一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法

摘要

本发明公开了一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，包括步骤：供试样品溶液制备；高效液相色谱检测；计算特征峰峰面积的比值；根据比值范围进行鉴别。本方法采用高效液相色谱技术对水飞蓟提取物中的特征成分进行了有效分离，并通过测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积，根据特征峰峰面积比值范围鉴别判断存在是否人为掺假现象，解决了水飞蓟素中有效成分的人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题。本方法专属性强，准确性高，方便快捷，为鉴别水飞蓟提取物中是否人为掺假提供了一种有效的方法，为含水飞蓟产

权利要求

1.一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）供试品溶液的制备

将水飞蓟提取物样品加入甲醇，超声提取，离心，取上清液，过滤，得到供试品溶液；所述水飞蓟提取物包括水飞蓟乙醇提取物、水飞蓟乙酸乙酯提取物、水飞蓟丙酮提取物中的任意一种；

（2）高效液相色谱检测

采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测，测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积；所述高效液相色谱的条件为：C18色谱柱，规格为4.6 × 250 mm，5.0μm；检测波长288 nm，流动相 A：1%乙酸水，流动相 B：1%乙酸甲醇，洗脱梯度如下表所示：；

（3）计算特征峰峰面积的比值

根据特征峰峰面积，计算特征峰峰面积的比值W1和W2，计算公式为：

； ；

其中，A1为水飞蓟宾A的峰面积，A2为水飞蓟宾B的峰面积，A3为异水飞蓟宾A的峰面积，A4为异水飞蓟宾B的峰面积；

（4）鉴别方法

根据特征峰峰面积比值范围判断，若特征峰峰面积比值W1在1.15‑1.35之间且W2在

1.40‑1.80之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1、W2中至少一个未在上述范围内，则判断为人为掺假的水飞蓟提取物。

2.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（1）中，供试品溶液的制备具体为：精密称取0.2 g样品，加入20‑25 mL甲醇后涡旋5‑10 min，超声提取20‑40 min，在8000‑15000 rpm的转速下离心10‑20 min，取上层清液，过0.45 μm的滤膜，稀释20倍，移取1 mL至液相进样瓶中。

3.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，所述C18色谱柱为Zorbax SB‑C18色谱柱。

4.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，柱温为30℃，流速为1.0 mL/min。

5.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，所述特征峰为水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的峰。

6.根据权利要求5所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（2）中，所述特征峰为水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的峰。

7.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（4）中，若特征峰峰面积比值W1在1.21‑1.31之间且W2在1.45‑1.65之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物。

8.根据权利要求1所述的水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，其特征在于，步骤（4）中，若特征峰峰面积比值W1小于1.15且W2小于1.40，判断为人为掺假水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1大于1.35且W2大于1.80，判断为人为掺假水飞蓟宾B的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在1.45‑1.65之间且W1小于1.15，判断为人为掺假异水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在1.45‑1.65之间且W1大于1.35，判断为人为掺假异水飞蓟宾B的水飞蓟提取物。

说明书

一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法

技术领域

[0001] 本发明属于天然植物提取物鉴别技术领域，具体涉及一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法。

背景技术

[0002] 水飞蓟为菊科植物水飞蓟（Silybum marianum (L.) Gaertn.）的干燥成熟果实，具有清热解毒、疏肝利胆的功效（中国药典2020版一部）。水飞蓟素主要由水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B、水飞蓟亭、水飞蓟宁等6 种黄酮木脂素类物质组成，是水飞蓟及其提取物的有效成分。研究发现，水飞蓟素具有抗辐射、肝保护、抗衰老、延缓皮肤衰老等功效。水飞蓟提取物广泛应用于医药、保健食品、化妆品等行业。

[0003] 水飞蓟宾A和水飞蓟宾B合称水飞蓟宾，是水飞蓟提取物中含量最高的成分，也是肝保护活性最好的成分。异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B合称异水飞蓟宾，通常把水飞蓟宾和异水飞蓟宾合称为“双宾”。我国已有多款以水飞蓟为主要原料的保健食品申报成功。这些水飞蓟提取物产品都以水飞蓟素、水飞蓟宾或者“双宾”作为其功效成分进行宣传。水飞蓟宾较好的护肝效果，目前市场大都以高含量的水飞蓟宾的提取物作为其产品优良的主要参考指标。而天然提取的水飞蓟宾成本较高，目前生物合成水飞蓟宾方法较为成熟，大大降低的水飞蓟宾的生产成本。

[0004] 目前针对水飞蓟提取物质量控制的标准主要有《欧洲药典》、《美国药典》和由中国医药保健食品进出口商会提出的团体标准《植物提取物 水飞蓟提取物（原料药级）》（T/CCCMHPIE 1.21‑2016），在这些标准中都是规定了6种水飞蓟素总和（或水飞蓟总黄酮）的含量范围，以及水飞蓟宾A和水飞蓟宾B 占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B 占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围、水飞蓟亭和水飞蓟宁占水飞蓟素总量（或水飞蓟总黄酮）的占比范围。这些范围界定相对比较宽泛，例如水飞蓟提取物中水飞蓟素总量占提取物质量的30‑65%，水飞蓟宾A和水飞蓟宾B占水飞蓟素总量的40‑65%（相当于占水飞蓟提取物质量的12%‑42.25%）。由于水飞蓟宾是水飞蓟提取物的主要成分，从水飞蓟宾含量角度无法鉴别水飞蓟宾人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题，即目前还没有能够鉴别水飞蓟提取物中人为掺假的方法。

发明内容

[0005] 为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，该方法采用高效液相法对水飞蓟提取物中的特征成分进行有效分离，并通过特征峰峰面积比值鉴别水飞蓟提取物中是否人为掺假，该方法专属性强，准确性高，方便快捷。

[0006] 本发明是通过以下技术方案实现：

[0007] 一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，包括如下步骤：

[0008] （1）供试品溶液的制备

[0009] 将水飞蓟提取物样品加入甲醇，超声提取，离心，取上清液，过滤，得到供试品溶液；

[0010] （2）高效液相色谱检测

[0011] 采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测，测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积；所述高效液相色谱的条件为：C18色谱柱，检测波长288 nm，流动相 A：1%乙酸水，流动相 B：
1%乙酸甲醇，洗脱梯度如下表1所示：

[0012] 表1流动相梯度程序

[0013]

[0014] （3）计算特征峰峰面积的比值

[0015] 根据特征峰峰面积，计算特征峰峰面积的比值W1和W2，计算公式为：

[0016] ； ；

[0017] 其中，A1为水飞蓟宾A的峰面积，A2为水飞蓟宾B的峰面积，A3为异水飞蓟宾A的峰面积，A4为异水飞蓟宾B的峰面积；

[0018] （4）鉴别方法

[0019] 根据特征峰峰面积比值范围判断，若特征峰峰面积比值W1在1.15‑1.35之间且W2在1.40‑1.80之间，优选为特征峰峰面积比值W1在1.21‑1.31之间且W2在1.45‑1.65之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1、W2中至少一个未在上述范围内，则判断为人为掺假的水飞蓟提取物。

[0020] 本发明通过大量的分析和测试意外的发现，天然提取的水飞蓟提取物中的水飞蓟宾B、水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B和异水飞蓟宾A的峰面积之间存在特定的比例关系，这种天然的比例关系与提取试剂无关，与产地来源也无关，基于这种天然特定的比例关系为鉴别水飞蓟提取物中有效成分的人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题提供了理论基础。

[0021] 作为优选，步骤（1）中，所述水飞蓟提取物包括水飞蓟乙醇提取物、水飞蓟乙酸乙酯提取物、水飞蓟丙酮提取物中的任意一种。

[0022] 作为优选，步骤（1）中，供试品溶液的制备具体为：精密称取0.2 g样品，加入20‑25 mL甲醇后涡旋5‑10 min，超声提取20‑40 min，在8000‑15000 rpm的转速下离心10‑20 min，取上层清液，过0.45 μm的滤膜，稀释20倍，移取1 mL至液相进样瓶中。

[0023] 作为优选，步骤（2）中，所述C18色谱柱为Zorbax SB‑C18色谱柱，规格为4.6 × 250 mm，5.0μm。

[0024] 作为优选，步骤（2）中，所述柱温为30℃，流速为1.0 mL/min。

[0025] 作为优选，步骤（2）中，所述特征峰为水飞蓟亭、水飞蓟宁、水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的峰，更优选为水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B的峰。

[0026] 进一步地，本发明还可以依据特征峰峰面积比值变化结果来判断人为掺假的水飞蓟宾的异构体种类。作为优选，步骤（4）中，若特征峰峰面积比值W1小于1.15且W2小于1.40，判断为人为掺假水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1大于1.35且W2大于1.80，判断为人为掺假水飞蓟宾B的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在1.45‑1.65之间且W1小于1.15，判断为人为掺假异水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在
1.45‑1.65之间且W1大于1.35，判断为人为掺假异水飞蓟宾B的水飞蓟提取物。

[0027] 本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

[0028] 本发明提供了一种水飞蓟提取物中人为掺假的鉴别方法，本方法采用高效液相色谱技术对水飞蓟提取物中的特征成分进行了有效分离，并通过测定水飞蓟提取物中特征峰峰面积，根据特征峰峰面积比值范围鉴别判断是否人为掺假，解决了水飞蓟素中有效成分的人为添加或者利用提取某种水飞蓟有效成分后的药渣来以次充好的问题。本方法专属性强，准确性高，方便快捷，为鉴别水飞蓟提取物中是否人为掺假提供了一种有效的方法，为含水飞蓟产品的质量评判提供技术依据。

附图说明

[0029] 图1为水飞蓟提取物的高效液相色谱图。

具体实施方式

[0030] 为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。实施例1：

[0031] 一、高效液相色谱条件的确定

[0032] 1.1试剂与仪器

[0033] 试剂：水飞蓟宾A（C25H22010）；CAS：22888‑70‑6，纯度≥98%，水飞蓟宾B（C25H22010）；CAS：142797‑34‑0，纯度≥98%，异水飞蓟宾A（C25H22010）；CAS：142796‑21‑2，纯度≥98%，异水飞蓟宾B（C25H22010）；CAS：142796‑22‑3，纯度≥98%，水飞蓟亭（C25H22010）；CAS：33889‑69‑9，纯度≥98%，水飞蓟宁（C25H22010）；CAS：29782‑68‑1，纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司。甲醇（CH4O）：色谱纯，德国Merck公司。乙酸(CH3COOH)：色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。尼龙66(Nylon)水相滤膜：13 mm，0.45 μm，津腾实验设备有限公司。

[0034] 仪器：iChrom5100分析型国产液相色谱仪，配DAD检测器大连依利特分析仪器有限公司；Zorbax SB‑C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm，100Å），安捷伦科技（中国）有限公司；Thmorgan‑VM200型涡旋振荡器，托摩根生物科技有限公司；HITACHI‑CF15RXII离心机，日立公司；Sartorius分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；ELGA纯水仪，北京诚驿恒仪科技有限公司；LMDTC‑15F超声波清洗仪，北京绿棉科技有限公司；MPE系列高通量真空平行浓缩仪，睿科集团股份有限公司。

[0035] 1.2标准母液配置：分别准确称取10 mg 6种水飞蓟素标准品置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至10 mL，配置成浓度为1000 μg/mL标准混合储备液，避光保存于4 ℃冰箱备用，有效期1个月。

[0036] 1.3标准工作液配置：以甲醇为溶剂，将6种水飞蓟素标准混合储备液稀释至150 μg/mL、125 μg/mL、100 μg/mL、75 μg/mL、50 μg/mL、10 μg/mL、5 μg/mL的系列标准工作液，此溶液需现用现配。

[0037] 1.4样品前处理

[0038] 精密称取供试品0.2 g（精确至0.1 mg），置于50 mL离心管中，加入20 mL甲醇，涡旋5 min，超声提取30 min，在10000 rpm的转速下离心15 min，取上层清液，过0.45 μm的滤膜，稀释20倍，移取1 mL至液相进样瓶中，等待进样。

[0039] 1.5 液相色谱条件

[0040] a）色谱柱：Zorbax SB‑C18色谱柱（4.6 × 250 mm，5.0 μm）；

[0041] b）检测波长：288 nm；

[0042] c）流动相：流动相 A：1%乙酸水；流动相 B：1%乙酸甲醇，洗脱梯度如下表2所示：

[0043] 表2 流动相梯度程序

[0044]

[0045] d）流速：1.0 mL/min；

[0046] e）进样量：10 μL；

[0047] f）柱温：30 ℃。

[0048] 1.6 标准曲线

[0049] 将配制好的系列标准工作溶液按上述液相色谱条件进样分析，以各水飞蓟素的浓度（X）为横坐标，峰面积(mAU)响应值（Y）为纵坐标，绘制系列标准曲线，得到6种水飞蓟素的标准曲线线性回归方程及线性范围如下表3所示：

[0050] 表3 六种水飞蓟素的线性范围及线性回归方程

[0051]

[0052] 1.7仪器精密度、重复性及稳定性考察

[0053] 精密度考察：在相同仪器条件下，取100 μg/mL浓度的6种水飞蓟素的标准工作溶液，按前述色谱条件重复进样6次，测得各被检测组分的峰面积，计算测定峰面积的相对标准偏差RSD。

[0054] 重复性考察：在相同的仪器条件下，精密称取1.0 g(精确到0.001g) 水飞蓟提取物样品各6份，按“1.4”项下方法进行前处理，将处理好的提取液按前述色谱条件进样分析，测得6种水飞蓟素的峰面积，计算各水飞蓟素峰面积的标准偏差RSD。

[0055] 稳定性考察：在相同仪器条件下，精密称取1.0 g(精确到0.001 g)水飞蓟提取物样品，以“1.4”的前处理方法，制成提取液，在同一天内，以前述色谱条件分别分析，每2小时测定一次，总共测定6次，测得6种水飞蓟素的峰面积，再计算各水飞蓟素峰面积的相对标准偏差RSD。

[0056] 表4 六种水飞蓟素检测方法的精密度、重复性、稳定性

[0057]

[0058] 由表4可知，本方法的精密度、重复性、稳定性良好。

[0059] 二、鉴别依据的确定

[0060] 2.1.1水飞蓟提取物样品收集

[0061] 收集不同产地、不同提取工艺的水飞蓟提取物样品（厂商自述天然提取的水飞蓟提取物，无人为掺假）供39份样品。

[0062] 2.1.2供试样品溶液制备

[0063] 精密称取供试样品0.2 g（精确至0.1 mg），置于50 mL离心管中，加入20 mL甲醇，涡旋5 min，超声提取30 min，在10000 rpm的转速下离心15 min，取上层清液，过0.45 μm的滤膜，稀释20倍，移取1 mL至液相进样瓶中，等待进样。

[0064] 2.1.3 色谱方法

[0065] Zorbax SB‑C18色谱柱（4.6 × 250 mm，5.0 μm），检测波长为288 nm，流动相及洗脱梯度见表2，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30℃，色谱图见图1，由图1可知，本发明通过系统性的优化流动相梯度程序，使得目标物可以和基质实现较好的分离，可以同时对水飞蓟提取物中6种水飞蓟素进行检测，且6种水飞蓟素均能得到良好的分离。

[0066] 2.1.4 特征峰峰面积的比值1（W1）和比值2（W2）计算公式如下：

[0067]  ； ；

[0068] 其中，A1为水飞蓟宾A的峰面积，A2为水飞蓟宾B的峰面积，A3为异水飞蓟宾A的峰面积，A4为异水飞蓟宾B的峰面积。

[0069] 2.1.5 特征成分含量比值及水飞蓟素总含量

[0070] 特征成分含量比值1（W1’）和比值2（W2’）计算公式如下：

[0071] ；  ；

[0072] 水飞蓟素总含量（S）计算公式如下：

[0073] ；

[0074] 其中，C1为水飞蓟宾A的含量，C2为水飞蓟宾B的含量，C3为异水飞蓟宾A的含量，C4为异水飞蓟宾B的含量，C5为水飞蓟亭的含量，C6为水飞蓟宁的含量。C1、C2、 C3、 C4、 C5、 C6由各特征峰峰面积根据标准曲线计算得出。

[0075] 2.1.6测定结果

[0076] 收集了市面上39种自述为天然水飞蓟提取物（无人为掺假），涉及多个产地包括我国内蒙古自治区、辽宁省、陕西省等地以及欧洲地区。不同工艺提取的水飞蓟提取物测试结果见表5 7。由表5 7可知，尽管不同厂家、不同产地、不同生产工艺、不同提取溶剂的水飞蓟~ ~提取物中水飞蓟素的总含量差异较大（34.5%‑55.9%），但特征峰峰面积比值非常稳定，比值
1（W1）在1.25左右，比值2（W2）在1.54左右。具体来说，乙醇提取物特征峰峰面积比值1（W1）的范围为1.22‑1.31，比值2（W2）的范围为1.45‑1.66（见表5）；乙酸乙酯提取物特征峰峰面积比值1（W1）的范围为1.21‑1.30，比值2（W1）的范围为1.49‑1.56（见表6）；丙酮提取物特征峰峰面积比值1（W1）的范围为1.22‑1.27，比值2（W1）的范围为1.46‑1.54（见表7）。值得注意地是，通过标准曲线校准计算的特征成分含量比值1（W1’）和比值2（W2’）比通过特征峰峰面积计算的比值1（W1）和比值2（W2）稍大一些，但也非常稳定。为了方法的适用性、简便性，本发明采用特征峰峰面积比值进行鉴别。

[0077] 表5 水飞蓟乙醇提取物测试结果

[0078]

[0079] 表6 水飞蓟乙酸乙酯提取物测试结果

[0080]

[0081] 表7 水飞蓟丙酮提取物测试结果

[0082]

[0083] 2.2 水飞蓟药材特征峰峰面积比值

[0084] 为验证上述结果，本发明进一步对水飞蓟药材中特征峰峰面积比值进行了研究，具体方法如下：

[0085] 2.2.1水飞蓟药材样品

[0086] 不同产地的中药水飞蓟样品购于中药材市场。

[0087] 2.2.2水飞蓟药材前处理

[0088] 称取水飞蓟药材样品1.0 g，分别采用100 mL乙醇、乙酸乙酯、丙酮进行回流提取1 h，过滤得提取液，重复提取两次，合并两次的提取液，减压浓缩获得提取物。取0.1g（精确至0.1 mg）提取物，置于离心管中，加入10 mL甲醇，涡旋5 min，超声提取30 min，在10000 rpm的转速下离心15 min，取上层清液，过0.45 μm的滤膜，稀释20倍，移取1 mL至液相进样瓶中，等待进样。

[0089] 2.2.3 色谱方法

[0090] Zorbax SB‑C18色谱柱（4.6 × 250 mm，5.0 μm），检测波长为288 nm，流动相及洗脱梯度见表2，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃。

[0091] 2.2.4 特征峰峰面积的比值1（W1）和比值2（W2）计算公式如下：

[0092] ； ；

[0093] 其中，A1为水飞蓟宾A的峰面积，A2为水飞蓟宾B的峰面积，A3为异水飞蓟宾A的峰面积，A4为异水飞蓟宾B的峰面积。

[0094] 2.2.5 测定结果

[0095] 检测结果如表8所示，不同产地的水飞蓟药材中，特征峰峰面积的比值也较为稳定，其中比值1（W1）的范围为1.17‑1.25，均值为1.21；比值2（W1）的范围为1.58‑1.77，均值为1.69。该结果表明水飞蓟素单体成分含量之间天然存在着特定的比例关系，该比例关系不会因为提取溶剂的改变而发生大的变化。由上述表5 7的结果也可看出，水飞蓟素单体成~分之间天然的比例关系在各种水飞蓟提取物中依然存在。这一发现为水飞蓟提取物人为掺假的鉴定提供了理论基础。

[0096] 表8 水飞蓟药材特征峰峰面积比测试结果

[0097]

[0098] 三、鉴别方法

[0099] 因此，根据上述结果，本发明以特征峰峰面积比值为鉴别依据，根据特征峰峰面积比值范围判断，若特征峰峰面积比值W1在1.15‑1.35之间且W2在1.40‑1.80之间，判断为天然提取的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1、W2中至少一个未在上述范围内，则判断为人为掺假的水飞蓟提取物。

[0100] 四、依据特征峰峰面积比值变化结果来判断掺假的水飞蓟宾的异构体种类

[0101] 4.1掺假水飞蓟宾的样品溶液制备

[0102] 精密称取约0.2g（精确至0.1 mg）水飞蓟提取物样品，分别加入不同比例的水飞蓟宾A化合物，置于50 mL离心管中，加入20 mL甲醇，涡旋5 min，超声提取30 min，在10000 rpm的转速下离心15 min，取上层清液，稀释40倍，过0.45 μm的滤膜，移取1mL至液相进样瓶中，等待进样。同样方法，在水飞蓟提取物中分别加入不同比例的水飞蓟宾B化合物、异水飞蓟宾A化合物、异水飞蓟宾B化合物，制备样品溶液备用。

[0103] 4.2测定结果

[0104] 结果如表9所示，在天然提取的水飞蓟提取物中人为掺假不同比例的水飞蓟宾A后，特征峰峰面积比值W1和W2均降低了，随着掺假量的增大，特征峰峰面积比值降低越多。人为掺假水飞蓟宾B后，水飞蓟特征峰峰面积比值W1和W2随着掺假量的增大而升高。当掺假量达到一定比例后（如水飞蓟宾A掺假大于2%，或者水飞蓟宾B掺假大于4%），破坏了水飞蓟提取物中各单体之间存在的天然比例，导致特征峰峰面积比值发生改变。掺假异水飞蓟宾A和异水飞蓟宾B时，不会改变提取物中水飞蓟宾A和水飞蓟宾B的组成，所以特征峰峰面积比值W2不会改变，根据比值W1的变化可判断是否掺假异水飞蓟宾A或者异水飞蓟宾B。具体地，异水飞蓟宾A的掺假量大于1.6%时，特征峰峰面积比值W1会小于1.15；异水飞蓟宾B的掺假量大于0.9%时，特征峰峰面积比值W1会大于1.29。

[0105] 表9 掺假水飞蓟宾的水飞蓟提取物特征峰峰面积比测试结果

[0106]

[0107] 由上述结果，本发明依据特征峰峰面积比值变化结果可以判断掺假的水飞蓟宾的异构体种类。若特征峰峰面积比值W1小于1.15且W2小于1.40，判断为人为掺假水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W1大于1.35且W2大于1.80，判断为人为掺假水飞蓟宾B的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在1.45‑1.65之间且W1小于1.15，判断为人为掺假异水飞蓟宾A的水飞蓟提取物；若特征峰峰面积比值W2在1.45‑1.65之间且W1大于1.35，判断为人为掺假异水飞蓟宾B的水飞蓟提取物。