用于确定肝素诱导的血小板减少症的规程和装置

摘要

本发明采用诸如血栓弹性描记器(TEG)止血分析仪等止血分析仪对止血过程进行连续实时检测以产生血液止血参数，所述止血过程从初始纤维蛋白形成开始，并包括血小板-纤维蛋白相互作用和溶解。采用所测定的血液止血参数可以确定肝素诱导的血小板减少症II复合物(HiT II)。

权利要求

1.与血液止血分析仪一起使用的试剂盒，该试剂盒用于确定肝素诱导的血小板减少症II复合物，该试剂盒包括：多个检测容器，各检测容器经配置以盛装用于在血液止血分析仪中进行检测的血样；

一定量的肝素，其足以配制至少一个检测用的肝素化血样和第二样品，其中所述第二样品用一定量的肝素进行配制，该一定量的肝素足以基本上完全抑制血小板激活；

一定量的激活剂，其足以至少激活所述肝素化血样和非肝素化的血样；和一定量的苯丙氨酰-脯氨酰-精氨酸氯甲基酮，该一定量的苯丙氨酰-脯氨酰-精氨酸氯甲基酮足以配制至少两个检测用血样。

2.如权利要求1所述的试剂盒，所述量的肝素被分装入与待配制的用于检测的多个各血样相对应的多个小瓶中。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其中，所述量的肝素和所述量的激活剂是分开包装的。

说明书

用于确定肝素诱导的血小板减少症的规程和装置

[0001] 与相关申请的相互参考

[0002] 本申请涉及以下共同拥有的美国专利和专利申请：于2000年6月9日提交的名称为“用于监测抗血小板剂的方法和装置”的序列号为No.09/591,371的美国专利申请；于2003年3月2日提交的名称为“用于监测血小板抑制的规程”的序列号为No.10/384,345的美国专利申请；于2003年4月8日提交的名称为“用于监测与人造表而装置有关的止血的方法和仪器”的序列号为No.10/409,479的美国专利申请；以及名称为“用于测定止血的方法和装置”的序列号为No.6,225,236的美国专利，在此通过参考方式明确地引入上述美国专利和专利申请所公开的内容。

技术领域

[0003] 本发明涉及用于确定肝素诱导的血小板减少症(HiT)的规程和装置。

背景技术

[0004] 血液是将氧气和营养物质携带到各组织并带走二氧化碳和各种排泄代谢产物的机体循环组织。全血包含浅黄或灰黄液体，即血浆，其中悬浮有红细胞、白细胞、血小板和止血因子。

[0005] 对于某些外科和内科操作，以及时和有效的方式对患者血液的凝固和溶解(即止血)能力进行准确检测是至关重要的。快速(迅速)而准确地检测异常止血对于下述的适当治疗也是特别重要的，所述治疗为对患有凝血病的患者的治疗，以及需要对患者施用抗凝血剂、抗纤维蛋白溶解剂、血栓溶解剂、抗血小板剂或血液成分的治疗，所施用物质的量的确切确定需要考虑到患者血液中的异常成分或“因子”和可能导致目前止血紊乱的以前止血治疗。

[0006] 止血是动态的涉及许多相互作用因子的极端复杂的过程，所述相互作用因子包括凝固和纤维蛋白溶解蛋白、激活剂、抑制剂以及诸如血小板细胞骨架、血小板细胞质颗粒和血小板细胞表层等细胞成分。因此，在激活过程中没有静止的或孤立工作的因子。凝固过程的起始是血小板聚集(图1a)和酶促反应的初始阶段。凝固过程的最终结果是形成聚合的纤维蛋白(原)纤维的三维网络，该聚合的纤维蛋白(原)的三维网络与血小板糖蛋白IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)受体结合一起形成最终的凝块(图1b)。该网络结构的独特性质是它表现为刚性弹性固体，能够抗循环血液的变形剪切力。最终凝块的抗变形剪切力的强度取决于纤维蛋白纤维网络的结构和密度以及参与其中的血小板所施加的作用力。

[0007] 因此，作为激活凝固的结果而形成并粘附于受损的血管系统且抗循环血液的变形剪切力的凝块，实质上是一种为提供“临时塞子”而形成的机械装置，其在血管愈合过程中抗循环血液的剪切力。所述凝块的动力学、强度和稳定性，即其抗循环血液的变形剪切力的物理性能，决定了该凝块发挥止血作用的能力，其阻止出血而不会形成不当的血栓。这正是准备让下述的血栓弹性描记器 (Thrombelastograph )(TEG )止血分析系统所要进行的工作，即，检测初始纤维蛋白形成所需的时间、所述凝块达到最大强度所需的时间、实际最大强度以及该凝块的稳定性。

[0008] 自从Helmut Hartert教授于20世纪40年代在德国开发出血液止血分析仪设备以后，这类设备就已经为人们所知。在共同转让的专利号为No.5,223,227和No.6,225,126的美国专利中记载了一种类型的血液止血分析仪，在此通过参考的方式明确地引入所述专利所公开的内容。当血液在类似静脉缓慢血流的低剪切环境下被诱导凝块时，用该设备(TEG 止血分析系统)来检测血液的弹性。形成中的凝块的剪切弹性的变化模式使确定凝块形成的动力学以及所形成的凝块的强度和稳定性成为可能；简而言之，使确定形成中的凝块的机械性能成为可能。如上所述，凝块的动力学、强度和稳定性提供了有关凝块完成“机械工作”能力的信息，所述机械工作即抗循环血液的变形剪切力；实质上，凝块是止血的基本结构，TEG 止血分析系统可以检测凝块在其结构形成整个过程中执行机械工作的能力。TEG 止血分析系统以非孤立或静止的方式，从检测起始的时间到初始纤维蛋白形成，经由凝块速度加快阶段和通过借助血小板GPIIb/IIIa受体的纤维蛋白血小板结合的最终凝块强度以及凝块溶解，以全血成分的净产物形式连续检测患者止血的全部阶段。

[0009] 肝素是最广泛使用的抗凝血剂处方药之一并且已经非常成功。但是，肝素也有一些潜在的不利影响。和任何其它抗凝血剂一样，也存在出血的危险。肝素还与骨质疏松症、皮肤反应和称为肝素诱导的血小板减少症(HiT)的疾病的危险性增加有关。

[0010] 经观测，HiT以两种形式发生。第一种即I型或非免疫HiT(HiTI)经常发现于接受全剂量静脉内的未分馏肝素的患者中。HiT I中由肝素诱导的血小板计数的下降是暂时性的，即使继续进行肝素疗法，也不会产生任何不利的影响，并且所述血小板计数的下降在肝素可溶解的范围内是自我限制性的。这主要是肝素直接与血小板结合的结果。

[0011] II型或免疫介导的HiT(HiT II)是抗原-抗体反应的结果。在HiT II中，由于患者的血液频繁地接触肝素，因此可以形成肝素诱导的抗体。肝素和血小板因子4(PF4)具有很高的亲和性。PF4一旦与肝素分子结合，就会暴露出抗原决定簇，该抗原决定簇引发免疫系统并产生免疫球蛋白G(IGH)。

[0012] IGH抗体通过Fc片段结合到抗原和血小板上。相邻的Fc受体在血小板膜上的占据引起血小板的剧烈激活，导致血小板数下降(血小板减少症)和白色凝块血栓形式的血栓症，从而引起高风险的发病率和死亡率。

[0013] 此处肝素-PF4-IGH称为HiT II复合物。

[0014] 用于HiT II的实验室诊断的测定主要有两类：激活(功能性)测定和抗原测定。功能性测定包括血小板聚集测定和5-羟色胺释放测定。在实验室中进行的血小板聚集测定具有超过90％的特异性。缺点是灵敏度低，低于35％，即相对较高的假阴性概率。

[0015] 5-羟色胺释放测定检测5-羟色胺从血小板聚集体的释放。其依赖于在存在肝素的情况下来自患者的血小板的聚集。该测定具有高灵敏度和高特异性。缺点是该测定技术上要求高并涉及放射性物质的使用。在各种可行的功能性测定中，据认为采用洗涤血小板的血小板聚集反应和血小板5-羟色胺释放是最准确的。

[0016] 另一类测定是抗原测定。肝素-PF4酶联免疫吸附测定(ELISA)依赖于HiT IGH抗体对肝素-PF4复合物的特异性。对于检测肝素诱导的抗体，所述测定比5-羟色胺释放测定灵敏10倍。但是，肝素-PF4ELISA费用高而且耗时。该测定还比功能性测定更容易对临床上非显著性抗体产生反应，因此具有较低的特异性，即相对较高的假阳性。

[0017] 因此，大部分用于HiT II诊断的可行的实验室检验费用高、耗时、经常自相矛盾而且在灵敏度和特异性上不稳定。

[0018] 由于用额外的肝素或血小板治疗HiT II患者存在相关的发病率和死亡率风险，因此在怀疑是HiT II时临床医生必须经常不必要地转而推荐使用另外一种抗凝血剂来代替肝素。然而，其它物质所需的费用更高，并且难以或不可能检测抗凝血程度以给病人正确用药来防止缺血性事件。这些抗凝血剂还缺乏使它们的抗凝血作用逆转的必要物质，这可能导致无法控制手术后的出血。

[0019] 因此，需要用于确定肝素诱导的血小板缺少症的方法和装置。

附图说明

[0020] 图1a是表示血小板聚集机制的图示。

[0021] 图1b是表示纤维蛋白/血小板网络的图示。

[0022] 图2是根据本发明优选实施方案的止血分析仪的示意图。

[0023] 图3是说明由图2所示的止血分析仪产生的止血概况的图。

[0024] 图4是根据本发明的一个实施方案的止血分析仪的示意图。

[0025] 图5是说明根据本发明实施方案的规程和装置获得的几种止血概况。

发明内容

[0026] 根据本发明的优选实施方案，采用止血分析仪(例如可由Haemoscope Corp.，Niles，Illinois获得的血栓弹性描记器 (TEG )止血分析仪)连续实时地检测从初始纤维蛋白形成，经由血小板-纤维蛋白GPIIb/IIIa结合和溶解的止血过程。虽然为确定患者是否具有肝素诱导的血小板减少症(HiT)而对具体规程和装置进行讨论，但是应该理解，本发明在与HiT有关或无关的其它诊断技术方面具有实用性。

[0027] 根据本文描述的本发明的实施方案，根据本发明的规程采用止血分析仪利用患者全血或利用正常供血者富含血小板的血浆(PRP)与HiT II疑似患者的血浆的混合物，可以确定HiT II的发病初起。全血检测规程提供现场医护检测能力，而PRP-患者血浆混合物规程提供实验室检测能力。两种规程都依赖于对止血分析仪所测定的血液凝块的一种或多种物理特征进行检测。这些特征包括凝块的强度或弹性、最初凝块形成的时间、凝块形成的速度或强化、凝块溶解的速度等。根据所采用的特定规程制备的数个样品可以在一个或多个止血分析仪检测站进行检测。

[0028] 止血分析仪10(例如上述提及的血栓弹性描记器 (TEG )止血分析仪)可以用来检测患者血样检测过程中形成的凝块的物理特性。术语患者血样在全文中使用，并且可以互换地称为患者全血样品，PRP-患者血浆混合物或其它适当的患者血样。示例性的止血分析仪10在前述的美国专利6,225,126中有详细的描述，在此不再重复讨论。但为了有助于理解本发明，参照图2对血液止血仪10进行了简要说明。所述止血分析仪使用装有血样13的特殊的稳定的圆柱形杯12。杯12与驱动机械装置连接，该装置使杯以角度θ振荡，优选的角度约为4°45′。每一旋转周期为10秒钟。将轴(pin)14通过扭力丝15悬挂在血样13中，并监测轴14的运动。只有在纤维蛋白-血小板结合使杯12和轴14连接在一起之后，旋转的杯12的扭矩才被传送到所浸没的轴14。纤维蛋白-血小板结合的强度影响轴运动的幅度，所以，牢固的凝块直接带动轴14与杯进行同相运动。因而，输出的幅度与所形成的凝块的强度直接相关。随着凝块的缩小或溶解，这种结合受到破坏，并且杯子运动的传递也减小了。

[0029] 轴14的旋转运动通过传感器16转换成电信号，该电信号可以通过包括处理器和控制程序的计算机(未在图2中示出)进行监测。

[0030] 计算机可对电子信号进行操作，以建立与被检测的凝血过程相对应的止血概况。此外，计算机可以包括可视显示器或连接到打印机上，以提供止血概况的可视性显示。这种计算机的配置完全处于本领域普通技术人员的能力内。

[0031] 如还将进行描述的，根据对止血概况所进行的估测，计算机通过其控制程序可以适用于提供治疗建议。如图3所示，结果得到的止血概况20是对形成第一条血纤维蛋白链所需的时间、凝块形成动力学、凝块的强度(以毫米(mm)为单位进行测定，并转换为剪切弹2
性单位dyn/cm(达因/平方厘米))以及凝块的溶解所进行的测量。下表I提供了几个这些所测量的参数的定义。

[0032] 表I时间R是从血液被放入TEG 分析仪到初始纤维蛋白形成的这段
R


潜伏期。
α 纤维蛋白形成和交联的速度的检测(凝块强化)。
以mm计的MA或最大幅度，是由GPIIb/IIIa介导的纤维蛋白和
MA 血小板结合的最大动力学特性的直接函数，代表纤维蛋白凝块的
最终强度。
LY30检测MA之后30分钟的幅度衰减速率，代表凝块缩小或溶
LY30
解。

[0033] 在临床上，这些检测为下述监测提供媒介：提供监测抗凝疗法(例如肝素或华法令)、血栓溶解疗法(例如tPA、链激酶、尿激酶)、抗纤维蛋白溶解剂(例如ε-氨基己酸(Amicar )、特斯乐(抑肽酶)、氨甲环酸(TX))的作用、抗血小板剂(例如阿昔单抗(ReoPro )、依替巴肽(Integrilin )、替罗非班(Aggrastat ))的作用、血液成分输血疗法、在癌症和感染中血栓形成危险性估测、高风险手术和其它可能导致过度凝血(凝固性过高的疾病)或过度出血(凝固性过低的疾病)。然后根据本发明实施方案，可将止血分析仪10用于检测药物治疗的临床效果以阻止纤维蛋白溶解，或用于检测血栓溶解药物的效果以监测血栓溶解，或用于检测抗血小板剂的效果以监测血小板抑制、缺血性或出血性并发症。

[0034] 在定量上，止血分析仪10和所连的计算机绘出凝块强度相对于时间的图，其中标示出凝块形成的初起、反应时间(R)(图3)。该图还显示出血样的最大凝块强度(或硬度)MA。MA是对血小板-纤维蛋白GPIIb/IIIa结合的总体估算，其用于例如指导手术后血液的血小板或纤维蛋白原更换疗法。仅就血小板和纤维蛋白而言，异常低的MA指示血液中的血液血小板异常(即数量性或功能性缺陷)和/或纤维蛋白原含量异常。但是，通过保持纤维蛋白原水平和血小板数量恒定，MA的任何变化都反映血小板功能的变化。因此，升高的MA值反映较高的血小板功能，而较低的MA反映较低的血小板功能，当血小板功能降低至血小板活性为零的限度时，则MA只受到纤维蛋白的影响。但是缺乏任何其它血小板激活剂/激动剂时，HiT II复合物的存在激活血小板，使MA值高出纤维蛋白的MA值。因此，如上所述，为了对HiT II进行适当的监测，可以采用以下程序：

[0035] 1.TEG-5000，如其通常用途那样，测定由凝血酶激活的血小板功能物(platelet function)(MA)，所述凝血酶是直接激活GPIIb/IIIa受体位点的最有效的血小板激活剂。为了使MA对血小板功能物(血小板功能物诸如HiT II复合物)的低激活敏感，应当抑制凝血酶。因此，当在TEG止血分析仪上分析血样时，用凝血酶的直接抑制剂例如PPACK(苯丙氨酰-脯氨酰-精氨酸氯甲基酮)抑制凝血酶的形成。

[0036] 2.遗憾的是，凝血酶还参与激活纤维蛋白原向纤维蛋白的转化。在步骤1中抑制凝血酶的形成以后，需要用另外一种酶来激活纤维蛋白原。唯一功能为激活纤维蛋白原向纤维蛋白转化的蛇毒凝血酶(矛头蝮蛇毒酶)是适宜的酶。此时凝块被蛇毒凝血酶(纤维蛋白原激活剂)和诸如HiT II复合物等较弱的血小板激动剂所激活。如上所述，通过MA检测凝块的强度。

[0037] 3.通过纤维蛋白原激活剂如蛇毒凝血酶和由HiT II复合物导致的血小板激活而形成的凝块通常比通过凝血酶所形成的凝块弱。因此，可以加入激活的因子XIII(因子XIIIa)。因子IIIa导致称为纤维蛋白交联的由氢键到更强的共价键的纤维蛋白网络，由此进一步增强了纤维蛋白凝块的强度。

[0038] 基于以上所述，可以实施以下规程。

[0039] 参考图4和图5，描述采用止血分析仪确定HiT II的规程。图4说明止血分析仪10′的4个检测站10a、10b、10c和10d。各检测站可以与结合图2进行描述的站10基本上相同，或可以是另外一种配置。所述检测站还可以是分开的检测装置的一部分，例如，可以是4个信号站设备、两个双站设备、一个四站设备等。配置各检测站，以检测相应的血样并提供血样的特征。例如，可以配置各检测站，以提供各血样的参数R、α、MA和LY 30。第一个血样13a可以是基线样品。第二个样品13b和第三个样品13c可以加有不同量的肝素。
第四个样品13d可以经制备以基本上完全抑制血小板激活。例如，这可以通过使样品中包含足够的大量肝素而实现。检测各个样品并报道各个样品的MA。第一个样品13a的MA代表基本没有血小板激活时纤维蛋白对凝块强度的作用，即MAFIB。如果样品13d中的血小板激活几乎受到完全抑制，该样品的MA应该极为近似于MAFIB。在存在HiT抗体时，将存在一些血小板-血小板聚集，导致比单独的纤维蛋白作用时的MA(即MAFIB)大的MA。因此，如果测定的样品13b和样品13c的MA大于MAFIB，例如约大1.5倍～3倍，表明是HiT II。

[0040] 根据前文，对以下规程进行详细说明。

具体实施方式

[0041] 实施例1：采用混有HiT II患者柠檬酸盐化血浆的正常供血者富含血小板的血浆来测定HiT II

[0042] 抽取正常供血者全血，并将其转移到塑料离心管中，相对于每1ml血液所述离心管中装有5μl～15μl的PPACK。正常供血者的血小板计数应该大于150,000/μl，并且未服用NSAIDS(非甾体抗炎药)或其它血小板抑制剂。对于典型的检测，抽取12ml的血液并加到含有约180μl的PPACK的管中，将所述管盖上盖子并颠倒混合几次，例如3次。在100g将该样品离心20分钟(对于标准的IEC台式离心机，转速为800RPM(转/分钟))，以将富含血小板的血浆(PRP)和其它血细胞分离。这一程序将获得足够用于3～4次待测混合物的PRP，过量的PRP可以在-35℃～-70℃贮藏到测定。

[0043] 制备PRP-患者血浆混合物。采用标准程序从贮藏在-30℃～-70℃的柠檬酸盐化全血中分离患者血浆。以约2∶1的比例将正常的PRP加入到融化的室温下的患者血浆中，例如，将约1.6ml～1.2ml的PRP加入到约0.8ml～0.6ml待测患者血浆中，并充分混合。这一程序只用于柠檬酸盐化血浆，不用于血清或收集到其它抗凝血剂中的血浆，也不用于HiT患者全血。

[0044] 准备好用于检测的四个样品容器。向第一个样品容器中加入5μl的盐水。向第二个样品容器中加入5μl的1U/ml(单位/毫升)的肝素。向第三个样品容器中加入5μl的3U/ml的肝素。向第四个样品容器中加入5μl的30U/ml的肝素。所述肝素可以使用预包装管/小瓶以适当浓度来提供。例如，可以提供含有各种量的肝素的HiT1、HiT3和HiT30小瓶。

[0045] 向各样品容器中加入350μl的PRP-患者血浆混合物并混合，例如用移液管混合3次。如果按以上顺序进行，可以使用一个移液管。在37℃温育除了第一个容器中的样品之外的其它样品至少10分钟。如果使用TEG 止血分析仪，可以将杯子滑到检测位置以进行慢慢混合和避免蒸发。特别是如果不采用非TEG 止血分析仪，可以采用进行混合和避免蒸发的其它技术。

[0046] 为了测定，向各样品容器中加入约10μl的激活剂并立即混合，例如与另外一个移液管的350μl的PRP-患者血浆混合物混合3次。然后将样品容器迅速移到检测位置并开始进行检测。检测应该在加入所述激活剂后30秒内开始。激活剂可以是Reptilase与FXIIIa的组合或Reptilase 、FXIIIa和肾上腺素的组合。一旦向各容器中加入μl的PRP-患者血浆混合物和10μl的激活剂，第一个容器将不含有加入的肝素，第二个容器将含有1U/ml的肝素，第三个容器将含有3U/ml的肝素，而第四个容器将含有30U/ml的肝素。

[0047] 继续检测直到获得稳定的最大幅度。所预期的HiT II呈阳性的结果为：分别含有1U/ml肝素或3U/ml肝素的第二个样品或第三个样品将获得大于样品1的MA的MA反应。
例如，第二或第三个样品的MA应比样品1的MA约大1.5倍～3倍。在一个实施方案中，采用TEG 止血分析仪参数MA，所预期的MA2和/或MA3大于10mm，比MA1或MA4大2倍。
这可以表示为：

[0048] MA2和/或MA32×＞MA1≈MA4

[0049] 这是HiT II呈阳性的表示。由于将优势量的肝素加入样品中，血小板基本上受到完全抑制，所以含有30U/ml肝素的样品4的MA与样品1的MA看上去基本相等。

[0050] 实施例2：采用患者全血来测定HiT II

[0051] 将3ml的HiT II可疑患者全血样品抽到塑料管中，相对于每1ml血液，该塑料管装有约5μl的5mg/ml的PPACK。患者的血小板计数应该大于50,000/μl。另外，患者不应服用诸如Reopro 、Integrilin 和Aggrestat等GPIIb/IIIa抑制剂药物或掩蔽由HiT II抗体复合物引起的血小板激活的其它药物。

[0052] 对于典型的检测，将6ml的患者血液抽入装有30μl的PPACK的塑料管中并混合。这提供足够用于测定的血样，并提供足够用于分离血浆的剩余血样以如上述实施例1所述与正常供血者血液用于确认检测，尤其是如果患者的血小板计数小于50,000/μl。

[0053] 准备好用于检测的四个样品容器。向第一个样品容器中加入5μl的盐水。向第二个样品容器中加入5μl的1U/ml的肝素。向第三个样品容器中加入5μl的3U/ml的肝素。向第四个样品容器中加入5μl的30U/ml的肝素。所述肝素可以使用预包装管/小瓶以适当浓度来提供。例如，可以提供含有各种量的肝素的HiT1、HiT3和HiT30小瓶。

[0054] 向各样品容器中加入350μl的抗凝全血并混合，例如用移液管混合3次。如果按以上顺序进行，可以使用一个移液管来进行添加和混合。在37℃温育除了第一个容器中的样品之外的其它样品至少10分钟。如果使用TEG 止血分析仪，可以将杯子滑到检测位置以进行慢慢混合并避免蒸发。可以采用进行混合和避免蒸发的其它技术。

[0055] 为了测定，向各样品容器中加入10μl的激活剂并立即混合，例如与另外一个移液管的350μl的HiT II可疑患者全血混合3次。然后将样品容器迅速移到检测位置并开始进行检测。检测应该在加入所述激活剂后30秒内开始。激活剂可以是Reptilase 与FXIIIa的组合或Reptilase 、FXIIIa和肾上腺素的组合。一旦向各容器中加入HiT II可疑患者全血和10μl的激活剂，第一个容器将不含有加入的肝素，第二个容器将含有1U/ml的肝素，第三个容器将含有3U/ml的肝素，而第四个容器将含有30U/ml的肝素。

[0056] 继续检测直到获得稳定的最大幅度。所预期的HiT II呈阳性结果为：分别含有1U/ml肝素或3U/ml肝素的第二个样品或第三个样品将获得比样品1的MA大的MA反应。
例如，第二或第三个样品的MA应比样品1的MA约大1.5倍～3倍。在一个实施方案中，采用TEG 止血分析仪参数MA，所预期的MA2和/或MA3大于10mm，比MA1或MA4大2倍。
这可以表示为：

[0057] MA2和/或MA32×＞MA1≈MA4

[0058] 这是HiT II呈阳性的表示。由于将优势量的肝素加入样品中，血小板基本上受到完全抑制，含有30U/ml肝素的样品4的MA与样品1的MA看上去基本相等。患者的全血检测规程有利于提供HiT II的现场医护确定。

[0059] 利用TEG 止血分析仪所得的结果并参考参数MA，在图5a中对HiTII的阳性指示进行说明。迹线22代表MA1而迹线24代表MA4，两者基本上都低于10mm，处于2mm～5mm的级别。迹线26代表MA2而迹线28代表MA3，两者基本上都大于10mm，分别处于15mm和40mm的级别。因此，MA2和MA3大于10mm，并且都比MA1或MA4大2倍，这基本上等同于提供HiT II的阳性指示。

[0060] 图5b说明没有HiT II。迹线30代表MA1而迹线32代表MA4，两者基本上都低于10mm，处于2mm～5mm的级别。迹线34代表MA2而迹线46代表MA3，两者基本上也都小于
10mm，并处于2～5的级别。因此，MA2和MA3都低于10mm，并且都约等于MA1或MA4，这提供了HiT II的阴性指示。

[0061] 可以制备测定试剂盒。所述试剂盒可包括多个检测容器、一定量的肝素和一定量的激活剂。各检测容器经配置以盛装用于在血液止血分析仪中检测的血样。例如，对于TEG 止血分析仪，检测容器为杯12，并提供4个杯。对于其它类型的检测装置，可以使用不同的容器。肝素的量应当足以制备检测所需的肝素化血样。但是，所述试剂盒可以包括如上所述用于测定的适当浓度的肝素的3个分开的管/小瓶。足以激活血样的一定量的激活剂也包含在分开的管/小瓶中。所述试剂盒还可以包括装在管/或小瓶中的一定量的PPACK。可以对所述管/小瓶标进行色码标记、数字标记或其它标记。所述试剂盒可以是分开的以便于贮藏。例如，可以将5mg的PPACK装在小瓶中来提供。然后用1ml的盐水复原。复原后的PPACK应贮藏在0～-4℃，并在数月内保持稳定。从试剂盒中取出所需量，而将剩余物返回贮藏。

[0062] 未开启的肝素储存品，例如上述装有1U/ml、3U/ml和30U/ml肝素的小瓶，可以贮藏在0～-4℃，并在数月内保持稳定。打开过的管应当在打开后一个星期内丢弃。

[0063] 未开启的包含约1.8ml激活剂的激活剂小瓶应当以贮藏在-70℃，并在数周内保持稳定。开启过的储存品应当在开启后8小时内丢弃。因此，可以对各小瓶进行定量，以提供仅够每4个样品使用的激活剂。激活剂在使用前应当融化到室温。

[0064] 激活剂成分还可以在储存品小瓶中提供，从所述小瓶中制备激活剂以进行测定。例如，可以从所提供的储存品小瓶中抽取例如其量为180μl的激活剂到管中。根据测定的类型，可加入另外的成分。例如，对于正常供血者加柠檬酸盐化患者血浆检测(上述实施例
1)，20μl的2M CaCl2可以与10μl的1mM肾上腺素一起添加。对于全血检测(上述实施例2)，20μl的盐水可以与10μl 1mM的肾上腺素一起添加。可以使用其它的激活剂，这取决于激活剂成分的可获得性和所进行检测的类型。

[0065] 已在几个优选实施方案和实施例方面对本发明进行描述。本领域技术人员应理解，本发明可以具有其它具体体现而不脱离本发明的适当范围，所述适当的范围提供在所附的权利要求中。