2,4-二氧代-3-喹唑啉基芳基磺酰基脲转让专利
申请号 : CN200480028791.3
文献号 : CN1863798B
文献日 : 2011-08-31
发明人 : 罗伯特·M·斯卡伯勒 , 黄沃林 , 安贾莉·潘迪 , 肖恩·M·鲍尔 , 张晓明 , 照中·J·贾
申请人 : 博尔托拉制药公司
摘要 :
本发明提供了2，4-二氧代-3-喹唑啉基芳基磺酰脲类化合物，其可用于抑制ADP-血小板凝集，特别是用于血栓形成和与血栓形成有关的状况和病症的治疗。
权利要求 :
1.下式表示的化合物：
其中
R为H；
R1为选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基和C3-5环烷基-烷基的基团；
R2为选自H和卤素的基团；
L为选自-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-和-CH2CH2CH2-的1-3个碳的连接基团；
L1为选自键和-CH2-的连接基团；
L2为选自键、-NH-和-CH2-的连接基团；
Ar1为选自苯、吡啶和嘧啶的芳香环，其各自任选地被1-2个R3取代基取代，其中每个R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
Ar2为5-6元单环或9-10元稠和双环的芳香环系统，其任选地具有1-3个选自N、O和S的杂原子作为环顶点，所述环系统任选地被1-3个R4取代基取代，其中所述R4取代基各自独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基和-C(O)R4a，其中R4a各自为独立地选自H、羟基和C1-6烷氧基的基团；
当L2为键时下标t为0或1，并且当L2选自-NH-和-CH2-时下标t为1；
或其可药用盐。
2.权利要求1的化合物，其中R1为H或C1-4烷基；L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-；
L1为键并且R2为卤素。
3.权利要求1的化合物，其中Ar1为苯环，其任选地被1-2个R3取代基取代。
4.权利要求1的化合物，其中Ar1为吡啶环，其任选地被1-2个R3取代基取代。
5.权利要求1的化合物，其中Ar1为嘧啶环，其任选地被1-2个R3取代基取代。
6.权利要求3的化合物，其中Ar2为苯或萘，其各自任选地被1-3个R4取代基取代。
7.权利要求3的化合物，其中Ar2选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、嘧啶、苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑，其各自任选地被1-3个R4取代基取代。
8.权利要求7的化合物，其中R1为H或C1-4烷基；L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-；
L1为键并且R2为卤素。
9.权利要求6的化合物，其中R1为H或C1-4烷基；L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-；
L1为键并且R2为卤素。
10.权利要求1的化合物，其由下式表示：其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。
1 2 3
11.权利要求10的化合物，其中R 为H；R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷4
基和C1-4烷氧基；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基。
2 4
12.权利要求11的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基。
13.权利要求1的化合物，其选自如下的化合物：2
14.权利要求3的化合物，其中Ar 选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡4
啶和嘧啶，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1
15.权利要求14的化合物，其中R 为H或C1-4烷基；L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-；
2
并且R 为卤素。
2
16.权利要求3的化合物，其中Ar 选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并4
咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1
17.权利要求16的化合物，其中R 为H或C1-4烷基；L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-；
2
并且R 为卤素。
18.权利要求1的化合物，其由下式表示：其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。
2
19.权利要求18的化合物，其中Ar 选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡4
啶和嘧啶，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1 2 3
20.权利要求19的化合物，其中R 为H；R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷4
基和C1-4烷氧基；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基。
2 4
21.权利要求20的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基。
2
22.权利要求18的化合物，其中Ar 选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并4
咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1 2 3
23.权利要求22的化合物，其中R 为H；R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷4
基和C1-4烷氧基；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基。
2 4
24.权利要求23的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；并且R 当存在时选自卤素、氰基和C1-6烷基。
25.权利要求1的化合物，其由下式表示：其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。
2
26.权利要求25的化合物，其中Ar 选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡4
啶和嘧啶，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1 2 3
27.权利要求26的化合物，其中R 为H；R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷4
基和C1-4烷氧基；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基。
2 4
28.权利要求27的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基。
2
29.权利要求25的化合物，其中Ar 选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并4
咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑，其各自任选地被1-2个R 取代基取代。
1 2 3
30.权利要求29的化合物，其中R 为H；R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷4
基和C1-4烷氧基；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6卤代烷基。
2 4
31.权利要求30的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；并且每个R 当存在时独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基。
32.权利要求1的化合物，其由下式表示：1
其中下标n1表示0到2的整数，并且R 为选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基和C3-5环烷基-烷基的基团。
2 3
33.权利要求32的化合物，其中R 为卤素；每个R 当存在时独立地选自C1-4烷基和C1-4烷氧基。
2
34.权利要求33的化合物，其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接。
35.药学组合物，其包括可药用载体和权利要求1-34中任一项的化合物。
36.权利要求1到34中任一项的化合物在制备用于治疗血栓形成的药物中的应用。
37.权利要求36的应用，其中所述化合物经口服给用。
38.权利要求1到34中任一项的化合物在制备用于预防继发性缺血事件发生的药物中的应用。
39.权利要求38的应用，其中所述原发性和/或继发性缺血事件选自心肌梗死、稳定型或不稳定型心绞痛、经皮腔内冠状血管成形术后的急性再闭塞、再狭窄、血栓形成性卒中、一过性缺血发作、可逆性缺血性神经功能缺损和间歇性跛行。
说明书 :
2，4-二氧代-3-喹唑啉基芳基磺酰基脲
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2003年10月3日提交的临时申请60/508,564的优先权，其公开被并入本文作为参考。
[0003] 关于在联邦赞助研究与开发下得到的本发明权力的声明不适用
[0004] 对以光盘形式提交的“顺序表”、表、或计算机程序列表附录的参考不适用[0005] 发明背景
[0006] 血栓形成并发症是工业化世界的主要死亡原因。这些并发症的例子包括急性心肌梗死、不稳定型心绞痛、慢性稳定型心绞痛、一过性缺血发作、中风、周围性血管疾病、先兆子痫/惊厥、深部静脉血栓形成、栓塞、弥漫性血管内凝血、和血栓形成血细胞减少性紫癜。还在介入手术如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植手术、支架放置和血管内装置和假体植入后出现血栓形成和再狭窄性并发症。通常认为在这些情况中血小板聚集起到至关重要的作用。通常在脉管系统中自由循环的血小板由破裂的动脉粥样硬化病灶或介入治疗如血管成形术引起的扰动血流而被活化并聚集形成血栓，引起血管闭塞。血小板活化可由多种物质引发，如暴露的内皮下基质分子如胶原蛋白、或由在凝血级联(coagulation cascade)中形成的凝血酶引发。
[0007] 血小板活化和聚集的重要递质为ADP(腺苷-5′-二磷酸)，其当脉管系统中的血小板被不同物质如胶原蛋白和凝血酶活化时从血小板释放、和从被破坏的血细胞、内皮或组织释放。由ADP活化将募集更多的血小板并使现有的血小板聚集物更稳定。介导聚集的血小板ADP受体由ADP及其一些衍生物活化并被ATP(腺苷-5′-三磷酸)及其一些衍生物拮抗(Mills，D.C.B.(1996)Thromb.Hemost.，76：835-856)。因此，血小板ADP受体是由嘌呤和/或嘧啶类核苷酸活化的P2受体家族的成员(King，B.F.，Townsend-Nicholson，A.&Burnstock，G.，(1998)TrendsPharmacol.Sci.，19：506-514)。
[0008] 新近的使用选择性拮抗剂的药理学数据表明，ADP依赖性血小板凝集需要活化至少两种ADP受体(Kunapuli，S.P.(1998)，TrendsPharmacol.Sci.，19：391-394；Kunapuli，S.P.&Daniel，J.L(1998)Biochem.J.，336：513-523；Jantzen，H.M. 等 人 (1999)Thromb.Hemost.，81：111-117)。一个受体好象是与克隆的P2Y1受体相同，介导磷脂酶C活化和细胞内钙的活动，并且是血小板形状改变所需要的。对于聚集有重要作用的第二个血小板ADP受体介导腺苷酸环化酶的抑制。最近有报导这种受体(P2Y12)的基因或cDNA的分子克隆(Hollopeter，G.等人(2001)Nature 409：202-207)。根据其药理学和信号性质，这种受体已经预先被称为P2YADP(Fredholm，B.B.等人(1997)TIPS 18：79-82)；P2TAC(Kunapuli，S.P.(1998)，Trends Pharmacol.Sci.19：391-394)；或P2Ycyc(Hechler，B.等 人 (1998)Blood，92，152-159)。
[0009] 已经报导了多种具有抗血栓形成活性的直接或间接起作用用于ADP依赖性血小板凝集的合成抑制剂。口服活性的抗血栓形成噻吩并吡啶噻类的氯匹定和氯吡格雷抑制ADP诱导的血小板凝集、放射性标记的ADP受体激动剂2-甲硫腺苷-5′-二磷酸与血小板的结合、和其它ADP依赖性事件，可能是间接地通过形成不稳定的和不可逆的作用代谢物(Quinn，M.J.&Fitzgerald，D.J.(1999)Circulation 100：1667-1667)。内源性拮抗剂ATP的一些嘌呤类衍生物如AR-C(原来的FPL或ARL)67085MX和AR-C69931MX为选择性的血小板ADP受体拮抗剂，其抑制ADP依赖性血小板凝集并且在动物血栓形成模型中有效(Humphries等人(1995)，Trends Pharmacol.Sci.，16，179；Ingall，A.H.等人(1999)J.Med.Chem.，42，213-230)。已经公开了新型的三唑并[4，5-d]嘧啶化合物作为P2T-拮抗剂(WO 99/05144)。作为血小板ADP受体抑制剂的三环类化合物也在WO 99/36425中公开。这些抗血栓形成化合物的攻击目标好象是由血小板ADP受体介导的腺苷酸环化酶抑制。
[0010] 尽管有这些化合物，仍需要更有效的血小板ADP受体抑制剂。特别是，需要可用于预防和/或治疗心血管疾病特别是与血栓形成有关的那些疾病的具有抗血栓形成活性的血小板ADP受体抑制剂。
发明内容
[0011] 在一个方面中，本发明提供下式的化合物：
[0012]
[0013] 或其可药用盐，其中R表示H或C1-6烷基；R1表示选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、2
C3-5环烷基和C3-5环烷基-烷基中的基团；R 表示选自H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔
2a 2a
基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、氰基和-C(O)R 中的基团，其中R 选自C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。
C3-5环烷基和C3-5环烷基-烷基中的基团；R 表示选自H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔
2a 2a
基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、氰基和-C(O)R 中的基团，其中R 选自C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。
[0014] 字母L表示选自-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-和-CH2CH2CH2-的1-31 2
个碳的连接基团。符号L 表示键或-CH2-。符号L 表示键、-NH-或-CH2-。
个碳的连接基团。符号L 表示键或-CH2-。符号L 表示键、-NH-或-CH2-。
[0015] 当L2为键时，下标t为0到1的整数，当L2为-NH-或-CH2-时，下标t为1。
[0016] Ar1为选自苯、吡啶和嘧啶的芳香环，其各自任选地被1-2个R3取代基取代，其中3
每个R 独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨
3a 3b 3b 3b 3b
基、-C(O)R 、-O(CH2)mOR 、-(CH2)mOR 、-O(CH2)mN(R )2和-(CH2)mN(R )2，其中下标m为1
3a 3b
到3的整数，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基，每个R
3b
独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基，并且任选地，连接于氮的两个R 基团与氮原子组合在一起形成氮杂环丁烷、吡咯烷、或哌啶环。
每个R 独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨
3a 3b 3b 3b 3b
基、-C(O)R 、-O(CH2)mOR 、-(CH2)mOR 、-O(CH2)mN(R )2和-(CH2)mN(R )2，其中下标m为1
3a 3b
到3的整数，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基，每个R
3b
独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基，并且任选地，连接于氮的两个R 基团与氮原子组合在一起形成氮杂环丁烷、吡咯烷、或哌啶环。
[0017] Ar2为5-6元单环或9-10元稠和双环的芳香环系统，其任选具有1-3个选自N、O4 4
和S的杂原子作为环顶点，所述环系统任选地被1-3个R 取代基取代，其中每个R 取代基独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基和-C(O)
4a 4a
R ，并且每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。
和S的杂原子作为环顶点，所述环系统任选地被1-3个R 取代基取代，其中每个R 取代基独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基和-C(O)
4a 4a
R ，并且每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。
[0018] 本发明另外涉及包含与可药用赋形剂混合的一种或多种上述化合物的药学组合物。
[0019] 在其它方面中，本发明提供治疗血栓形成和与血栓形成有关的状况或病症的方法，其中对需要这种治疗的患者给用上式的化合物。
附图说明
[0020] 图1-3提供本发明选择的和优选的化合物的结构。
[0021] 发明详述
[0022] 定义
[0023] 除非另有说明，本身或作为另一个取代基的一部分的术语“烷基”是指具有指定碳原子数的直链或支链的烃基(即C1-8是指一到八个碳)。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”是指具有一个或多个双键的不饱和烷基。类似地，术语“炔基”是指具有一个或多个三键的不饱和烷基。这种不饱和烷基的例子包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯、2-(丁间二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基、及其高级同系物和异构体。术语“环烷基”是指具有所示环原子数(如，C3-6环烷基)并且完全饱和或在环顶之间具有至多一个双键的烃环。当“环烷基”与“烷基”组合使用时，如在C3-5环烷基-烷基中，环烷基部分是指具有三到五个碳原子，而烷基部分为具有一到三个碳原子的亚烷基部分(如，-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-)-。
[0024] 术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)以其常规意义使用，是指分别通过氧原子、氨基、或硫原子与分子的其余部分连接的那些烷基。为了简便起见，术语C1-6烷基氨基是指包括直链的、支链的或环状的烷基基团或其组合，如甲基、乙基、2-甲基丙基、环丁基和环丙基甲基。
[0025] 除非另有说明，术语“卤代”或“卤素”，单独使用或作为另一个取代基的一部分，是指氟、氯、溴、或碘原子。另外，术语如“卤代烷基”是指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”是指包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
[0026] 除非另有说明，术语“芳基”是指多不饱和的，典型为芳香族的烃，其可为单环或稠和在一起或共价连接的多环(最多三个环)。示例性的芳基为苯基、萘基、联苯基等。术语“杂芳基”是指包含一到五个选自N、O、和S的杂原子的芳基(或芳环)，其中氮和硫原子任选被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。杂芳基可以通过杂原子与分子的其余部分连接。杂芳基的非限制性例子包括1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、1-吡唑基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、苯并吡唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基、和
6-喹啉基。上述芳基和杂芳基环系统中各自的取代基选自如下所述的可接受的取代基。
6-喹啉基。上述芳基和杂芳基环系统中各自的取代基选自如下所述的可接受的取代基。
[0027] 如本文中使用的，术语“杂原子”是指包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
[0028] 术语“可药用盐”是指包括根据本文所述化合物上所发现的特定取代基，与相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明的化合物包含相对酸性的官能度时，可通过使中性形式的这种化合物与充分量的所需碱(纯的或在适当的惰性溶剂中)接触得到碱加成盐。可药用碱加成盐的例子包括钠、钾、钙、铵、有机氨基、或镁的盐、或类似的盐。当本发明的化合物包含相对碱性的官能度时，可通过使中性形式的这种化合物与充分量的所需酸(纯的或在适当的惰性溶剂中)接触得到酸加成盐。可药用酸加成盐的例子包括得自无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、单氢碳酸、磷酸、单氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、单氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等的那些盐，以及得自相对无毒的有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等的盐。还包括氨基酸的盐如精氨酸盐等，和有机酸如葡糖酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如Berge，S.M.等人，“Pharmaceutical Salts”，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性的官能度，使得化合物可转化为或碱或酸的加成盐。
[0029] 中性形式的化合物可通过使盐与碱或酸接触并以常规的方式分离母体化合物再生。母体形式的化合物与不同的盐的形式在某些物理性能上不同，如在极性溶剂中的溶解度，然而在别的方面，对于本发明的目的，盐等价于母体形式的化合物。
[0030] 除了盐的形式之外，本发明提供前药形式的化合物。本文所述的化合物的前药为在生理条件容易经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可在回体(ex vivo)环境中通过化学或生化方法转化为本发明的化合物。例如，当被置于具有适当的酶或化学试剂的透皮贴片储存器中时，前药可以慢慢地转化为本发明的化合物。
[0031] 本发明的某些化合物可以未溶剂合物形式以及溶剂合物形式(包括水合形式)存在。一般说来，溶剂合物形式等价于未溶剂合物形式并且都被包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以多结晶或非结晶形式存在。一般说来，所有的物理形式对于本发明考虑的应用都是等价的，并且都被包括在本发明的范围内。
[0032] 本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；消旋物、非对映异构体、几何异构体和单独的异构体(如单独的对映异构体)都被包括在本发明的范围内。
[0033] 本发明的化合物也可在构成这种化合物的一个或多个原子中包含非自然比例的原子同位素。例如，化合物可用放射性同位素进行放射性标记，放射性同位素诸如例如，氚3 125 14
(H)、碘-125( I)或碳14( C)。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否为放射性的，都被包括在本发明的范围内。
(H)、碘-125( I)或碳14( C)。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否为放射性的，都被包括在本发明的范围内。
[0034] 实施方案说明
[0035] 化合物
[0036] 考虑到以上所述，本发明在一个方面中提供下式的化合物：
[0037]
[0038] 或其可药用盐，其中：R表示H或C1-6烷基，优选为H或CH3，更优选为H。符号R1表示选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、和C3-5环烷基-烷基的基团，更优选为H或2
C1-4烷基，更优选为H或CH3，最优选为H。符号R 表示选自H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6
2a 2a
炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、氰基和-C(O)R 的基团，其中R 选自C1-6烷氧基和(C1-6
2
烷基)0-2氨基。更优选地，R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CH、-C≡CH
2
和-CONH2。更优选地，R 为卤素并且连接于噻吩环的5-位。
C1-4烷基，更优选为H或CH3，最优选为H。符号R 表示选自H、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6
2a 2a
炔基、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、氰基和-C(O)R 的基团，其中R 选自C1-6烷氧基和(C1-6
2
烷基)0-2氨基。更优选地，R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CH、-C≡CH
2
和-CONH2。更优选地，R 为卤素并且连接于噻吩环的5-位。
[0039] 字母L表示选自-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-和-CH2CH2CH2-的1-3个碳的连接基团。优选地，L选自-CH2-、-CH(CH3)-和-CH2CH2-。更优选地，L选
1 2
自-CH2-和-CH(CH3)-。符号L 表示键或-CH2-，优选表示键。符号L 表示键、-NH-或-CH2-，
2
优选为键或-NH-。在更优选的实施方案中，L 位-NH-。
1 2
自-CH2-和-CH(CH3)-。符号L 表示键或-CH2-，优选表示键。符号L 表示键、-NH-或-CH2-，
2
优选为键或-NH-。在更优选的实施方案中，L 位-NH-。
[0040] 当L2为键时，下标t为0到1的整数，当L2为-NH-或-CH2-时，下标t为1。
[0041] Ar1为选自苯、吡啶和嘧啶的芳香环，其各自任选地被1-2个R3取代基取代，其中3
每个R 独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨
3a 3b 3b 3b 3b
基、-C(O)R 、-O(CH2)mOR 、-(CH2)mOR 、-O(CH2)mN(R )2和-(CH2)mN(R )2，其中下标m为1
3a 3b
到3的整数，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基，每个R
3b
独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基，并且任选地，连接于氮的两个R 基团与氮原子组合
3
在一起形成氮杂环丁烷、吡咯烷、或哌啶环。优选地，每个R 独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧
3b 3b 3b
基、C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基。
每个R 独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨
3a 3b 3b 3b 3b
基、-C(O)R 、-O(CH2)mOR 、-(CH2)mOR 、-O(CH2)mN(R )2和-(CH2)mN(R )2，其中下标m为1
3a 3b
到3的整数，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基，每个R
3b
独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基，并且任选地，连接于氮的两个R 基团与氮原子组合
3
在一起形成氮杂环丁烷、吡咯烷、或哌啶环。优选地，每个R 独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧
3b 3b 3b
基、C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基。
[0042] Ar2为5-6元单环或9-10元稠和双环的芳香环系统，其任选地具有1-3个选自N、4 4
O和S的杂原子作为环顶点，所述环系统任选地被1-3个R 取代基取代，其中每个R 取代基独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基和-C(O)
4a 4a
R ，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。在一组优选
2 4
实施方案中，Ar 为苯或萘，其各自任选地被1-3个R 取代基取代。在另一组优选实施方案
2
中，Ar 为呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、或嘧啶，其各自任选地被1-3个，
4 2
更优选1-2个R 取代基取代。在另一组优选实施方案中，Ar 为苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹
4
啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑或苯并噻唑，其各自任选地被1-3个，更优选1-2个R 取代基取代。
O和S的杂原子作为环顶点，所述环系统任选地被1-3个R 取代基取代，其中每个R 取代基独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C1-6卤代烷氧基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基、(C1-6烷基)0-2氨基和-C(O)
4a 4a
R ，每个R 独立地选自H、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基。在一组优选
2 4
实施方案中，Ar 为苯或萘，其各自任选地被1-3个R 取代基取代。在另一组优选实施方案
2
中，Ar 为呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、或嘧啶，其各自任选地被1-3个，
4 2
更优选1-2个R 取代基取代。在另一组优选实施方案中，Ar 为苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹
4
啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑或苯并噻唑，其各自任选地被1-3个，更优选1-2个R 取代基取代。
[0043] 在上述式I中，优选基团Ar2-L-N(R1)-连接于2，4-二氧代-喹唑啉环系统的6-或7-位，所述系统的编号如以下所示：
[0044]
[0045] 更优选地，基团Ar2-L-N(R1)-连接于2，4-二氧代-喹唑啉环系统的7-位。
[0046] 上述说明包括许多优选实施方案。在一组优选实施方案中，R1为H或C1-4烷基；1 2
L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2。
L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2。
[0047] 在另一组优选实施方案中，Ar1为苯环，其任选地被1-2个R3取代基取代。在另一组1 3
优选实施方案中，Ar 为吡啶环，其任选地被1-2个R 取代基取代。在另一组优选实施方案
1 3
中，Ar 为嘧啶环，其任选地被1-2个R 取代基取代。在这些组实施方案中的每一个中，一组
2 4
进一步优选的化合物为其中Ar 为苯或萘的那些，其各自任选地被1-3个R 取代基取代。在
1
这组实施方案中进一步优选的是其中R 为H或C1-4烷基；L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；
1 2
L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2的那些化合物。
优选实施方案中，Ar 为吡啶环，其任选地被1-2个R 取代基取代。在另一组优选实施方案
1 3
中，Ar 为嘧啶环，其任选地被1-2个R 取代基取代。在这些组实施方案中的每一个中，一组
2 4
进一步优选的化合物为其中Ar 为苯或萘的那些，其各自任选地被1-3个R 取代基取代。在
1
这组实施方案中进一步优选的是其中R 为H或C1-4烷基；L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；
1 2
L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2的那些化合物。
[0048] 在优选实施方案的有关的组中，Ar1为苯环，其任选地被1-2个R3取代基取代，2
并且Ar 为呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、嘧啶、苯并噻吩、吲哚、喹啉、
4
异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑或苯并噻唑，其各自任选地被1-3个R 取代基取
2
代。在一组实施方案中，Ar 为选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶和嘧
2
啶的单环。在另一组实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。本领域技术人员应该理解，对化合物其余部分的连接可通过环或环系统上的任何可利用的化合价位置进行。例如，“吡啶”是指包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基部分。类似地，稠环系统之一的连接可通过两个环中任一个进行。例如，“苯并噻唑”是指包括2-苯并噻唑基以及5-苯并噻唑基等。优选的连
1
接位置为在本文的实施例和附图中提供的那些。进一步优选的是其中R 为H或C1-4烷基；
1 2
L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2的那些化合物。
并且Ar 为呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、嘧啶、苯并噻吩、吲哚、喹啉、
4
异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑或苯并噻唑，其各自任选地被1-3个R 取代基取
2
代。在一组实施方案中，Ar 为选自呋喃、噻吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶和嘧
2
啶的单环。在另一组实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。本领域技术人员应该理解，对化合物其余部分的连接可通过环或环系统上的任何可利用的化合价位置进行。例如，“吡啶”是指包括2-吡啶基、3-吡啶基和4-吡啶基部分。类似地，稠环系统之一的连接可通过两个环中任一个进行。例如，“苯并噻唑”是指包括2-苯并噻唑基以及5-苯并噻唑基等。优选的连
1
接位置为在本文的实施例和附图中提供的那些。进一步优选的是其中R 为H或C1-4烷基；
1 2
L为-CH2-、-CH(CH3)-或-CH2CH2-；L 为键和R 为卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH或-CONH2的那些化合物。
[0049] 在一组特别优选的实施方案中，本发明的化合物由式Ia表示：
[0050]
[0051] 其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。其余的基团R1、R2、R3和R4具有1 2
针对上述式I所提供的含义。进一步优选的式Ia化合物为其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷
3
基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C ≡CH和-CONH2的那些；每个R(当存在时)独立地
3b 3b
选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标
3b 4
m为1或2，每个R 独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5
2
环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选的是其中R
4
为卤素并与噻吩环的5位连接；和每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ia化合物。
针对上述式I所提供的含义。进一步优选的式Ia化合物为其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷
3
基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C ≡CH和-CONH2的那些；每个R(当存在时)独立地
3b 3b
选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标
3b 4
m为1或2，每个R 独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5
2
环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选的是其中R
4
为卤素并与噻吩环的5位连接；和每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ia化合物。
[0052] 另一组特别优选的本发明的化合物由式Ib表示：
[0053]
[0054] 其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。其余的基团Ar2、R1、R2、R3和R42
具有针对上述式I所提供的含义。在一组式Ib化合物的优选实施方案中，Ar 选自呋喃、噻
2
吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、和嘧啶。在另一组优选实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。对
1 2
于式Ib每组实施方案，进一步优选其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤
3
代烷基、-CN、-C≡CH和-CONH2；每个R(当存在时)独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-5
3b 3b 3b
环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立地选
4
自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷
2
氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；且每
4
个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ib的化合物。
具有针对上述式I所提供的含义。在一组式Ib化合物的优选实施方案中，Ar 选自呋喃、噻
2
吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、和嘧啶。在另一组优选实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。对
1 2
于式Ib每组实施方案，进一步优选其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤
3
代烷基、-CN、-C≡CH和-CONH2；每个R(当存在时)独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-5
3b 3b 3b
环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立地选
4
自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷基-烷
2
氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选其中R 为卤素并与噻吩环的5位连接；且每
4
个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ib的化合物。
[0055] 另一组特别优选的本发明的化合物由式Ic表示：
[0056]
[0057] 其中下标n1和n2各自独立地表示0到2的整数。其余基团Ar2、R1、R2、R3和R42
具有针对上述式I所提供的含义。在一组式Ic化合物的优选实施方案中，Ar 选自呋喃、噻
2
吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、和嘧啶。在另一组优选实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。对
1 2
于式Ic的每组实施方案，进一步优选其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4
3
卤代烷基、-CN、-C≡CH和-CONH2；每个R(当存在时)独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、
3b 3b 3b
C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立
4
地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷
2
基-烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选其中R 为卤素并与噻吩环的5位连
4
接；和每个R(当存在时)选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ib的化合物。
具有针对上述式I所提供的含义。在一组式Ic化合物的优选实施方案中，Ar 选自呋喃、噻
2
吩、噻唑、噁唑、噻二唑、咪唑、吡唑、吡啶、和嘧啶。在另一组优选实施方案中，Ar 为选自苯并噻吩、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并噁唑和苯并噻唑的稠和双环系统。对
1 2
于式Ic的每组实施方案，进一步优选其中R 为H；R 选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4
3
卤代烷基、-CN、-C≡CH和-CONH2；每个R(当存在时)独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、
3b 3b 3b
C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR 和-O(CH2)mN(R )2，其中下标m为1或2，每个R 独立
4
地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基；每个R(当存在时)独立地选自卤素、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基、C3-5环烷基-烷基、C3-5环烷
2
基-烷氧基和(C1-6烷基)0-2氨基的那些。进一步优选其中R 为卤素并与噻吩环的5位连
4
接；和每个R(当存在时)选自卤素、氰基和C1-6烷基的那些式Ib的化合物。
[0058] 另一组特别优选的本发明的化合物由式Id表示：
[0059]
[0060] 其中下标n1表示0到2的整数，R1为选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-5环烷基和3-5环烷基-烷基的基团。其余基团R2和R3具有针对上述式I所提供的含义。在优选实施方案中，R2选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷基、-CN、-C≡CH和-CONH2；并且每个R3(当存在时)独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-5环烷基-烷氧基、-O(CH2)mOR3b和-O(CH2)mN(R3b)2，其中下标m为1或2，并且每个R3b独立地选自H、C1-4烷基和C1-4烷酰基。进一步优选其中R2为卤素并与噻吩环的5位连接的那些式Id的化合物。
[0061] 在式I化合物的最优选实施方案中有许多具体的化合物，其在图1-3中提供。
[0062] 式I化合物的制备
[0063]1 2 1 2
[0064] 图解1说明制备其中R、R、Ar 和Ar 的定义如上所述的某些式I化合物的方法。
[0065] 图解1
[0066]
[0067] 式I化合物的制备为：通过在碱如碳酸钾、碳酸铯、或氢化钠的存在下在惰性溶剂如DMF或THF中，将通过前述方法(参见公开的专利申请US2002077486)制备的4-叔丁氧羰基氨基-2-硝基苯甲酸甲酯与被取代的芳烷基卤化物反应，得到化合物2。通过本领域技术人员已知的步骤将化合物2的硝基还原，得到苯胺3。例如，硝基还原的方法可以通过氢化进行。氢化使用适当的催化剂(如10％Pd/C或Pt/C)在氢气下和在适当的溶剂中在室温下进行，溶剂典型为醇，优选乙醇。用适当取代的芳基或杂芳基异氰酸酯处理化合物3(方法A)提供中间体脲4。或者，脲4的形成可以通过在碱如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和MeCN中在适当的温度下(优选在20℃)用三光气处理化合物3，随后用取代的芳基或杂芳基胺处理(方法B)。通过方法A或方法B典型地制备的未经进一步纯化的脲4经过热或碱诱导的闭环，得到喹唑啉二酮5。可以通过本领域技术人员已知的步骤将化合物5的硝基还原，得到游离的氨基。例如，还原的方法可通过氢化进行，使用适当的催化剂(如，10％碳载钯)在适当的溶剂(典型地为醇)中进行。磺酰脲连接的形成可通过在二氯甲烷中用取代的噻吩-2-磺酰胺、N，N′-二琥珀酰亚胺基碳酸酯和四甲基胍的预混合溶液处理还原后的产物苯胺6，随后在室温下在二氯甲烷中用TFA处理，得到式I的磺酰脲。或者，可以通过使苯胺6与5-氯噻吩-2-磺酰胺乙基碳酸酯在甲苯中反应形成磺酰脲连接。
[0068] 图解2说明制备其中R1、R2、Ar1和Ar2的定义如上所述的式I化合物的替代性方法。
[0069] 图解2
[0070]
[0071] 式I化合物的制备为：以通过使用10％Pd/C的标准氢化方法将4-叔丁氧羰基氨基-2-硝基苯甲酸甲酯在乙酸乙酯中还原为苯胺9。用适当取代的芳基或杂芳基异氰酸酯处理化合物9得到中间体脲10(方法A)。或者，脲10的形成可以通过在碱如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和MeCN中在适当温度(优选20℃)用三光气处理化合物9，随后用取代的芳基或杂芳基胺处理(方法B)。通过方法A或方法B典型地制备的未经进一步纯化的脲10经过热或碱诱导的闭环，得到喹唑啉二酮11。可以通过本领域技术人员已知的步骤将化合物11的硝基还原，得到游离的氨基。例如，还原方法可以通过使用适当的催化剂(如10％的碳载钯)在适当的溶剂中进行，溶剂典型地为乙酸乙酯、甲醇、二甲基甲酰胺或其混合物。磺酰脲13的制备为：通过在二氯甲烷中用取代的噻吩-2-磺酰胺、N，N′-二琥珀酰亚胺基碳酸酯和四甲基胍的预混合溶液处理苯胺12，随后在室温下在二氯甲烷中用TFA处理，得到式I的磺酰脲。或者，可以通过使苯胺6和5-氯噻吩-2-磺酰胺乙基碳酸酯在热的甲苯、二氧杂环己烷、或乙腈中反应制备化合物13。在冰浴中将化合物13用二氯甲烷和三氟乙酸为1∶1的混合物处理，或用市售的在二氧杂环己烷中的4N HCl溶液处理，得到苯胺14。在二甲亚砜中用醛、氰基硼氢化钠和乙酸将苯胺14还原胺化，得到目标化合物15。
[0072] 图解3
[0073]
[0074] 其中酰基磺酰胺为连接基的式I化合物的制备为：用适当取代的芳基或杂芳基异氰酸酯处理化合物3(图解3，方法A)，以提供中间体脲16。或者，脲16的形成可以通过在碱如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下在惰性溶剂如THF、二氯甲烷和MeCN中在适当温度(优选20℃)用三光气处理化合物3，随后用取代的芳基或杂芳基胺处理(方法B)。通过方法A或方法B典型地制备的未经进一步纯化的脲16经过热或碱诱导的闭环，得到喹唑啉二酮17。可通过在适当的溶剂或溶剂混合物如二氧杂环己烷/水或THF/水中用氢氧化锂处理，使化合物17的酯转化为羧酸。通过在作为溶剂的二氯甲烷或DMF中用DIC、DMAP和适当取代的磺酰胺处理完成羧酸到酰基磺酰胺19的转化。用酸，在二氯甲烷中的50％TFA或在二氧杂环己烷中的4M HCl，处理被Boc保护的类似物，得到式I的酰基磺酰胺。
[0075] 组合物
[0076] 在本发明的另一个方面中，提供了药学组合物，其中式I、la、Ib、Ic、或Id(单独或组合)与可药用载体组合。用于本发明组合物中的优选化合物为如上述具体或优选实施方案中所示的那些化合物。
[0077] 本发明的药学组合物可为溶液或悬浮液的形式。在血栓形成病症的处置中，本发明的化合物或药学组合物的剂型可为例如口服给药用的片剂、胶囊、或酏剂形式；栓剂、无菌溶液或悬浮液或可注射给药形式等，或结合到成型制品中。
[0078] 可被结合到片剂、胶囊等中的代表性的助剂包括但不限于粘合剂如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如微晶纤维素；崩解剂如玉米淀粉或海藻酸；润滑剂如硬脂酸镁；甜味剂如蔗糖或乳糖；或调味剂。当剂型为胶囊时，除了上述材料之外，其也可包含液体载体，如水、盐水、或脂肪油。可使用多种类型的其它材料作为剂量单元物理外形的包衣或作为改性剂。可以根据常规的药学实践配制注射用无菌组合物。例如，将活性化合物溶解或悬浮在介质如油或合成脂类介质如油酸乙酯中，或可能期望溶解或悬浮在脂质体中。可以根据被接受的药学实践引入缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等。
[0079] 另外，用于治疗学给药的包含本发明的式I、Ia、Ib、Ic、或Id的化合物的剂量给药制剂或药学组合物必须为无菌的。无菌可以使用通过无菌膜如0.2微米的膜过滤或使用其它常规方法容易地实现。制剂典型地以固体形式储存，优选以冻干形式储存。虽然优选的给药途径为口服途径，但是本发明的式I、la、Ib、Ic、或Id化合物的剂量给药制剂或药学组合物也可通过注射、静脉内(弹丸(bolus)和/或输注)、皮下、肌内、结肠、直肠、鼻、透皮或腹膜内途径给药。也可采用多种剂型，其包括但不限于栓剂、植入的小球(pellets)或小柱体(cylinders)、气雾剂、口服剂量给药制剂和局部制剂如膏剂、滴剂和皮肤贴片。本发明的式I、la、Ib、Ic、或Id的化合物和药学组合物也可被结合到成型制品中，如植入物，其可使用惰性物质如可生物降解的聚合物或合成硅树脂分，如SILASTIC、硅橡胶或其它市售的聚合物。本发明的化合物和药学组合物也可以脂质体递送系统的形式提供，如小单层脂囊(cesicles)、大单层囊、和多层囊。可使用本领域技术人员公知的方法从多种脂质如胆固醇、十八胺、或卵磷脂形成脂质体。
[0080] 治疗方法/给药方法
[0081] 在另一个方面中，本发明提供预防或治疗哺乳动物中血栓形成的方法，其包括对哺乳动物给用治疗有效量的式I、la、Ib、Ic或Id的化合物，单独给药或作为如上所述的本发明的药学组合物的一部分给药。本发明的式I、la、Ib、Ic或Id的化合物和包含本发明的式I、la、Ib、Ic或Id的化合物的药学组合物适合于单独或作为多组分治疗方案的一部分应用，用于预防或治疗心血管疾病，特别是与血栓形成有关的那些疾病。例如，本发明的化合物或药学组合物可作为用于任何血栓形成的药物或治疗剂，特别是血小板依赖性血栓形成适应症，包括但不限于急性心肌梗死；不稳定型心绞痛；慢性稳定型心绞痛；一过性缺血发作；中风；周围性血管疾病；先兆子痫/惊厥、深部静脉血栓形成；栓塞；弥漫性血管内凝血；和血栓形成血细胞减少性紫癜；介入手术如血管成形术、颈动脉内膜切除术、CABG(冠状动脉旁路移植)手术后、血管移植手术、支架放置和血管内装置和假体插入后的血栓形成和再狭窄性并发症。
[0082] 本发明的化合物和药学组合物也可用作与其它治疗剂或诊断剂的多组分治疗方案的一部分，用于预防或治疗哺乳动物中的血栓形成。在某些优选实施方案中，本发明的化合物或药学组合物可与根据普遍接受的医疗实践而通常用于这些状况的其它处方化合物一起共同给药，其它化合物如抗凝血剂、血栓溶解剂、或其它抗血栓形成剂包括血小板聚集抑制剂、组织纤溶酶原活化剂、尿激酶、尿激酶原、链激酶、肝素、阿司匹林、或华法林。可与本发明的化合物给药的另外的其它药物包括抗血小板化合物、纤维蛋白溶解剂、抗炎化合物、降胆固醇剂、降血压剂和5-羟色胺阻断剂。适当的抗血小板化合物包括GPIIB-IIIa拮抗剂、阿司匹林、磷酸二酯酶III抑制剂和血栓烷A2受体拮抗剂。适当的抗凝血剂包括凝血酶抑制剂、华法林钠(华法林)、肝素和 。适当的抗炎化合物包括非甾体抗炎药、环加氧酶-2抑制剂和类风湿性关节炎药物。这些药物与本发明的化合物共同给药也可允许使用降低剂量的血栓溶解剂并从而使潜在的出血副作用最小化。本发明的化合物和药学组合物也可以协同的方式起作用，用于预防成功的溶血栓疗法之后的再闭塞和/或缩短再灌注的时间。
[0083] 在有关的方法中，本发明的化合物可用于继发性缺血事件的预防。在这些方法中，将本发明的化合物或其药学组合物以足以预防或减少可能发生的继发性事件的量对患有原发性缺血事件的患者给药。通常，原发性和/或继发性的缺血事件选自心肌梗死、稳定型或不稳定型心绞痛、经皮腔内冠状血管成形术后的急性再闭塞、再狭窄、血栓形成性卒中、一过性缺血发作、可逆性缺血性神经功能缺损和间歇性跛行。
[0084] 本发明的化合物和药学组合物可在体内使用，通常在哺乳动物如灵长类动物(如人)、羊、马、牛、猪、狗、猫、大鼠和小鼠中使用，或体外使用。如上定义的，本发明的化合物或药学组合物的生物学特性可以容易地通过本领域中公知的方法表征，例如通过体内试验以评价抗血栓形成效力，和对止血和血液学参数的影响。
[0085] 可对需要使用本发明的化合物或药学组合物治疗的主体(通常为哺乳动物)给用将提供最佳效力的剂量。给药剂量和给药方法随主体而定并且可随各种因素如治疗的哺乳动物的类型、性别、体重、饮食、共同给药的药物、总体的临床状况；使用的特定的式I、la、Ib、Ic或Id的化合物、化合物或药学组合物的具体应用、和医疗领域技术人员认识到的其它因素而定。
[0086] 可通过体外或体内方法确定治疗有效剂量。对于本发明的每种具体的化合物或药学组合物，可进行单独的测定以确定所需的最佳剂量。治疗有效剂量的范围受给药途径、治疗目标、和患者状况的影响。对于通过皮下注射针的注射，可认为剂量被递送到体液中。对于其它给药途径，必须通过药理学领域中公知的方法分别测定每种化合物的吸收效率。因此，可能需要临床医学家确定剂量并根据需要改变给药途径，以获得最佳的治疗效果。
[0087] 有效剂量的确定，即达到所需结果(即血小板ADP受体抑制)的剂量可由本领域技术人员容易地确定。典型地，本发明的化合物或药学组合物的应用以较低剂量开始，增加剂量直到达到预期效果。本发明的化合物和组合物可以约0.01到1000mg/kg剂量范围内的有效量以单个或几个分开的日剂量的给药方案口服给药。如果在本发明的药学组合物中使用可药用载体，典型地，将约5到500mg的式I、la、Ib、Ic、或Id的化合物与被广泛接收的药学实践所需的可药用载体混合，所述载体包括但不限于生理学可接受的介质、载体、赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、染料、调味剂等。在这些组合物中，活性组分的量为使得获得所示范围内的适当剂量。
[0088] 给出以下制备例和实施例，使得本领域技术人员更清楚地理解和实践本发明。不应将它们看作是限制本发明的范围，而只是作为本发明的说明性的和代表性的例子。
[0089] 实施例
[0090] 用于制备这些化合物的起始材料和试剂通常得自商业供应商如AldrichChemical Co.或者，通过本领域技术人员已知的、在参考文献如Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，Wiley&Sons：NewYork，1991，Volumes 1-15；Rodd′s Chemistry of Carbon Compounds，Elsevier Science Publishers，1989，Volumes 1-5和Supplementals；和Organic Reactions，Wiley&Sons：New York，1991，Volumes 1-40中所述方法制备。以下合成反应图解只是说明可以合成本发明化合物的一些方法，可由本领域技术人员参考本申请中包含的公开进行和提出对这些合成反应图解的多种改进。
[0091] 如果期望，可以使用常规技术将合成反应图解中的起始材料和中间体进行分离和纯化，所述常规技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱法等。这些材料可以使用常规方法表征，包括物理常数和光谱数据。
[0092] 除非另外说明，优选本文中所述的反应在惰性气氛下在常压下在约-78℃到约150℃的反应温度范围下进行，更优选在约0℃到约125℃进行，最优选地和方便地在约室温(或环境温度)如约20℃下进行。
[0093] 实施例1
[0094] 2-氨基-4-(苄基-叔丁氧羰基-氨基)-苯甲酸甲酯
[0095]
[0096] 向CsCO3(4.9g，15毫摩尔)和(4-叔丁氧羰基氨基-2-硝基-苯甲酸甲酯(2.96g，10毫摩尔)在无水DMF(100mL)中的悬浮液中加入苄基溴(2.57g，15毫摩尔)并将得到的混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物过滤、浓缩、用乙酸乙酯稀释，并用5％柠檬酸、饱和NaHCO3溶液和水洗。将有机相通过在EtOAc中的10％Pd/C进行氢化。在12小时之后，将混合物通过celite垫过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗品油状物，将其通过柱色谱法+
纯化，得到所需产物，为灰白色固体(2.05g，57％收率)。ESMS表现出357的m/z，为正确的
1
产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：β＝1.34(s，9H)，3.71(s，3H)，4.74(s，2H)，6.39(d，J＝9Hz，1H)，6.62(s，1+2H)，7.19(d，J＝7Hz，2H)，7.24(d，J＝7Hz，1H)，7.32(dd，J1＝J2＝7Hz，2H)。
纯化，得到所需产物，为灰白色固体(2.05g，57％收率)。ESMS表现出357的m/z，为正确的
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产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：β＝1.34(s，9H)，3.71(s，3H)，4.74(s，2H)，6.39(d，J＝9Hz，1H)，6.62(s，1+2H)，7.19(d，J＝7Hz，2H)，7.24(d，J＝7Hz，1H)，7.32(dd，J1＝J2＝7Hz，2H)。
[0097] 实施例2
[0098] 3-(4-氨基-苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢-喹唑啉-7-基]-苄基-氨基甲酸叔丁酯
[0099]
[0100] 将2-氨基-4-(苄基-叔丁氧羰基-氨基)-苯甲酸甲酯(890mg，2.5毫摩尔)和4-硝基苯基异氰酸酯(0.45g，2.75毫摩尔)在甲苯(8mL)和DMF(15mL)的混合物中的溶液加热到90℃并搅拌24小时。过滤之后，将溶液中的中间体通过在EtOAc中的10％Pd/C氢化。当反应完成时(12-24小时)，将混合物通过celite垫过滤，并将滤液真空浓缩，得到粗品固体，将其通过高压液相色谱法纯化，得到化合物6，为灰白色固体(813mg)。ES+MS表现
1
出459的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：β＝1.40(s，9H)，4.90(s，2H)，
5.19(s，2H)，6.55(d，J＝8Hz，2H)，6.82(d，J＝8Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.09(d，J＝8Hz，
1H)，7.19(d，J＝7Hz，2H)，7.24(d，J＝7Hz，1H)，7.32(dd，J1＝J2＝7Hz，2H)，11.31(s，
1H)。
1
出459的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)：β＝1.40(s，9H)，4.90(s，2H)，
5.19(s，2H)，6.55(d，J＝8Hz，2H)，6.82(d，J＝8Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.09(d，J＝8Hz，
1H)，7.19(d，J＝7Hz，2H)，7.24(d，J＝7Hz，1H)，7.32(dd，J1＝J2＝7Hz，2H)，11.31(s，
1H)。
[0101] 实施例3
[0102] 5-氯-N-[({4-(7-苄基氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基}-苯基氨基)羰基]噻吩-2-磺酰胺
[0103]
[0104] 将[3-(4-氨基-苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢-喹唑啉-7-基]-苄基-氨基甲酸叔丁酯(92mg，0.2毫摩尔)和5-氯-噻吩-2-磺酰胺乙基碳酸酯(60mg，0.22毫摩尔)在甲苯(8mL)中的悬浮液加热回流3小时。将反应混合物在真空下浓缩并干燥。残余物用含水的90％TFA处理20分钟。在将TFA蒸发之后，通过高压液相色谱法纯化得到无色的粉末。+ 1
ESMS表现出582的m/z和ES-MS为580的m/z，为正确的产物质量。HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：4.31(d，J＝6Hz，2H)，6.18(s，1H)，6.48(d，J＝9Hz，1H)，7.08(d，J＝9Hz，2H)，
7.22(m，2H)，7.32(m，4H)，7.41(m，，3H)，7.55(d，J ＝ 9Hz，1H)，7.60(m，1H)，9.06(s，1H)，
11.05(s，1H)。
ESMS表现出582的m/z和ES-MS为580的m/z，为正确的产物质量。HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：4.31(d，J＝6Hz，2H)，6.18(s，1H)，6.48(d，J＝9Hz，1H)，7.08(d，J＝9Hz，2H)，
7.22(m，2H)，7.32(m，4H)，7.41(m，，3H)，7.55(d，J ＝ 9Hz，1H)，7.60(m，1H)，9.06(s，1H)，
11.05(s，1H)。
[0105] 实施例4
[0106] 4-氟代苄基(3-(4-氨基-3-甲基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-7-基)氨基甲酸叔丁酯
[0107]
[0108] 将3-甲基-4-硝基苯胺(231mg，1.52毫摩尔)和三乙胺(0.42mL，3.04毫摩尔)的二氯甲烷(10mL)溶液慢慢地加入到二琥珀酰基碳酸酯(389mg，1.52毫摩尔)在二氯甲烷(10mL)中的悬浮液中，在加入过程中，悬浮液变为均一的。搅拌反应直到所有的起始苯胺被耗尽，然后用实施例1中所述方法从4-氟苄基溴制备的苯胺(300mg，1.17毫摩尔)处理并在室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干，然后用DMF稀释并加热到90℃，持续4小时，然后将其冷却到室温，用水稀释，然后用乙酸乙酯提取两次，然后将合并的有机层用硫酸镁干燥。浓缩之后，粗产物通过硅胶色谱法纯化。然后将得到的黄色固体如实施例2中所述+还原，得到10mg的所需苯胺(10％收率，2步收率)。ESMS表现出491的m/z，为正确的产
1
物质量。H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.40(s，9H)，2.20(s，3H)，4.83(s，2H)，6.73(m，1H)，
6.86(m，7H)，7.13(m，2H)，7.99(m，2H)，10.08(s，1H)。
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物质量。H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.40(s，9H)，2.20(s，3H)，4.83(s，2H)，6.73(m，1H)，
6.86(m，7H)，7.13(m，2H)，7.99(m，2H)，10.08(s，1H)。
[0109] 实施例5
[0110] 1-(4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-2-甲基苯基)-3-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)脲
[0111]
[0112] 使用实施例3中所述的实验步骤将得自实施例4的苯胺转化为标题化合物。ES+MS1
表现出614的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.23(s，3H)，4.39(s，
2H)，6.16(s，1H)，6.54(d，1H)，7.04(m，5H)，7.37(m，2H)，7.69(m，3H)。
表现出614的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.23(s，3H)，4.39(s，
2H)，6.16(s，1H)，6.54(d，1H)，7.04(m，5H)，7.37(m，2H)，7.69(m，3H)。
[0113] 实施例6
[0114] 4-氟代苯基(3-(4-氨基-3，5-二甲基苯基)-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-7-基)氨基甲酸叔丁酯
[0115]
[0116] 将3，5-二甲基-4-硝基苯胺(100mg，0.60毫摩尔)的THF(10mL)溶液用10％碳载钯(Degussa，10mg)处理并在H2气氛下搅拌五小时，然后将其过滤，浓缩并经过方法B所+述的条件，得到标题，为灰白色固体(89mg，29％收率，为2步收率)。ESMS表现出505的
1
m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝1.41(s，9H)，4.85(s，2H)，6.83(s，
2H)，6.98(m，4H)，7.17(m，2H)，8.00(d，1H)，9.50(brs，1H)。
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m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝1.41(s，9H)，4.85(s，2H)，6.83(s，
2H)，6.98(m，4H)，7.17(m，2H)，8.00(d，1H)，9.50(brs，1H)。
[0117] 实施例7
[0118] 1-(4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-2，6-二甲基苯基)-3-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)脲
[0119]
[0120] 将二琥珀酰基碳酸酯(290mg，1.13毫摩尔)悬浮在二氯甲烷(5mL)中，然后用在5mL二氯甲烷中的5-氯-2-噻吩磺酰胺(210mg，1.05毫摩尔)和四甲基胍(0.22mL，1.74毫摩尔)处理，这时，反应变为均一的。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后真空除去溶剂并将残余物悬浮在乙腈中，将其转移到包含得自实施例6的苯胺(440mg，0.87毫摩尔)的烧瓶中。将混合物回流过夜，然后冷却并用氯化铵水溶液稀释，然后用二氯甲烷提取三次并浓缩至干。将粗产物用二氯甲烷(10mL)稀释并用三氟乙酸(10mL)处理并搅拌1小时，期间形成絮状的沉淀。除去溶剂并将残余物用少量乙腈和水稀释，产生白色沉淀物，将其过滤并干燥，得到所需产物，为蓬松的白色固体。ES-MS表现出626的m/z，为正确的产物质量。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝2.03(s，6H)，4.29(s，2H)，6.18(s，1H)，6.48(d，1H)，
6.90(s，2H)，7.19(t，2H)，7.26(s，1H)，7.38(m，3H)，7.57(d，1H)，7.65(s，1H)，8.21(s，1H)，
11.09(s，1H)。
6.90(s，2H)，7.19(t，2H)，7.26(s，1H)，7.38(m，3H)，7.57(d，1H)，7.65(s，1H)，8.21(s，1H)，
11.09(s，1H)。
[0121] 类似地，根据实施例1-3中所述的方法，但是用其它适当的芳基烷基、杂芳基烷基溴化物和芳基异氰酸酯代替苄基溴和4-硝基苯基异氰酸酯，并利用本领域技术人员已知的改进方法，制备另外的通式I的化合物(参见表1)：
[0122] 表1
[0123]
[0124]
[0125]
[0126]
[0127]
[0128]
[0129]
[0130]
[0131]
[0132]
[0133] 实施例45
[0134] 2-氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)-苯甲酸甲酯
[0135]
[0136] 向4-(叔丁氧羰基氨基)-2-硝基-苯甲酸甲酯(7.0g，23.6毫摩尔)在400mL乙酸乙酯中的溶液中加入1.0g的10％Pd/C。反应混合物使用氢气球氢化24-36小时，或直到通过HPLC监控反应完全。将混合物通过celite层过滤，并将固体饼用乙酸乙酯彻底地+洗涤。滤液真空浓缩至干，得到标题化合物(6.3g，99％)。ESMS表现出267的m/z，为正确的产物质量。
[0137] 实施例46
[0138] 3-(4-氨基苯基)-1，2，3，4-四氢-2，4-二氧代喹唑啉-7-基氨基甲酸叔丁酯[0139]
[0140] 将2-氨基-4-(叔丁氧羰基氨基)-苯甲酸甲酯(6.3g，23.6毫摩尔)和4-硝基苯基异氰酸酯(7.8g，47.4毫摩尔)在100mL无水二甲基甲酰胺中的溶液在室温下搅拌20小时。然后向其中加入二异丙胺(8.2mL，47.4毫摩尔)，并将反应混合物在80℃的浴中加热2小时。将其冷却到室温并滤掉固体沉淀物。将二甲基甲酰胺滤液真空浓缩以蒸发溶剂。向残余物中加入400mL的二氯甲烷。在搅拌和打漩之后，通过过滤分离固体。然后将固体溶解于100mL二甲基甲酰胺和200mL甲醇中。向其中加入1.0g的10％Pd/C，并使混合物使用氢气球经过标准氢化20小时。将其通过celite层过滤。将滤液真空浓缩并使用急骤+
柱纯化，得到标题化合物(4.1g，44％)。ESMS表现出397的m/z，为正确的产物质量。
柱纯化，得到标题化合物(4.1g，44％)。ESMS表现出397的m/z，为正确的产物质量。
[0141] 实施例47
[0142] 5-氯-N-[(4-(7-氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基氨基)羰基]噻吩-2-磺酰胺
[0143]
[0144] 将3-(4-氨基苯基)-1，2，3，4-四氢-2，4-二氧代喹唑啉-7-基氨基甲酸叔丁酯(4.0g，10毫摩尔)和5-氯噻吩-2-磺酰胺乙基碳酸酯(3.0g，11毫摩尔)在200mL甲苯中的混合物回流16小时。将其真空浓缩。在室温下向残余物中加入市售的4N HCl-二氧杂环己烷(20mL)。将混合物在室温下搅拌1小时并真空浓缩。将固体与二氯甲烷研磨。通+过过滤分离固体并在真空中干燥。为标题化合物(2.6g，53％)。ESMS表示492的m/z和ES-MS为490m/z，为正确的产物质量。
[0145] 实施例48
[0146] 5-氯-N-[(4-(7-(噻吩-2-基)-氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基氨基)羰基]噻吩-2-磺酰胺
[0147]
[0148] 将化合物5-氯-N-[(4-(7-氨基-2，4-二氧代-1，4-二氢-2H-喹唑啉-3-基)-苯基氨基)羰基]噻吩-2-磺酰胺(40mg，0.08毫摩尔)溶解于二甲基亚砜(0.5mL)中。向其中加入乙酸(1.0mL)和噻吩-2-甲醛(18mg，0.16毫摩尔)。混合物在室温下搅拌15分钟。然后向其中加入氰基硼氢化钠(21mg，0.32毫摩尔)。将混合物搅拌30分钟并用水(2mL)+
淬灭。然后反应混合物直接经过制备HPLC纯化，得到标题化合物(26mg，55％)。ESMS表现出588的m/z，ES-MS为586m/z，为正确的产物质量。
淬灭。然后反应混合物直接经过制备HPLC纯化，得到标题化合物(26mg，55％)。ESMS表现出588的m/z，ES-MS为586m/z，为正确的产物质量。
[0149] 类似地，根据实施例28-31中所述的方法，但是用其它适当的甲醛代替噻吩-2-甲醛并利用本领域技术人员已知的改进方法，制备另外的通式I的化合物(参见表2)。
[0150] 表2
[0151]
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]
[0162] 实施例105
[0163] 4-(7-(叔丁氧羰基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯甲酸
[0164]
[0165] 步骤1：
[0166] 将使用实施例1所述方法从4-氟代苯基溴制备的苯胺(600mg，1.6毫摩尔)用DMF(6mL)稀释，然后用4-异氰酸根合苯甲酸甲酯(430mg，2.4毫摩尔)处理并在90℃下搅拌过夜。加入三乙胺(0.33mL，2.3毫摩尔)并再加热混合物另外的3小时，这时所有的物质都环化成为所需产物。将反应冷却，用水稀释，并用提取两次，用二氯甲烷提取一次，然后将合并的有机相用硫酸镁干燥。在浓缩之后，粗品残余物通过硅胶色谱法纯化，得到所需产物(539mg，65％)，被少量从异氰酸酯衍生的对称脲污染。
[0167] 步骤2：
[0168] 然后将混合物用5mL的THF稀释并用LiOH水溶液(1M，2mL，2毫摩尔)处理。向两相混合物中滴加乙腈直到变为均一的。在搅拌过夜之后，将混合物用1M HCl酸化到pH＝3，然后用乙酸乙酯提取。有机相用硫酸镁干燥，过滤，浓缩并通过硅胶色谱法纯化，得1
到羧酸，为灰白色固体(295mg，56％)。ES-MS表现出504的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)β＝1.44(s，9H)，4.89(s，2H)，6.97t，2H)，7.10(m，2H)，7.19(m，2H)，
7.39(m，2H)，8.02(d，1H)，8.20(d，2H)，8.78(br s，1H)，10.58(s，1H)。
到羧酸，为灰白色固体(295mg，56％)。ES-MS表现出504的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)β＝1.44(s，9H)，4.89(s，2H)，6.97t，2H)，7.10(m，2H)，7.19(m，2H)，
7.39(m，2H)，8.02(d，1H)，8.20(d，2H)，8.78(br s，1H)，10.58(s，1H)。
[0169] 实施例106
[0170] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0171]
[0172] 步骤1：
[0173] 将得自实施例105的羧酸(100mg，0.20毫摩尔)溶解于二氯甲烷(3mL)中，然后用5-氯-2-噻吩磺酰胺(27mg，0.22毫摩尔)、DMAP(27mg，0.22毫摩尔)和EDC(42mg，0.22毫摩尔)处理，然后在室温下搅拌过夜。第二天，通过分析HPLC测定反应完成并将混合物用水稀释，分液，然后用乙酸乙酯提取并将合并的有机层用硫酸镁干燥。
[0174] 步骤2：
[0175] 在过滤之后，除去溶剂并将粗品残余物用在二氧杂环己烷中的HCl(4M，5mL)处理并搅拌一小时。真空除去溶剂，并将残余物通过制备HPLC纯化，得到所需苯胺，为白色粉末。ES-MS表现出583m/z，为正确的产物质量。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.21(s，2H)，6.19(s，1H)，6.49(d，1H)，7.16(t，2H)，7.28(d，1H)，7.66(m，3H)，7.44(s，1H)，7.56(d，1H)，
7.73(d，1H)，7.92(d，2H)，11.16(s，1H)。
7.73(d，1H)，7.92(d，2H)，11.16(s，1H)。
[0176] 实施例107
[0177] 4-氨基-3-甲氧基苯甲酸甲酯
[0178]
[0179] 步骤1：
[0180] 将3-甲氧基-4-硝基苯甲酸(2.00g，10.2毫摩尔)加入到在0℃已经用二氯亚砜(1.46mL，20.4毫摩尔)处理的甲醇(10mL)溶液中。将混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩，用碳酸氢钠水溶液稀释并用二氯甲烷提取，以定量收率得到所需甲酯。
[0181] 步骤2：
[0182] 然后通过在乙酸乙酯(20mL)中用10％Pd/C(Degussa，200mg)在氢气气氛下搅拌过夜将硝基还原。第二天，将反应混合物通过celite过滤并浓缩，得到苯胺，为白色固1
体(1.54g，83％，为2步收率)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.73(s，3H)，3.78(s，3H)，
5.59(s，2H)，6.60(d，1H)，7.28(s，1H)，7.35(dd，1H)。
体(1.54g，83％，为2步收率)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.73(s，3H)，3.78(s，3H)，
5.59(s，2H)，6.60(d，1H)，7.28(s，1H)，7.35(dd，1H)。
[0183] 实施例108
[0184] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-甲氧基苯甲酰胺
[0185]
[0186] 步骤1：
[0187] 将在二氯甲烷中的得自实施例107的苯胺(198mg，1.09毫摩尔)和TEA(0.303mL，2.18毫摩尔)慢慢地加入到而琥珀酰基碳酸酯(280mg，1.09毫摩尔)的二氯甲烷(10mL)溶液中。搅拌得到的溶液30分钟，然后用根据实施例1所述方法从4-氟苄基溴制备的苯胺(300mg，0.82毫摩尔)处理并在室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩，然后用10mL的DMF稀释并在90℃搅拌，直到所有的物质已经环化成为所需产物。这时，将反应如实施例33中所述进行后处理(worked up)并如实施例34所述转化为标题化合物。ES-MS表现出613的m/
1
z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.83(s，3H)，4.40(s，2H)，6.17(s，1H)，
6.56(dd，1H)，7.06(t，2H)，7.13(d，1H)，7.32(d，1H)，7.36(ddd，2H)，7.52(dd，1H)，7.56(s，
1H)，7.68(d，1H)，7.76(d，1H)。
1
z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.83(s，3H)，4.40(s，2H)，6.17(s，1H)，
6.56(dd，1H)，7.06(t，2H)，7.13(d，1H)，7.32(d，1H)，7.36(ddd，2H)，7.52(dd，1H)，7.56(s，
1H)，7.68(d，1H)，7.76(d，1H)。
[0188] 实施例109
[0189] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-3-氟苯甲酰胺
[0190]
[0191] 步骤1：
[0192] 使用实施例107中所述的方法将4-溴-3-氟苯甲酸转化为甲酯。
[0193] 步骤2：
[0194] 将得到的4-溴-3-氟苯甲酸甲酯(2.00g，8.6毫摩尔)溶解于THF(30mL)中并用氨基甲酸叔丁酯(1.20g，10.3毫摩尔)和碳酸铯(5.61g，17.2毫摩尔)处理，然后用氩气进行脱气。然后将溶液用4，5-双(二苯膦)-9，9-二甲基氧杂蒽(0.37g，0.65毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0.20g，0.22毫摩尔)处理并在氩气下回流过夜。第二天，将反应冷却，用水稀释并用乙酸乙酯提取两次，将合并的有机相用硫酸镁干燥。在过滤并浓缩之后，粗产物通过硅胶色谱法纯化，得到所需产物，为浅黄色固体，将其立即用HCl/二氧杂环己烷(4M，15mL)脱保护。在搅拌3小时之后，将反应用5mL醚稀释并过滤固体，得到所需产1
物，为浅黄色固体(1.15g，70％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.83(s，3H)，7.28(t，1H)，
3.76(m，2H)。
物，为浅黄色固体(1.15g，70％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.83(s，3H)，7.28(t，1H)，
3.76(m，2H)。
[0195] 步骤3：
[0196] 将二氯甲烷(10mL)中的上述4-氨基-3-氟苯甲酸甲酯盐酸盐(266mg，1.2毫摩尔)和三乙胺(0.80mL，5.6毫摩尔)慢慢地加入到搅拌的光气(1.89M，在甲苯中，1.27mL，2.4毫摩尔)的二氯甲烷(10mL)溶液。在加入完成之后，将反应混合物在室温搅拌1小时，然后浓缩并用20mL二氯甲烷中的根据实施例1所述方法从4-氟苄基溴制备的苯胺(300mg，0.80毫摩尔)处理并搅拌过夜。第二天，将反应浓缩，用10mL的DMF和三乙胺(0.80mL，5.6毫摩尔)稀释，然后在90℃搅拌，直到所有的物质环化为所需喹唑啉二酮。将反应混合物冷却，用水稀释，然后用乙酸乙酯提取两次。将合并的有机相浓缩并通过硅胶色谱法纯化，得到所需喹唑啉二酮甲酯，被得自异氰酸酯的对称脲污染。
[0197] 然后以实施例34中所述方法将该物质转化为标题化合物。ES-MS表现出601m/z，1
为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.33(s，2H)，6.19(s，1H)，6.51(d，1H)，
7.15(m，3H)，7.34(s，2H)，7.50(m，2H)，7.61(m，2H)，7.81(m，2H)，11.29(s，1H)。
为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.33(s，2H)，6.19(s，1H)，6.51(d，1H)，
7.15(m，3H)，7.34(s，2H)，7.50(m，2H)，7.61(m，2H)，7.81(m，2H)，11.29(s，1H)。
[0198] 实施例110
[0199] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-2-甲基苯甲酰胺
[0200]
[0201] 使用实施例109所述方法从4-溴-2-甲基苯甲酸制备标题化合物。ES-MS表现出597的m/z，为正确的产物质量。
[0202] 实施例111
[0203] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-2-甲氧基苯甲酰胺
[0204]
[0205] 使用实施例108所述方法从4-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯制备标题化合物。ES-MS表现出613的m/z，为正确的产物质量。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.90(s，3H)，
4.39(s，2H)，6.18(s，1H)，6.57(d，1H)，6.93(d，1H)，7.11(m，4H)，7.37(dd，2H)，7.70(s，
1H)，7.73(m，2H)。
4.39(s，2H)，6.18(s，1H)，6.57(d，1H)，6.93(d，1H)，7.11(m，4H)，7.37(dd，2H)，7.70(s，
1H)，7.73(m，2H)。
[0206] 实施例112
[0207] 4-(7-(4- 氟 代 苄 基 氨 基 )-2，4- 二 氧 代 -1，2- 二 氢 喹 唑啉-3(4H)-基)-2-氯-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0208]
[0209] 使用实施例109所述方法从4-溴-2-氯苯甲酸制备标题化合物。ES-MS表现出617的m/z，为正确的产物质量。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.31(s，2H)，6.18(s，1H)，
6.50(d，1H)，7.14(t，2H)，7.31(m，2H)，7.42(m，2H)，7.60(m，2H)，7.79(m，2H)，11.14(s，
1H)。
6.50(d，1H)，7.14(t，2H)，7.31(m，2H)，7.42(m，2H)，7.60(m，2H)，7.79(m，2H)，11.14(s，
1H)。
[0210] 实施例113
[0211] 4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)-2-氟苯甲酰胺
[0212]
[0213] 使用实施例109所述方法从4-溴-2-氟苯甲酸制备标题化合物。ES-MS表现出1
601的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.31(s，2H)，6.19(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.19(m，3H)，7.30(d，1H)，7.36(m，2H)，7.45(s，1H)，7.57(d，1H)，7.67(t，1H)，
7.73(d，1H)，11.14(s，1H)。
601的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.31(s，2H)，6.19(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.19(m，3H)，7.30(d，1H)，7.36(m，2H)，7.45(s，1H)，7.57(d，1H)，7.67(t，1H)，
7.73(d，1H)，11.14(s，1H)。
[0214] 实施例114
[0215] 3-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0216]
[0217] 使用实施例108所述方法从3-氨基苯甲酸甲酯制备标题化合物。ES-MS表现出1
583的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.30(s，2H)，6.19(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.14(t，2H)，7.24(s，1H)，7.38(m，2H)，7.43(m，1H)，7.53(m，3H)，7.70(s，1H)，
7.79(s，1H)，7.90(d，1H)，11.18(s，1H)。
583的m/z，为正确的产物质量。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.30(s，2H)，6.19(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.14(t，2H)，7.24(s，1H)，7.38(m，2H)，7.43(m，1H)，7.53(m，3H)，7.70(s，1H)，
7.79(s，1H)，7.90(d，1H)，11.18(s，1H)。
[0218] 实施例115
[0219] 2-(4-(7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)乙酰胺
[0220]
[0221] 使用实施例108所述方法从4-氨基苯基乙酸乙酯制备标题化合物。ES-MS表现出597的m/z，为正确的产物质量。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝3.65(s，2H)，4.30(d，2H)，
6.18(s，1H)，6.49(d，1H)，7.14(m，3H)，7.22(m，3H)，7.37(m，2H)，7.41(m，1H)，7.57(d，1H)，
7.64(d，1H)，11.09(s，1H)。
6.18(s，1H)，6.49(d，1H)，7.14(m，3H)，7.22(m，3H)，7.37(m，2H)，7.41(m，1H)，7.57(d，1H)，
7.64(d，1H)，11.09(s，1H)。
[0222] 实施例116
[0223] 4-((7-(4-氟代苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)甲基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0224]
[0225] 使用实施例107步骤1的，随后为实施例108所述的方法从4-氨基甲基苯甲酸制备标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.28(s，2H)，5.04(s，2H)，6.17(s，1H)，6.48(d，1H)，7.17(t，2H)，7.25(s，1H)，7.31(m，4H)，7.58(d，1H)，7.70(d，1H)，7.81(d，2H)，
11.09(s，1H)。
11.09(s，1H)。
[0226] 实施例117
[0227] 4-(7-氨基-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0228]
[0229] 使用类似于实施例106所述方法从2-氨基-4-(叔丁氧羰基)苯甲酸甲酯制备标1
题化合物。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝6.21(s，1H)，6.40(d，1H)，7.25(d，1H)，7.38(d，
2H)，7.54(d，1H)，7.71(s，1H)，7.93(d，2H)，11.18(s，1H)。
题化合物。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝6.21(s，1H)，6.40(d，1H)，7.25(d，1H)，7.38(d，
2H)，7.54(d，1H)，7.71(s，1H)，7.93(d，2H)，11.18(s，1H)。
[0230] 实施例118
[0231] 4-(7-(苄基氨基)-2，4-二氧代-1，2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)-N-(5-氯噻吩-2-基磺酰基)苯甲酰胺
[0232]
[0233] 将得自实施例117的苯胺(20mg，0.042毫摩尔)和苯甲醛(7μL，0.063毫摩尔)溶解于10％乙酸/甲醇(2mL)中并搅拌30分钟。然后，加入氰基硼氢化钠(6mg，0.84毫摩尔)并将反应在室温搅拌过夜。第二天，将反应混合物并通过制备HPLC纯化，得到所需产1
物，在冷冻干燥之后为白色固体。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.32(s，2H)，6.20(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.26(s，2H)，7.33(m，5H)，7.45(s，1H)，7.57(d，1H)，7.70(s，1H)，7.92(d，2H)，
11.16(s，1H)。
物，在冷冻干燥之后为白色固体。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ＝4.32(s，2H)，6.20(s，1H)，
6.49(d，1H)，7.26(s，2H)，7.33(m，5H)，7.45(s，1H)，7.57(d，1H)，7.70(s，1H)，7.92(d，2H)，
11.16(s，1H)。
[0234] 类似地，根据实施例118所述方法，但是用其它适当的醛和酮代替苯甲醛并使用本领域技术人员已知的改进方法，合成实施例119-140：
[0235] 表3
[0236]
[0237]
[0238]
[0239]
[0240]
[0241] 实施例141
[0242] 药理学试验
[0243] 通过以下体外试验测定本发明的每个化合物的药理学活性：
[0244] 1.体外对由ADP介导的血小板凝集的抑制
[0245] 检验本发明的化合物对由ADP诱导的人血小板凝集的作用优选在96孔微滴定度试验中评价(通常参见Jantzen，H.M.等人(1999)Thromb.Hemost.，81：111-117中的方法)。从健康的未使用药物的志愿者收集人静脉血到包含PGI2的ACD(85mM柠檬酸钠、111mM葡萄糖、71.4mM柠檬酸)中(1.25ml ACD包含1.6μM PGI2/10ml血液；PGI2得自Sigma，St.Louis，MO)。通过在室温下在160×g离心20分钟制备血小板富集的血浆(PRP)。通过将PRP在730×g离心10分钟并将血小板团粒再悬浮在包含1U/ml三磷酸腺苷双磷酸酶(V级，Sigma，St.Louis，MO)的CGS(13mM柠檬酸钠、30mM葡萄糖、120mM NaCl；2ml CGS/10ml原始血量)中制备经洗涤的血小板。在37℃培养15分钟之后，通过在730×g离心10分8
钟收集血小板并以3×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含0.1％牛血清清蛋白、1mM CaCl2和1mM MgCl2的Hepes-Tyrode′s缓冲液(10mM Hepes、138mM NaCl、5.5mM葡萄糖、2.9mM KCl、12mM NaHCO3，pH 7.4)中。在用于聚集试验之前血小板悬浮液在37℃保持＞45分钟。
钟收集血小板并以3×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含0.1％牛血清清蛋白、1mM CaCl2和1mM MgCl2的Hepes-Tyrode′s缓冲液(10mM Hepes、138mM NaCl、5.5mM葡萄糖、2.9mM KCl、12mM NaHCO3，pH 7.4)中。在用于聚集试验之前血小板悬浮液在37℃保持＞45分钟。
[0246] 优选使用类似于由Frantantoni等人Am.J.Clin.Pathol.，94，613(1990)描述的方法的微量滴定板振荡器和读板器在96孔平底微量滴定板中测定对ADP依赖性聚集的抑制。所有步骤都在室温下进行。0.2ml/孔的总反应容积包括在Hepes-Tyrodes缓7
冲液/0.1％BSA中：4.5×10 三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的血小板、0.5mg/ml人纤维蛋白酶原(American Diagnostica，Inc.，Greenwich，CT)、试验化合物(对照孔为缓冲液)在0.6％DMSO中进行系列稀释。在室温下预培养约5分钟之后，加入ADP到诱导亚极量(submaximal)聚集的2μM的最终浓度。在一组对照孔(ADP-对照)中加入缓冲液而不是ADP。然后使用微量滴定板读板器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，CA)在490nm测定样品的OD，得到0分钟的读数。然后将板在微量滴定板振动器上摇动5分钟，并在读板器中得到5分钟读数。从t＝5分钟相对于t＝0分钟的在490nm的OD减小计算聚集，并表示为在以不凝集的对照样品中的变化进行校正之后的ADP对照样品的减小％。
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冲液/0.1％BSA中：4.5×10 三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的血小板、0.5mg/ml人纤维蛋白酶原(American Diagnostica，Inc.，Greenwich，CT)、试验化合物(对照孔为缓冲液)在0.6％DMSO中进行系列稀释。在室温下预培养约5分钟之后，加入ADP到诱导亚极量(submaximal)聚集的2μM的最终浓度。在一组对照孔(ADP-对照)中加入缓冲液而不是ADP。然后使用微量滴定板读板器(Softmax，Molecular Devices，Menlo Park，CA)在490nm测定样品的OD，得到0分钟的读数。然后将板在微量滴定板振动器上摇动5分钟，并在读板器中得到5分钟读数。从t＝5分钟相对于t＝0分钟的在490nm的OD减小计算聚集，并表示为在以不凝集的对照样品中的变化进行校正之后的ADP对照样品的减小％。
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[0247] II.对[H]2-MeS-ADP与血小板结合的抑制
[0248] 在使用上述第一个试验测定本发明的化合物抑制ADP依赖性血小板凝集之后，第二个试验用于测定这种抑制是否是由与血小板ADP受体的相互作用介导的。使用第二个试3 3
验，测定这种化合物针对[H]2-MeS-ADP与全部血小板结合的抑制的效价。[H]2-MeS-ADP结合实验常规地使用在医院血库通过标准程序收集的过时的人血小板进行。如下制备三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的过时的血小板(除非另外表明，所有的步骤在室温下进行)：
验，测定这种化合物针对[H]2-MeS-ADP与全部血小板结合的抑制的效价。[H]2-MeS-ADP结合实验常规地使用在医院血库通过标准程序收集的过时的人血小板进行。如下制备三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的过时的血小板(除非另外表明，所有的步骤在室温下进行)：
[0249] 将过时的血小板悬浮液用1体积的CGS稀释并在1900×g离心45分钟使血小板9
形成团粒。将血小板团粒以3-6×10 血小板/ml再悬浮在包含1U/ml三磷酸腺苷双磷酸酶(V级，Sigma，St.Louis，MO)的CGS中并在37℃培养15分钟。在730×g离心20分钟之
8
后，将团粒以6.66×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含01％BSA(Sigma，St.Louis，MO))的Hepes-Tyrode′s缓冲液中。在＞45分钟的血小板静止之后进行结合实验。
形成团粒。将血小板团粒以3-6×10 血小板/ml再悬浮在包含1U/ml三磷酸腺苷双磷酸酶(V级，Sigma，St.Louis，MO)的CGS中并在37℃培养15分钟。在730×g离心20分钟之
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后，将团粒以6.66×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含01％BSA(Sigma，St.Louis，MO))的Hepes-Tyrode′s缓冲液中。在＞45分钟的血小板静止之后进行结合实验。
[0250] 或者，如I.(Inhibition of ADP-Mediated Platelet Aggregation in vitro)所8
述制备的，使用新鲜的人血小板进行结合实验，只是血小板以6.66×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含0.1％BSA(Sigma，St.Louis，MO)的Hepes-Tyrode′s缓冲液中。使用新鲜的和过时的血小板得到非常类似的结果。
述制备的，使用新鲜的人血小板进行结合实验，只是血小板以6.66×10 血小板/ml的浓度再悬浮在包含0.1％BSA(Sigma，St.Louis，MO)的Hepes-Tyrode′s缓冲液中。使用新鲜的和过时的血小板得到非常类似的结果。
[0251] 在96孔微滴定度板上进行使用氚化的有效激动剂配体[3H]2-MeS-ADP(Jantzen，H.M.等人(1999)Thromb.Hemost.，81：111-117)的血小板ADP受体结合试验。在0.2ml试验体积的具有0.1％BSA和0.6％DMSO的Hepes-Tyrode′s缓冲液中，在96孔平底微量滴定8
板中将1×10 三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的血小板与试验化合物的系列稀释物预培养5分
3 3
钟，然后加入1nM的[H]2-MeS-ADP([H]2-甲硫腺苷-5′-二磷酸铵盐；比放射性48-49Ci/mmol，得自Amersham Life Science Inc.，Arlington Heights，IL或NEN Life Science Products，Boston，MA)。在没有试验化合物的存在下测定总的结合。非特异性结合的样品可包含10-5M未标记的2-MeS-ADP(RBI，Natick，MA)。在室温下培养15分钟之后，通过快速过滤分离未结合的放射性配体并用冷的(4-8℃)Binding WashBuffer(10mM Hepes，pH
7.4，138mM NaCl)洗涤两次，使用96孔细胞收集器(Minidisc 96，Skatron Instruments，Sterling，VA)和8×12GF/C玻璃纤维连续过滤器(Filtermat)(Printed Filtermat A，
1450 Microbeta，Wallac Inc.，Gaithersburg，MD)。在闪烁计数器(Microbeta 1450，WallacInc.，Gaithersburg，MD)中测定连续过滤器上的血小板结合放射性。通过从总的结合减去非特异性结合测定特异性结合，在试验化合物存在下的特异性结合表示为特异性结合在没有试验化合物稀释物存在下时的％。
板中将1×10 三磷酸腺苷双磷酸酶洗涤的血小板与试验化合物的系列稀释物预培养5分
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钟，然后加入1nM的[H]2-MeS-ADP([H]2-甲硫腺苷-5′-二磷酸铵盐；比放射性48-49Ci/mmol，得自Amersham Life Science Inc.，Arlington Heights，IL或NEN Life Science Products，Boston，MA)。在没有试验化合物的存在下测定总的结合。非特异性结合的样品可包含10-5M未标记的2-MeS-ADP(RBI，Natick，MA)。在室温下培养15分钟之后，通过快速过滤分离未结合的放射性配体并用冷的(4-8℃)Binding WashBuffer(10mM Hepes，pH
7.4，138mM NaCl)洗涤两次，使用96孔细胞收集器(Minidisc 96，Skatron Instruments，Sterling，VA)和8×12GF/C玻璃纤维连续过滤器(Filtermat)(Printed Filtermat A，
1450 Microbeta，Wallac Inc.，Gaithersburg，MD)。在闪烁计数器(Microbeta 1450，WallacInc.，Gaithersburg，MD)中测定连续过滤器上的血小板结合放射性。通过从总的结合减去非特异性结合测定特异性结合，在试验化合物存在下的特异性结合表示为特异性结合在没有试验化合物稀释物存在下时的％。
[0252] 下表提供如上所述评价的本发明选择的化合物的活性。在下表中，如下提供PRP试验的活性：+++，IC50＜10μM；++，10μM＜IC50＜30μM；和+，IC50＞30μM。
[0253]实施例编号 活性 实施例编号 活性
实施例3 +++ 实施例61 ++
实施例5 +++ 实施例65 +
实施例12 +++ 实施例72 ++
实施例16 +++ 实施例77 +
实施例21 +++ 实施例94 +
实施例41 ++ 实施例100 +++
实施例51 +++ 实施例102 +
实施例53 ++ 实施例106 +++
实施例57 +++ 实施例113 +++
实施例3 +++ 实施例61 ++
实施例5 +++ 实施例65 +
实施例12 +++ 实施例72 ++
实施例16 +++ 实施例77 +
实施例21 +++ 实施例94 +
实施例41 ++ 实施例100 +++
实施例51 +++ 实施例102 +
实施例53 ++ 实施例106 +++
实施例57 +++ 实施例113 +++
[0254] 应该理解，前述的讨论、实施方案和实施例只是提供对某些优选实施方案的详细说明。对于本领域技术人员来说，显而易见，可得到多种改进和等价物而不脱离本发明的精神实质和范围。上述讨论或引用的所有的专利、期刊文章和其它文件都被并入本文作为参考。