非天然异香豆素衍生物的制备和用途转让专利
申请号 : CN200510122353.X
文献号 : CN1785993B
文献日 : 2012-03-14
发明人 : 范志金 , 瓜勒姆.瓜弟尔 , 那斯姆.汗山.拉姆
申请人 : 南开大学
摘要 :
本发明提供了一种非天然异香豆素衍生物的合成方法，提供了异香豆素衍生物在农药领域的用途，涉及卤素取代的异香豆素衍生物，它们具有如下化学结构通式：其中包括7种异香豆素衍生物(A系列)。本发明公开了这些化合物的合成方法及其用于农业病害和草害防除的使用方法和用途。
权利要求 :
1.异香豆素类衍生物，其特征在于：具有以下的化学结构通式：
其中，R是：3，5-二氟苯基；3，4-二氟苯基；2，4-二氟苯基；2，3-二氟苯基。
2.异香豆素类衍生物的合成方法，其特征在于总的合成路线是：
其中，R是：3，5-二氟苯基；3，4-二氟苯基；2，4-二氟苯基；2，3-二氟苯基；
具体操作步骤如下：
二氟苯基异香豆素的制备：
二卤代苯甲酸，是3，5-二氟苯甲酸，3，4-二氟苯甲酸，2，4-二氟苯甲酸或2，3-二氟苯甲酸，上述一种二卤代苯甲酸各53.0毫摩尔和亚硫酰氯38.0毫摩尔的混合物中加入一滴DMF，回流30分钟，当不再生成气体时，减压除去亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯50.0毫摩尔，分别是3，5-二氟苯甲酰氯，3，4-二氟苯甲酰氯，2，4-二氟苯甲酰氯或2，3-二氟苯甲酰氯中的一种；将邻羧基苯乙酸11.3毫摩尔和一种二卤代苯甲酰氯47.0毫摩尔混合，二卤代苯甲酰氯是3，5-二氟苯甲酰氯，3，4-二氟苯甲酰氯，2，4-二氟苯甲酰氯或2，3-二氟苯甲酰氯，将混合物加热到200摄氏度并回流4小时，冷却后的反应混合物用乙酸乙酯溶解，然后加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸，分离出有机相，浓缩后用聚酯醚40到80摄氏度作为洗脱剂过硅胶柱层析得异香豆素化合物，分别是3-(3′，5′-二氟苯基)异香豆素，3-(3′，4′-二氟苯基)异香豆素，3-(2′，4′-二氟苯基)异香豆素或3-(2′，
3′-二氟苯基)异香豆素中的一种，通过甲醇重结晶纯化，上述化合物的用量按相应比例扩大或缩小。
3.权利要求1所述的异香豆素类衍生物用于农业病害防治的方法和用途。
4.权利要求1所述的异香豆素类衍生物用于农业杂草防除的方法和用途。
说明书 :
非天然异香豆素衍生物的制备和用途
技术领域
[0001] 本发明的技术方案涉及卤素取代的异香豆素衍生物，具体地说是涉及异香豆素衍生物和合成这类衍生物的制备方法和用途。
背景技术
[0002] 异香豆素(学名：1H-2-苯并吡喃-1-酮)是一些天然产物的基本结构，广泛存在于自然界，其衍生物具有广泛的生理和生物活性如抗菌、消炎、抗癌、抑制蛋白酶和除草等以及明显的抗癌活性(李丽，杨锦飞，袁相爱，异香豆素类化合物的合成研究及新进展，南京师范大学学报(工程技术版)，2005，5(2)：64-67.)。异香豆素和3，4-二氢异香豆素是真菌、苔藓、霉菌、细菌、高等植物和动物的次级代谢物，现已从真菌类的艾属、曲霉菌、喙壳菌、镰刀霉、青霉菌、链霉菌等物种中分离得到。他们也是木棉科、菊科、豆科、杨梅科、虎耳草科和百合科等高等植物的组分。
[0003] 含有卤素的天然的异香豆素非常稀少，含氟的天然异香豆素至今仍没有被发现，仅含氯和溴的天然异香豆素已有报道，Thomas等(Thomas O.L.and Jens B.，Dichlorodiaportin，diaportinol，and diaportinic acid：Three novel isocoumarins from Penicillium nalgiovense.J.Nat.Prod.62，1182(1999))已经从青霉菌的干酪培养物中分离得到含有氯的代谢物dichlorodiaportin(01)。Stalder从子囊菌培养物中分离得到4-溴-6-羟基蜂蜜曲菌素(02)(Stadler，M.，H.Anke&O.Sterner.Metabolites with nematicidal and antimicrobial activities from the ascomycete Lachnum papyraceum(Karst.)Karst.III.Production of novel isocoumarin derivatives，isolation，and biological activites.J.Antibiotics 48，261-266，(1995))。 人 工合成的含氟的异香豆素也很少，Chuikov等(Chuikov I.P.，Karpov V.M.and Platonov V.E.；C.A.118：124161c.)报道了3，3，4，5，6，7，8-七氟-4-三氟甲基-3，4-二氢异香豆素(03)和3，3，4，4，5，6，7，8-八氟-3，4-二氢异香豆素的合成。一个类似的异香豆素的合成也已经被Karpov等报道。Beautement(Beautement K.and Clough J.M.Tetrahedron Lett.，B25，3025(1984))等合成了在异香豆素4位上连有氟取代的苯基的异香豆素(04)。在3位上连有氟苯基的3，4-二氢异香豆素(05)也已被Crenshaw合成(Crenshaw，L.；
Khanapure，S.P.Siriwardane，U.；Biehl，E.R.A Stereocontrolled Synthesis of cis-3，
4-Diarylisochroman-1-one Through Diastereoselective Reaction of Benzaldehyde and a-Lithio-2-cyanodiarylmethane Intermediate.Tetrahedron Lett.1988，29，
3777.)。4-氯-3-[(4-氟苯基)甲氧基]异香豆素(06)已被发现是人体Q31颗粒溶解霉A的有效抑制剂(Odake S.，Kam C.M.，Narasimhan L.，Poe M.，Blake J.T.，Krahenbuhl O.，Tschopp J.and Powers J.C.；Human and murine cytotoxic substrates and inhibition of enzyme activity and cytolysis by isocoumarins.Biochemistry，
30，2217-2227，1991)，鼠类和人类颗粒溶解霉A是从细胞毒素T淋巴细胞分离得到的。这种异香豆素(06)可以作为丝氨酸蛋白酶抑制剂来治疗肺气肿(Hudig D.，Allison N.J.，Kam C.M.and Powers J.C.；Selective isocoumarin serine protease inhibitors block RNK-16lymphocyte granule-mediated cytolysis.Mol.Immunol.，26，793-798，1989)。
3-氟-3，4-二氢-5，8-二甲氧基异香豆素(07)可以抑制发炎(Hudig D.，Allison N.J.，Kam C.M.and Powers J.C.；Selective isocoumarin serine protease inhibitors block RNK-16 lymphocyte granule-mediated cytolysis.Mol.Immunol.，26，793-798，1989)。本发明的申请人合成了3(3′-氯-4′-氟苯基)-3，4-二氢异香豆素(08)，发现它们具有抗细菌和抗真菌活性，但过去没有公开其结构和活性。6-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-3，4-二氢异香豆素(09)可以作为除草剂(Clark M.T.and Gilmore I.J.；C.A，111，19479v.)，它几乎可以完全控制穇子、白芥和其他杂草的生长。
Khanapure，S.P.Siriwardane，U.；Biehl，E.R.A Stereocontrolled Synthesis of cis-3，
4-Diarylisochroman-1-one Through Diastereoselective Reaction of Benzaldehyde and a-Lithio-2-cyanodiarylmethane Intermediate.Tetrahedron Lett.1988，29，
3777.)。4-氯-3-[(4-氟苯基)甲氧基]异香豆素(06)已被发现是人体Q31颗粒溶解霉A的有效抑制剂(Odake S.，Kam C.M.，Narasimhan L.，Poe M.，Blake J.T.，Krahenbuhl O.，Tschopp J.and Powers J.C.；Human and murine cytotoxic substrates and inhibition of enzyme activity and cytolysis by isocoumarins.Biochemistry，
30，2217-2227，1991)，鼠类和人类颗粒溶解霉A是从细胞毒素T淋巴细胞分离得到的。这种异香豆素(06)可以作为丝氨酸蛋白酶抑制剂来治疗肺气肿(Hudig D.，Allison N.J.，Kam C.M.and Powers J.C.；Selective isocoumarin serine protease inhibitors block RNK-16lymphocyte granule-mediated cytolysis.Mol.Immunol.，26，793-798，1989)。
3-氟-3，4-二氢-5，8-二甲氧基异香豆素(07)可以抑制发炎(Hudig D.，Allison N.J.，Kam C.M.and Powers J.C.；Selective isocoumarin serine protease inhibitors block RNK-16 lymphocyte granule-mediated cytolysis.Mol.Immunol.，26，793-798，1989)。本发明的申请人合成了3(3′-氯-4′-氟苯基)-3，4-二氢异香豆素(08)，发现它们具有抗细菌和抗真菌活性，但过去没有公开其结构和活性。6-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-3，4-二氢异香豆素(09)可以作为除草剂(Clark M.T.and Gilmore I.J.；C.A，111，19479v.)，它几乎可以完全控制穇子、白芥和其他杂草的生长。
[0004] 7-氨基-4-氯-3-(2′-溴乙氧基)异香豆素(10)已经被合成(Kerrigan，J.E.；Oleksyszyn，J.；Kam，C.-M.；Selzler，J.；Powers，J.C.Mechanism-based inhibitors for human leukocyte elastase.Effect of the 7-amino substituent and 3-alkoxy group in 7-amino-4-chloro-3-alkoxyisocoumarins on inhibitory potency，J.Med.Chem.1995，38，544-552.)，并被认为是一种潜在的人体白细胞胰肽酶和血凝酶的抑制剂 (Kam，C.；Kerrigan，J.E.；Plaskon，R.；Duffy，E.J.；Lollar，P.；Suddath，F.L.；
Powers，J.C.Mechanism-based isocoumarin inhibitors for blood coagulation serine proteases.Effect of the 7-Substituent in 7-amino-4-chloro-3-isothiureidoalkoxyisocoumarin derivatives on inhibitory and anticoagulant potency，J.Med.Chem.1994，37，1298-1306.)。7-氨基-3-(2/3-溴丙氧基)-4-氯异香豆素可用于治疗神经退化性疾病，3-溴乙基-6，8-羟基异香豆素(11a)是一种抗癌抗生素异香 豆 素(11b) 的 中 间 体。Hussain(Hussan M.T.，Nasim H.Rama&A Malik；Synthies of some new 3-(Bromopheny)isocoumarins and their conversion to(dl)-3，
4-dihydroisocoumarins.Indian J.Chem.Section B，40B，372-6，2001.)在Rama博士的指导下已经合成了3-(溴苯基)异香豆素(12a-c)，这种物质经测试具有抗细菌和抗真菌活性，但过去没有公开其活性。
Powers，J.C.Mechanism-based isocoumarin inhibitors for blood coagulation serine proteases.Effect of the 7-Substituent in 7-amino-4-chloro-3-isothiureidoalkoxyisocoumarin derivatives on inhibitory and anticoagulant potency，J.Med.Chem.1994，37，1298-1306.)。7-氨基-3-(2/3-溴丙氧基)-4-氯异香豆素可用于治疗神经退化性疾病，3-溴乙基-6，8-羟基异香豆素(11a)是一种抗癌抗生素异香 豆 素(11b) 的 中 间 体。Hussain(Hussan M.T.，Nasim H.Rama&A Malik；Synthies of some new 3-(Bromopheny)isocoumarins and their conversion to(dl)-3，
4-dihydroisocoumarins.Indian J.Chem.Section B，40B，372-6，2001.)在Rama博士的指导下已经合成了3-(溴苯基)异香豆素(12a-c)，这种物质经测试具有抗细菌和抗真菌活性，但过去没有公开其活性。
[0005] Balasubramanian(Balasubramanian T.R.and Nagarajan A.Indian J.Chem.，27B，380(1988))已经制备了四种异香豆素(13a-d)，这些化合物是通过2-烷基苯甲酸和N-丁二酰亚胺的内酯化使碘位于4位上的，他也报道了通过金属有机路线来合成异香豆素(14a-d)的简单方法(Waitz J.A.and Deuve C.G.Antifungal agents.Annu.Rep.Med.Chem.，7，109，1972)。
[0006]
[0007] 在国内外专利文献公开的异香豆素衍生物中许多的化合物具有重要的生理活性和生物活性，香豆素类化合物已经被用做杀鼠剂和除草剂等农药使用，目前已经报道的异香豆素衍生物合成的专利很多，但具有生物活性尤其是农药生物活性的报道相对较少，近几年来国内外专利中报道的异香豆素衍生物及其生物活性的情况见表1。由表1可见，在具有生物活性的异香豆素化合物中其取代基中均提到了含有卤素原子，最近，Zahid Shafig等合成了部分二卤代的异香豆素衍生物包括3-(2′，4′-氯苯基)异香豆素、3-(3′，4′-氯苯基)异香豆素和3-(2′-氯-6′-氟苯基)异香豆素及其3，
4-二氢衍生物(Zahid Shafig，Muhammad Arfan，Nasim Hasan Rama，Shahid Hameed，Ghulam Abbas，Muhammad Tahir Hussain.Synthesis of some new dihalophenyl and dihalobenzylisocoumarins and their(dl)-3，4-dihydroderivatives.Turk J Chem，
2005，29，321-325.)，由于与卤素取代的异香豆素衍生物具有较好的生物活性，本发明合成了部分新的3-卤代苯基异香豆素和由它们转化的3，4-二氢衍生物，并对这些化合物进行了相关的生物活性测试，以便能够检测它们的医药如抗真菌和细菌以及细胞毒性等活性以及农药如除草、杀虫、杀菌等植物疾病控制活性。
4-二氢衍生物(Zahid Shafig，Muhammad Arfan，Nasim Hasan Rama，Shahid Hameed，Ghulam Abbas，Muhammad Tahir Hussain.Synthesis of some new dihalophenyl and dihalobenzylisocoumarins and their(dl)-3，4-dihydroderivatives.Turk J Chem，
2005，29，321-325.)，由于与卤素取代的异香豆素衍生物具有较好的生物活性，本发明合成了部分新的3-卤代苯基异香豆素和由它们转化的3，4-二氢衍生物，并对这些化合物进行了相关的生物活性测试，以便能够检测它们的医药如抗真菌和细菌以及细胞毒性等活性以及农药如除草、杀虫、杀菌等植物疾病控制活性。
[0008] 表1具有生物活性的异香豆素衍生物
[0009]
[0010]
发明内容
[0011] 本发明所要解决的技术问题是：提供进行农药生物活性筛选的异香豆素类衍生物及其合成方法和农药生物活性的筛选以及用途。
[0012] 本发明解决该技术问题所采用的技术方案是：异香豆素类衍生物及其中间体的化学结构通式如下，其具体的化学结构式表示见I所示：
[0013]
[0014] R是：3，5-二氯苯基或3，5-二氟苯基或2，3-二氯苯基或3，4-二氟苯基或2，5-二氯苯基或2，4-二氟苯基或2，3-二氟苯基。
[0015] I.本发明中合成的异香豆素类衍生物的化学结构：
[0016]
[0017] 本发明的异香豆素类衍生物的合成方法如下：
[0018]
[0019] 具体分为以下步骤：
[0020] 本发明中所有化合物的熔点用Gallenkemp熔点仪(未校正)在开放的毛细管中1
测得；红外光谱是Hitachi型270-50红外光谱仪测定的；H-NMR(400MHz)以TMS作为内标，在AM-400仪器上测定，EI-MS是在MAT-112-S仪器上测定，所用石油醚沸点为40到80摄氏度。
测得；红外光谱是Hitachi型270-50红外光谱仪测定的；H-NMR(400MHz)以TMS作为内标，在AM-400仪器上测定，EI-MS是在MAT-112-S仪器上测定，所用石油醚沸点为40到80摄氏度。
[0021] I.二氯苯基和二氟苯基异香豆素(31，32，33，41，42，43，44)A的制备：
[0022] 其合成的反应方程式如下：
[0023]
[0024] R是：3，5-二氯苯基或3，5-二氟苯基或2，3-二氯苯基或3，4-二氟苯基或2，5-二氯苯基或2，4-二氟苯基或2，3-二氟苯基
[0025] 在二卤代苯甲酸53.0毫摩尔和亚硫酰氯38.0毫摩尔的混合物中加入一滴DMF，回流30分钟，当不再生成气体时，减压除去亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯50.0毫摩尔；将邻羧基苯乙酸11.3毫摩尔和二卤代苯甲酰氯47.0毫摩尔的混合物加热到200摄氏度并回流4小时，冷却后的反应混合物用乙酸乙酯溶解，然后加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸，分离出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得1
异香豆素化合物，通过甲醇重结晶纯化，测定熔点和 H NMR以及其他的结构参数；所述的二卤代苯甲酸是3，5-二氯苯基苯甲酸或3，5-二氟苯甲酸或2，3-二氯苯甲酸或3，4-二氟苯甲酸或2，5-二氯苯甲酸或2，4-二氟苯甲酸或2，3-二氟苯甲酸；所述的二卤代苯甲酰氯是
3，5-二氯苯基苯甲酰氯或3，5-二氟苯甲酰氯或2，3-二氯苯甲酰氯或3，4-二氟苯甲酰氯或2，5-二氯苯甲酰氯或2，4-二氟苯甲酰氯或2，3-二氟苯甲酰氯；所述的异香豆素化合物是3-3′，5′-氯苯基异香豆素或3-3′，5′-二氟苯基异香豆素或3-2′，3′-二氯苯基异香豆素或3-3′，4′-二氟苯基异香豆素或3-2′，5′-二氯苯基异香豆素或3-2′，
4′-二氟苯基异香豆素或3-2′，3′-二氟苯基异香豆素。
异香豆素化合物，通过甲醇重结晶纯化，测定熔点和 H NMR以及其他的结构参数；所述的二卤代苯甲酸是3，5-二氯苯基苯甲酸或3，5-二氟苯甲酸或2，3-二氯苯甲酸或3，4-二氟苯甲酸或2，5-二氯苯甲酸或2，4-二氟苯甲酸或2，3-二氟苯甲酸；所述的二卤代苯甲酰氯是
3，5-二氯苯基苯甲酰氯或3，5-二氟苯甲酰氯或2，3-二氯苯甲酰氯或3，4-二氟苯甲酰氯或2，5-二氯苯甲酰氯或2，4-二氟苯甲酰氯或2，3-二氟苯甲酰氯；所述的异香豆素化合物是3-3′，5′-氯苯基异香豆素或3-3′，5′-二氟苯基异香豆素或3-2′，3′-二氯苯基异香豆素或3-3′，4′-二氟苯基异香豆素或3-2′，5′-二氯苯基异香豆素或3-2′，
4′-二氟苯基异香豆素或3-2′，3′-二氟苯基异香豆素。
[0026] 本发明的苯并噻二唑衍生物生物活性的筛选方法如下：
[0027] I.除草活性的筛选方法：采用温室盆栽法进行，分苗前土壤处理和苗后茎叶处理，处理剂量为750克/公顷，施药方法为喷施，于施药后15天测定地上部鲜重抑制百分率，测定试材包括油菜(Brassica campestris)、稗草(Echinochloa crus-galli)、苋菜(Amaranthus retroflexus L.)和马唐(Digitaria sanguinalis(L.)Scop)；
[0028] II.杀虫活性的筛选方法：粘虫(Mythimna separata)采用浸叶法，用玉米叶浸渍于丙酮配制的药液中(500微克/毫升)，待药液后接入4龄幼虫，主要测定胃毒和触杀作用，24、96小时检查试验结果(观察昆虫生长调节剂作用)，用死亡百分率表示杀虫活性高低。蚊幼虫(Culex pipiens pallens)的测定是将4龄幼虫放入一定浓度(5微克/毫升)的药液(水)中，24小时检查蚊幼虫的死亡情况；
[0029] III.杀菌活性的筛选方法：采用菌体生长率测定法(Mycelium growth rate test)，具体过程是，取5毫克样品溶解在适量二甲基甲酰胺内，然后用含有一定量吐温20乳化剂水溶液稀释至500微克/毫升的药剂，将供试药剂在无菌条件下各吸取1毫升注入培养皿内，再分别加入9毫升培养基，摇匀后制成50微克/毫升含药平板，以添加1毫升灭菌水的平板做空白对照，用直径4毫米的打孔器沿菌丝外缘切取菌盘，移至含药平板上，呈等边三角形摆放，每处理重复3次，将培养皿放在24±1摄氏度恒温培养箱内培养，48小时后调查各处理菌盘扩展直径，求平均值，与空白对照比较计算相对抑菌率。供试病原真菌包括小麦赤霉(Gibberella zeae)、番茄早疫(Alternaria)、芦笋茎枯(Phoma asparagi solani)、苹果轮纹(Physalospora piricola)和花生褐斑(Cercospora arachidicola)。
[0030] 本发明将通过特定制备和生物活性测定实施例更加具体地说明异香豆素类衍生物的合成和生物活性，但所述实施例仅用于具体的说明本发明而非限制本发明，具体的实施方式如下：
[0031] 实施例1
[0032] 3，5-二氯苯甲酰氯(31′)的制备：
[0033] 在500毫升的三口瓶中加入3，5-二氯苯甲酸(31)(10.0g，53.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，50.0毫摩尔)(31′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0034] 实施例2
[0035] 2，3-二氯苯甲酰氯(32′)的制备：
[0036] 在500毫升的三口瓶中加入2，3-二氯苯甲酸(32)(10.0g，53.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，50.0毫摩尔)(32′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0037] 实施例3
[0038] 2，5-二氯苯甲酰氯(33′)的制备：
[0039] 在500毫升的三口瓶中加入2，5-二氯苯甲酸(33)(10.0g，53.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，50.0毫摩尔)(33′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0040] 实施例4
[0041] 2，3-二氟苯甲酰氯(41′)的制备：
[0042] 在500毫升的三口瓶中加入2，3-二氟苯甲酸(41)(10.0g，63.3毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(41′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0043] 实施例5
[0044] 3，5-二氟苯甲酰氯(42′)的制备：
[0045] 在500毫升的三口瓶中加入3，5-二氟苯甲酸(42)(10.0g，63.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(42′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0046] 实施例6
[0047] 3，4-二氟苯甲酰氯(43′)的制备：
[0048] 在500毫升的三口瓶中加入3，4-二氟苯甲酸(43)(10.0g，63.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(43′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0049] 实施例7
[0050] 2，4-二氟苯甲酰氯(44′)的制备：
[0051] 在500毫升的三口瓶中加入2，4-二氟苯甲酸(44)(10.0g，63.0毫摩尔)和亚硫酰氯(4.5毫升，38.0毫摩尔)，在混合物中加入滴DMF，回流30分钟，当不产生气体时证明反应结束，减压除去未反应的亚硫酰氯得到二卤代苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(44′)，产品无须纯化并保存在干燥器中备下一步反应直接使用。
[0052] 实施例8
[0053] 3-(3′，5′-氯苯基)异香豆素(31A)的合成和结构鉴定：
[0054] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和3，5-二氯苯甲酰氯(11g，52.5毫摩尔)(31′)混合物加热到200摄氏度回流4小时，将混合物溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸，分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(3′，5′-氯苯基)异香豆素(31A)，通过1
甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.9g，30.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和理化
1
参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，H的+
数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.9g，30.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和理化
1
参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，H的+
数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0055] 实施例9
[0056] 3-(2′，3′-二氯苯基)异香豆素(32A)的合成和结构鉴定：
[0057] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和3，5-二氯苯甲酰氯(11g，52.5毫摩尔)(32′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(2′，3′-氯苯基)异香豆素(32A)，1
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.8g，30.3毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.8g，30.3毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0058] 实施例10
[0059] 3-(2′，5′-二氯苯基)异香豆素(33A)的合成和结构鉴定：
[0060] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和2，5-二氯苯甲酰氯(11g，52.5毫摩尔)(33′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(2′，5′-氯苯基)异香豆素(33A)，1
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.9g，30.7毫摩尔)，测定熔点和 H NMR，其化学结构式
1
和理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位+
移，H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.9g，30.7毫摩尔)，测定熔点和 H NMR，其化学结构式
1
和理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位+
移，H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0061] 实施例11
[0062] 3-(2′，3′-二氟苯基)异香豆素(41A)的合成和结构鉴定：
[0063] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和2，3-二氯苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(41′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(2′，3′-氟苯基)异香豆素(41A)，1
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.5g，32.8毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.5g，32.8毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0064] 实施例12
[0065] 3-(3′，5′-二氟苯基)异香豆素(42A)的合成和结构鉴定：
[0066] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和3，5-二氟苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(42′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(3′，5′-氟苯基)异香豆素(42A)，1
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.7g，33.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.7g，33.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0067] 实施例13
[0068] 3-(3′，4′-二氟苯基)异香豆素(43A)的合成和结构鉴定：
[0069] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和3，4-二氟苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(43′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(2′，3′-氯苯基)异香豆素(32A)，1
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.7g，33.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
通过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.7g，33.7毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和
1
理化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0070] 实施例14
[0071] 3-(2′，4′-二氟苯基)异香豆素(44A)的合成和结构鉴定：
[0072] 在100毫升的三口瓶中加入邻羧基苯乙酸(1)(2.5g，13毫摩尔)和2，4-二氯苯甲酰氯(11g，62.3毫摩尔)(44′)混合物加热到200摄氏度回流4小时。混合物被溶解在乙酸乙酯中，加入无水碳酸钠除去未反应的邻羧基苯乙酸。分出有机相，浓缩后用聚酯醚(40到80摄氏度)作为洗脱剂过硅胶柱层析得到3-(2′，4′-二氟苯基)异香豆素(44A)，通1
过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.6g，33.3毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和理
1
化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
过甲醇重结晶进一步纯化得纯品8.6g，33.3毫摩尔，测定熔点和 H NMR，其化学结构式和理
1
化参数见表2和表3，由表2和表3可见，该化合物 H NMR显示与其结构相应的化学位移，+
H的数目与其结构吻合，MS测定出现相应M 的m/z峰，IR出现相应的骨架吸收峰。
[0073] 实施例15
[0074] 本发明中合成的新化合物杀菌活性的测定：
[0075] 采用菌体生长率测定法(Mycelium growth rate test)，具体过程是，取5毫克样品溶解在适量二甲基甲酰胺内，然后用含有一定量吐温20乳化剂水溶液稀释至500微克/毫升的药剂，将供试药剂在无菌条件下各吸取1毫升注入培养皿内，再分别加入9毫升培养基，摇匀后制成50微克/毫升含药平板，以添加1毫升灭菌水的平板做空白对照，用直径4毫米的打孔器沿菌丝外缘切取菌盘，移至含药平板上，呈等边三角形摆放，每处理重复3次，将培养皿放在24±1摄氏度恒温培养箱内培养，48小时后调查各处理菌盘扩展直径，求平均值，与空白对照比较计算相对抑菌率。供试病原真菌包括小麦赤霉(Gibberella zeae)、番茄早疫(Alternaria)、芦笋茎枯(Phoma asparagi solani)、苹果轮纹(Physalospora piricola)和花生褐斑(Cercospora arachidicola)。测定结果见表4，表4表明，部分化合物在50微克/毫升时对测定的病原真菌表现出一定的抑制生长作用。
[0076] 实施例16本 发明中合成的新化合物杀虫活性的测定：
[0077] 本发明的化合物对粘虫的杀虫活性的测定采用浸叶法，用玉米叶浸渍于丙酮配制的药液中(500微克/毫升)，待药液后接入4龄幼虫，主要测定胃毒和触杀作用，24小时和96小时检查试验结果(观察昆虫生长调节剂作用)，用死亡百分率表示杀虫活性高低。本发明的化合物对蚊幼虫的杀虫活性采用浸液法测定，将4龄幼虫放入一定浓度(5微克/毫升)的药液(水)中。蚊幼虫24小时检查蚊幼虫的死亡情况。测定结果见表5，表5表明，测定的化合物无任何杀虫活性。4天后粘虫正常脱皮变成5龄，也没有发现昆虫生长调节剂作用。
[0078] 实施例17
[0079] 本发明中合成的新化合物除草活性的测定：
[0080] 采用温室盆栽法进行，分苗前土壤处理和苗后茎叶处理，处理剂量为750克/公顷，施药方法为喷施，于施药后15天测定地上部鲜重抑制百分率，测定试材包括油 菜 (Brassica campestris)、稗 草(Echinochloa crus-galli)、苋 菜 (Amaranthus retroflexus L.)和马唐(Digitaria sanguinalis(L.)Scop)。测定结果见表6，表6表明，32A和44A对油菜有较好的生长抑制作用。
[0081] 表2本发明化合物的理化参数
[0082]
[0083] 表3本发明化合物的1H NMR和MS以及IR数据
[0084]
[0085] 表4本发明中的部分化合物杀菌活性的测定结果(3次实验的平均结果)[0086]