可用于治疗糖尿病和高脂血症的旋复花提取物转让专利
申请号 : CN200510069547.8
文献号 : CN1861104B
文献日 : 2010-05-05
发明人 : 单俊杰 , 赵毅民 , 杨明 , 任晋玮
申请人 : 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
摘要 :
本发明涉及用含水溶剂提取旋复(覆)花(包括Inula japinica和Inula britannica)植物得到的水提取物、其制备方法、含有这种水提取物的组合物以及水提取物和组合物用于预防和治疗糖尿病和高脂血症的用途。水提物包含生物碱、黄酮苷、肽和糖类。实验表明提取物无毒，具有明显的降血糖和降血脂功效，能提高对葡萄糖的耐受能力。
权利要求 :
1.一种用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物，其含有用含水溶剂提取旋复花植物材料获得的旋复花水提取物，任选地，还含有赋形剂或者载体。
2.权利要求1的组合物，其中，所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
3.权利要求1的组合物，其中所述旋复花植物材料是旋复花植物的地上部分。
4.权利要求1的组合物，其中所述旋复花植物材料是花序。
5.权利要求1的组合物，其中所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液。
6.权利要求5的组合物，其中有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。
7.用含水溶剂提取旋复花植物材料获得的旋复花水提取物或者权利要求1-6任一项的组合物在制备用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的药物中的用途。
8.权利要求7的用途，其中所述旋复花植物材料是旋复花植物的地上部分。
9.权利要求7的用途，其中所述旋复花植物材料是花序。
10.权利要求7的用途，其中所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液。
11.权利要求10的用途，其中有机溶剂是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。
12.旋复花植物材料或者其提取物用于生产可用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物中的用途。
13.权利要求12的用途，其中所述提取物是水提取物。
14.权利要求12的用途，其中所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
说明书 :
技术领域
本发明涉及旋复(覆)花提取物。特别地，本发明涉及用含水溶剂提取旋复(覆)花(包括Inula japinica和Inula britannica)植物材料得到的水提取物、其制备方法、含有这种水提取物的组合物以及水提取物和组合物用于预防和治疗糖尿病和高脂血症的用途。
背景技术
旋复(覆)花(包括Inula japinica和Inula britannica)属菊科植物。具有消痰、下气、软坚和行水之功效。文献报道旋复(覆)花地上部分含旋复(覆)花内酯、天人菊内酯、槲皮素、槲皮黄甙、咖啡酸、绿原酸等多种成分(黄泰康，常用中药成分与药理手册，p1608，1994)。
有关Inula属植物降血糖活性文献报道：
1.西班牙约70种植物(包括柳叶旋复花，Inula salicina)用于茶饮，推测可能有降血糖作用(Pardo de S.，J Ethnopharmacol，2005，98(1-2)：1-19)；
2.总状木香(Inula racemosa)根醇提取物能降低激素性糖尿病小鼠血糖(Gholap S.，Pharmazie，2004，59(11)：876-8)；
3.总状木香通过调节甲状腺激素而改善激素性糖尿病小鼠血糖(Gholap S.，Pharmazie，2003，58(6)：413-5)；
4.总状木香作为保健品，具有提高胰岛素敏感性作用(Kelly GS，Altern Med Rev，2000，5(2)：109-32)；
5.总状木香乙醇提物能降低糖尿病小鼠血糖，增加肝糖原合成(Tripathi YB，1995，33(9)：686-9)。
6.旋复花(Inula britannica)水提物能调解糖尿病小鼠细胞免疫功能(Kobayashi T.，Phytother Res，2002，16(4)：377-82)；
7.“香附旋覆花汤”加味方(12味中药)治疗II型糖尿病一例报道(张秀云，山东中医杂志，1996，15(6)：255)。
本发明采用水及含有机溶剂的水溶液提取二种旋复(覆)花植物(包括Inula japinica和Inula britannica)地上部分获得提取物。该二种提取物具有较强降血糖和降血脂作用，能显著改善四氧嘧啶糖尿病小鼠对葡萄糖耐受能力。有关旋复花(包括Inula japinica和Inulabritannica)提取物治疗糖尿病和高脂血症方面的研究经检索后，未见与本研究有相同的报道，本研究属首次发现该植物具有降血糖和降血脂活性。
有关Inula属植物降血糖活性文献报道：
1.西班牙约70种植物(包括柳叶旋复花，Inula salicina)用于茶饮，推测可能有降血糖作用(Pardo de S.，J Ethnopharmacol，2005，98(1-2)：1-19)；
2.总状木香(Inula racemosa)根醇提取物能降低激素性糖尿病小鼠血糖(Gholap S.，Pharmazie，2004，59(11)：876-8)；
3.总状木香通过调节甲状腺激素而改善激素性糖尿病小鼠血糖(Gholap S.，Pharmazie，2003，58(6)：413-5)；
4.总状木香作为保健品，具有提高胰岛素敏感性作用(Kelly GS，Altern Med Rev，2000，5(2)：109-32)；
5.总状木香乙醇提物能降低糖尿病小鼠血糖，增加肝糖原合成(Tripathi YB，1995，33(9)：686-9)。
6.旋复花(Inula britannica)水提物能调解糖尿病小鼠细胞免疫功能(Kobayashi T.，Phytother Res，2002，16(4)：377-82)；
7.“香附旋覆花汤”加味方(12味中药)治疗II型糖尿病一例报道(张秀云，山东中医杂志，1996，15(6)：255)。
本发明采用水及含有机溶剂的水溶液提取二种旋复(覆)花植物(包括Inula japinica和Inula britannica)地上部分获得提取物。该二种提取物具有较强降血糖和降血脂作用，能显著改善四氧嘧啶糖尿病小鼠对葡萄糖耐受能力。有关旋复花(包括Inula japinica和Inulabritannica)提取物治疗糖尿病和高脂血症方面的研究经检索后，未见与本研究有相同的报道，本研究属首次发现该植物具有降血糖和降血脂活性。
发明内容
本发明体现在以下编号的段落中：
1.一种制备旋复花的水提取物的方法，包括：获得旋复花植物材料；用含水溶剂提取旋复花植物材料，获得旋复花的水提取物。
2.段落1的方法，其中用含水溶剂提取旋复花植物材料包括：(1)在适当条件下用含水溶剂浸泡旋复花植物材料；(2)分离液相和固相；(3)任选地，重复步骤(1)和(2)一次或多次(例如重复1-数次、1-5次、1-2次、2-5次、3次、4次)；(4)任选地，合并液相；和(5)任选地，将由步骤(2)或者步骤(4)得到的液相浓缩。
3.段落2的方法，其中步骤(1)中所述适当条件包括：温度为大约0-100℃，例如大约0-80℃，优选大约0-60℃，例如大约4-50℃，如大约15-40℃、大约20-30℃，方便的是大约室温，也可以是大约60-100℃；压力为大约0.1个大气压-5个大气压，例如大约0.5个大气压-3个大气压，例如大约1个大气压，方便的是大约常压；浸泡时间是至少大约1小时，长至例如10天，例如大约6小时-5天，大约12-96小时，例如大约24、48、72小时，或者其中的任何时间，优选不短于24小时；旋复花植物材料与含水溶剂的重量体积比为大约1∶1到大约1∶100(千克/升)，例如大约1∶1到大约1∶50、大约1∶2到大约1∶40，优选大约1∶5到大约1∶20，更优选大约1∶5到大约1∶15(千克/升)；优选在浸泡时搅拌。
4.段落2-3任一项的方法，其中步骤(2)中分离通过过滤、离心、自然沉降等来实现。
5.段落2-4任一项的方法，其中步骤(5)的浓缩是减压浓缩，温度可以在大约0℃到大约80℃，优选不超过大约60℃，例如室温到大约60℃，例如大约30-60℃，如大约55℃；步骤(5)的浓缩可以是冷冻干燥。
6.段落1-5任一项的方法，其中所述旋复花是Inula japinica或者Inula britannica。
7.段落1-6任一项的方法，其中所述旋复花植物材料是旋复花植物的地上部分，例如花序。
8.段落1-7任一项的方法，其中所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液；其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。
9.段落1-7任一项的方法，其中在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前可以预先用有机溶剂提取。有机溶剂包括但不限于：石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合等。
10.旋复花的水提取物。
11.段落10的水提取物，其是通过段落1-9任何一项的方法获得的。
12.可通过段落1-9任何一项的方法获得的旋复花的水提取物。
13.一种组合物，其含有段落10-12任何一项的旋复花水提取物。
14.段落13的组合物，它还含有赋形剂或者载体。
15.段落13或者14的组合物，它是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
16.段落10-12任何一项的旋复花水提取物或者段落13或者14的组合物在制备用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的药物中的用途。
17.旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)用于生产可用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物中的用途.
18.段落16的用途，其中所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
19.一种降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的方法，包括向患者给予旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品。
本发明的这些方面和其它方面将在下文进一步说明，但是它们不应答理解为是对本发明范围的限制。
1.一种制备旋复花的水提取物的方法，包括：获得旋复花植物材料；用含水溶剂提取旋复花植物材料，获得旋复花的水提取物。
2.段落1的方法，其中用含水溶剂提取旋复花植物材料包括：(1)在适当条件下用含水溶剂浸泡旋复花植物材料；(2)分离液相和固相；(3)任选地，重复步骤(1)和(2)一次或多次(例如重复1-数次、1-5次、1-2次、2-5次、3次、4次)；(4)任选地，合并液相；和(5)任选地，将由步骤(2)或者步骤(4)得到的液相浓缩。
3.段落2的方法，其中步骤(1)中所述适当条件包括：温度为大约0-100℃，例如大约0-80℃，优选大约0-60℃，例如大约4-50℃，如大约15-40℃、大约20-30℃，方便的是大约室温，也可以是大约60-100℃；压力为大约0.1个大气压-5个大气压，例如大约0.5个大气压-3个大气压，例如大约1个大气压，方便的是大约常压；浸泡时间是至少大约1小时，长至例如10天，例如大约6小时-5天，大约12-96小时，例如大约24、48、72小时，或者其中的任何时间，优选不短于24小时；旋复花植物材料与含水溶剂的重量体积比为大约1∶1到大约1∶100(千克/升)，例如大约1∶1到大约1∶50、大约1∶2到大约1∶40，优选大约1∶5到大约1∶20，更优选大约1∶5到大约1∶15(千克/升)；优选在浸泡时搅拌。
4.段落2-3任一项的方法，其中步骤(2)中分离通过过滤、离心、自然沉降等来实现。
5.段落2-4任一项的方法，其中步骤(5)的浓缩是减压浓缩，温度可以在大约0℃到大约80℃，优选不超过大约60℃，例如室温到大约60℃，例如大约30-60℃，如大约55℃；步骤(5)的浓缩可以是冷冻干燥。
6.段落1-5任一项的方法，其中所述旋复花是Inula japinica或者Inula britannica。
7.段落1-6任一项的方法，其中所述旋复花植物材料是旋复花植物的地上部分，例如花序。
8.段落1-7任一项的方法，其中所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液；其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。
9.段落1-7任一项的方法，其中在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前可以预先用有机溶剂提取。有机溶剂包括但不限于：石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合等。
10.旋复花的水提取物。
11.段落10的水提取物，其是通过段落1-9任何一项的方法获得的。
12.可通过段落1-9任何一项的方法获得的旋复花的水提取物。
13.一种组合物，其含有段落10-12任何一项的旋复花水提取物。
14.段落13的组合物，它还含有赋形剂或者载体。
15.段落13或者14的组合物，它是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
16.段落10-12任何一项的旋复花水提取物或者段落13或者14的组合物在制备用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的药物中的用途。
17.旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)用于生产可用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物中的用途.
18.段落16的用途，其中所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
19.一种降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的方法，包括向患者给予旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品。
本发明的这些方面和其它方面将在下文进一步说明，但是它们不应答理解为是对本发明范围的限制。
附图说明
无附图。
具体实施方式
本发明一个目的是获得旋复(覆)花植物(包括Inula japinica和Inula britannica)水提物及含有机溶剂的水提物，这些提取物可用于治疗糖尿病及高血脂症的用途，尤其用于糖尿病治疗。
因此，第一方面，本发明涉及一种制备旋复花的水提取物(或者浸出物)的方法，包括：获得旋复花植物材料；用含水溶剂提取(或者浸出)旋复花植物材料，获得旋复花的水提取物。本发明的方法用于从旋复(覆)花植物材料中提取可用于降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的活性成分。
可通过煎煮法、浸渍法、渗漉法、或水蒸气蒸馏法等提取(或者浸出)旋复花植物材料。
在一个具体实施方案中，用含水溶剂提取旋复花植物材料包括：(1)在适当条件下用含水溶剂浸泡旋复花植物材料；(2)分离液相和固相；(3)任选地，重复步骤(1)和(2)一次或多次(例如重复1-数次、1-5次、1-2次、2-5次、3次、4次)；(4)任选地，合并液相；和(5)任选地，将由步骤(2)或者步骤(4)得到的液相浓缩。
在步骤(1)中，所述适当条件可通过试验确定。温度通常为大约0-100℃，例如大约0-80℃，优选大约0-60℃，例如大约4-50℃，如大约15-40℃、大约20-30℃，方便的是大约室温，也可以是大约60-100℃。压力通常为大约0.1个大气压-5个大气压，例如大约0.5个大气压-3个大气压，例如大约1个大气压，方便的是大约常压。浸泡时间通常是至少大约1小时，长至例如10天，例如大约6小时-5天，大约12-96小时，例如大约24、48、72小时，或者其中的任何时间，优选不短于24小时。旋复花植物材料与含水溶剂的重量体积比通常为大约1∶1到大约1∶100(千克/升)，例如大约1∶1到大约1∶50、大约1∶2到大约1∶40，优选大约1∶5到大约1∶20，更优选大约1∶5到大约1∶15(千克/升)。优选在浸泡时搅拌，例如多次搅拌或者连续搅拌。
步骤(2)中的分离可通过本领域已知的任何方法来实现，包括但不限于，过滤、离心、自然沉降等。
步骤(5)的浓缩可通过本领域已知的任何方法来实现.这种浓缩没有特别的限制，前提是不破坏活性成分.例如，该浓缩可以是减压浓缩.温度可以在大约0℃到大约80℃，例如大约室温到大约80℃，优选不超过大约60℃，例如大约0℃到大约60℃，例如大约50-60℃，如大约55℃.步骤(5)的浓缩也可以是冷冻干燥.
一种常见的浓缩方法是蒸发，例如常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发等。
浓缩之后可以进行干燥，例如，常压干燥、减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。干燥不是必需的步骤，但在某些实施方案中是优选的。
在有些实施方案中，浓缩步骤也可以省略。例如，可以直接使用浸出液，例如直接给患者服用，或者直接作为原料制备含有旋复花提取物的组合物。
本发明的水提取物(如浸出液或者浓缩、干燥之后的浸膏)还可以进一步进行纯化。这可采用本领域已知许多纯化方法中的任何一种或者几种来进行。在纯化过程中，最好监测活性成分的存在。例如通过降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力等性质来监测活性成分。
在本发明方法中，所述旋复花植物可以是Inula japinica或者Inula britannica或者它们的组合。
在本发明方法中，所述旋复花植物材料可以是旋复花植物全株或其任何部分，例如其器官、组织、或细胞，包括花、果实、种子、茎、叶、根，优选是旋复花植物的地上部分，例如花序。旋复花植物材料可以是药材，也可以是生药。旋复花植物材料可以是组织培养物、细胞培养物。旋复花植物可以是天然的或者转基因的。旋复花植物材料可以是干燥的或者新鲜的。
在本发明的提取方法中，所述旋复花植物材料可以是经过预先处理的。这些处理包括物理处理、化学处理、生物处理等。例如，旋复花植物材料可以预先进行简单洗涤、粉碎。在一个实施方案中，在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前可以预先用有机溶剂提取(例如简单地提取)。有机溶剂包括但不限于：石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合等，如乙醇如95％的乙醇。
在本发明中，所述“含水溶剂”是任何含水的溶剂，它可以是水或者含有有机溶剂的水溶液；其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。水可以是例如蒸馏水、离子交换水、或者自来水。含水溶剂还可以是添加适当其它物质的提取用水。其它物质可以是例如有机溶剂、缓冲剂等。优选地，所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液。含水溶剂中水的含量(体积比)可以是例如至少大约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或者更高，优选至少大约10％，更优选至少大约20％、50％或者更多。
在一个具体实施方案中，本发明旋复(覆)花植物提取物的制备方法是将旋复(覆)花植物的地上部分在常温、常压下，用水或含有机溶剂的水溶液浸提获得旋复(覆)花提取浸膏。生药旋复(覆)花与浸泡用水或含有机溶剂的水溶液的重量体积比推荐为1∶5-15(千克/升)。浸泡时间推荐大于24小时，浸泡温度推荐0℃-60℃。所用有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮及正丁醇。浓缩可以是将萃取液减压浓缩，温度推荐等于或低于60℃进行。
另一方面，本发明涉及旋复花的水提取物(或者水浸出物)。
本发明的旋复花的“水提取物(或者水浸出物)”是指通过用含水溶剂(如水或者含有有机溶剂的水)从旋复花植物材料中提取的旋复花提取物，该旋复花提取物含有可降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的活性成分.
本发明的水提取物可通过以上定义的本发明提取方法获得的。
在一方面，本发明涉及可通过任何一种本发明的方法获得的旋复花的水提取物。
例如，可通过煎煮法、浸渍法、渗漉法、或水蒸气蒸馏法等提取(或者浸出)旋复花植物材料，得到浸出液。然后，任选地进行浓缩、干燥、或者纯化、或者它们的任何组合。
所得浸出物或纯化产物可以进一步配制成目的组合物，如药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
本发明的提取物中主要含有生物碱、黄酮苷、肽和糖类成分。
本发明的提取物具有降血糖和降血脂功能，其可用于制备治疗糖尿病和高血脂的药品，包括口服药和注射剂，也可制备为降血糖、降血脂的保健品。
在另一方面，本发明涉及含有本发明旋复花水提取物的组合物。优选地，该组合物还含有赋形剂或者载体。
在具体实施方案中，所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
将本发明旋复花水提取物配制成目的组合物的方法是本领域已知的。根据不同的需要，本发明所属领域技术人员可以选择适当的添加物、配制方法、剂型、单位剂量等。
当本发明组合物是药物组合物时，可以含有适当的药用赋形剂、载体或者稀释剂。可以采用制药领域公知的技术进行制剂。
本发明药物组合物可以采用多种剂型，这往往取决于给药途径。例如，本发明旋复花水提取物可用于制备治疗糖尿病和高血脂的药品，包括口服药和肠胃外给药用的制剂，如注射剂。
本发明药物组合物可以通过多种途径给药，例如口服、肠胃外给药等。给药方案和剂量取决于多种因素，如给药途径、患者健康状况等，并且可由医生确定。剂量范围可以由本领域技术人员通过常规实验确定。
另一方面，本发明涉及旋复花水提取物或者含有旋复花水提取物的组合物在制备用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)用于生产可用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物中的用途。所述组合物优选是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
另一方面，本发明涉及一种降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的方法，包括向患者给予旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品。
“患者”包括任何动物，优选哺乳动物，特别是宠物、饲养动物.在一个优选实施方案这，患者是人.“患者”可以是患有或者怀疑患有高脂血症或者糖尿病或者相关疾病的个体，也可以是有患高脂血症或者糖尿病危险或者相关疾病的个体，或者是正常个体.因此，本发明的旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品的用途不仅包括治疗，也包括预防高脂血症或者糖尿病或者相关疾病.
实施例
实施例1
旋复(覆)花(Inula japinic)花序1kg，加入95％乙醇8L室温浸泡48小时，不断搅拌。四层纱布过滤，残渣继续用95％乙醇4L浸泡48小时，过滤。合并滤液，离心，上清液45℃减压浓缩得到乙醇提取浸膏55.6克，得率为5.56％。乙醇提取后的残渣1kg用蒸馏水8L室温浸泡72h，不断搅拌。浸泡液过滤，残渣用蒸馏水4L再继续浸泡24h，过滤，合并滤液，减压浓缩，55℃烘干得水提浸膏114.2g，得率为11.42％。
旋复花(Inula britannica)花序1kg采用同样方法提取，醇提物得率为5.04％，水提物得率为13.01％。
实施例2
取按实施例1方法提取的二种旋复花的水提浸膏少许，溶于水中，进行薄层层析比较。
层析板：GF254硅胶板
展开剂条件1正丁醇∶甲醇∶水∶氨水＝3∶1∶1∶0.2
2正丁醇∶甲醇∶水∶氨水＝2∶2∶1∶0.5
3正丁醇∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝2∶1∶1∶2
显色条件：荧光显色法，λ＝254nm，365nm.
碘熏法(I2)
层析结果：
方法1的Rf值(采用条件1)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.66±0.1(365nm) Rf 1＝0.66±0.1(365nm)
Rf 2＝0.58±0.1(365，254nm，I2) Rf 2＝0.58±0.1(365，254nm，I2)
Rf 3＝0.52±0.1(365nm)
Rf 3＝0.49±0.1(254nm，I2) Rf 4＝0.49±0.1(254nm，I2)
Rf 4＝0.48±0.1(365nm) Rf 5＝0.48±0.1(365nm)
Rf 5＝0.37±0.1(I2) Rf 6＝0.37±0.1(I2)
Rf 6＝0.27±0.1(I2) Rf 7＝0.27±0.1(I2)
Rf 7＝0.20±0.1(I2) Rf 8＝0.20±0.1(I2)
Rf 8＝0.12±0.1(365nm) Rf 9＝0.12±0.1(365nm)
Rf 9＝0.04±0.02(254nm，I2) Rf 10＝0.04±0.02(254nm，I2)
Rf 10＝0.00(254nm，I2) Rf 11＝0.00(254nm，I2)
方法2的Rf值(采用条件2)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.80±0.1(365nm) Rf 1＝0.80±0.1(365nm)
Rf 2＝0.70±0.1(365nm，I2) Rf 2＝0.70±0.1(365nm，I2)
Rf 3＝0.65±0.1(365nm) Rf 3＝0.65±0.1(365nm)
Rf 4＝0.52±0.1(I2) Rf 4＝0.52±0.1(I2)
Rf 5＝0.40±0.1(I2) Rf 5＝0.40±0.1(I2)
Rf 6＝0.05±0.02(I2) Rf 6＝0.05±0.02(I2)
Rf 7＝0.00(254nm，I2) Rf 7＝0.00(254nm，I2)
方法3的Rf值(采用条件3)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.89±0.1(365nm)
Rf 1＝0.87±0.1(365nm) Rf 2＝0.87±0.1(365nm)
Rf 2＝0.76±0.1(365nm) Rf 3＝0.76±0.1(365nm)
Rf 3＝0.73±0.1(254nm，I2) Rf 4＝0.73±0.1(254nm，I2)
Rf 4＝0.61±0.1(365nm，I2) Rf 5＝0.61±0.1(365nm，I2)
Rf 5＝0.42±0.1(I2) Rf 6＝0.42±0.1(I2)
Rf 6＝0.28±0.1(I2) Rf 7＝0.28±0.1(I2)
Rf 7＝0.09±0.02(I2) Rf 8＝0.09±0.02(I2)
Rf 8＝0.01(254nm，I2) Rf 9＝0.00(254nm，I2)
层析结果表明：二种旋复花植物水提物组成成分基本相同。另取标准旋复花药材1g按实施例1方法制成对照药材溶液，分别点在同一硅胶G254薄层板上展开。与对照药材相比，呈相同斑点。
实施例3
对二种旋复花的水提物进行定性检验，分析结果如下：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
1碘化铋钾沉淀反应：(生物碱) 阳性 阳性
2茚三酮显色反应：(肽、氨基酸) 阳性 阳性
3三氧化铝荧光显色反应：(黄酮类) 阳性 阳性
4α-萘酚显色反应：(糖类) 阳性 阳性
5溴酚兰显色反应：(有机酸) 阳性 阳性
6三氯化铁反应：(多酚和鞣质) 阳性 阳性
定性检验结果表明这二种旋复花水提物中均含有生物碱、肽、黄酮苷和糖类化合物，另外还含有机酸和鞣质等多酚类化合物。
实施例4
50只昆明小鼠随机分为正常对照组(10只)和待造模组(40只)。待造模组小鼠禁食24小时后(不禁水)，尾静脉快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60mg·kg-1。72h后尾尖取血测定小鼠血糖，血糖值＞20.0mmol·L-1的小鼠被选为糖尿病小鼠，分成模型组(10只)(模型组和正常对照组给水)，旋复花(Inula japinic)水提物组(1g.kg-1，10只)(水提物的量按实施例1的水提物浸膏的量计算)，和gliclazide阳性药组(40mg/kg，10只).连续灌胃给药18天，第7天测定血糖，第18天测定血糖.数据以X±SD表示，二组均数间差异用t检验进行分析.结果表明旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有明显降血糖作用.
表1 旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
数值＝平均值±S.D.，与模型组比较，*p＜0.05，***p＜0.001
以上糖尿病小鼠给予旋复花水提物18天后，测定血糖，眼眶取血，处死。测定小鼠血清中总胆固醇、甘油三脂和糖基化白蛋白水平。数据以X±SD表示，二组均数间差异用t检验进行分析。实验结果表明该水提物具有显著降低血浆中甘油三酯作用。
表2 旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)
数值＝平均值±SD.，与正常组相比，△p＜0.05，△△p＜0.01，△△△p＜0.001；与模型组相比，*p＜0.05.
实施例5
正常昆明小鼠和糖尿病小鼠(四氧嘧啶模型)(均为雄性)禁食16小时后，正常鼠分为三组：对照组；旋复花水提物组(1.0g/kg，po)；和二甲双胍组(175mg/kg，po)。糖尿病小鼠同样分为三组：模型组；旋复花水提物(Inula japinic)组(1.0g/kg，po)(水提物的量按实施例1的水提浸膏的量计算)；和二甲双胍组(175mg/kg，po)。每组小鼠为5只。给药组分别预先1.0h给予水提物和二甲双胍，然后测定各组小鼠血糖(0min)。每组小鼠口服葡萄糖水溶液(2g/kg)，测定给予后30min，60min，90min，150min及270min时血糖。结果表明旋复花水提物能明显提高糖尿病小鼠对葡萄糖的耐受能力。
表3 旋复花水提物对糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力的影响
与正常组相比，△p＜0.05，△△p＜0.01；与模型组相比，*p＜0.05.正＝正常鼠，旋＝旋复花水提物，
二＝二甲双胍，糖＝糖尿病鼠。
因此，第一方面，本发明涉及一种制备旋复花的水提取物(或者浸出物)的方法，包括：获得旋复花植物材料；用含水溶剂提取(或者浸出)旋复花植物材料，获得旋复花的水提取物。本发明的方法用于从旋复(覆)花植物材料中提取可用于降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的活性成分。
可通过煎煮法、浸渍法、渗漉法、或水蒸气蒸馏法等提取(或者浸出)旋复花植物材料。
在一个具体实施方案中，用含水溶剂提取旋复花植物材料包括：(1)在适当条件下用含水溶剂浸泡旋复花植物材料；(2)分离液相和固相；(3)任选地，重复步骤(1)和(2)一次或多次(例如重复1-数次、1-5次、1-2次、2-5次、3次、4次)；(4)任选地，合并液相；和(5)任选地，将由步骤(2)或者步骤(4)得到的液相浓缩。
在步骤(1)中，所述适当条件可通过试验确定。温度通常为大约0-100℃，例如大约0-80℃，优选大约0-60℃，例如大约4-50℃，如大约15-40℃、大约20-30℃，方便的是大约室温，也可以是大约60-100℃。压力通常为大约0.1个大气压-5个大气压，例如大约0.5个大气压-3个大气压，例如大约1个大气压，方便的是大约常压。浸泡时间通常是至少大约1小时，长至例如10天，例如大约6小时-5天，大约12-96小时，例如大约24、48、72小时，或者其中的任何时间，优选不短于24小时。旋复花植物材料与含水溶剂的重量体积比通常为大约1∶1到大约1∶100(千克/升)，例如大约1∶1到大约1∶50、大约1∶2到大约1∶40，优选大约1∶5到大约1∶20，更优选大约1∶5到大约1∶15(千克/升)。优选在浸泡时搅拌，例如多次搅拌或者连续搅拌。
步骤(2)中的分离可通过本领域已知的任何方法来实现，包括但不限于，过滤、离心、自然沉降等。
步骤(5)的浓缩可通过本领域已知的任何方法来实现.这种浓缩没有特别的限制，前提是不破坏活性成分.例如，该浓缩可以是减压浓缩.温度可以在大约0℃到大约80℃，例如大约室温到大约80℃，优选不超过大约60℃，例如大约0℃到大约60℃，例如大约50-60℃，如大约55℃.步骤(5)的浓缩也可以是冷冻干燥.
一种常见的浓缩方法是蒸发，例如常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发等。
浓缩之后可以进行干燥，例如，常压干燥、减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。干燥不是必需的步骤，但在某些实施方案中是优选的。
在有些实施方案中，浓缩步骤也可以省略。例如，可以直接使用浸出液，例如直接给患者服用，或者直接作为原料制备含有旋复花提取物的组合物。
本发明的水提取物(如浸出液或者浓缩、干燥之后的浸膏)还可以进一步进行纯化。这可采用本领域已知许多纯化方法中的任何一种或者几种来进行。在纯化过程中，最好监测活性成分的存在。例如通过降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力等性质来监测活性成分。
在本发明方法中，所述旋复花植物可以是Inula japinica或者Inula britannica或者它们的组合。
在本发明方法中，所述旋复花植物材料可以是旋复花植物全株或其任何部分，例如其器官、组织、或细胞，包括花、果实、种子、茎、叶、根，优选是旋复花植物的地上部分，例如花序。旋复花植物材料可以是药材，也可以是生药。旋复花植物材料可以是组织培养物、细胞培养物。旋复花植物可以是天然的或者转基因的。旋复花植物材料可以是干燥的或者新鲜的。
在本发明的提取方法中，所述旋复花植物材料可以是经过预先处理的。这些处理包括物理处理、化学处理、生物处理等。例如，旋复花植物材料可以预先进行简单洗涤、粉碎。在一个实施方案中，在用含水溶剂提取旋复花植物材料之前可以预先用有机溶剂提取(例如简单地提取)。有机溶剂包括但不限于：石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合等，如乙醇如95％的乙醇。
在本发明中，所述“含水溶剂”是任何含水的溶剂，它可以是水或者含有有机溶剂的水溶液；其中有机溶剂可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它们的任何组合。水可以是例如蒸馏水、离子交换水、或者自来水。含水溶剂还可以是添加适当其它物质的提取用水。其它物质可以是例如有机溶剂、缓冲剂等。优选地，所述含水溶剂是水或者含有有机溶剂的水溶液。含水溶剂中水的含量(体积比)可以是例如至少大约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或者更高，优选至少大约10％，更优选至少大约20％、50％或者更多。
在一个具体实施方案中，本发明旋复(覆)花植物提取物的制备方法是将旋复(覆)花植物的地上部分在常温、常压下，用水或含有机溶剂的水溶液浸提获得旋复(覆)花提取浸膏。生药旋复(覆)花与浸泡用水或含有机溶剂的水溶液的重量体积比推荐为1∶5-15(千克/升)。浸泡时间推荐大于24小时，浸泡温度推荐0℃-60℃。所用有机溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮及正丁醇。浓缩可以是将萃取液减压浓缩，温度推荐等于或低于60℃进行。
另一方面，本发明涉及旋复花的水提取物(或者水浸出物)。
本发明的旋复花的“水提取物(或者水浸出物)”是指通过用含水溶剂(如水或者含有有机溶剂的水)从旋复花植物材料中提取的旋复花提取物，该旋复花提取物含有可降低血糖、或者降低血脂、或者治疗高脂血症、或者治疗糖尿病、或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的活性成分.
本发明的水提取物可通过以上定义的本发明提取方法获得的。
在一方面，本发明涉及可通过任何一种本发明的方法获得的旋复花的水提取物。
例如，可通过煎煮法、浸渍法、渗漉法、或水蒸气蒸馏法等提取(或者浸出)旋复花植物材料，得到浸出液。然后，任选地进行浓缩、干燥、或者纯化、或者它们的任何组合。
所得浸出物或纯化产物可以进一步配制成目的组合物，如药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
本发明的提取物中主要含有生物碱、黄酮苷、肽和糖类成分。
本发明的提取物具有降血糖和降血脂功能，其可用于制备治疗糖尿病和高血脂的药品，包括口服药和注射剂，也可制备为降血糖、降血脂的保健品。
在另一方面，本发明涉及含有本发明旋复花水提取物的组合物。优选地，该组合物还含有赋形剂或者载体。
在具体实施方案中，所述组合物是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
将本发明旋复花水提取物配制成目的组合物的方法是本领域已知的。根据不同的需要，本发明所属领域技术人员可以选择适当的添加物、配制方法、剂型、单位剂量等。
当本发明组合物是药物组合物时，可以含有适当的药用赋形剂、载体或者稀释剂。可以采用制药领域公知的技术进行制剂。
本发明药物组合物可以采用多种剂型，这往往取决于给药途径。例如，本发明旋复花水提取物可用于制备治疗糖尿病和高血脂的药品，包括口服药和肠胃外给药用的制剂，如注射剂。
本发明药物组合物可以通过多种途径给药，例如口服、肠胃外给药等。给药方案和剂量取决于多种因素，如给药途径、患者健康状况等，并且可由医生确定。剂量范围可以由本领域技术人员通过常规实验确定。
另一方面，本发明涉及旋复花水提取物或者含有旋复花水提取物的组合物在制备用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)用于生产可用于降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的组合物中的用途。所述组合物优选是药物组合物、保健组合物、食品组合物、或者饮料组合物。
另一方面，本发明涉及一种降低血糖或者降低血脂或者治疗高脂血症或者治疗糖尿病或者提高糖尿病患者对葡萄糖的耐受能力的方法，包括向患者给予旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品。
“患者”包括任何动物，优选哺乳动物，特别是宠物、饲养动物.在一个优选实施方案这，患者是人.“患者”可以是患有或者怀疑患有高脂血症或者糖尿病或者相关疾病的个体，也可以是有患高脂血症或者糖尿病危险或者相关疾病的个体，或者是正常个体.因此，本发明的旋复花植物材料或者其提取物(优选水提取物)或者含有这种提取物的组合物或者其它由旋复花植物材料加工后的产品的用途不仅包括治疗，也包括预防高脂血症或者糖尿病或者相关疾病.
实施例
实施例1
旋复(覆)花(Inula japinic)花序1kg，加入95％乙醇8L室温浸泡48小时，不断搅拌。四层纱布过滤，残渣继续用95％乙醇4L浸泡48小时，过滤。合并滤液，离心，上清液45℃减压浓缩得到乙醇提取浸膏55.6克，得率为5.56％。乙醇提取后的残渣1kg用蒸馏水8L室温浸泡72h，不断搅拌。浸泡液过滤，残渣用蒸馏水4L再继续浸泡24h，过滤，合并滤液，减压浓缩，55℃烘干得水提浸膏114.2g，得率为11.42％。
旋复花(Inula britannica)花序1kg采用同样方法提取，醇提物得率为5.04％，水提物得率为13.01％。
实施例2
取按实施例1方法提取的二种旋复花的水提浸膏少许，溶于水中，进行薄层层析比较。
层析板：GF254硅胶板
展开剂条件1正丁醇∶甲醇∶水∶氨水＝3∶1∶1∶0.2
2正丁醇∶甲醇∶水∶氨水＝2∶2∶1∶0.5
3正丁醇∶乙酸乙酯∶甲醇∶水＝2∶1∶1∶2
显色条件：荧光显色法，λ＝254nm，365nm.
碘熏法(I2)
层析结果：
方法1的Rf值(采用条件1)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.66±0.1(365nm) Rf 1＝0.66±0.1(365nm)
Rf 2＝0.58±0.1(365，254nm，I2) Rf 2＝0.58±0.1(365，254nm，I2)
Rf 3＝0.52±0.1(365nm)
Rf 3＝0.49±0.1(254nm，I2) Rf 4＝0.49±0.1(254nm，I2)
Rf 4＝0.48±0.1(365nm) Rf 5＝0.48±0.1(365nm)
Rf 5＝0.37±0.1(I2) Rf 6＝0.37±0.1(I2)
Rf 6＝0.27±0.1(I2) Rf 7＝0.27±0.1(I2)
Rf 7＝0.20±0.1(I2) Rf 8＝0.20±0.1(I2)
Rf 8＝0.12±0.1(365nm) Rf 9＝0.12±0.1(365nm)
Rf 9＝0.04±0.02(254nm，I2) Rf 10＝0.04±0.02(254nm，I2)
Rf 10＝0.00(254nm，I2) Rf 11＝0.00(254nm，I2)
方法2的Rf值(采用条件2)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.80±0.1(365nm) Rf 1＝0.80±0.1(365nm)
Rf 2＝0.70±0.1(365nm，I2) Rf 2＝0.70±0.1(365nm，I2)
Rf 3＝0.65±0.1(365nm) Rf 3＝0.65±0.1(365nm)
Rf 4＝0.52±0.1(I2) Rf 4＝0.52±0.1(I2)
Rf 5＝0.40±0.1(I2) Rf 5＝0.40±0.1(I2)
Rf 6＝0.05±0.02(I2) Rf 6＝0.05±0.02(I2)
Rf 7＝0.00(254nm，I2) Rf 7＝0.00(254nm，I2)
方法3的Rf值(采用条件3)：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
Rf 1＝0.89±0.1(365nm)
Rf 1＝0.87±0.1(365nm) Rf 2＝0.87±0.1(365nm)
Rf 2＝0.76±0.1(365nm) Rf 3＝0.76±0.1(365nm)
Rf 3＝0.73±0.1(254nm，I2) Rf 4＝0.73±0.1(254nm，I2)
Rf 4＝0.61±0.1(365nm，I2) Rf 5＝0.61±0.1(365nm，I2)
Rf 5＝0.42±0.1(I2) Rf 6＝0.42±0.1(I2)
Rf 6＝0.28±0.1(I2) Rf 7＝0.28±0.1(I2)
Rf 7＝0.09±0.02(I2) Rf 8＝0.09±0.02(I2)
Rf 8＝0.01(254nm，I2) Rf 9＝0.00(254nm，I2)
层析结果表明：二种旋复花植物水提物组成成分基本相同。另取标准旋复花药材1g按实施例1方法制成对照药材溶液，分别点在同一硅胶G254薄层板上展开。与对照药材相比，呈相同斑点。
实施例3
对二种旋复花的水提物进行定性检验，分析结果如下：
Inula japinic水提物 Inula britannica水提物
1碘化铋钾沉淀反应：(生物碱) 阳性 阳性
2茚三酮显色反应：(肽、氨基酸) 阳性 阳性
3三氧化铝荧光显色反应：(黄酮类) 阳性 阳性
4α-萘酚显色反应：(糖类) 阳性 阳性
5溴酚兰显色反应：(有机酸) 阳性 阳性
6三氯化铁反应：(多酚和鞣质) 阳性 阳性
定性检验结果表明这二种旋复花水提物中均含有生物碱、肽、黄酮苷和糖类化合物，另外还含有机酸和鞣质等多酚类化合物。
实施例4
50只昆明小鼠随机分为正常对照组(10只)和待造模组(40只)。待造模组小鼠禁食24小时后(不禁水)，尾静脉快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60mg·kg-1。72h后尾尖取血测定小鼠血糖，血糖值＞20.0mmol·L-1的小鼠被选为糖尿病小鼠，分成模型组(10只)(模型组和正常对照组给水)，旋复花(Inula japinic)水提物组(1g.kg-1，10只)(水提物的量按实施例1的水提物浸膏的量计算)，和gliclazide阳性药组(40mg/kg，10只).连续灌胃给药18天，第7天测定血糖，第18天测定血糖.数据以X±SD表示，二组均数间差异用t检验进行分析.结果表明旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有明显降血糖作用.
表1 旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响
数值＝平均值±S.D.，与模型组比较，*p＜0.05，***p＜0.001
以上糖尿病小鼠给予旋复花水提物18天后，测定血糖，眼眶取血，处死。测定小鼠血清中总胆固醇、甘油三脂和糖基化白蛋白水平。数据以X±SD表示，二组均数间差异用t检验进行分析。实验结果表明该水提物具有显著降低血浆中甘油三酯作用。
表2 旋复花水提物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)
数值＝平均值±SD.，与正常组相比，△p＜0.05，△△p＜0.01，△△△p＜0.001；与模型组相比，*p＜0.05.
实施例5
正常昆明小鼠和糖尿病小鼠(四氧嘧啶模型)(均为雄性)禁食16小时后，正常鼠分为三组：对照组；旋复花水提物组(1.0g/kg，po)；和二甲双胍组(175mg/kg，po)。糖尿病小鼠同样分为三组：模型组；旋复花水提物(Inula japinic)组(1.0g/kg，po)(水提物的量按实施例1的水提浸膏的量计算)；和二甲双胍组(175mg/kg，po)。每组小鼠为5只。给药组分别预先1.0h给予水提物和二甲双胍，然后测定各组小鼠血糖(0min)。每组小鼠口服葡萄糖水溶液(2g/kg)，测定给予后30min，60min，90min，150min及270min时血糖。结果表明旋复花水提物能明显提高糖尿病小鼠对葡萄糖的耐受能力。
表3 旋复花水提物对糖尿病小鼠葡萄糖耐受能力的影响
与正常组相比，△p＜0.05，△△p＜0.01；与模型组相比，*p＜0.05.正＝正常鼠，旋＝旋复花水提物，
二＝二甲双胍，糖＝糖尿病鼠。