巴氏染色方法转让专利
申请号 : CN200480008309.X
文献号 : CN1764469B
文献日 : 2010-07-28
发明人 : 丹尼尔·拉彭 , 诺曼·索尔 , 索姆图克·利姆
申请人 : 西泰克公司
摘要 :
本发明提供了一种用巴氏染色过程来处理生物样品的方法。该方法包括在多个步骤的任何一个步骤中将去污剂处理结合到该染色过程中。已经发现该方法有利地减少了巴氏染色过程中产生的人为假象的数量。本发明还提供了用该方法染色的样品。
权利要求 :
1.一种将经固定的生物样品染色的方法，包括：将所述样品与苏木精染色剂接触；
将所述样品与橘黄G复染剂接触；或可选地
将所述样品与伊红Y-亮绿/固绿复染剂接触；
将所述样品与一种类型的以足以减少染色的人为假象的量的去污剂相接触，所述去污剂选自FC170、TWEEN80、Igepal CA-630、CHAPS、和苯扎氯铵；
其中，所述去污剂可以在苏木精染色前使用、与苏木精染色混合使用、在苏木精染色后使用、与着蓝溶液结合使用、在着蓝溶液之后使用、或者与橘黄G、伊红Y-亮绿/固绿或其它复染溶液结合使用。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述去污剂是苯扎氯铵。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述两性离子去污剂是CHAPS。
4.根据权利要求1所述的方法，包括将样品与结合有着蓝溶液的去污剂接触。
5.根据权利要求1所述的方法，其中将所述样品与溶液中浓度为溶液的至少0.0001％并小于10％的去污剂接触。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述去污剂为所述溶液的至少0.01％。
7.根据权利要求5所述的方法，其中所述去污剂为所述溶液的至少0.1％。
8.根据权利要求5所述的方法，其中所述去污剂为所述溶液的至少0.5％。
9.根据权利要求5所述的方法，其中所述去污剂为所述溶液的1％。
说明书 :
技术领域
本发明涉及生物样品染色中所使用的方法、物品和组合物。
背景技术
医学诊断性检测方法对于病理状况的早期检测是非常重要的筛查工具。早期检测可以使在更有可能治疗成功的阶段鉴别出这样的状况(病症)。早期治疗往往还伴随更小的损伤或更少的侵入性治疗方法，从而减少对患者的影响。除了常规筛查之外，诊断性检测也用于多种其它应用中，包括活组织检查分析以及监测正在进行的医学治疗的效果。
诊断性检测中的一种特别有用的工具是巴氏(Papanicolau)染色过程。这个过程最初被研制开发用于妇产科样品的染色，并且已经导致了子宫颈癌病死率的显著降低。目前巴氏染色用于诊断多种不同组织和器官的多种病理状况。
然而，巴氏染色易受人为假象(artifact)的影响，这种人为假象可以对技术人员或机器成功读取经处理的样品的能力产生不利的影响。这些人为假象包括假性非特异性的细胞质染色，人为假象如：细胞质分裂、玉米片状染色(cornflaking)、被污染的细胞核详图(smudged nuclear detail)、淡染的染色和浓染的染色。这样的人为假象最低限度减少了部分可被评估的样品，可以产生干扰正确诊断的假性染色图案(pattern)，还可以使样品无法读取。对于这种样品的分析困难导致了病人焦虑、重新筛查费用及诊断延误的增加，并且更重要的是导致了可能的误诊的增加。
在本领域中，需要用于诊断样品染色的经改进的方法以及在该方法中所使用的组合物及物品的制造。
诊断性检测中的一种特别有用的工具是巴氏(Papanicolau)染色过程。这个过程最初被研制开发用于妇产科样品的染色，并且已经导致了子宫颈癌病死率的显著降低。目前巴氏染色用于诊断多种不同组织和器官的多种病理状况。
然而，巴氏染色易受人为假象(artifact)的影响，这种人为假象可以对技术人员或机器成功读取经处理的样品的能力产生不利的影响。这些人为假象包括假性非特异性的细胞质染色，人为假象如：细胞质分裂、玉米片状染色(cornflaking)、被污染的细胞核详图(smudged nuclear detail)、淡染的染色和浓染的染色。这样的人为假象最低限度减少了部分可被评估的样品，可以产生干扰正确诊断的假性染色图案(pattern)，还可以使样品无法读取。对于这种样品的分析困难导致了病人焦虑、重新筛查费用及诊断延误的增加，并且更重要的是导致了可能的误诊的增加。
在本领域中，需要用于诊断样品染色的经改进的方法以及在该方法中所使用的组合物及物品的制造。
发明内容
本发明提供了一种用巴氏染色过程来处理生物样品的经改进的方法。所述方法包括：将去污剂处理结合入该染色过程的多个步骤的任何一个步骤。已经发现该方法有利地减少了巴氏染色过程中产生的人为假象的数量。本发明还提供了用该方法染色的样品。
具体实施方式
本发明已经有利地发现将去污剂处理结合到易受人为假象影响的巴氏染色过程中减少了人为假象的出现。已经发现使用去污剂可以清除来自经该过程染色的细胞胞质的多余染色斑，使得增强了对比度并且提高了对于细胞、细胞核及染色质形态的检测能力。另外，将来自细胞质的多余染色斑去除可以提高对于与异常相关的染色过深的检测能力。
术语“巴氏染色过程”、“巴氏染色斑”、“巴氏早期癌变探查试验”等等，指的是经改进或未改进的巴氏染色过程，该巴氏染色过程差别性地对样品中的细胞核与细胞质进行染色，例如在妇产科筛查性检查(如阴道抹片检查)中得到的样品。
这种检测依赖于对样品中不同细胞类型的细胞核和细胞质的染色图案、染色强度及大小和形状的区分能力。有利的是巴氏染色过程提供了经深染的细胞核和透明的细胞质，这在检测由某些采样技术包括阴道抹片检查所提供的多层样品中的异常细胞时是特别有用的。
可用的检测依赖于对该样品中细胞的有效百分比的读取能力，否则的话，检测的准确性可能有问题，并且样品会变得不可使用，从而导致了额外的重新筛查费用并且增加了病人的焦虑。
因此，染色人为假象会降低对样品中细胞的真染色图案的识别能力，能够显著削弱巴氏早期癌变探查试验的有用性。人为假象可以降低对细胞核与细胞质的染色图案的区分能力，可以提高细胞或样品区中无法读取的百分比，并且可以增加细胞质浓染，从而降低了作为巴氏早期癌变探查试验的主要优点之一的透明度，由此使得区分样品中的异常细胞变得更加困难。
在进一步详细描述本发明之前，应该理解本发明不限于所描述的特定方法、技术方案或装置，当然是因为这些方法、技术方案或装置可以变化。还应当理解本文中所使用的术语的目的仅为了描述具体实施例，并不是要限制本发明的保护范围。
单数形式“一”“一种/一个”和“该”的使用包括复数的含义，除非上下文明确表示另外的含义。因此，例如，提及“(一)样品”包括多个样品，提及“(一种)去污剂”包括多种这样的去污剂，提及“(一种)复染剂(counterstain)”包括多种复染剂，等等。另外，特定的复数含义，如“二”“三”等的使用，应理解为包括同样对象的更多的数量，除非上下文明确表示另外的含义。
术语如“连接”“附着”和“键合”在本文中是可以替换使用的，并且包括直接和间接的连接、附着、键合或接合，除非上下文明确表示另外的含义。在提及数值范围时，可以理解为在该范围所提及的上限和下限之间的每一个介于其间的整数值及其分数都是特定公开的，连同在这些数值之间的每个子范围也是特定公开的。任何范围的上限和下限可以独立的被包括在或排除出该范围，并且包括一个边界值、不包括边界值或者包括两个边界值的每个范围也都包括在本发明中。当被讨论的值具有固有的边界时，如一种组合物可以以从0到100％的浓度存在，或者水溶液的pH可以从1到14变化，这些固有的边界是特定公开的。当明确提及一个数值时，可以理解为那些与所提及的数值大约是同样数量或量的值也在本发明的保护范围内，其范围也是基于同样的原则。当公开一种组合时，该组合的各成分的每个子组合也是特定公开的，并且也在本发明的保护范围内。与之相反，当公开不同成分或成分的集合时，其组合也是公开的。当本发明的任何成分在具有多种替代物的状态下被公开时，本发明的其中每种替代物以单独或与任何其它替代物结合的方式被排除在本发明的实施例中的实例也由此被公开；本发明的多于一种的成分可以有这样的排除，并且具有这种排除性的成分的所有组合也由此被公开。
除非使用另外的含义定义或者上下文明确表示另外的含义，本文所使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域中的普通技术人员所通常理解的具有相同的含义。尽管与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料均可以用于本发明的实施或检测中，但是这里只描述优选的方法和材料。
术语“可选的”或“可选地”意味着随后描述的事件或情况可以发生或者也可以不发生，并且包括该事件或情况发生时的实例以及该事件或情况不发生时的实例。
巴氏染色
巴氏染色方法(过程)包括：至少苏木精染色步骤、橘黄G细胞质复染步骤、以及伊红Y-亮绿/固绿复染步骤。该方法可以包括“着蓝(bluing)”步骤。有利地，巴氏染色产生带有透明细胞胞质的样品，这对于分析覆盖了多层的细胞诸如来自阴道抹片检查的细胞是特别有用的。
在开始巴氏染色过程之前，样品必需经固定。可以使用任何可以产生满意效果的固定方法。醇固定法通常用于巴氏染色，如95％的乙醇、100％的甲醇、80％的丙醇或95％的乙醇/醚(1∶1)。也可以使用商品化的喷雾固定剂。
典型的巴氏染色过程包括与金属媒染剂结合使用的苏木精染色步骤，以使细胞的染色质染色，可以递增或递减地进行。染色质染色是这种检测的关键部分，因为染色质的大小、染色强度和染色图案是分析样品中的异常细胞的关键要素。任何形式的苏木精均可使用，包括Harris’s、Gill’s、Delafield’s、Ehrlich’s或Mayer’s苏木精。也可以使用苏木精应用染料的替代物如，劳氏紫、维多利亚蓝B、天青B等。
如果以递减的方式进行，先将该样品过染，然后用试剂(如，稀HCl)使之区分开，该试剂可以将染色强度降至所希望的水平。这引起所着染的颜色从蓝色/紫色到浅橙色/红色的变化。可以使用本领域已知的试剂(如，Scott’s自来水替代物、氨水、碳酸锂)利用“着蓝”步骤重新建立蓝色。该着蓝溶液可以在没有区分步骤的情况下加入。
在巴氏染色中使用了多种细胞质复染剂，以便能够鉴别样品中的多种细胞类型、它们的形态以及它们的频度。
细胞质染色剂橘黄G以及伊红Y-亮绿/固绿是在醇中制备的。橘黄G是单色染色剂，其在角蛋白存在时将细胞胞质着染成黄色或橙色，能够使成熟或正在成熟的产生角蛋白的恶性细胞与较小的明显良性细胞区分开来。橘黄G可以以细胞染色领域中已知的溶液形式使用，如以OG-6的形式。
按照惯例，伊红Y-亮绿/固绿是以三种染色剂，即伊红Y、亮绿SF和/或固绿FCF、以及俾斯麦棕的混合物形式制备的。典型的混合物包括EA36、EA50及EA65。伊红Y在核仁、纤毛、红细胞及成熟的鳞状细胞的细胞质中产生粉红色。亮绿SF淡黄(LightGreen SF Yellowish)和固绿FCF在代谢活跃的副基(parabasal)鳞状细胞、中间鳞状细胞及柱状细胞的细胞质中产生蓝色/绿色。俾斯麦棕在巴氏染色中不产生有用的染色图案，并且可以在本方法的多种变化形式中被排除。还可以使用亮绿SF淡黄的替代物，如固绿FCF。细胞质复染剂还可以是在单一溶液中产生的OG与伊红Y-亮绿/固绿的混合物，用作复染剂。
这些细胞质复染剂是在醇中制备的，该醇所导致的透明细胞质在分析通过巴氏过程染色的样品时非常重要。
在适当的时候，如在水溶液和非水溶液之间转换时的水合/脱水过程，将清洗步骤结合到该染色过程中。该染色过程完成后，可以如在本领域所公知的对样品进行清洗和封固。可以在进行巴氏过程之前或之后在样品上进行另外的操作。随后可以人工和/或借助于合适的装置，如自动成像系统，来对该样品进行分析。自动成像系统的实例包括：Cytyc公司的ThinPrep成像系统、TriPath FocalPointTM断面仪、ChromaVision Acis系统、CompuCyt iCyte成像系统、应用成像CytoVisionTM系统以及Veracel Verasys成像系统。
可以对巴氏染色过程进行多种改变，这在本领域是公知的。例如，可以将该过程改变成如同美国专利第5,168,066号和第6,348,325号(分别于1992年12月1日和2002年2月19日出版，并转让给Cytyc公司)那样，以便结合使用劳氏紫。也能够使用其它的噻嗪染料和三芳甲烷染料。
样品
将要分析的样品部分可以是任何来源的生物材料，该生物材料可以从活的有机体直接或间接得到，包括细胞、组织或体液。样品的非限制性的实例包括：血、尿、精液、奶、痰液、粘液、胸膜液、骨盆液、关节液、腹水液、体腔洗液、眼冲洗液、皮肤刮下物、口腔拭抹物、阴道拭抹物、阴道抹片检查物、直肠拭抹物、抽出物、穿刺活检物、获得的组织切片(例如通过手术或尸体剖检得到的)、血浆、血清、脊髓液、淋巴液、(皮肤、呼吸、肠以及泌尿生殖道的)外分泌物、泪液、唾液、肿瘤、器官以及体外细胞培养成分的样品。典型的样品是阴道抹片检查物，其是在妇产科检查或怀疑包含异常细胞的活组织检查中常规得到的。
样品可以是已知包含异常细胞的阳性对照样品。也可以用阴性对照样品，该阴性对照样品用于确定一组给定的染色条件是否会产生假阳性(即使样品中不存在异常细胞时也存在的阳性信号)。
通常，样品在载玻片或类似的玻璃表面上染色，例如管瓶、盖玻片、或其它用于分析样品的对入射光透光的表面。
去污剂
任何可检测到减少巴氏染色过程中产生的人为假象的去污剂均可使用。以适于可检测到减少人为假象的量和时间来使用去污剂。通过结合如本文中所述的去污剂清洗，至少一种这样的人为假象的百分比可以令人满意地被减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、70％、90％、95％、98％或更多。当被用在选择载玻片的某些区域(“感兴趣的区域”)的成像系统中，用以对基于本领域公知的多种参数中的任意参数进行分析时，本发明可以令人满意地减少假性被选区域的数目(假性被选区域是基于染色的人为假象而被假性选择用于分析的区域，该染色人为假象符合成像系统的选择标准)至少约10％、20％、30％、40％、50％、70％、90％、95％、98％或更多。这提高了所选择的用于分析的有效区域的百分比。
去污剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的或两性离子的。也可以使用去污剂的混合物。去污剂的典型类别包括：醇醚硫酸盐、醇硫酸盐、烷醇酰胺、烷基磺酸盐、氧化胺、两性去污剂、阴离子去污剂、甜菜碱衍生物、阳离子去污剂、二磺酸盐、十二烷基苯磺酸、乙氧基化醇类、乙氧基化烷基酚、乙氧基化脂肪酸、甘油酯水溶助剂、十二烷基硫酸盐、单酸甘油酯和甘油二酯、非离子去污剂、磷酸酯、季铵盐类去污剂以及失水山梨糖醇衍生物。
典型的非离子性去污剂包括：BigCHAP(N，N-双[3-(D-葡糖酰胺)丙基]胆酰胺)、二(聚乙二醇二[咪唑基羰基])、Brij30(聚氧乙烯4月桂基醚)、Brij35(聚氧乙烯23月桂基醚)、Brij52(聚氧乙烯2鲸蜡基醚)、Brij56(聚氧乙烯10鲸蜡基醚)、Brij58(聚氧乙烯20鲸蜡基醚)、Brij72(聚氧乙烯2硬脂基醚)、Brij76(聚氧乙烯10硬脂基醚)、Brij78(聚氧乙烯20硬脂基醚)、Brij92(聚氧乙烯2油基醚)、Brij97(聚氧乙烯10油基醚)、Brij98(聚氧乙烯20油基醚)、Brij700(聚氧乙烯100硬脂基醚)、CremophorEL(蓖麻油/环氧乙烷聚醚)、十(乙二醇)单十二烷基醚、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺(MECA-8)、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺(MECA-10)、正辛基葡糖苷、正十二烷基葡糖苷、异十三烷基-聚(乙二醇醚)n、N-癸酰基-N-甲基葡糖胺、正癸基α-D-吡喃葡糖苷、癸基β-D-麦芽糖吡喃糖苷、正十二烷酰-N-甲基葡糖酰胺、正十二烷基α-D-麦芽糖苷、正十二烷基β-D-麦芽糖苷、七(乙二醇)单癸基醚、七(乙二醇)单十四烷基醚、正十六烷基β-D-麦芽糖苷、六(乙二醇)单十二烷基醚、六(乙二醇)单十六烷基醚、六(乙二醇)单十八烷基醚、六(乙二醇)单十四烷基醚、Igepal CA-630(辛苯基-聚乙二醇)、IgepalCA-210(聚氧乙烯(2)异辛苯基醚)、IgepalCA-520(聚氧乙烯(5)异辛基苯基醚)、IgepalCO-630(聚氧乙烯(9)壬基苯基醚)、IgepalCO-720(聚氧乙烯(12)壬基苯基醚)、IgepalCO-890(聚氧乙烯(40)壬基苯基醚)、IgepalCO-990(聚氧乙烯(100)壬基苯基醚)、IgepalDM-970(聚氧乙烯(150)二壬基苯基醚)、甲基-6-O-(N-庚基氨基甲酰基)-α-D-吡喃葡糖苷、九(乙二醇)单十二烷基醚、N-壬酰基-N-甲基葡糖胺、八(乙二醇)单癸基醚、八(乙二醇)单十二烷基醚、八(乙二醇)单十六烷基醚、八(乙二醇)单十八烷基醚、八(乙二醇)单十四烷基醚、辛基-β-D-吡喃葡糖苷、五(乙二醇)单癸基醚、五(乙二醇)单十二烷基醚、五(乙二醇)单十六烷基醚、五(乙二醇)单己基醚、五(乙二醇)单十八烷基醚、五(乙二醇)单辛基醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇醚W-1、聚氧乙烯10十三烷基醚、聚氧乙烯100硬脂酸酯、聚氧乙烯20异十六烷基醚、聚氧乙烯20油基醚、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯50硬脂酸酯、聚氧乙烯8硬脂酸酯、聚氧乙烯二(咪唑基羰基)、聚氧乙烯25丙二醇硬脂酸酯、皂角甙、Span20(失水山梨糖醇单月桂酸酯)、Span40(失水山梨糖醇单棕榈酸酯)、Span60(失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、Span65(失水山梨糖醇三硬脂酸酯)、Span80(失水山梨糖醇单油酸酯)、Span85(失水山梨糖醇三油酸酯)、任何形式的润湿剂(包括的类型有：15-S-5、15-S-7、15-S-9、15-S-12、15-S-30、NP-4、NP-7、NP-9、NP-10、NP-40、NPX(Imbentin-N/63)、TMN-3(聚乙二醇三甲基壬基醚)、TMN-6(聚乙二醇三甲基壬基醚)、TMN-10(聚乙二醇三甲基壬基醚)、MIN FORM 1x以及MINFORM 2x)、十四烷基-β-D-麦芽糖苷、四(乙二醇)单癸基醚、四(乙二醇)单十二烷基醚、四(乙二醇)单十四烷基醚、三(乙二醇)单癸基醚、三(乙二醇)单十二烷基醚、三(乙二醇)单十六烷基醚、三(乙二醇)单辛基醚、三(乙二醇)单十四烷基醚、TritonCF-21、CF-32、DF-12、DF-16、GR-5M、N-101(聚氧乙烯支链的壬基苯基醚)、QS-15、QS-44、RW-75(聚乙二醇260单(十六烷基/十八烷基)醚和1-十八烷醇)、X-100(聚乙二醇叔-辛基苯基醚)、X-102、X-15、X-151、X-200、X-207、X-114、X-165、X-305、X-405(聚氧乙烯(40)异辛基苯基醚)、还原的X-405(聚氧乙烯(40)异辛基环己基醚)、X-45(聚乙二醇4-叔辛基苯基醚)、X-705-70、任何形式的(包括20(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯)、21(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯)、40(聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇单棕榈酸酯)、60(聚乙二醇失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、61(聚乙二醇失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、65(聚氧乙烯失水山梨糖醇三硬脂酸酯)、80(聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)、81(聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)以及85(聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇三油酸酯))、四丁酚醛(带有甲醛和环氧乙烷的4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚聚合物)以及正十一烷基β-D-吡喃葡糖苷。
典型的阴离子去污剂包括：鹅脱氧胆酸、胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸、毛地黄皂苷、毛地黄毒苷配基、N，N-二甲基十二烷胺-N-氧化物、多库酯钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸-3-硫酸二钠盐、甘氨石胆酸乙基酯、N-月桂酰基肌氨酸、十二烷基硫酸锂、Lugol(碘-碘化钾)、Niaproof(2-乙基己基硫酸钠盐)、Niaproof 4(7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠盐)、可选取代的烷基磺酸盐(包括：1-丁磺酸盐、戊磺酸盐、己磺酸盐、1-辛磺酸盐、1-癸磺酸盐、1-十二烷基磺酸盐、1-庚磺酸盐、1-庚磺酸盐、1-壬磺酸盐、1-丙磺酸盐以及2-溴乙磺酸盐，尤其是钠盐)、胆酸钠、脱氧胆酸钠、可选取代的十二烷基硫酸钠、辛基硫酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺鹅脱氧胆酸钠、牛磺猪脱氧胆酸钠、牛磺石胆酸-3-硫酸二钠盐、牛磺熊脱氧胆酸钠盐、Trizma十二烷基硫酸盐、熊脱氧胆酸。该阴离子去污剂可以以酸或盐、或者两者均有的形式提供。
典型的阳离子去污剂包括：烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、苄基二甲基十六烷基氯化铵、苄基二甲基十四烷基氯化铵、苄基十二烷基二甲基溴化铵、苄基三甲基四氯碘酸铵、二甲基双(十八烷基)溴化铵、十二烷基乙基二甲基溴化铵、十二烷基三甲基溴化铵、乙基十六烷基二甲基溴化铵、吉拉德(Girard’s)试剂T、十六烷基三甲基溴化铵、N，N’，N’-聚氧乙烯(10)-N-牛油-1，3-二氨基丙烷、通佐溴铵以及三甲基(十四烷基)溴化铵。
典型的两性离子去污剂包括：CHAPS(3-{(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基}-1-丙磺酸盐)、CHAPSO(3-{(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基}-2-羟基-1-丙磺酸盐)、3-(癸基二甲氨基)丙磺酸盐、3-(十二烷基二甲氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基十四烷基氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基十八烷基氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基辛基氨基)丙磺酸盐以及3-(N，N-二甲基棕榈基氨基)丙磺酸盐。
去污剂包括那些本领域已知的或发现的去污剂。去污剂可以合成或从许多厂商中的任何一个(如Sigma-Aldrich公司，St.Louis，MO，USA，www.simmaaldrich.com)商业获得。已经发现苯扎氯铵和CHAPS对于减少巴氏染色过程中的人为假象特别有用。
可以将给定的去污剂通过在巴氏染色过程中结合到清洗步骤来检测其减少人为假象的能力，该巴氏染色过程可以在已知产生染色的人为假象的条件下进行。然后可以通过与未经去污剂处理的样品进行对照，并且与用苯扎氯铵处理或其它已知的减少染色人为假象的阳性对照处理的样品进行对照，来评估用试验去污剂处理的样品。
通常，所使用的去污剂的量是使用去污剂的溶液的至少约0.0001％并可高达约10％，并且去污剂的量可以是溶液的至少约0.0005％、0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、或1％或更多；去污剂的量可以是溶液的约5％或更少、约2.5％或更少、约2％或更少、约1％或更少、约0.5％或更少、约0.2％或更少、约0.1％或更少、约0.05％或更少、或其间的任何范围或子范围。
去污剂处理可以在任何能够使人为假象减少同时不会对分析样品的能力有不利影响的pH下进行。因此去污剂处理可以在pH约为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或其间的任何范围或子范围内进行。通常该处理在pH约为2到约为8之间进行。
去污剂可以在巴氏染色过程的任何时刻使用。例如，去污剂可以在苏木精染色前使用、与苏木精染色混合使用、在苏木精染色后使用、与着蓝溶液结合使用、在着蓝溶液之后使用、或者与橘黄G、伊红Y-亮绿/固绿或其它复染溶液结合使用。
实施例
阐述下面的实施例的目的是给本领域普通技术人员提供怎样制备和使用本发明的完整描述，而不是用来限制本发明的保护范围的。虽然已经尽力确保所使用的相关数目(如数量、温度等)的准确性，但应该对一些实验误差和偏差加以考虑。除非指明另外的情况，份是按照重量份、温度是摄氏度以及压力是处于或接近大气压、并且所有的材料都是可商业获得的。
实施例1
在阴道抹片检查的载玻片上可以非常明显地发现细胞质分裂，该载玻片是在检测条件即巴氏染色条件下处理的。为了对用于减少细胞质分裂的方法进行试验，获得了4种不同的阴道抹片检查物样品，由样品制作载玻片，固定，使其干燥一天，然后根据下面的步骤利用改进的巴氏染色方法进行染色：
步骤：1 开启工作台
2 试验清洗步骤
3 5分钟 50％的试剂乙醇
4 5分钟 盐溶液(50％的乙醇中的10％的NaCl)
5 5分钟 盐溶液(50％的乙醇中的10％的NaCl)
6 1分钟 95％的试剂乙醇
7 1分钟 95％的试剂乙醇
8-22 1分钟 细胞核染色(15分钟)
23 20秒 异丙醇
24 20秒 异丙醇
25 30秒 异丙醇
26 20秒 异丙醇
27-34 1分钟 复染剂(橘黄G和伊红-固绿/亮绿的混合物)(8分钟)
35 30秒 100％的试剂乙醇
36 3分钟 异丙醇
37 3分钟 异丙醇
38 1分钟 二甲苯
39 3分钟 二甲苯
40 结束 二甲苯
将载玻片移到最后的二甲苯中
利用封固剂(Permount)人工封固盖玻
片
四种样品均产生了细胞质分裂，并且进行试验清洗步骤以确定可以减少人为假象的条件。由每个样品制备十个载玻片。在来自每个样品的十个载玻片上分别进行五分钟水洗、十五分钟水洗、以及利用FC120表面活性剂(3M公司)的十五分钟清洗和利用FC170表面活性剂(3M公司)的十五分钟清洗。已经发现这些清洗条件均不能显著减少细胞质分裂的染色的人为假象。
十个另外的载玻片是由四种样品中的每一个制备的，并且进行了更多的试验清洗步骤，包括在下述任何一种溶液中进行十五分钟的清洗：0.1％的FC170 pH为6.9、0.1％的Tween80 pH为6.9、0.1％的Igepal CA-630 pH为7.0、0.1％的CHAPS pH为7.7、0.1％的ZEPHIRAN pH为7.2、水、盐溶液步骤之前没有50％乙醇步骤的水、没有盐溶液步骤的水、以及在盐溶液步骤和没有盐溶液步骤之前没有50％的乙醇步骤的水。
ZEPHIRAN(苯扎氯铵)显著减少了假性蓝色细胞质染色，并且减少了细胞质分裂。CHAPS在这个浓度也将两种人为假象减少到一定程度。其它处理在给定的浓度对这些染色的人为假象几乎没有影响。
实施例2
结合去污剂清洗步骤的巴氏染色方案的实施例如下：
术语“巴氏染色过程”、“巴氏染色斑”、“巴氏早期癌变探查试验”等等，指的是经改进或未改进的巴氏染色过程，该巴氏染色过程差别性地对样品中的细胞核与细胞质进行染色，例如在妇产科筛查性检查(如阴道抹片检查)中得到的样品。
这种检测依赖于对样品中不同细胞类型的细胞核和细胞质的染色图案、染色强度及大小和形状的区分能力。有利的是巴氏染色过程提供了经深染的细胞核和透明的细胞质，这在检测由某些采样技术包括阴道抹片检查所提供的多层样品中的异常细胞时是特别有用的。
可用的检测依赖于对该样品中细胞的有效百分比的读取能力，否则的话，检测的准确性可能有问题，并且样品会变得不可使用，从而导致了额外的重新筛查费用并且增加了病人的焦虑。
因此，染色人为假象会降低对样品中细胞的真染色图案的识别能力，能够显著削弱巴氏早期癌变探查试验的有用性。人为假象可以降低对细胞核与细胞质的染色图案的区分能力，可以提高细胞或样品区中无法读取的百分比，并且可以增加细胞质浓染，从而降低了作为巴氏早期癌变探查试验的主要优点之一的透明度，由此使得区分样品中的异常细胞变得更加困难。
在进一步详细描述本发明之前，应该理解本发明不限于所描述的特定方法、技术方案或装置，当然是因为这些方法、技术方案或装置可以变化。还应当理解本文中所使用的术语的目的仅为了描述具体实施例，并不是要限制本发明的保护范围。
单数形式“一”“一种/一个”和“该”的使用包括复数的含义，除非上下文明确表示另外的含义。因此，例如，提及“(一)样品”包括多个样品，提及“(一种)去污剂”包括多种这样的去污剂，提及“(一种)复染剂(counterstain)”包括多种复染剂，等等。另外，特定的复数含义，如“二”“三”等的使用，应理解为包括同样对象的更多的数量，除非上下文明确表示另外的含义。
术语如“连接”“附着”和“键合”在本文中是可以替换使用的，并且包括直接和间接的连接、附着、键合或接合，除非上下文明确表示另外的含义。在提及数值范围时，可以理解为在该范围所提及的上限和下限之间的每一个介于其间的整数值及其分数都是特定公开的，连同在这些数值之间的每个子范围也是特定公开的。任何范围的上限和下限可以独立的被包括在或排除出该范围，并且包括一个边界值、不包括边界值或者包括两个边界值的每个范围也都包括在本发明中。当被讨论的值具有固有的边界时，如一种组合物可以以从0到100％的浓度存在，或者水溶液的pH可以从1到14变化，这些固有的边界是特定公开的。当明确提及一个数值时，可以理解为那些与所提及的数值大约是同样数量或量的值也在本发明的保护范围内，其范围也是基于同样的原则。当公开一种组合时，该组合的各成分的每个子组合也是特定公开的，并且也在本发明的保护范围内。与之相反，当公开不同成分或成分的集合时，其组合也是公开的。当本发明的任何成分在具有多种替代物的状态下被公开时，本发明的其中每种替代物以单独或与任何其它替代物结合的方式被排除在本发明的实施例中的实例也由此被公开；本发明的多于一种的成分可以有这样的排除，并且具有这种排除性的成分的所有组合也由此被公开。
除非使用另外的含义定义或者上下文明确表示另外的含义，本文所使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域中的普通技术人员所通常理解的具有相同的含义。尽管与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料均可以用于本发明的实施或检测中，但是这里只描述优选的方法和材料。
术语“可选的”或“可选地”意味着随后描述的事件或情况可以发生或者也可以不发生，并且包括该事件或情况发生时的实例以及该事件或情况不发生时的实例。
巴氏染色
巴氏染色方法(过程)包括：至少苏木精染色步骤、橘黄G细胞质复染步骤、以及伊红Y-亮绿/固绿复染步骤。该方法可以包括“着蓝(bluing)”步骤。有利地，巴氏染色产生带有透明细胞胞质的样品，这对于分析覆盖了多层的细胞诸如来自阴道抹片检查的细胞是特别有用的。
在开始巴氏染色过程之前，样品必需经固定。可以使用任何可以产生满意效果的固定方法。醇固定法通常用于巴氏染色，如95％的乙醇、100％的甲醇、80％的丙醇或95％的乙醇/醚(1∶1)。也可以使用商品化的喷雾固定剂。
典型的巴氏染色过程包括与金属媒染剂结合使用的苏木精染色步骤，以使细胞的染色质染色，可以递增或递减地进行。染色质染色是这种检测的关键部分，因为染色质的大小、染色强度和染色图案是分析样品中的异常细胞的关键要素。任何形式的苏木精均可使用，包括Harris’s、Gill’s、Delafield’s、Ehrlich’s或Mayer’s苏木精。也可以使用苏木精应用染料的替代物如，劳氏紫、维多利亚蓝B、天青B等。
如果以递减的方式进行，先将该样品过染，然后用试剂(如，稀HCl)使之区分开，该试剂可以将染色强度降至所希望的水平。这引起所着染的颜色从蓝色/紫色到浅橙色/红色的变化。可以使用本领域已知的试剂(如，Scott’s自来水替代物、氨水、碳酸锂)利用“着蓝”步骤重新建立蓝色。该着蓝溶液可以在没有区分步骤的情况下加入。
在巴氏染色中使用了多种细胞质复染剂，以便能够鉴别样品中的多种细胞类型、它们的形态以及它们的频度。
细胞质染色剂橘黄G以及伊红Y-亮绿/固绿是在醇中制备的。橘黄G是单色染色剂，其在角蛋白存在时将细胞胞质着染成黄色或橙色，能够使成熟或正在成熟的产生角蛋白的恶性细胞与较小的明显良性细胞区分开来。橘黄G可以以细胞染色领域中已知的溶液形式使用，如以OG-6的形式。
按照惯例，伊红Y-亮绿/固绿是以三种染色剂，即伊红Y、亮绿SF和/或固绿FCF、以及俾斯麦棕的混合物形式制备的。典型的混合物包括EA36、EA50及EA65。伊红Y在核仁、纤毛、红细胞及成熟的鳞状细胞的细胞质中产生粉红色。亮绿SF淡黄(LightGreen SF Yellowish)和固绿FCF在代谢活跃的副基(parabasal)鳞状细胞、中间鳞状细胞及柱状细胞的细胞质中产生蓝色/绿色。俾斯麦棕在巴氏染色中不产生有用的染色图案，并且可以在本方法的多种变化形式中被排除。还可以使用亮绿SF淡黄的替代物，如固绿FCF。细胞质复染剂还可以是在单一溶液中产生的OG与伊红Y-亮绿/固绿的混合物，用作复染剂。
这些细胞质复染剂是在醇中制备的，该醇所导致的透明细胞质在分析通过巴氏过程染色的样品时非常重要。
在适当的时候，如在水溶液和非水溶液之间转换时的水合/脱水过程，将清洗步骤结合到该染色过程中。该染色过程完成后，可以如在本领域所公知的对样品进行清洗和封固。可以在进行巴氏过程之前或之后在样品上进行另外的操作。随后可以人工和/或借助于合适的装置，如自动成像系统，来对该样品进行分析。自动成像系统的实例包括：Cytyc公司的ThinPrep成像系统、TriPath FocalPointTM断面仪、ChromaVision Acis系统、CompuCyt iCyte成像系统、应用成像CytoVisionTM系统以及Veracel Verasys成像系统。
可以对巴氏染色过程进行多种改变，这在本领域是公知的。例如，可以将该过程改变成如同美国专利第5,168,066号和第6,348,325号(分别于1992年12月1日和2002年2月19日出版，并转让给Cytyc公司)那样，以便结合使用劳氏紫。也能够使用其它的噻嗪染料和三芳甲烷染料。
样品
将要分析的样品部分可以是任何来源的生物材料，该生物材料可以从活的有机体直接或间接得到，包括细胞、组织或体液。样品的非限制性的实例包括：血、尿、精液、奶、痰液、粘液、胸膜液、骨盆液、关节液、腹水液、体腔洗液、眼冲洗液、皮肤刮下物、口腔拭抹物、阴道拭抹物、阴道抹片检查物、直肠拭抹物、抽出物、穿刺活检物、获得的组织切片(例如通过手术或尸体剖检得到的)、血浆、血清、脊髓液、淋巴液、(皮肤、呼吸、肠以及泌尿生殖道的)外分泌物、泪液、唾液、肿瘤、器官以及体外细胞培养成分的样品。典型的样品是阴道抹片检查物，其是在妇产科检查或怀疑包含异常细胞的活组织检查中常规得到的。
样品可以是已知包含异常细胞的阳性对照样品。也可以用阴性对照样品，该阴性对照样品用于确定一组给定的染色条件是否会产生假阳性(即使样品中不存在异常细胞时也存在的阳性信号)。
通常，样品在载玻片或类似的玻璃表面上染色，例如管瓶、盖玻片、或其它用于分析样品的对入射光透光的表面。
去污剂
任何可检测到减少巴氏染色过程中产生的人为假象的去污剂均可使用。以适于可检测到减少人为假象的量和时间来使用去污剂。通过结合如本文中所述的去污剂清洗，至少一种这样的人为假象的百分比可以令人满意地被减少至少约10％、20％、30％、40％、50％、70％、90％、95％、98％或更多。当被用在选择载玻片的某些区域(“感兴趣的区域”)的成像系统中，用以对基于本领域公知的多种参数中的任意参数进行分析时，本发明可以令人满意地减少假性被选区域的数目(假性被选区域是基于染色的人为假象而被假性选择用于分析的区域，该染色人为假象符合成像系统的选择标准)至少约10％、20％、30％、40％、50％、70％、90％、95％、98％或更多。这提高了所选择的用于分析的有效区域的百分比。
去污剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的或两性离子的。也可以使用去污剂的混合物。去污剂的典型类别包括：醇醚硫酸盐、醇硫酸盐、烷醇酰胺、烷基磺酸盐、氧化胺、两性去污剂、阴离子去污剂、甜菜碱衍生物、阳离子去污剂、二磺酸盐、十二烷基苯磺酸、乙氧基化醇类、乙氧基化烷基酚、乙氧基化脂肪酸、甘油酯水溶助剂、十二烷基硫酸盐、单酸甘油酯和甘油二酯、非离子去污剂、磷酸酯、季铵盐类去污剂以及失水山梨糖醇衍生物。
典型的非离子性去污剂包括：BigCHAP(N，N-双[3-(D-葡糖酰胺)丙基]胆酰胺)、二(聚乙二醇二[咪唑基羰基])、Brij30(聚氧乙烯4月桂基醚)、Brij35(聚氧乙烯23月桂基醚)、Brij52(聚氧乙烯2鲸蜡基醚)、Brij56(聚氧乙烯10鲸蜡基醚)、Brij58(聚氧乙烯20鲸蜡基醚)、Brij72(聚氧乙烯2硬脂基醚)、Brij76(聚氧乙烯10硬脂基醚)、Brij78(聚氧乙烯20硬脂基醚)、Brij92(聚氧乙烯2油基醚)、Brij97(聚氧乙烯10油基醚)、Brij98(聚氧乙烯20油基醚)、Brij700(聚氧乙烯100硬脂基醚)、CremophorEL(蓖麻油/环氧乙烷聚醚)、十(乙二醇)单十二烷基醚、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺(MECA-8)、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺(MECA-10)、正辛基葡糖苷、正十二烷基葡糖苷、异十三烷基-聚(乙二醇醚)n、N-癸酰基-N-甲基葡糖胺、正癸基α-D-吡喃葡糖苷、癸基β-D-麦芽糖吡喃糖苷、正十二烷酰-N-甲基葡糖酰胺、正十二烷基α-D-麦芽糖苷、正十二烷基β-D-麦芽糖苷、七(乙二醇)单癸基醚、七(乙二醇)单十四烷基醚、正十六烷基β-D-麦芽糖苷、六(乙二醇)单十二烷基醚、六(乙二醇)单十六烷基醚、六(乙二醇)单十八烷基醚、六(乙二醇)单十四烷基醚、Igepal CA-630(辛苯基-聚乙二醇)、IgepalCA-210(聚氧乙烯(2)异辛苯基醚)、IgepalCA-520(聚氧乙烯(5)异辛基苯基醚)、IgepalCO-630(聚氧乙烯(9)壬基苯基醚)、IgepalCO-720(聚氧乙烯(12)壬基苯基醚)、IgepalCO-890(聚氧乙烯(40)壬基苯基醚)、IgepalCO-990(聚氧乙烯(100)壬基苯基醚)、IgepalDM-970(聚氧乙烯(150)二壬基苯基醚)、甲基-6-O-(N-庚基氨基甲酰基)-α-D-吡喃葡糖苷、九(乙二醇)单十二烷基醚、N-壬酰基-N-甲基葡糖胺、八(乙二醇)单癸基醚、八(乙二醇)单十二烷基醚、八(乙二醇)单十六烷基醚、八(乙二醇)单十八烷基醚、八(乙二醇)单十四烷基醚、辛基-β-D-吡喃葡糖苷、五(乙二醇)单癸基醚、五(乙二醇)单十二烷基醚、五(乙二醇)单十六烷基醚、五(乙二醇)单己基醚、五(乙二醇)单十八烷基醚、五(乙二醇)单辛基醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚乙二醇醚W-1、聚氧乙烯10十三烷基醚、聚氧乙烯100硬脂酸酯、聚氧乙烯20异十六烷基醚、聚氧乙烯20油基醚、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚氧乙烯50硬脂酸酯、聚氧乙烯8硬脂酸酯、聚氧乙烯二(咪唑基羰基)、聚氧乙烯25丙二醇硬脂酸酯、皂角甙、Span20(失水山梨糖醇单月桂酸酯)、Span40(失水山梨糖醇单棕榈酸酯)、Span60(失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、Span65(失水山梨糖醇三硬脂酸酯)、Span80(失水山梨糖醇单油酸酯)、Span85(失水山梨糖醇三油酸酯)、任何形式的润湿剂(包括的类型有：15-S-5、15-S-7、15-S-9、15-S-12、15-S-30、NP-4、NP-7、NP-9、NP-10、NP-40、NPX(Imbentin-N/63)、TMN-3(聚乙二醇三甲基壬基醚)、TMN-6(聚乙二醇三甲基壬基醚)、TMN-10(聚乙二醇三甲基壬基醚)、MIN FORM 1x以及MINFORM 2x)、十四烷基-β-D-麦芽糖苷、四(乙二醇)单癸基醚、四(乙二醇)单十二烷基醚、四(乙二醇)单十四烷基醚、三(乙二醇)单癸基醚、三(乙二醇)单十二烷基醚、三(乙二醇)单十六烷基醚、三(乙二醇)单辛基醚、三(乙二醇)单十四烷基醚、TritonCF-21、CF-32、DF-12、DF-16、GR-5M、N-101(聚氧乙烯支链的壬基苯基醚)、QS-15、QS-44、RW-75(聚乙二醇260单(十六烷基/十八烷基)醚和1-十八烷醇)、X-100(聚乙二醇叔-辛基苯基醚)、X-102、X-15、X-151、X-200、X-207、X-114、X-165、X-305、X-405(聚氧乙烯(40)异辛基苯基醚)、还原的X-405(聚氧乙烯(40)异辛基环己基醚)、X-45(聚乙二醇4-叔辛基苯基醚)、X-705-70、任何形式的(包括20(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯)、21(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯)、40(聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇单棕榈酸酯)、60(聚乙二醇失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、61(聚乙二醇失水山梨糖醇单硬脂酸酯)、65(聚氧乙烯失水山梨糖醇三硬脂酸酯)、80(聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)、81(聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯)以及85(聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇三油酸酯))、四丁酚醛(带有甲醛和环氧乙烷的4-(1，1，3，3-四甲基丁基)苯酚聚合物)以及正十一烷基β-D-吡喃葡糖苷。
典型的阴离子去污剂包括：鹅脱氧胆酸、胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸、毛地黄皂苷、毛地黄毒苷配基、N，N-二甲基十二烷胺-N-氧化物、多库酯钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸-3-硫酸二钠盐、甘氨石胆酸乙基酯、N-月桂酰基肌氨酸、十二烷基硫酸锂、Lugol(碘-碘化钾)、Niaproof(2-乙基己基硫酸钠盐)、Niaproof 4(7-乙基-2-甲基-4-十一烷基硫酸钠盐)、可选取代的烷基磺酸盐(包括：1-丁磺酸盐、戊磺酸盐、己磺酸盐、1-辛磺酸盐、1-癸磺酸盐、1-十二烷基磺酸盐、1-庚磺酸盐、1-庚磺酸盐、1-壬磺酸盐、1-丙磺酸盐以及2-溴乙磺酸盐，尤其是钠盐)、胆酸钠、脱氧胆酸钠、可选取代的十二烷基硫酸钠、辛基硫酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺鹅脱氧胆酸钠、牛磺猪脱氧胆酸钠、牛磺石胆酸-3-硫酸二钠盐、牛磺熊脱氧胆酸钠盐、Trizma十二烷基硫酸盐、熊脱氧胆酸。该阴离子去污剂可以以酸或盐、或者两者均有的形式提供。
典型的阳离子去污剂包括：烷基三甲基溴化铵、苯扎氯铵、苄基二甲基十六烷基氯化铵、苄基二甲基十四烷基氯化铵、苄基十二烷基二甲基溴化铵、苄基三甲基四氯碘酸铵、二甲基双(十八烷基)溴化铵、十二烷基乙基二甲基溴化铵、十二烷基三甲基溴化铵、乙基十六烷基二甲基溴化铵、吉拉德(Girard’s)试剂T、十六烷基三甲基溴化铵、N，N’，N’-聚氧乙烯(10)-N-牛油-1，3-二氨基丙烷、通佐溴铵以及三甲基(十四烷基)溴化铵。
典型的两性离子去污剂包括：CHAPS(3-{(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基}-1-丙磺酸盐)、CHAPSO(3-{(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基}-2-羟基-1-丙磺酸盐)、3-(癸基二甲氨基)丙磺酸盐、3-(十二烷基二甲氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基十四烷基氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基十八烷基氨基)丙磺酸盐、3-(N，N-二甲基辛基氨基)丙磺酸盐以及3-(N，N-二甲基棕榈基氨基)丙磺酸盐。
去污剂包括那些本领域已知的或发现的去污剂。去污剂可以合成或从许多厂商中的任何一个(如Sigma-Aldrich公司，St.Louis，MO，USA，www.simmaaldrich.com)商业获得。已经发现苯扎氯铵和CHAPS对于减少巴氏染色过程中的人为假象特别有用。
可以将给定的去污剂通过在巴氏染色过程中结合到清洗步骤来检测其减少人为假象的能力，该巴氏染色过程可以在已知产生染色的人为假象的条件下进行。然后可以通过与未经去污剂处理的样品进行对照，并且与用苯扎氯铵处理或其它已知的减少染色人为假象的阳性对照处理的样品进行对照，来评估用试验去污剂处理的样品。
通常，所使用的去污剂的量是使用去污剂的溶液的至少约0.0001％并可高达约10％，并且去污剂的量可以是溶液的至少约0.0005％、0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、或1％或更多；去污剂的量可以是溶液的约5％或更少、约2.5％或更少、约2％或更少、约1％或更少、约0.5％或更少、约0.2％或更少、约0.1％或更少、约0.05％或更少、或其间的任何范围或子范围。
去污剂处理可以在任何能够使人为假象减少同时不会对分析样品的能力有不利影响的pH下进行。因此去污剂处理可以在pH约为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或其间的任何范围或子范围内进行。通常该处理在pH约为2到约为8之间进行。
去污剂可以在巴氏染色过程的任何时刻使用。例如，去污剂可以在苏木精染色前使用、与苏木精染色混合使用、在苏木精染色后使用、与着蓝溶液结合使用、在着蓝溶液之后使用、或者与橘黄G、伊红Y-亮绿/固绿或其它复染溶液结合使用。
实施例
阐述下面的实施例的目的是给本领域普通技术人员提供怎样制备和使用本发明的完整描述，而不是用来限制本发明的保护范围的。虽然已经尽力确保所使用的相关数目(如数量、温度等)的准确性，但应该对一些实验误差和偏差加以考虑。除非指明另外的情况，份是按照重量份、温度是摄氏度以及压力是处于或接近大气压、并且所有的材料都是可商业获得的。
实施例1
在阴道抹片检查的载玻片上可以非常明显地发现细胞质分裂，该载玻片是在检测条件即巴氏染色条件下处理的。为了对用于减少细胞质分裂的方法进行试验，获得了4种不同的阴道抹片检查物样品，由样品制作载玻片，固定，使其干燥一天，然后根据下面的步骤利用改进的巴氏染色方法进行染色：
步骤：1 开启工作台
2 试验清洗步骤
3 5分钟 50％的试剂乙醇
4 5分钟 盐溶液(50％的乙醇中的10％的NaCl)
5 5分钟 盐溶液(50％的乙醇中的10％的NaCl)
6 1分钟 95％的试剂乙醇
7 1分钟 95％的试剂乙醇
8-22 1分钟 细胞核染色(15分钟)
23 20秒 异丙醇
24 20秒 异丙醇
25 30秒 异丙醇
26 20秒 异丙醇
27-34 1分钟 复染剂(橘黄G和伊红-固绿/亮绿的混合物)(8分钟)
35 30秒 100％的试剂乙醇
36 3分钟 异丙醇
37 3分钟 异丙醇
38 1分钟 二甲苯
39 3分钟 二甲苯
40 结束 二甲苯
将载玻片移到最后的二甲苯中
利用封固剂(Permount)人工封固盖玻
片
四种样品均产生了细胞质分裂，并且进行试验清洗步骤以确定可以减少人为假象的条件。由每个样品制备十个载玻片。在来自每个样品的十个载玻片上分别进行五分钟水洗、十五分钟水洗、以及利用FC120表面活性剂(3M公司)的十五分钟清洗和利用FC170表面活性剂(3M公司)的十五分钟清洗。已经发现这些清洗条件均不能显著减少细胞质分裂的染色的人为假象。
十个另外的载玻片是由四种样品中的每一个制备的，并且进行了更多的试验清洗步骤，包括在下述任何一种溶液中进行十五分钟的清洗：0.1％的FC170 pH为6.9、0.1％的Tween80 pH为6.9、0.1％的Igepal CA-630 pH为7.0、0.1％的CHAPS pH为7.7、0.1％的ZEPHIRAN pH为7.2、水、盐溶液步骤之前没有50％乙醇步骤的水、没有盐溶液步骤的水、以及在盐溶液步骤和没有盐溶液步骤之前没有50％的乙醇步骤的水。
ZEPHIRAN(苯扎氯铵)显著减少了假性蓝色细胞质染色，并且减少了细胞质分裂。CHAPS在这个浓度也将两种人为假象减少到一定程度。其它处理在给定的浓度对这些染色的人为假象几乎没有影响。
实施例2
结合去污剂清洗步骤的巴氏染色方案的实施例如下：