供试品溶液适量，室温放置0、2、4、8、12、16、20、24h，分别进样10μL，测定其峰面积。结果见表4。

[0203] 表4

[0204]

[0205] 从表4可知，芥子碱的峰面积RSD为1.09％，表明芥子碱在24h内稳定。

[0206] 1.10 加样回收率试验

[0207] 称取已知含量温肺化纤汤样品溶液约5mL，精密量取，加入一定量的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液，按样品方法制备，在确定色谱条件下进行测定，结果见表5。

[0208] 表5 加样回收率试验结果（n=6）

[0209]

[0210] 由表5可知，样品的平均回收率99.98%，且RSD为1.07%，表明方法的准确性高。

[0211] 以上结果最终表明采用芥子碱作为评价制粒效果可行。

[0212] 实验2

[0213] 在实施例6、实施例7、对照例1、对照例2、对照例38中，第一次煎煮后，取滤液分别测定浸膏含固量和芥子碱的含量，计算芥子碱的转移率及浸膏得率，结果见表6。

[0214] 表6

[0215]

[0216] 从表6可知，指标成分转移率与浸膏得率随着加水量的增大相应的提高，实施例6、7与对照例1、2相比，其指标芥子碱转移率和浸膏得率增加较多，而加8.5倍水煎煮与11倍水相比，其指标芥子碱转移率和浸膏得率增加不明显，从生产周期和节约能耗考虑，所以第一煎煮确定加水8 8.5倍量。此外，实施例6与对照例38相比，第一次煎煮后，实施例6的芥子碱~
转移率和浸膏得率均优于对照例38。

[0217] 实验3

[0218] 在实施例6、对照例3、对照例4中，第一次煎煮后，取滤液分别测定浸膏含固量和芥子碱的含量，计算芥子碱的转移率及浸膏得率，结果见表7。

[0219] 表7

[0220]

[0221] 由表7可知，随着第一次煎煮时间的增大，指标成分转移率和浸膏得率变化不明显，考虑生产周期，所以确定第一次煎煮时间为1小时。

[0222] 实验4

[0223] 在实施例6、实施例8、对照例5、对照例6、对照例38中，第二次煎煮后，取滤液分别测定浸膏含固量和芥子碱的含量，计算芥子碱的转移率及浸膏得率，结果见表8。

[0224] 表8

[0225]

[0226] 从表8可知，指标成分转移率与浸膏得率随着加水量的增大相应的提高，实施例6、8与对照例5、6相比，其指标芥子碱转移率和浸膏得率增加较多，而加5.5倍水煎煮与6倍水相比，其指标芥子碱转移率和浸膏得率增加不明显，从生产周期和节约能耗考虑，所以第二煎煮确定加水5 5.5倍量。此外，实施例6与对照例38相比，第二次煎煮后，实施例6的芥子碱~
转移率和浸膏得率均优于对照例38。

[0227] 实验5

[0228] 在实施例6、对照例7、对照例8中，第二次煎煮后，取滤液分别测定浸膏含固量和芥子碱的含量，计算芥子碱的转移率及浸膏得率，结果见表9。

[0229] 表9

[0230]

[0231] 由表9可知，随着提取时间的增大，指标成分转移率和浸膏得率变化不明显，考虑生产周期，所以确定第二次煎煮时间为1小时。

[0232] 实验6

[0233] 对于实施例6、实施例9、对照例9、对照例10中得到的浸膏以及对照例38得到的浓缩液，分别于设定时间点（0、1、3、5、7、12h）进行取样，然后测定芥子碱降解百分比。数据见表10。

[0234] 表10 芥子碱降解百分比

[0235]

[0236] 由表10可知，温肺化纤汤提取液中芥子碱降解百分率随浓缩温度升高而升高，当温度升高至85℃（对照例10），芥子碱7小时降解了10%以上，导致药物超过了有效期。芥子碱在不同温度下随着浓缩时间的延长呈下降趋势，当温度为75℃或80℃时（实施例6和实施例9），浓缩液浓缩12小时芥子碱含量仅下降了约5%，因此，减压浓缩的条件为：压强0.08Mpa，温度85℃，时间12h。此外，实施例6与对照例38相比，对照例38，芥子碱7小时的降解超过了
10%，实施例6优于对照例38。

[0237] 实验7

[0238] 收集实施例6、实施例10、对照例11、对照例12中喷雾干燥后的喷雾浸膏粉以及对照例38干燥得到的干粉，计算得粉率，测定浸膏粉的含水量，结果见表11。

[0239] 表11

[0240]

[0241] 由表11可知，随着药液相对密度的升高，喷雾浸膏粉的含水量变化不大，但是得粉率有下降趋势，因此考虑生产顺利性以及药液浓缩的便利性，确定药液的相对密度控制在1.08‑1.12（60℃）。此外，实施例6与对照例38相比，实施例6的含水量小于对照例38，实施例
6的得粉率大于对照例38，实施例6优于对照例38。

[0242] 实验8

[0243] 收集实施例6、实施例11、对照例13、对照例14中喷雾干燥后的喷雾浸膏粉，计算得粉率，测定浸膏粉的含水量以及出风温度，结果见表12。

[0244] 表12

[0245]

[0246] 由表12可知，随着进风温度的升高，出风温度逐渐上升，浸膏粉含水量逐渐降低；实施例6和实施例11的得粉率较高，且实施例6和实施例11未出现粘壁情况，因此，确定喷雾干燥进风温度为140‑160℃。

[0247] 实验9

[0248] 收集实施例6、实施例12、对照例15、对照例16中喷雾干燥后的喷雾浸膏粉，计算得粉率，测定浸膏粉的含水量以及出风温度，结果见表13。

[0249] 表13

[0250]

[0251] 由表13可知，随着进液流量的增加，出风温度逐渐降低，喷雾浸膏粉含水量逐渐升高，实施例6和实施例12的得粉率较高，因此，确定进料流速控制在12‑16r/min。

[0252] 实验10

[0253] 计算实施例6、实施例13、对照例17、对照例18、对照例19、对照例38的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表14。

[0254] 表14

[0255]

[0256] 由表14可知，实施例6和实施例13的制粒难易度最为容易、颗粒得率较高，因此，确定主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=（2 3）：1。此外，实施例6与对照例38相比，实~施例6的颗粒得率明显优于对照例38。

[0257] 实验11

[0258] 计算实施例6、对照例20、对照例21、对照例22、对照例23、对照例24、对照例25、对照例26的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表15。

[0259] 表15

[0260]

[0261] 由表15可知，实施例6的制粒难易度最为容易、颗粒得率较高，因此，确定辅料由麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉组成。

[0262] 实验12

[0263] 计算实施例6、对照例27、对照例28的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表16。

[0264] 表16

[0265]

[0266] 由表16可知，实施例6制粒难易度最为容易、颗粒得率最高，因此，确定辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1。

[0267] 实验13

[0268] 计算实施例6、对照例29、对照例30的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表17。

[0269] 表17

[0270]

[0271] 由表17可知，实施例6制粒难易度最为容易、颗粒得率最高，润湿剂乙醇浓度变化会对颗粒性质产生影响。当乙醇浓度为70%时，润湿剂较易分散，制粒较为容易。当乙醇浓度为50%时，润湿剂不易分散，软材易成团，制粒困难，因此，确定向浸膏粉加入辅料、60%乙醇、三氯蔗糖，混合制粒。

[0272] 实验14

[0273] 计算实施例6、实施例14、对照例31、对照例32的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表18。

[0274] 表18

[0275]

[0276] 由表18可知，实施例6和实施例14制粒容易、颗粒得率高，因此，确定搅拌浆速度为100 150rpm。
~

[0277] 实验15

[0278] 计算实施例6、实施例15、对照例33、对照例34的颗粒得率，并检测颗粒的溶化性，结果见表19。

[0279] 表19

[0280]

[0281] 由表19可知，实施例6和实施例15制粒容易、颗粒得率高，因此，确定搅拌浆速度为1000 1500rpm。
~

[0282] 实验16

[0283] 计算实施例6、对照例35、对照例36、对照例37、对照例38的颗粒含水量，结果见表20。

[0284] 表20

[0285]

[0286] 由表20可知，实施例6的颗粒含水量最低，因此，确定干燥条件为：70℃，2h。此外，实施例6与对照例38相比，实施例6的颗粒含水量明显低于对照例38。

[0287] 实验17

[0288] 通过检测C57BJ/6J小鼠肺脏病理变化，观察温肺化纤颗粒剂对C57BL/6J小鼠肺纤维化的干预作用

[0289] （1）实验动物

[0290] SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只[体质量（22±3）g]，日龄（42‑49）d，购买于湖南安生美药物研究有限公司，许可证号:SCXK(湘)：2019‑0004，合格证号：NO.20220824。饲养于江西中医药大学实验动物中心SFP级动物房，温度20℃～26℃，湿度（50±10）%。小鼠均可自由进食饮水。

[0291] （2）动物分组

[0292] 适应性喂养1周，通过SPSS20.0软件包生成随机数字表，将60只C57BL/6J小鼠随机分为4组，即模型组（以下简称BLM）、温肺化纤颗粒1组（以下简称WFHX1）、温肺化纤颗粒2组（以下简称WFHX2）、正常对照组（以下简称CTRL），每组10只。CTRL组小鼠给予正常小鼠饲料喂养，BLM组、WFHX1组和WFHX2组给予高磷饲料（磷1.2%，钙1.6%）。

[0293] （3）药物制备

[0294] 实验前根据“人与动物间的等效剂量换算”计算各给药组用药剂量，使用蒸馏水制备博来霉素，浓度为30mg/kg。温肺化纤颗粒1组中使用的颗粒由对照例38的方法制备得到，温肺化纤颗粒2组中使用的颗粒由实施例6的方法制备得到。

[0295] （4）给药

[0296] 温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组连续给药3周，日1次，每日清晨8点给药，并根据小鼠体重对给药进行调整，给药剂量如下：CTRL组和BLM组以双蒸水进行灌胃；温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组以温肺化纤颗粒悬液进行灌胃，各组药量均别为25.7(g/kg)。

[0297] （5）检测指标

[0298] （5.1）各组小鼠一般情况

[0299] 每周观察各组小鼠的一般情况，如摄食、摄水、精神状况、皮毛色泽、活动情况等。

[0300] （5.2）各组小鼠细胞因子及免疫球蛋白检测

[0301] 细胞因子及免疫球蛋白检测：实验结束，取肺脏，使用ELISA实验技术分别检测细胞因子IL‑1β,IL‑2,IL‑4,IL‑6,IL‑12,IL‑23,TGF‑β,TNF‑α,TFN‑γ以及免疫球蛋白IgA,IgG,IgM在各组间的表达情况。

[0302] 实验步骤：

[0303] 1)准备好空白、标准、待测样品多个孔。空白孔中加入0.1ml样品稀释液，剩余孔分别加标准品或待测样品0.1ml。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。

[0304] 2)弃去孔内液体，甩干，不用洗板，每孔中加入生物素化抗体工作液0.1ml，给酶标板加上覆膜，37℃温育60分钟。

[0305] 3)倒掉孔内液体，需要洗板3次，每次浸泡时间为30秒，每孔大约0.35ml洗板液，轻轻甩干孔内液，剩余孔内液体可用吸水纸吸干。

[0306] 4)每孔加酶结合物工作液0.1ml，工作液在使用前20分钟内配制好，并遮光保存，然后加覆膜，37℃温育30分钟。

[0307] 5)倒掉孔内液体，然后甩干，重复洗板5次。

[0308] 6)每个孔加入90μl显色剂（TMB），在酶标板加上覆膜，37℃遮光孵育15分钟。

[0309] 7)在每个酶标孔加入50μl终止液，终止反应，此时孔内蓝色立转黄色。

[0310] 8)用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度（OD值）。

[0311] 9)以横坐标为标准品浓度，纵坐标为OD值，借助软件绘制标准曲线及公式，将测得的样品OD值代入标准曲线公式，然后用计算出的数值除以样品相应蛋白浓度即为待测指标胰岛素的实际浓度。

[0312] （5.3）小鼠肺脏HE染色

[0313] 一、组织包埋

[0314] 1）小鼠肺脏组织于4%多聚甲醛中固定48h后，从4℃冰箱中取出备用；

[0315] 2）将肺脏组织块切成小块，以便放入样品盒中；

[0316] 3）脱水和透明：75%乙醇（1h）→95%乙醇I（1h）→95%乙醇II（1h）→100%无水乙醇I（30min）→100%无水乙醇II（30min）→二甲苯（20min）；

[0317] 4）烊化石蜡块：样本盒放入蜡块中，恒温箱60℃（60min）；

[0318] 5）对样本盒依次标号，放入组织块进行包埋，冷却固定后放入冰箱；

[0319] 二、石蜡切片

[0320] 石蜡切片切片前将水温维持在40‑45℃，30%乙醇溶液备用。准备完成后，将包埋好的组织蜡块置于切片机上，切片厚度为4μm，将切片机切开的蜡带放入乙醇溶液水面中，使切片展开。展开的切片再移置水浴锅的温水中，使切片充分展开。将已充分展开的切片放置载玻片上，并在磨面处写上标记，放入烤箱中60℃烤干过夜。

[0321] 三、HE染色方法

[0322] 1）脱蜡：烘烤干的切片二甲苯中脱蜡2次（每次20min）→100%乙醇（5min）→95%乙醇（5min）→85%乙醇（5min）→75%乙醇（5min）→自来水流水冲洗（3min）；

[0323] 2）染色：切片放入苏木精中染色（30min），自来水流水冲洗（15min），且过程中水流不宜过大，防止切片的脱落，待切片变成蓝色后停止冲洗；

[0324] 3）分化：切片放入1%盐酸乙醇液中褪色，待组织切片变红，且颜色变浅为宜，时间大约维持数十秒钟。褪色完成后，放入自来水再次冲洗，待切片再次恢复蓝色为止；

[0325] 4）脱水：取出切片放入50%乙醇（5min）→70%乙醇（5min）→80%乙醇（5min）中，进行不同浓度乙醇溶液梯度脱水；

[0326] 5）复染：取出切片置于0.5%伊红乙醇液染色3min；

[0327] 6）脱水：配置95%乙醇以吸取切片中多余的红色，接着放入100%乙醇溶液中3min。最后取出切片，擦去多余的乙醇溶液；

[0328] 7）透明：将切片放入二甲苯中透明5min；

[0329] 8）封片：中性树脂封片，并于显微镜下观察。

[0330] （5.4）小鼠肺脏Masson染色

[0331] 一、组织包埋

[0332] 1）取下小鼠新鲜心脏组织固定于4%多聚甲醛中48h；

[0333] 2）将组织块切成小块，以便放入样品盒中；

[0334] 3）脱水和透明：75%乙醇（1h）→95%乙醇I（1h）→95%乙醇II（1h）→100%无水乙醇I（30min）→100%无水乙醇II（30min）→二甲苯（20min）；

[0335] 4）烊化石蜡块：样本盒放入蜡块中，恒温箱60℃（60min）；

[0336] 5）对样本盒依次标号，放入组织块进行包埋，冷却固定后放入冰箱；

[0337] 二、石蜡切片

[0338] 石蜡切片切片前将水温维持在40‑45℃，30%乙醇溶液备用。准备完成后，将包埋好的组织蜡块置于切片机上，切片厚度为4μm，将切片机切开的蜡带放入乙醇溶液水面中，使切片展开。展开的切片再移置水浴锅的温水中，使切片充分展开。将已充分展开的切片放置载玻片上，并在磨面处写上标记，放入烤箱中60℃烤干过夜。

[0339] 三、Masson染色方法

[0340] 1）脱蜡：烘烤干的切片二甲苯中脱蜡2次（每次20min）→100%乙醇（5min）→95%乙醇（5min）→85%乙醇（5min）→75%乙醇（5min）→自来水流水冲洗（3min）；

[0341] 2）染细胞核：铁苏木素A液和铁苏木素B液等体积混匀，配置铁苏木素染液，染色3min，充分水洗；

[0342] 3）丽春红染色：置于丽春红染液中5‑10min，自来水冲洗数秒；

[0343] 4）磷钼酸分化：将切片置入磷钼酸中分化15min；

[0344] 5）苯胺蓝溶液染色：取出切片，置于苯胺蓝染液中5‑10min；

[0345] 6）冰醋酸分化：1%冰醋酸分化1min；

[0346] 7）脱水封片：使用95%、100%浓度乙醇进行梯度脱水5min，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明5min，滴入中性树脂封片。

[0347] 8）镜检：显微镜下观察组织形态，选取部位拍照。ImageJ进行计算统计纤维化面积半定量。

[0348] （5.5）小鼠肺脏免疫组化实验

[0349] 1）石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入脱蜡液Ⅰ 15min‑脱蜡液Ⅱ 15min‑脱蜡液III 15min‑无水乙醇Ⅰ 5min‑无水乙醇Ⅱ 5min‑85%酒精5min‑75%酒精5min‑蒸馏水洗。

[0350] 2）抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

[0351] 3）阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

[0352] 4）血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA均匀覆盖组织，室温封闭30min，一抗是山羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用BSA封闭。

[0353] 5）加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜，（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。

[0354] 6）加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。

[0355] 7）DAB显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。

[0356] 8）复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。

[0357] 9）脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min‑‑85%酒精5min‑‑无水乙醇Ⅰ5min‑‑无水乙醇Ⅱ 5min‑‑正丁醇5min‑‑二甲苯Ⅰ 5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，封片胶。

[0358] （5.6）统计学方法

[0359] 实验数据的分析采用SPSS20.0统计软件包，实验数据的结果使用均数±标准差（）表示，运用单因素方差分析（one‑wayANOVA）对多组间结果进行比较，以P<0.05具有统计学差异，实验所需的图片采用AdobePhotoshopCS6和GraphPadPrism8进行绘制，采用ImageJ软件对心脏胶原纤维进行定量分析。

[0360] （6）实验结果

[0361] （6.1）大鼠一般情况

[0362] ⑴造模前：适应性喂养1周期间，各组大鼠一般情况良好，大鼠均能自由摄食摄水，毛发光泽，活动灵敏，性格温和，各组大鼠精神及体重等方面无明显差异。

[0363] ⑵造模后：正常组大鼠一般情况良好，大鼠摄食摄水无明显变化，皮毛顺滑清洁，反应敏捷，四肢肌力正常，日常观察大鼠精神状况良好，排便无明显改变。剩余各组大鼠变化明显，以摄食量上升、毛发粗糙、日常活动度增多、精神亢奋、排便增加、灌胃时剧烈抵抗、体重较正常组明显下降。

[0364] ⑶给药后：温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组上述情况改善，可见大鼠摄食量逐渐恢复，毛发渐显光泽，活动量减少，精神状态好转，灌胃时抵抗减弱，体重缓慢恢复，而模型对照组无明显改变。体重、体重增长率的变化见图3。

[0365] （6.2）小鼠的肺重和肺重/体重指标、脾重和脾重/体重指标

[0366] 在测定肺重和肺重/体重指标时，观察到模型组的肺重明显高于其他组别，且与其他组别相比具有显著性差异（p<0.05）。这表明在肺纤维化模型组中，肺组织受到显著影响，出现肺重增加的现象。而在温肺化纤颗粒1组、温肺化纤颗粒2组中，肺重均较模型组明显降低，显示出对肺纤维化的抑制效果，且温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组，肺重更加减轻。

[0367] 同时，在计算脾重和脾重/体重指标时，发现模型组的脾重明显低于其他组别，并且与其他组别相比也具有显著性差异（p<0.05）。这表明在肺纤维化模型组中，脾脏可能出现功能异常或受到抑制，导致脾重较其他组别显著降低。而在温肺化纤颗粒1组、温肺化纤颗粒2组中，脾重均较模型组显著增加，显示出对脾脏功能的保护和恢复效果，且温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组，脾重更加增加，具体见图4。

[0368] （6.3）小鼠细胞因子及免疫球蛋白检测

[0369] 在ELISA实验中，对不同治疗组的肺组织标本进行了相关炎性因子和免疫球蛋白的检测，以评估不同治疗对肺纤维化相关指标的影响。

[0370] 结果显示，模型组的肺组织中相关炎性因子（IL‑1β, IL‑2, IL‑4, IL‑6, IL‑12, IL‑23, TNF‑α, IFN‑γ , TGF‑β）的含量明显高于其他治疗组，表现出显著的炎症反应。而在温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组，相关炎性因子的含量相对较低，显示出抑制炎症的效果，且与模型组相比均有显著性差异（p<0.05），且温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组显示出好的抑制炎症效果。

[0371] 然而，在免疫球蛋白方面，模型组的IgA和IgG的含量明显高于其他治疗组，表明免疫反应的活跃程度较高。而在PFD组，虽然IgA和IgG的含量也有所降低，但与模型组相比差异不显著。而对于IgM指标，模型组的含量较其他组别低，与温肺化纤颗粒1组、温肺化纤颗粒2组之间无显著性差异。

[0372] 综合ELISA结果，可以得出结论：在相关炎性因子的含量上，模型组明显高于其他组别，温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组显示相对较好的抑制炎症效果，且温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组炎症抑制效果更加明显。然而，在免疫球蛋白方面，模型组的IgA和IgG含量较高，而温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组对IgA和IgG的影响不显著。需要注意的是，IgM指标在模型组较其他组别低，但在温肺化纤颗粒组间无显著性差异。这表明温肺化纤颗粒对相关炎性因子的调节效果较为显著，对免疫球蛋白也具有一定的影响，结果见图5。

[0373] （6.4）小鼠的HE染色结果

[0374] 经过HE染色观察，空白对照组的小鼠肺组织结构显示清晰，肺泡间隔正常，无明显的炎性细胞浸润。然而，博来霉素诱导后的模型组小鼠肺组织结构明显紊乱，肺间隔异常，肉眼可见大量炎性细胞浸润。对于温肺化纤颗粒1组和温肺化纤颗粒2组，在温肺化纤颗粒干预后，小鼠肺组织的炎症得到缓解，炎症细胞较模型组减少，同时肺结构也有所复原，且温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组HE染色效果更加趋于空白对照组，温肺化纤颗粒2组的肺泡结构明显清晰可见，炎性细胞浸润几乎消失，结果见图6。

[0375] （6.5）小鼠的Masson染色结果

[0376] 通过Masson染色观察，空白对照组的肺组织未见明显的胶原沉积，肺泡间隔正常，肺结构清晰。然而，经过博来霉素诱导后的模型组肺组织可见大量胶原沉积，有部分肺泡结构被胶原所覆盖，且肺组织纹理紊乱，肺泡壁明显增厚。经过温肺化纤颗粒1组治疗后，胶原沉积有所降低，肺组织结构逐渐恢复。温肺化纤颗粒2组干预后，肺泡结构和肺组织纹理也有进一步恢复，肺组织中胶原含量较模型组略有降低，肺泡壁厚度较模型组有所缓解。在胶原沉积方面恢复最好的是温肺化纤颗粒2组，肺组织中可见清晰的肺纹理和肺泡结构，肺泡壁和肺泡内未见明显的胶原沉积，结果见图7。

[0377] （6.6）小鼠的免疫组化结果

[0378] 在免疫组化实验中，对不同治疗组的肺组织标本进行了COL1A1、TNF‑α和α‑SMA的染色分析，以评估不同治疗对肺纤维化相关指标的影响。

[0379] 结果显示，温肺化纤颗粒2组的效果最为显著，温肺化纤颗粒1组次之。在COL1A1的免疫组化染色中，模型组呈现出明显的胶原沉积，而温肺化纤颗粒2组显示明显减少的胶原沉积，肺组织中COL1A1表达水平显著降低；温肺化纤颗粒1组显示较为减少的胶原沉积，肺组织中COL1A1表达水平有所降低。在TNF‑α的免疫组化染色中，模型组呈现出明显增加的TNF‑α表达，而温肺化纤颗粒2组显示明显减少的TNF‑α表达，肺组织中TNF‑α表达水平显著降低；温肺化纤颗粒1组显示较为减少的TNF‑α表达，肺组织中TNF‑α表达水平有所降低。在α‑SMA的免疫组化染色中，模型组表现出明显增加的肺间质α‑SMA表达，而温肺化纤颗粒2组显示明显减少的肺间质α‑SMA表达，肺组织中α‑SMA表达水平显著降低；温肺化纤颗粒1组显示较为减少的肺间质α‑SMA表达，肺组织中α‑SMA表达水平有所降低。

[0380] 综合免疫组化结果，可以得出结论：在COL1A1、TNF‑α和α‑SMA这三个指标上，温肺化纤颗粒2组相比温肺化纤颗粒1组，显示出更为明显的抑制肺纤维化的效果，能够有效减少胶原沉积、降低炎性因子TNF‑α的表达，并且抑制肺间质α‑SMA的过度表达，结果见图8。

[0381] 综上，本发明提供的温肺化纤颗粒剂的制备方法，采用麦芽糊精、环糊精、蔗糖粉作为辅料，且具体限定辅料中各组分的重量配比为：麦芽糊精：环糊精：蔗糖粉=0.5：0.5：1；同时限定主成分与辅料的重量配比为：主成分：辅料=（2‑3）：1，配合本发明优化的制备工艺，首先将主成分加水煎煮两次，合理设置加水量和煎煮时间，并将滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.08～1.12的浸膏，然后在限定的条件下进行喷雾干燥，得到含水量<8%的浸膏粉，再加入辅料、润湿剂、矫味剂，混合制粒，再过14目筛，得到湿颗粒，最后对湿颗粒进行干燥，制成温肺化纤颗粒剂，实验结果表明，该方法改善了制粒效果，且提升了制备得到的颗粒剂的药效。

[0382] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。